不同提取方法对葛根总黄酮得率的影响

范树国，赵朝英，邱璐，等．不同提取方法对葛根总黄酮得率的影响［J］．江苏农业科学，2012，40（1）：233－235．
不同提取方法对葛根总黄酮得率的影响
范树国1，2，赵朝英1，邱璐1，2，李国树1，2，李天星1，杨海艳1，梁晓华1
（1．楚雄师范学院化学与生命科学系，云南楚雄675000；2．滇中高原生物资源开发与利用研究所，云南楚雄675000）
摘要：以95%乙醇为提取剂，分别用冷浸法、超声法、超声与冷浸结合使用法提取葛根总黄酮，以紫外分光光度计法测量葛根总黄酮含量。

以葛根总黄酮的得率为评价指标，对3种方法进行综合评价，并筛选出各种方法所需的最佳提取时间。

试验数据经SPSS统计分析表明，超声与冷浸结合使用法对葛根总黄酮得率的提高影响不显著，实际生产应用时，冷浸提取48h效果较好。

关键词：葛根；总黄酮；提取方法；得率
中图分类号：TS202．1文献标志码：A文章编号：1002－1302（2012）
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01－0233－03
（上接第232页）
可取性。

3结论
本试验对苎麻非纤维高效降解菌株的分离筛选方式方法进行了大量的摸索研究，最终确定了用处理苎麻纤维对菌株进行富集，并以水解圈和降解显色的双重初筛快速鉴定方法，减少了无效菌株的生长干扰，使得目标菌株得以富集，成为优势菌株，降解苎麻胶质，得到质量较好的苎麻纤维。

该筛选模型的建立为今后的试验者提供了一个良好的参考依据，大大降低了工作量，提高了工作效率。

但是这仅仅是一个开始，接下来还需要进行大量试验摸索。

参考文献：
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葛根（Radix puerariae），为豆科植物葛藤属野葛［Pueraria lobata（Willd．）Ohwi］或粉葛（P．thomsonii Benth）的块根，有“山人参”之美称，我国广东、广西、四川、云南等地均有较丰富的葛根资源。

葛根的主要有效成分为异黄酮类化合物，根据理化性质和波谱数据，对野葛根的化学成分进行分析，共分离鉴定了14个化合物［1－2］。

其中葛根素是豆科葛藤属的特有成分，也是主要有效成分，是葛根及其制剂中异黄酮含量的
收稿日期：2010－12－28
基金项目：云南省中青年学术技术带头人后备人才培养计划（编号：2006PY01－61）；云南省高校2009—2012年重点建设学科和楚雄师范学院重点学科建设项目“植物学”（编号：05YJJSXK03）；楚雄师范学院学术带头人专项（编号：05YJDTR08）。

作者简介：范树国（1965—），男，河北青县人，博士，教授，主要从事植物生理生化及分子生物学研究。

Tel：（0878）3101953；E－mail：fansg@cxtc．edu．cn。

通信作者：邱璐，女，硕士，教授，主要从事植物组织培养及转基因研究。

E－mail：qiulu@cxtc．edu．cn。

评价指标［2］。

葛根具有改善脑循环和外周循环、收缩和舒张平滑肌、抗肿瘤、抗骨质疏松、治疗绝经期综合症、抗心肌梗塞和心律失常、扩张冠状血管、降血糖、增强记忆力及解热等功能与作用［3］。

葛根在食品工业、医药工业和日用化工方面均有较多应用。

目前对葛根总黄酮提取方法的研究大都采用单一提取方法，部分专家研究单一提取方法时采用过酶解回流法［4］，提高了葛根总黄酮的收率。

本研究探讨不同单一提取方法及结合使用方法对葛根总黄酮得率的影响。

1材料与方法
1．1材料
葛根粉，购自楚雄一心堂药房，为粉葛粉，200g/盒，批号：080201、071201，云南红云天然食品有限公司生产，原产地广西。

葛根素对照品（HPLC级，纯度＞98%），购自成都曼思特生物科技有限公司。

1．2方法
1．2．1不同方法提取葛根总黄酮采用冷浸法、超声法、超
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江苏农业科学2012年第40卷第1期
声与冷浸结合使用法提取葛根总黄酮。

1．2．1．1冷浸法葛根粉各50g（3份），提取溶剂为95%乙醇各250mL，常温浸泡24、48、72h，隔12h搅拌1次，减压过滤，回收乙醇，药液浓缩至干，得葛根提取物。

