催化分光光度法快速测定血清过氧化氢酶活性
过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法
过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC0200规格:50T/48S 产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体100μL×3瓶，4℃保存。
产品说明：CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H 2O 2清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。
H 2O 2在240nm 下有特征吸收峰，CAT 能够分解H 2O 2，使反应溶液240nm 下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT 活性。
试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水操作步骤：一、粗酶液提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500-1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（功率20%或200w，超声3秒，间隔10秒。
重复30次）；8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5-10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
二、CAT 测定操作1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至240nm 处，蒸馏水调零。
2、CAT 检测工作液的配置：用时在每瓶试剂二（100μL）中加入20ml 试剂一，充分混匀，作为工作液；用不完的试剂4℃保存一周。
3、测定前将CAT 检测工作液37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴10min。
4、取1mLCAT 检测工作液于1mL 石英比色皿中，再加入35μL 样本，混匀5s；室温下立即测定240nm 下的初始吸光值A1和1min 后的吸光值A2。
过氧化氢酶活力的测定实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：实验35过氧化氢酶的活性测定植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使h2o2发生累积。
h2o2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。
过氧化氢酶可以清除h2o2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。
因此，植物组织中h2o2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。
本实验用分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。
一、过氧化氢含量的测定【原理】h2o2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被h２so4溶解后，在415nm波长下比色测定。
在一定范围内，其颜色深浅与h2o2浓度呈线性关系。
【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。
【试剂】100μmol/Lh2o2丙酮试剂：取30%分析纯h2o257μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（w/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。
【方法】1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表40-1加入试剂。
待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml 刻度，415nm波长下比色。
2.样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织2~5g（视h2o2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。
(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。
沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。
(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。
过氧化物酶、过氧化氢酶活性测定方法及试剂配制
过氧化物酶（POD ）活性测定【实验原理】过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中，在有H 202存在条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色的4-邻甲氧基苯酚，可用分光光度计测生成物的含量来测定活性。
【实验试剂】 愈创木酚、30%过氧化氢、20mmol/LKH2PO4、100mmol/L 磷酸缓冲液（pH6.0）、反应混合液[100mmol/L 磷酸缓冲液（Ph6.0）50mL ，加入愈创木酚28uL,加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液溶解冷却后，加入30%过氧化氢19uL ，混合均匀保存在冰箱中]【方法步骤】（1）、粗酶液的提取 称取小麦叶片0.25g ，加20mmol/LKH2PO4 2.5mL ，于研钵中研成匀浆，以4000r/min 离心10分钟，收集上清液保存在冷处，所得残渣再用20mmol/LKH2PO4 2.5mL 提取一次，全并两次上清液，所得的即为粗酶提取液(酶活性过高，稀释10倍)。
（2）、酶活性的测定 取试管3只，于一只中加入反应混合液3mL ，KH2PO41mL ，作为校零对照，另外三只中加入反应混合液3mL ，稀释后的酶液1mL （如表1），立即开启秒表，于分光光度计470nm 波长下测量OD 值，每隔1min 读数一次（4min ）。
以每分钟表示酶活性大小，将每分钟OD 值增加0.01定义为一个活力单位。
表1 紫外吸收法测定POD 酶活性配置表4.结果计算以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以 ΔA 470 /[min · g （鲜重） ]表示之。
也可以用每 min内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位（ u ）表示。
POD 总活性[u/g(FW)]=式中：POD 总活性以酶单位每克鲜重表示。
其中 △470=ACK-AE比活力单位以酶单位每毫克蛋白表示。
ACK ——照光对照管的吸光度。
AE ——样品管的吸光度。
Vt ——样品液总体积，mL 。
实验九 过氧化氢酶(CAT)活性的测定
( AS 1 + AS 2 ) 2
作
1.写实验报告 写实验报告 2.问题： 问题： 问题
业：
（1）影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些 ）影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些? （2）过氧化氢酶与哪些生化过程有关 ）过氧化氢酶与哪些生化过程有关?
操作步骤：
3．测定
25℃预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L的 H2O2 ，每加完一管立即记时，并迅速倒入 石英测2min，记录数据。
4.按下式计算酶活性。
结果计算： 结果计算： 1min内 以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。 减少0.1的酶量为1个酶活单位（ 0.1的酶量为 过氧化氢酶活性(u/gFW/min)= 过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=
A240 = AS0∆A240 × VT
0.1 × V 1 × t × FW
式中： 式中： 加入煮死酶液的对照管吸光值； AS0—加入煮死酶液的对照管吸光值； 加入煮死酶液的对照管吸光值 样品管吸光值； AS1, AS2—样品管吸光值； 样品管吸光值 Vt—粗酶提取液总体积 ml）； 粗酶提取液总体积（ Vt 粗酶提取液总体积（ml）； 测定用粗酶液体积（ V1—测定用粗酶液体积（ml）； 测定用粗酶液体积 ml）； FW—样品鲜重 样品鲜重（ FW 样品鲜重（g）； 0.1—A 每下降0.1 个酶活单位（ 0.1为 0.1 A240每下降0.1为1个酶活单位（u）； 加过氧化氢到最后一次读数时间（ t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。 加过氧化氢到最后一次读数时间 min）。
操作步骤：
1 ． 称 取 植 物 材 料 0.3g ， 加 入 ， mo1 (pH7 0.1mo1/L 磷 酸 缓 冲 液 (pH7.0) ml(分三次加入 分三次加入， 6ml( 分三次加入 ， 最后两次用于 洗研钵) 在研钵中研磨成匀浆， 洗研钵)，在研钵中研磨成匀浆， 6000r 离心15 分钟， 15分钟 以 6000r ／ min 离心 15 分钟 ， 倾 出上清液。 出上清液。
用721_分光光度计测定过氧化氢酶活性的新方法
[ 5 ] Stern, K. G. 561～572.
