柱后衍生应用
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鸟氨酸
38 Lysine
赖氨酸
39 Histidine
组胺酸
40 3-Methyl-histidine
3-甲基组氨酸
41 1-Methyl-histidine
1-甲基组氨酸
Sarcosine 12
肌氨酸
-Aminoadipic acid 13
α-氨基己二酸
Proline
14 脯氨酸
Glycine 15
Citrulline
17 瓜氨酸
α-Amino-n-butyric acid
18
α-氨基-n-正丁酸
Valine 19
缬氨酸
Cystine
20 胱氨酸
Methionine 21
蛋氨酸
Allo-isoleucine 22
异白胺酸（同分异构体）
Cystathionine
23 丙氨酸丁氨酸硫醚
Isoleucine 24
在 440 nm 检测次要的氨基酸
注意 在这个方法中我们建议使用氨基葡糖酸作为内标物。 己氨酸和 a-氨基 –b-胍基丙酸 不适合作为内标物，因为它们分别会随着络氨酸和 3-甲基组氨酸一起 洗脱出来。
氨基酸校正标准
MSUD 病人血清
Phosphoserine 1
磷酸丝氨酸
Taurine 2
牛磺酸
Phosphoethanolamine 3
磷酸乙醇胺
Urea 4
尿素
Aspartic acid
5 天门冬氨酸
Hydroxyproline 6
羟基脯氨酸
Threonine 7
苏氨酸
Serine
8 丝氨酸
Asparagine 9
氨羰丙氨酸(天门冬酰胺)
Glutamic acid 10
谷氨酸
Glutamine
11 谷氨酸盐
Alanine 16
丙氨酸
液相分析条件 柱温: 55°C 进样体积: 100 μL 流速: 0.40 mL/min 流动相: 钾盐洗脱液，钾盐再生试剂
柱后衍生条件
反应器体积: 0.5 mL 反应器温度: 36°C 衍生剂 1: 100μL ，5%次氯酸钠( NaOCl) 衍生剂 2: 100 mg 邻苯二甲醛(o-Phthalaldehyde) 和 2g 巯基乙醇(Thiofluor) 衍生剂流速: 0.3 mL/min each 检测: 荧光检测器 λex: 330nm
λem: 465nm
步骤
0 1 2 3
时间 （min）
0 0-15 15.1-17 17.1-25
间隔 （min）
0 15 1.9 7.9
钾盐洗脱液 （%） 100 100 0 100
钾盐再生试剂 （%） 0 0 100 0
0.40 mL/min
进样 等度分离 阶跃变化 重新平衡
苜蓿和西红柿中草甘膦和氨甲基磷酸残留量含量的色谱图
检测： 荧光计： ex 330 nm, em 465 nm
C18, 4.6 x 250 mm, 5 µm
1 Aldicarb sulfoxide 涕灭威亚砜 2 Aldicarb sulfone 涕灭威砜 3 Oxamyl 草氨酰 4 Methomyl 灭多威 5 3-Hydroxycarbofuran 3-羟基呋喃丹 6 Aldicarb 涕灭威 7 Propoxur 残杀威 8 Carbofuran 克百威 9 Carbaryl 胺甲萘 10 1-Naphthol 1-萘酚 11 Methiocarb 灭虫威
λex: 365 nm λem: 430 nm
黄曲霉毒素 B1，B2，G1，G2，M1，和 M2
荧光检测和柱后衍生法测定氨基甲酸酯类(Carbamate)农药多残留
柱后衍生条件： 衍生剂 1： 0.05mol/L NaOH 水解衍生剂 衍生剂 2： 100 mg 邻苯二甲醛 (O-Phthaladehyde，OPA), 巯基乙醇 (Thiofluor) 反应器 1（水解温度）： 100 °C, 0.5 mL 反应器 2（衍生温度）： 室温，0.1ml 衍生剂流速： 0.3ml/min
甘氨酸
Phenylalanine 27
苯丙氨酸
-Alanine 28
β-丙氨酸
-Amino-i-butyric acid
