细菌的生化试验

细菌的生化实验
一、糖的发酵
培养基：糖培养基
PH7.6的蛋白胨水溶液（蛋白胨1%）（氯化钠0.5%）适量糖，1% 1.6%澳甲酚紫酒精溶液0.1% 分装10*100mm小试管，每管3-41^,内置一密闭端向上的发酵管， 10磅10分灭菌。

方法: 用接种环取少量纯培养物接种于培养基中，37摄氏度培养18-24小时后观察，一般观察2-3天。

结果: 产酸则培养基由兰紫变黄，用“ + ”表示。

产酸又产气，则培养基变黄，小管内有气泡，用“。

”表示，无变化则培养基仍为兰紫色，管内也无气泡，用“-”表示。

原理: 指示剂澳甲酚紫的指示范围为PH5.2-6.8（黄-紫）。

每一种糖（醇）培养基内只含一种糖（醇）的成分，接种进去的细菌若能发酵这种糖，则可产生乳酸，使PH下降，培养及就由兰紫色变为黄色，如果同时还产生CO2、H2、CH4等气体，则小管内留有气泡，如果不能发酵分解这种糖，则培养及不变色也无气泡。

培养基：蛋白胨水蛋白胨1%
氯化钠0.5%
蒸馏水适量
其中的蛋白胨最好选用含色氨酸较多的多价蛋白胨。

每支小试管分装3-4ml, 10磅10分灭菌。

试剂：（欧立希氏试剂）
对二甲基氨基苯甲醛 1g
纯乙醇95ml
浓盐酸20ml
以上物品依次混合溶解
方法：
接种细菌于培养基中，37摄氏度培养24-48小时后，取出加乙醚约
0.7cm厚，塞紧棉塞后摇震，使乙醚与培养物混匀，静置于试管架内
数分钟，待乙醚浮至培养基表面，打开棉塞，沿试管壁慢慢加入靛基
质试剂4-5滴，不要摇。

结果：
乙醚层现红色为阳性，以“ + ”表示，不变者为阴性，以“-”表示。

原理：
细菌若有色氨酸酶，就能分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质（吲哚）。

靛基质无色，但遇到对二甲基氨基苯甲醛，则可以生成红色的靛基质，以肉眼可见。

三、甲基红实验：
培养及：葡萄糖蛋白胨水（PH7.4）
葡萄糖0.5%
磷酸氢二钾0.5%
蛋白胨0.5%
蒸馏水适量
加热溶解后，分装小试管，每管3-4ml，10磅10分灭菌
试剂：0.1g甲基红溶于300ml95%乙醇中，加蒸馏水至500ml
方法：
接种细菌于培养液中，37摄氏度培养2-4天，取出加M、R试剂3-4 滴。

结果：红色者为阳性，以“ + ”表示，桔黄色者为阴性，以“-”表示。

原理：
甲基红是一种指示剂，其变色范围PH4.4-6.2 （红-黄）。

若细菌产酸量多，则培养PH下降，当加进M、R试剂时变为红色；若细菌产酸量少，或产酸后，又不断转化为其他物质（醇、醛、酮、气体和水）时，则PH 变化不大，培养基为桔黄色。

四、％P实验
培养及：同M、R实验
试剂：
甲液6%a-萘酚酒精溶液
乙液 40%KOH溶液
方法：接细菌于培养基中，37摄氏度培养2天后，取出加1滴管甲液和一滴管乙液，摇匀，37摄氏度放置30分钟。

结果：液体呈现红色者为阳性，以“ + ”表示，不变色者为阴性，以“-”表示。

原理：某些细菌能分解葡萄糖，产生丙酮酸，并将丙酮酸脱羧变为中性乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境中被空气中的氧气氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨水中的精氨酸所含的胍基起作用，生成红色化合物为V-P试验阳性，a-萘酚的作用是加速反应进行。