( 1937 ) Journal of B iological Chem istry 121,
图 3 温度对酶反应速度的影响 118
摘 要 : 本研究采用两步法对过氧化氢酶活力进行测定 。第一步是经典滴定法中的过氧化氢酶与底物作
用 , 第二步采用过氧化物酶与剩余过氧化氢反应 , 氧供体 (DH2 ) 被氧化成棕色物 , 以棕色深浅反推过氧化 氢酶活力单位 。结果表明 , 该方法是一种灵敏 、实用的测定过氧化氢酶活性的新方法 。 关键词 : 过氧化氢酶 ; 过氧化氢 ; 邻联茴香胺法 中图分类号 : TS20713 文献标识码 : A 文章编号 : 1006 - 2513 (2005) 06 - 0116 - 03
(Hebei Research Institute of M icrobiology, B aoding 071051; 3 Hebei Juwei B io2engineering Co. L td, Baoding 071051)
Abstract: This research adop ts two2step method to determ ine the activity of catalase. The first step is that catalase re2 acts w ith substrate in traditional titration method; The second step is that peroxidase reacts w ith residual hydrogen per2 oxide, DH 2 is oxygenated to a brown material, according to the shade of brown color, activity unit of catalase can be deduced in reverse. These results indicate that it is a convenient, sensitive and p ractical method to determ ine the cata2 lase activity. Key words: catalase; hydrogen peroxide; o2dianisidine method
酶催化分光光度法测定过氧化氢
酶催化分光光度法测定过氧化氢陈亚红;刘红梅;田丰收;宋毛平;陈鹏丽【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2009(045)004【摘要】过氧化氢能够氧化茜素红使之褪色,而模拟酶-血红蛋白对其具有催化作用.建立了一种以茜素红为指示剂的过氧化氢一茜素红一血红蛋白酶催化反应体系测定痕量过氧化氢的方法.确定了反应的最佳条件,体系的酸度为pH 9.8的氨水-氯化铵缓冲溶液,最大吸收波长为525 nm.线性范围为3.0×10-7～8.0×10-5mol·L-1,检出限(3s/k)为5.2×10<'-8>mol·L-1,表观摩尔吸光率为1.1×104mol-1·cm-1.该方法可用于雨水及消毒水中过氧化氢含量的测定.并以此样品为基体,测定了方法的平均回收率和相对标准偏差(n=5)依次为100.3%及3.26%.【总页数】3页(P401-403)【作者】陈亚红;刘红梅;田丰收;宋毛平;陈鹏丽【作者单位】周口师范学院,化学系,周口,466000;周口市第一高级中学,周口,466000;郑州大学,化学系,郑州,450052;郑州大学,化学系,郑州,450052;周口师范学院,化学系,周口,466000【正文语种】中文【中图分类】O657.32【相关文献】1.牛血红蛋白催化分光光度法测定过氧化氢 [J], 唐宁莉;蒙华毅;李欣;蒋小艳2.分光光度法测定小麦过氧化氢酶活动度 [J], 展海军;王华芳;谢鹏3.Fe3+催化二苯胺磺酸钠显色-分光光度法测定消毒液中过氧化氢 [J], 张爱菊;董娜;薛林科;白莹;戴兴德;张小林4.过氧化氢歧化酶模拟酶的合成及催化性质的研究——meso-四(4-磺基苯)卟啉-锰(MnTPPS_4)作为模拟酶的研究 [J], 奚星林;章咏华;吴金兰;张耀山5.橙黄G-Fenton体系催化分光光度法测定雨水中过氧化氢 [J], 徐秀泉;田新全;戴杨叶;吴春笃因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
过氧化氢酶活力的测定实验报告
过氧化氢酶活力的测定实验报告竭诚为您提供优质文档/双击可除过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：实验35过氧化氢酶的活性测定植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使h2o2发生累积。
h2o2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。
过氧化氢酶可以清除h2o2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。
因此，植物组织中h2o2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。
本实验用分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。
一、过氧化氢含量的测定【原理】h2o2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被h２so4溶解后，在415nm波长下比色测定。
在一定范围内，其颜色深浅与h2o2浓度呈线性关系。
【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。
【试剂】100μmol/Lh2o2丙酮试剂：取30%分析纯h2o257μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（w/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。