1．2．1．2超声法葛根粉各50g（3份），提取溶剂为95%乙醇各250mL，分别超声（功率200W）提取20、60、120min，温度为50ħ，减压过滤，回收乙醇，药液浓缩至干，得葛根提取物。

1．2．1．3超声与冷浸结合使用法葛根粉50g（3份），提取溶剂为95%乙醇各250mL，先超声（功率200W）提取20min，温度为50ħ，再分别用95%乙醇常温浸泡24、48、72h，隔12h搅拌1次，减压过滤，回收乙醇，药液浓缩至干，得葛根提取物。

1．2．2葛根总黄酮含量的测定
1．2．2．1标准曲线的绘制参照文献［5］绘制标准曲线。

称取干燥至恒重的葛根素5mg于25mL容量瓶中，加95%乙醇溶解，并稀释至刻度，分别吸取0．2、0．4、0．6、0．8、1．0mL 置10mL比色管中，以10．0mL95%乙醇加水至100mL的溶液稀释至刻度，摇匀。

以上述溶剂作空白对照，在250nm波长处测定吸收度。

将溶液浓度和吸光度进行线性回归，得回归方程：y=49．2500+x0．0028，r2=0．9996，y为吸光度，x 为溶液浓度。

1．2．2．2葛根提取物中总黄酮含量的测定称取各种方法提取物，相当于葛根黄酮5mg，置25mL容量瓶中，加95%乙醇溶解，并稀释至刻度，吸取1．0mL至10mL比色管中，以10．0mL95%乙醇加水至100mL的溶液稀释至刻度，摇匀。

同时以上述溶剂作空白对照，在250nm波长处测定吸收度，在标准曲线上换算出葛根总黄酮含量。

总黄酮含量=CˑVˑ25
m
ˑ100%
式中：C为浓度（mg/mL）；V=10mL；m为测量时所称取的提取物的量（mg）。

提取物得率=m
2
－m
1
50
ˑ100%
式中：m
1为蒸发皿干燥至恒重的重量（g）；m
2
为提取物和蒸
发皿干燥至恒重的重量（g）。

总黄酮得率=总黄酮含量ˑ（m
2
－m
1
）
50
ˑ100%
式中：m
1为蒸发皿干燥至恒重的重量（g）；m
2
为提取物和蒸
发皿干燥至恒重的重量（g）。

1．2．3数据分析运用SPSS11．5软件对数据进行均值分析及多重比较分析。

1．2．4提取物的鉴定用紫外分光光度计光谱扫描进行鉴定。

以葛根素（浓度0．004mg/mL）为对照，对冷浸提取72h、超声提取120min、超声提取20min+冷浸提取72h等3种方法的提取物分别进行光谱扫描鉴定。

提取物鉴定溶液配制方法与“1．2．2．2”一致。

2结果与分析
2．1不同提取方法提取物总黄酮含量及得率比较
3种不同方法提取的总黄酮含量及得率测定结果见表1。

表1紫外分光光度法测定不同提取物总黄酮含量的比较
提取
方法
提取时间
（h）
葛根粉
批号
重复
提取物总
黄酮含量
（%）
总黄酮
得率
（%）
总黄酮
（mg）冷浸法24080201117．160．27132．6
213．250．23114．5
平均15．210．25123．6
071201130．990．48242．4
223．900．37187．0
平均27．450．43214．7
48080201119．650．34170．1
221．250．37183．9
平均20．450．36177．0
071201134．630．83417．1
238．510．93463．9
平均36．570．88440．5
72080201124．840．53266．4
223．210．50248．9
平均24．030．52257．7
071201138．890．95472．9
245．241．10550．1
平均42．071．03511．5超声法0．33080201119．240．40197．5
218．350．38188．4
平均18．800．39193．0
071201135．730．91454．3
256．851．45722．8
平均46．291．18588．6
1080201116．040．39196．0
219．680．48240．4
平均17．860．44218．2
071201132．170．99494．0
231．110．96477．7
平均31．640．98485．9
2080201121．940．53263．6
215．280．37183．6
平均18．610．45223．6
071201126．590．87433．5
241．161．34671．0
平均33．881．11552．3冷浸+超声法0．33+24080201119．020．47236．2
212．730．32158．0
平均15．880．40197．1
071201134．400．64322．1
255．131．03516．2
平均44．770．84419．2 0．33+48080201124．140．57283．5
218．570．44218．1
平均21．360．51250．8
071201148．391．30647．9
242．051．13563．0
平均45．221．22605．5 0．33+72080201122．340．53266．4
211．310．30134．9
平均16．830．42200．7
071201138．811．44721．6
240．701．51756．7
平均39．761．48739．2 2．2SPSS统计分析
对表1进行SPSS统计分析。