五、枸橼酸盐利用实验
培养基：西蒙氏（SIIMMONS）枸橼酸盐培养基
磷酸二氢铵0.1g
硫酸镁 0.02g
磷酸二氢钾0.1g
枸橼酸钠（柠檬酸三钠）0.5g
氯化钠0.5g
蒸馏水100ml
PH 6.8
琼脂2g
10磅10分
1%澳麝香草酚兰1ml
混匀，分装小试管，每管4-5ml,10磅10分灭菌，趁热摆成斜面。

方法：
接种细菌于培养基斜面上37摄氏度培养24小时后观察。

结果：
斜面上有菌苔出现，培养基颜色变为深蓝色，为枸橼酸盐利用试剂阳性，以“+”表示，斜面上细菌不生长，无菌苔出现，培养基不变色为阴性，以“-”表示。

原理：指示剂澳麝香草酚兰的指示范围为PH6.0-7.6 （黄-兰）。

枸橼酸盐培养基中仅含有唯一的有机盐，即枸橼酸盐。

一般细菌能利用磷酸二氢铵作为氮源，但不一定能分解枸橼酸盐而去的碳源。

可分解枸橼酸盐取得碳源者，不仅能在本培养基上生长，形成菌苔，而且有碳酸盐生成，是培养基转为碱性，培养基由绿色变为深蓝色。

六、硫化氢实验
培养基：醋酸铅培养基
普通琼脂200ml
硫代硫酸钠0.5g
15磅20分灭菌，待冷至55摄氏度左右，灭菌加入8磅15分灭菌的10%醋酸铅溶液1ml，混匀，立即无菌分装，直立静止待凝。

方法：按东西南北四个方向将细菌穿刺接种于培养基与试管壁之间，37摄氏度培养24小时后观察结果。

穿刺部位呈褐黑色者为阳性（+），不变色者为阴性（-）。

原理：
某些细菌能分解胱氨酸等含硫氨基酸，生成硫化氢。

硫化氢与铅盐（铁盐，如硫酸亚铁），则形成黑褐色的硫化铅（硫化铁）沉淀物。

黑褐色
沉淀物愈多，表示生成的硫化氢量亦愈多。

硫化氢实验用的培养基
中含有硫代硫酸钠，是一种还原剂，能保持环境使形成的硫化氢不再被氧化。

七、尿素分解实验
培养基：Christensen氏尿素琼脂培养基
蛋白胨0.1g
氯化钠0.5g
磷酸氢二钾0.2g
蒸馏水100ml
PH7，4
琼脂 2g
10磅10分钟
0.6%酚红 0.2ml
10%葡萄糖1ml
20%尿素 1ml
混合，分装小试管，每管4-5ml，8磅15分灭菌后摆斜面
方法：
接种细菌于培养基斜面上，37摄氏度培养18-24小时
结果：
培养基呈红色者为阳性，以“+”表示。

原理：
酚红指示剂的指示范围为PH6.8-8.4 （黄-红）。

具有尿素分解酶的细菌，能分解尿素形成大量的氢，是培养基的碱度上升，培养基变为红色。

八、硝酸盐还原实验
培养基：硝酸钾蛋白胨水
蛋白胨1%
硝酸钾0.1%
蒸馏水适量
PH7.4
分装小试管，每管3-4ml,15磅15分灭菌。

试剂：
甲液：对位氨基苯磺酸0.8g
5N醋酸溶液100ml
乙液：a-萘胺0.5g
5N醋酸溶液100ml
方法：接种细菌后，37摄氏度培养24-48小时，沿管壁加入甲液、乙液各2-3滴，立即观察。

结果：
培养基立即呈现红色者为阳性，以“+”表示。

原理：
某些细菌能将硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐遇醋酸可变成亚硝酸，亚硝酸遇对位氨基苯磺酸重氮苯磺酸，重氮苯磺酸遇a-萘胺生成红色的N-a-萘胺偶氮苯磺酸。