【方法】1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表40-1加入试剂。
待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml 刻度，415nm波长下比色。
2.样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织2~5g（视h2o2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。
(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。
沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。
过氧化氢酶活性测定
实验29 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。
一、原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。
即可求出消耗的H2O2的量。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦叶片（二）仪器设备：1. 研钵；2. 三角瓶；3. 酸式滴定管；4. 恒温水浴； 5. 容量瓶。
（三）试剂：1. 10%H2SO4；2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；3.0.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L 草酸溶液标定；4. 0.1mol/L H2O2市售30%H2O2大约等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液 5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；5. 0.1mol/L 草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。
三、实验步骤（一）酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
（二）取50ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液 2.5ml，再加入 2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5ml。
过氧化氢酶活力的测定实验报告doc
过氧化氢酶活力的测定实验报告doc过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：过氧化氢酶活性测定实验29 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。
一、原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。
即可求出消耗的H2O2的量。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦叶片（二）仪器设备：1. 研钵；2. 三角瓶；3. 酸式滴定管；4. 恒温水浴；5. 容量瓶。
（三）试剂：1. 10%H2SO4；2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；3. 0.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L 草酸溶液标定；4.0.1mol/L H2O2市售30%H2O2大约等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；5.0.1mol/L 草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。
三、实验步骤（一）酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
（二）取50ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5ml。
高中生物实验：过氧化氢酶活性的测定
高中生物实验：过氧化氢酶活性的测定原理过氧化氢酶广泛存在于植物的所有组织中，能将过氧化氢分解为氧和水，可使生物机体免受过氧化氢的毒害作用。
测定过氧化氢酶的方法有测压法、滴定法以及分光光度法等。
用氧电极法测量放氧速度，方法灵敏而快速。
放氧速度与过氧化氢酶活性成正比。
仪器药品氧电极仪记录仪50mmol/L磷酸缓冲液，pH7.0(见附表2)。
50mmol/L过氧化氢溶液：取1.4ml30%H2O2用磷酸缓冲液定容至250ml即得。
标准过氧化氢酶溶液：称取过氧化氢酶(Sigma)1.0mg(110U/mg)，溶于50mmol/L磷酸缓冲液(pH7.0)11ml中，使酶浓度为10U/ml。
仪器的标定按实验88步骤进行仪器的标定，以求得记录纸上每小格相当的含氧量。
绘制酶活性标准曲线在反应杯中放满过氧化氢磷酸缓冲液，开启电磁搅拌器搅动10分钟，插入电极，吸去溢出在电极外面的溶液，调节移位旋钮，使记录笔位于满刻度的10─20%左右，使记录纸走动，1─2分钟后温度达到平衡，记录笔画出直线。
用微量注射器从电极塞小孔中注入10μ110U/ml过氧化氢酶，立即记录最初90秒钟内的氧释放曲线。
根据上述同样步骤，注入不同浓度的过氧化氢酶10μl(例如浓度为20、30、40、50U/ml等)，记录氧释放曲线。