2．2．1提取方法的影响当因变量为含量时，提取方法P= 0．196＞0．05（均方=66．833，F=1．591），说明提取方法对提
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取物总黄酮含量影响不显著。

当因变量为得率时，提取方法P=0．003＜0．01（均方=28791．940，F=4．648），说明提取方法对葛根总黄酮得率的影响极显著，选用不同的提取方法，葛根总黄酮得率不同。

2．2．2原料的影响当因变量为含量时，原料P=0．000＜
0．01（均方=3535．293，F=84．179），说明原料对提取物总黄酮含量的影响极显著；当因变量为得率时，原料P=0．000＜0．01（均方=809190．203，F=130．641），说明原料对葛根总黄酮得率的影响极显著。

提取方法和原料的交互作用对提取物总黄酮含量没有造成显著影响（P=0．548＞0．05，均方=37．157，F=0．885），而对葛根总黄酮得率会造成显著影响（P=0．041＜0．05，均方=16424．911，F=2．652）。

2种不同原料的统计分析结果表明，P=0．000＜0．01（标准误差=2．151），2种不同原料之间差异极显著。

选用不同的葛根粉来进行提取，葛根总黄酮的含量和得率会不同。

2．2．3提取时间的影响冷浸法中冷浸提取24h和冷浸提取48、72h之间P=0．03＜0．05，P=0．002＜0．01，差异显著和极显著；冷浸提取48h和冷浸提取72h总黄酮得率高于冷浸提取24h，而冷浸提取48h和冷浸提取72h之间P= 0．190＞0．05，差异不显著，因此，在使用冷浸法提取时，冷浸提取48h就可以得到较多的总黄酮。

超声法中，3个提取时间之间P=0．495＞0．05，P=0．960＞0．05，P=0．527＞0．05，总黄酮得率差异不显著，选择20min的超声提取时间就可以。

冷浸和超声联合使用法中，超声20min+冷浸24h和超声20min+冷浸48h、超声20min+冷浸72h之间P=0．045＜0．05，P=0．009＜0．01，差异显著和极显著，后2种提取时间下的总黄酮得率明显高于前1种，而超声20min+冷浸48h和超声20min+冷浸72h之间P=0．463＞0．05，差异不显著。

因此，在采用超声+冷浸法提取时，超声20min+冷浸48h就可以得到较多的总黄酮。

2．2．4超声和冷浸结合使用法的效果使用冷浸提取72h、超声提取20min、超声提取2h、超声20min+冷浸48h和超声提取20min+冷浸72h与本研究中的其他方法之间差异显著（P＜0．05），使用这几种方法进行提取时，能得到更多的总黄酮。

而这几种方法之间的差异不显著，用其中任何一种方法，提取效果都一样（图1），无法说明超声与冷浸结合使用法比单独用冷浸法或超声法会提高葛根总黄酮的得率。

3讨论
以95%乙醇为提取剂，使用冷浸72h提取法、超声20min提取法、超声2h提取法、超声20min+冷浸48h提取法和超声20min+冷浸72h提取法来提取葛根总酮，均可得到较多总黄酮。

提取时间长的提取方法总黄酮得率并没有显著高于提取时间短的方法，原因可能是提取时间达到一定程度，细胞破碎越来越完全，葛根中的有效成分已很好地溶出，随着时间的延长，葛根中的其他成分也溶出，阻碍了有效成分的溶出。

在生产实际应用时，超声提取20min的方法，提取时间短，节约时间，操作简单；而在没有超声仪器时，冷浸提取48h的方法操作简单，节约用电，对提取容器的损害也不大，用于大规模提取也是一种较好的方法。

原料对总黄酮含量和总黄酮得率的影响极显著，因此，要想得到较多总黄酮，大规模提取前可先做预试验来选择原料。

超声+冷浸法使用法显著优于本研究中的一些单一提取方法，但没有显著优于所有方法，不能说明2项单一技术的结合使用提高了葛根总黄酮的得率。

可能是单独使用冷浸法或单独使用超声法就可以提取出较多的总黄酮，也可能是由于重复提取和重复测量的次数不够多，影响统计分析结果。

提取方法对葛根总黄酮得率的影响极显著，因此，进一步研究提取方法是很有价值的。

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