样品测定在反应怀内注入50mmol/L过氧化氢磷酸缓冲液搅动10分钟，插上电极，待记录为一直线后，注入10μl合适浓度的待测酶液样品，立即记下最初90秒钟内的放氧曲线。
根据样品的放氧曲线，计算得到每分钟的放氧量，在标准曲线上查得酶活性大小。
如果没有标准的过氧化氢酶，不能计算酶活性单位时，也可以用每分钟的放氧量相对地表示酶的活性大小。
颜色反应、染色类试剂实验名称发生颜色变化的物质或结构颜色变化或现象斐林试剂检测生物组织中的还原糖还原糖蓝色→棕色→砖红色双缩脲试剂检测生物组织中的蛋白质蛋白质蓝色→紫色苏丹Ⅲ/Ⅳ检测生物组织中的脂肪脂肪橘黄/红色碘液检测生物组织中的淀粉淀粉蓝色甲基绿观察DNA和RNA在细胞中的分布DNA绿色吡罗红观察DNA和RNA 在细胞中的分布RNA红色溴麝香草酚蓝水溶液探究酵母菌的细胞呼吸方式CO2蓝色→绿色→黄色重铬酸钾溶液探究酵母菌的细胞呼吸方式酒精橙色→灰绿色龙胆紫(醋酸洋红溶液)观察根尖分生组织细胞有丝分裂染色体深色健那绿(活性染料)用高倍显微镜观察线粒体线粒体蓝绿色台盼蓝死细胞蓝色N-1-萘基乙二胺盐酸盐泡菜制作中测定亚硝酸盐的含量亚硝酸盐(经酸化、重氮化)玫瑰红酚红分离土壤中分解尿素的细菌的检测氨红色刚果红分解纤维素的微生物的分离纤维素红色二苯胺DNA的粗提取与鉴定DNA(水浴加热)变蓝冲洗、漂洗类实验名称冲洗、漂洗试剂作用检测生物组织中的脂肪体积分数95%的酒精洗去苏丹Ⅲ/Ⅳ的浮色观察DNA和RNA在细胞中的分布蒸馏水洗去盐酸，利于染色观察根尖分生组织细胞有丝分裂清水洗去解离液，防止过度解离低温诱导植物染色体数目变化体积分数95%的酒精洗去卡诺氏液使用酒精的实验实验名称浓度作用检测生物组织中的脂肪体积分数50%的酒精洗去浮色绿叶中色素的提取和分离无水乙醇溶解并提取绿叶中的色素观察根尖分生组织细胞有丝分裂体积分数95%的酒精与15%的盐酸按1：1比例制成解离液，使组织中的细胞相互分离低温诱导植物染色体数目变化体积分数95%的酒精与15%的盐酸按1：1比例制成解离液，使组织中的细胞相互分离土壤中小动物类群丰富度的研究体积分数70%的酒精保存收集的小动物DNA粗提取与鉴定体积分数95%的酒精(冷却)使DNA析出，与蛋白质分离使用盐酸的实验实验名称浓度作用观察DNA和RNA在细胞中的分布8%盐酸改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞；使染色质中DNA与蛋白质分离，利于DNA与染色剂的结合影响酶活性的条件5%盐酸设定酸性条件观察根尖分生组织细胞有丝分裂15%盐酸与体积分数为95%的酒精按1：1比例制成解离液，使组织中的细胞相互分离低温诱导植物染色体数目变化15%盐酸与体积分数为95%的酒精按1：1比例制成解离液，使组织中的细胞相互分离沃泰默、斯他林和贝利斯实验刺激小肠腔引起分泌促胰液素，发现人体中第一种激素：促胰液素使用NaOH溶液的实验实验名称浓度作用检测生物组织中的还原糖0.1g/mlNaOH形成Cu(OH)2检测生物组织中的蛋白质0.1g/mlNaOH创造碱性环境影响酶活性的条件5%NaOH设定碱性条件探究酵母菌的细胞呼吸方式10%NaOH吸收空气中的CO2，排除对实验结果的影响使用NaCl 溶液的实验实验名称浓度作用观察DNA和RNA在细胞中的分布0.95NaCl(生理盐水)保持人口腔上皮细胞正常形态DNA粗提取与鉴定2mol/L NaCl溶解DNA0.14mol/L NaClDNA的溶解度最小，DNA析出植物芳香油提取增加盐浓度，易于分层使用清水的实验实验名称作用体验制备细胞膜使细胞吸水涨破观察根尖分生组织细胞有丝分裂漂洗，洗去解离液，防止过度解离植物细胞质壁分离和复原保持植物细胞正常形态，观察洋葱鳞片叶外表皮细胞中紫色中央大液泡大小，及原生质层位置其他试剂试剂种类实验名称作用30%蔗糖溶液植物细胞质壁分离和复原植物细胞失水后发生质壁分离现象30%KNO3植物细胞质壁分离和复原植物细胞失水后发生质壁分离和自动复原现象35%FeCl3比较过氧化氢酶在不同条件下的分解过氧化氢分解过程中的无机催化剂，与过氧化氢酶的作用进行相互对照SiO2绿叶中色素的提取和分离充分研磨CaCO3绿叶中色素的提取和分离防止叶绿素被破坏层析液(汽油)绿叶中色素的提取和分离分离绿叶中的四种色素卡诺氏液低温诱导植物染色体数目变化固定细胞形态秋水仙素诱导染色体加倍；诱导基因突变看看网友们都有什么想法网友1实验原理：原理一：新鲜肝脏中含有过氧化氢酶，Fe3+是一种无机催化剂，它们都可以催化过氧化氢分解成水和氧。
过氧化物酶活性的测定
过氧化物酶活性的测定一、实验目的掌握酶活性的测定方法和原理。
二、实验原理过氧化物酶是一种含铁卟啉的氧化酶，是利用H2O2将代谢中一些化合物氧化,其活性与呼吸作用、光和作用等一些生理过程有关。
测定过氧化物酶的活性变化是植物生理和病历上一个常用的指标。
在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在470 nm 处有最大吸收，可用分光光度计测量470 nm的吸光度变化测定过氧化物酶活性。
三、材料、设备和试剂新鲜马铃薯块茎容量瓶（25ml）、量筒（25ml）、移液管（1ml）、研钵、试管架UV-9200紫外可见分光光度计、天平、秒表0.2M磷酸缓冲液（pH6.0）：将0.2M NaH2PO4溶液87.7ml与0.2M Na2HPO4溶液12.3ml混合反应混合液四、实验方法4.1制备酶液：4.2活性测定：值为纵坐标，绘制酶促反应曲线，计算酶的相对活性。
过氧化物酶活性=(△OD470*Vt)/(W*Vs*0.01*t)[u/(g·min)]其中：△OD470为反应时间内吸光值的变化；W为样品质量；t为反应时间；Vt为提取酶液总体积；Vs为测定时酶液体积。
聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离种子蛋白质一、实验目的学习聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理，掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳的操作技术。
二、实验原理SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基磺酸钠), SDS能断裂分子内和分子间氢键,破坏蛋白质的二级和三级结构,强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂,蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中,与SDS分子按比例结合,形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物,这种复合物由于结合大量的SDS,使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块,从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异,由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的,因此在进行电泳时,蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小.当分子量在15KD到200KD之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式:logMW=K-bX,式中:MW为分子量,X为迁移率,k,b 均为常数,若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在相同条件下进行电泳,根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量，从而根据分子量将混合蛋白质分离开。
过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒说明书
过氧化氢酶（CAT ）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0200规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60 mL×1瓶4℃保存试剂一液体60 mL×1瓶4℃保存试剂二液体320 μL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂二：液体置于试剂瓶内EP 管中，使用前需先离心。
2、检测工作液的配制：取100μL 试剂二加入20mL 试剂一，充分混匀（约20T ），作为工作液，现用现配；或者根据比例配制。
产品说明：CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H 2O 2清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。
H 2O 2在240nm 下有特征吸收峰，CAT 能够分解H 2O 2，使反应溶液240nm 下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT 活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌、细胞或组织样本的制备a 、细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL ）为500-1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（功率200w ，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
b 、组织：按照组织质量（g ）：提取液体积（mL ）为1：5-10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
酶催化分光光度法测定过氧化氢
1 中可以看出 ,有无过氧化氢存在时 ,体系的吸收光 谱峰形相同 。即在氨水2氯化铵介质中 ,空白体系的 最大吸收波长为 525 nm ,加入过氧化氢后 ,最大吸
·402 ·
1. p H 9. 8 的氨水2氯化铵 + 1. 0 ×10 - 6 mol ·L - 1血红蛋白溶液 + 4. 0 ×10 - 5 mol ·L - 1茜素红溶液
收波长不变 ,但体系的吸光度明显降低 ,表明在血红 蛋白的催化作用下过氧化氢对刚果红具有强烈的氧 化能力 。
1 试验部分
1. 1 仪器与试剂 J A SCO V2530 型紫外2可见分光光度计 。 过氧化氢标准溶液 :用高锰酸钾溶液标定过氧
化氢溶液 ,标准储备溶液 0. 10 mol ·L - 1 ,于 4 ℃冰 箱内保存 ,标准工作液浓度为 1. 0 ×10 - 3 mol ·L - 1 , 现配现用 。
CHEN Ya2hong1 , L IU Hong2mei2 , TIAN Feng2shou3 , SONG Mao2ping3 , CHEN Peng2l i1
(1. De pt. of Chemist ry , Zhoukou N orm al College , Zhoukou 466000 , Chi na; 2. Zhoukou N o. 1 H i g h S chool , Zhoukou 466000 , Chi na;
试验表明 :随茜素红溶液浓度的增大 ,ΔA 值和 A 值都增大 ,但茜素红溶液浓度太大 ,ΔA 反而变 小 。试 验 选 择 茜 素 红 溶 液 的 浓 度 为 4. 0 × 10 - 5 mol ·L - 1 。 2. 2. 3 血红蛋白用量
实验4、植物组织中过氧化氢酶的活力测定
数据处理
02
对实验数据进行处理，绘制了酶活力与吸光度值的关系图，以
便更好地展示实验结果。
数据可靠性分析
03
对实验数据进行了可靠性分析，确保数据的准确性和可靠性。
结果分析
01
酶活力比较
通过比较不同植物组织中过氧化 氢酶的活力，发现不同植物组织 中酶活力存在差异。
02
吸光度值分析
03
实验误差分析
通过对吸光度值的分析，发现吸 光度值与酶活力之间存在一定的 相关性。
过氧化氢酶活力测定的化学反应原理
01
过氧化氢酶能够催化过氧化氢分解 为水和氧气，这个反应可以用化学 方程式表示为：2H2O2 → 2H2O + O2。
02
在实验中，通常加入适量的过氧 化氢作为底物，并观察其分解速 度，通过测量氧气产生的速率来 计算过氧化氢酶的活力。
过氧化氢酶活力测定的计算方法
实验中，可以通过测量一定时间内氧气 产生的体积来计算过氧化氢酶的活力。
过氧化氢酶活力的大小与植物组织的代谢活性、抗逆性和抗病性等密切相关，因 此测定过氧化氢酶活力对于研究植物生理和抗性机制具有重要意义。
学习过氧化氢酶活力测定的方法
实验中采用了分光光度法来测定过氧化氢酶的活力。该方法 基于过氧化氢在过氧化氢酶的作用下分解产生氧气的原理， 通过测定反应体系中氧气含量的变化来计算过氧化氢酶的活 力。
实验4：植物组织中过 氧化氢酶的活力测定
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REPORTING
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果与分析 • 实验总结与展望
目录
PART 01
实验目的
REPORTING
WENKU DESIGN
过氧化氢酶活力的测定实验报告
过氧化氢酶活力的测定实验报告实验目的，通过测定过氧化氢酶活力的实验，掌握酶活力的测定方法，了解酶活性受到什么因素的影响，为进一步研究酶的特性和应用提供理论基础。
实验原理，过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，其活性可通过测定其催化分解过氧化氢的速率来间接反映。
该实验采用比色法，通过观察过氧化氢酶催化分解过氧化氢后生成的物质对底物的吸光度变化来测定过氧化氢酶的活力。
实验步骤：1. 预先配制好过氧化氢酶的不同浓度溶液。
2. 在试管中分别加入过氧化氢酶溶液、过氧化氢底物和磷酸盐缓冲液，混合均匀。
3. 将混合液放入分光光度计中，记录吸光度随时间的变化。
4. 根据吸光度变化曲线，计算出不同浓度过氧化氢酶的活力。
实验结果与分析：通过实验测定，得到了不同浓度过氧化氢酶的活力数据。
分析数据发现，过氧化氢酶活力随着浓度的增加呈现出一定的变化规律。
随着过氧化氢酶浓度的增加，其活力也随之增加，但当浓度达到一定范围后，活力增加速率逐渐减缓，最终趋于稳定。
这说明过氧化氢酶的活力受到其浓度的影响，但存在一定的饱和效应。
实验结论，通过本次实验，我们成功测定了过氧化氢酶的活力，并对其活力受浓度影响的规律进行了分析。
实验结果表明，过氧化氢酶的活力随着浓度的增加呈现出一定的变化规律，但存在饱和效应。
这对于我们进一步研究酶的特性和应用具有一定的指导意义。
实验意义，本次实验通过测定过氧化氢酶的活力，掌握了酶活力的测定方法，了解了酶活性受到浓度影响的规律。
这对于深入研究酶的特性和应用具有一定的理论意义和实践价值。
总结，通过本次实验，我们成功测定了过氧化氢酶的活力，并对其受浓度影响的规律进行了分析。
这为我们进一步研究酶的特性和应用提供了理论基础，也为我们掌握了酶活力的测定方法提供了实验经验。
希望通过今后的实验研究，能够更深入地了解酶的特性和应用，为科学研究和实践应用提供更多有益的信息。
过氧化氢酶活力的测定碘量法
过氧化氢酶活力的测定碘量法过氧化氢酶（catalase）是一种重要的酶类，它能催化过氧化氢（H2O2）分解为水和氧气。
过氧化氢酶活力的测定是研究酶活性和酶功能的常用方法之一，其中碘量法是一种常见且简便的测定方法。
碘量法是通过测定过氧化氢酶活性对碘化钾溶液消耗的碘量来间接反映酶活力。
具体步骤如下：1. 实验前的准备准备好所需的试剂和仪器设备。
试剂包括：过氧化氢溶液、碘化钾溶液、淀粉溶液、酶提取液等。
仪器设备包括：移液管、比色皿、分光光度计等。
2. 样品制备将待测的样品加入适量的提取液中，研磨均匀，通过离心等手段将细胞碎片去除，得到酶提取液。
酶提取液中的过氧化氢酶即可用于后续的测定。
3. 碘化钾溶液的制备将一定浓度的碘化钾溶液配制好，一般浓度为0.1mol/L。
注意，碘化钾溶液需新鲜配制并保存在暗处，以免被光照射而分解。
4. 实验操作取一定体积的酶提取液，加入适量的过氧化氢溶液中，使其反应一段时间。
然后，加入适量的碘化钾溶液，停止反应。
接着，加入适量的淀粉溶液，使反应体系中出现蓝色。
5. 测定与计算将混合溶液转移至比色皿中，利用分光光度计测定其吸光度。
根据吸光度与碘量的比例关系，可以计算出碘化钾溶液中消耗的碘量。
而碘量与过氧化氢酶活性之间存在一定的定量关系，从而可以间接反映出过氧化氢酶的活力。
通过以上实验步骤，我们可以测定出过氧化氢酶活性的结果。
需要注意的是，在测定过程中要严格控制实验条件，如温度、pH值等，以保证实验结果的准确性和可靠性。
除了碘量法，还有其他方法可以测定过氧化氢酶活力，如比色法、荧光法等。
每种方法都有其适用的场景和优缺点，研究人员可以根据实际需要选择合适的方法进行测定。
碘量法是一种常用且简便的测定过氧化氢酶活力的方法。
通过测定碘化钾溶液中消耗的碘量，可以间接反映出过氧化氢酶的活力。
这一方法在生物化学和医学领域有着广泛的应用，对于研究酶的功能和活性具有重要意义。
酶活力测定实验报告
酶活力测定实验报告酶活力测定实验报告引言：酶是一种生物催化剂，能够加速化学反应的速率，对于维持生物体内的代谢平衡起着重要的作用。
酶活力测定实验是一种常用的实验方法，通过测量酶催化反应中底物消耗量或产物生成量的变化，来间接反映酶的活性水平。
本实验旨在通过测定过氧化氢酶（catalase）在不同温度下的活性变化，探究酶活性与温度之间的关系。
材料与方法：1. 实验仪器：分光光度计、恒温水浴槽。
2. 实验试剂：过氧化氢酶溶液、过氧化氢底物溶液、磷酸盐缓冲液。
3. 实验步骤：a. 在分光光度计中设置波长为240nm。
b. 准备一组含有过氧化氢酶、过氧化氢底物和磷酸盐缓冲液的混合溶液，作为实验组。
c. 将实验组的混合溶液分别置于不同温度的恒温水浴槽中反应一段时间。
d. 取出反应后的混合溶液，通过分光光度计测定其吸光度，得到反应速率。
e. 重复以上步骤，分别在不同温度下进行实验，并记录实验数据。
结果与讨论：通过实验测定，我们得到了不同温度下过氧化氢酶的活性变化曲线。
实验结果显示，随着温度的升高，过氧化氢酶的活性呈现出先增加后降低的趋势。
在较低温度下，酶的活性较低，反应速率较慢；随着温度的升高，酶的活性逐渐增强，反应速率也随之增加；然而，当温度超过一定范围后，酶的活性开始下降，反应速率逐渐减小。
这一结果可以解释为酶的活性受到温度的影响。
酶是一种蛋白质，其活性受到温度的变化而变化。
当温度升高时，酶分子内部的振动加剧，使得酶与底物之间的碰撞频率增加，酶活性增强；然而，当温度过高时，酶分子的结构开始发生变化，部分酶分子失去了原有的构象，导致酶活性下降。
这种变化可能是由于酶分子的部分构象发生变化，使得酶活性中心的空间结构发生改变，从而影响了酶与底物之间的互作用。
此外，实验结果还表明，酶活性与温度之间存在一个最适温度。
在最适温度下，酶的活性达到最高点，反应速率最快。
这是因为在最适温度下，酶分子的结构处于最稳定的状态，酶活性中心与底物之间的互作用最为紧密，因此反应速率最高。
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第19 卷第4 期Vol . 19 No . 4四川省卫生管理干部学院学报J OU R NAL O F SICHUAN CON TINU IN G EDU C A TION COLL E G E O F MS2000 年12 月Dec . 2000 催化分光光度法快速测定血清过氧化氢酶活性Ξ陈大义1 ,余蓉1 ,许沧1 ,汪勇2( 1.四川省卫生管理干部学院检验系,四川成都610041 ;2 .遂宁市卫生防疫站,四川遂宁629000)[ 摘要] 目的:建立一种简单快速的血清过氧化氢酶活性分光光度测定方法。
方法: 利用过氧化氢酶催化分解底物过氧化氢,剩余的过氧化氢与钼酸铵、碘化钾反应生成单质碘,后者与淀粉反应生成蓝色,其蓝色深浅与酶的活性成反比。
结果:底物过氧化氢浓度在0 . 025～100μmol/ ml 范围内线性关系良好γ,为0 . 9995 ,检测限为0 . 025μmol/ ml 。
用本法测定316 例正常人血清,过氧化氢酶活性为50 . 78 ±17 . 46 KU/ L 。
结论: 本方法灵敏度高,稳定性较好,简单快速,适用于血清过氧化氢酶活性的测定。
[ 关键词] 血清;过氧氢化酶;活性测定[ 中图分类号] R44611 [ 文献标识码]A [ 文章编号]1003 - 403 X(2000) 04 - 0249 - 02Active Determination of CAT in Serum by Spectrophotometry/ Chen D a yi , Yu Rong , Xu Ca ng , W a ng Yong ∥Sichu an Contin2 uing Education College of Medical Sciences ,610041Abstract Objective : To establish a simple ,rapid determining met hod of CA T in serum. Method :CA T deco mposes a certain amount of H2 O2 . The surplus can act wit h ammo nium hep tamolybdate and potassium iodide. I odine ,o ne of t he p roduct s ,changes into blue colour when meeting starch mucilage. The intense of colour is inverse ratio wit h t he activit y of enzyme. R esults :There is a good linear relatio n ship in t he range of 0 . 025～100μmol/ ml H2 O2 ( r = 0 . 9995) . The detectio n limit is 0 . 025μmol/ ml . U s2 ing t he met hod ,we detected 316 serums of healt h people. The activit y of CA T in t hese people was 50 . 78 ±17 . 46 KU/ L (珔x ±s) . Conclusion :The met hod is sensitive ,stable and rapid. It is suitable to determine t he activity of CA T in serum.K ey w ords Serum ; C A T ;Activit y ;Determinatio n过氧化氢酶( CA T) 亦称触酶,主要参与体内自由基的清除,催化H2 O2 分解为H2 O 和O2 。
CA T 活性测定,多利用血清中触酶催化分解定量加入的H2 O2 ,经一定时间后,用钼酸铵中止上述反应,并与剩余H2 O2生成黄色的钼黄, 根据其颜色深浅可计算酶的活性[ 1 ] 。
但这些方法都存在样品加入试剂后易使蛋白质沉淀,使溶液浑浊、空白值增高,形成的黄色化合物的最大吸收波长在近紫外区,使分析灵敏度较低、测定值不稳定。
我们在实验中发现H2 O2 、钼酸铵和碘化钾在一定条件下反应析出单质碘,后者与淀粉形成蓝色溶液,从而建立过氧化氢酶分析与测定的方法,现将结果报告如下。
1 材料与方法钼酸铵溶液。
1 %碘化钾溶液。
1 %淀粉溶液。
样本采集:采空腹静脉血,立即测定或4 ℃冰箱保存,48 小时内测定。
试剂配制及实验用水均为亚沸蒸馏水。
112 方法静脉血经过自然分离后, 取血清100μl 与1 . 0ml 的基质液一起置37 ℃水浴箱中准确孵育3 分钟,取出立即加32 . 4mmol/ L 钼酸铵1 . 0ml , 混合后置室温5 分钟,加1 %碘化钾溶液0 . 6ml ,摇匀后,加1 %淀粉溶液0 . 2m 摇匀放置10 分钟,以1cm 比色皿,于586nm 波长下,用空白3 调零,测定样本、空白1 、空白2 的吸光度值。
酶活性单位的定义及计算按文献[ 1 ] 进行。
计算公式如下:A1 - A样271111 材料U V2260 型分光光度计( 日本岛津) 。
722 型分光光度计( 上海第三分析仪器厂)。
水浴箱。
p H7 .4 , 60mmol/ L 钠- 钾磷酸盐缓冲液。
基质液: 在p H7 . 4 磷酸盐缓冲液中含100μmol/ ml 的H2 O2 。
使用时以上述缓冲液稀释为含H2 O2 0. 1μmol/ ml 。
32 . 4mmol/ L血清过氧化氢酶活性KU / L =2 3×3注:过氧化氢酶的活性单位定义为: 每1min 分解1μmol 的H2 O2 即为1 个CA T 活性单位。
271 为一常数,3 为孵育时间(3 分钟) 。
A1 、A2 、A3 分别为空白1 、2 、3 的吸光度值。
空白1 包括1 . 0ml 基质液、1 . 0ml 钼酸铵溶液、100μl 血清、0 . 6ml 碘化钾溶液和0 . 2ml 淀Ξ [ 作者简介]陈大义( 1965 - ) ,男,硕士,副教授·249 ·四川省卫生管理干部学院学报2000 ;19 (4)粉溶液; 空白2 包括1 . 0ml 基质液、1 . 0ml 钼酸铵溶液、100μl 缓冲液、0 . 6ml 碘化钾溶液和0 . 2ml 淀粉溶液;空白3 包括1 . 2ml 缓冲液、1 . 0ml 钼酸铵溶液、0 . 6ml碘化钾溶液和0 . 2ml 淀粉溶液。
2 结果与讨论211 测定机理本实验的测定原理是利用过氧化氢酶在单位时间内催化过氧化氢分解,根据测定剩余过氧化氢的量来计算该酶的活性。
而过氧化氢的测定是利用过氧化氢与钼酸铵反应生成钼黄,钼黄进一步氧化碘化钾,形成单质碘,遇淀粉生成蓝色溶液,从而比色定量。
212 波长选择采用U V2260 型分光光度计对形成的蓝色溶液进行了吸收光谱扫描,结果表明最大吸收峰在586 . 4nm 处。
而文献方法[ 2～3 ] 形成的黄色产物最大吸收峰为380nm ,测定时选用410nm 处的侧峰, 灵敏度相对较低,而本法选用的最大吸收波长位于可见光区,因此更适用一般国产的分光光度计和普通自动化分析仪。
213 H2O2 浓度对测定的影响将含有100μmol/ ml H2 O2 基质液,逐渐稀释为0 . 025 、0 . 05 、0 . 10 、0 . 20 、0 . 40 、1 . 0μmol/ ml ,取上述不同浓度的基质液1 . 0ml ,分别与混合血清100ml 在37 ℃孵育3 分钟,按前述方法操作,测定吸光度值。
其结果表明A 值与H2 O2 浓度之间具有良好的线性关系。
直线回归方程Y = 1 . 96x - 0 . 0524 ,r = 0 . 9995 ( n = 7) 。
214 钼酸铵浓度的影响实验表明,随着钼酸铵浓度增大,蓝色产物吸光度值也增加。
低浓度钼酸铵达不到迅速中止反应的效果,且呈色浅,与H2 O2 反应后生成过多过大的氧气泡妨碍分光光度分析。
但钼酸铵浓度过高,空白吸光度值也上升。
本方法参照国内学者报道[ 1 ] 使用32 . 4mmol/ L 的钼酸铵浓度, 并经实验证实, 上述浓度较好。
该浓度不仅可迅速中止反应,且形成的氧气泡既小又少,不影响分光光度分析结果。
215 碘化钾浓度对测定的影响试验了1 %碘化钾溶液从0 . 05～1 . 0ml ,发现随着碘化钾加入量的增多,吸光度值呈上升的趋势,0 . 4ml 后逐渐稳定,本文选择0 . 6ml 。
216 淀粉浓度对测定的影响本方法关键在于使H2 O2 氧化碘化钾产生单质碘,因碘不稳定,我们利用碘与淀粉的呈色反应,在溶液中加入1 %淀粉溶液呈蓝色。
淀粉太少, 不能与单质碘完全反应,影响测定的准确性; 淀粉太多,溶液显色太深,测定误差较大,淀粉的量对测定影响较大。
实验表明1 %淀粉0 . 2ml 时,测定吸光度值在0 . 2～0 . 7 范围内,且空白管与样品管的测定值之差较大。
217 孵育时间分别进行了60s 、120s 、180s 、300s 、420s 的不同时间的孵育观察。
结果表明,随孵育时间延长,其吸光度值逐渐上升,但线性关系下降。
孵育时间较短时,虽线性关系好,但计时误差较大,结果精密度差。
因此本文采用180s (3min) ,此时方法线性关系好, 精密度也能满足分析要求。
218 孵育温度的影响温度高低与酶的活性密切相关,37 ℃是人体的正常温度,测定此温度下的酶活性,可准确、真实地反映酶在人体内的活性高低,其生理意义非常重要,故本文采用37 ℃作为孵育温度。
219 溶血、黄疸标本对吸光度的影响过氧化氢酶在血细胞中的浓度远高于血清中浓度,如红细胞中所含CA T 是血清的3600 倍,因此测定中应避免采用溶血标本。
由于本法最终显色为蓝色, 而非黄色,因此成功避开了黄胆和高脂血样的影响。
2110 标本与试剂的存放时间离开机体后,酶活性会迅速下降,因此血清标本存放时间对测定结果影响很大。
最好采样后立即测定, 若条件不容许,标本应放置4 ℃冰箱保存, 且48 小时内测定。
碘化钾溶液应置于棕色瓶中存放。
4 ℃冰箱中碘化钾溶液和淀粉溶液可以存放7 天。
若碘化钾溶液变色,则重新配制。
2111 方法精密度取混合血清重复测定, 其批内结果为58 . 66 ±15 . 66 KU / L ( n = 10) 。
2112 正常值参考范围用本法测定了健康体检者316 例,年龄从18～80 岁,其血清过氧化氢酶活性均值为50 . 78 ±17 . 46 KU / L ,与文献[ 3 ] 报道的结果基本一致。