29 β-氨基-i-正丁酸
Homocystine 30
高胱氨酸
42 Anserine
甲肌肽
43 Carnosine
肌肽
44 Homocarnosine
高肌肽
45 Arginine
精氨酸
柱温箱条件
时间 [min] 0 13 30 67 80 90 95
温度 [°C] 32 32 56 61 70 70 32
HPLC 条件
时间 [min] 0 20 40 57
57.1 78 78.1 95 95.1
Li290 % 100 100 0 0 0 0 0 0 100
Li365 % 0 0
100 100
碘化衍生法测定黄曲霉毒素含量
分析条件： 色谱柱：C18 柱（150 x 4.6 mm，5 pm) 温度：42 °C 流速：1.0 mL/min 流动相：甲醇：乙腈：水=22:22:56，等度 柱后衍生条件： 温度: 90 °C 反应器体积: 1.4 mL 柱后衍生溶液(0.05%碘溶液): 称取 0.1 g 碘，溶解于 20 mL 甲醇后，加纯水定容至 200 mL,，以 0. 45 um 的尼龙滤膜过滤,4℃避光保存。 流速: 0.3 mL/min 检测: 荧光计，氙灯
12 BDMC (internal standard)
甲醇性样品的条件:
时间
水%
甲醇 %
0
85
Байду номын сангаас
15
1
85
15
44
25
75
44.1
0
100
49
0
100
49.1
85
15
57
85
15
流速： 1ml/min 柱温 42°C, 进样体积 10 µL
OPA 衍生法测定草甘膦类(Glyphosate)除草剂残留
0 0 0 0 0
Li375 % 0 0 0 0
100 100 80 80
0
RG003 % 0 0 0 0 0 0 20 20 0
衍生法测定氨基酸
分析条件： 色谱柱: 高效锂盐阳离子交换色谱柱， 4x100 mm
锂盐阳离子交换保护柱, 2x20 mm. 流速: 0.4 mL/min 流动相: Li292, Li365, Li375, RG003
柱后衍生条件： 反应器体积：0.5 mL 温度: 130 °C 衍生剂: 茚三酮 流速: 0.3 mL/min 检测: UV/VIS 在 570 nm 检测主要的氨基酸
仪器： z 二元液相 z 荧光检测器 z 钾盐阳离子交换柱，4.0 x 150 mm z 钾盐阳离子交换保护柱 3.0 x 20 mm z SPE 小柱，阳离子交换
衍生剂： z 钾盐洗脱液 z 钾盐再生试剂 z 次氯酸盐 z 邻苯二甲醛稀释液（o-Phthalaldehyde） z 巯基乙醇 (Thiofluor) z 邻苯二甲醛 z 5%次氯酸钠溶液 z 二氯甲烷 z 酸性调节剂
异白胺酸
Leucine 25
白胺酸
Tyrosine
26 酪氨酸
31 γ-Aminobutyric acid
γ-氨基丁酸
32 Tryptophan
色氨酸
33 Ethanolamine
乙醇胺
34 Hydroxylysines
羟(基)赖氨酸
35 Ammonia
氨水
36 Creatinine
肌氨酸酐
37 Ornithine
38 Lysine
赖氨酸
39 Histidine
组胺酸
40 3-Methyl-histidine
3-甲基组氨酸
41 1-Methyl-histidine
1-甲基组氨酸
Sarcosine 12
肌氨酸
-Aminoadipic acid 13
α-氨基己二酸
Proline
14 脯氨酸
Glycine 15
Citrulline
17 瓜氨酸
α-Amino-n-butyric acid
18
α-氨基-n-正丁酸
Valine 19
缬氨酸
Cystine
20 胱氨酸
Methionine 21
蛋氨酸
Allo-isoleucine 22
异白胺酸（同分异构体）
Cystathionine
23 丙氨酸丁氨酸硫醚
Isoleucine 24
在 440 nm 检测次要的氨基酸
注意 在这个方法中我们建议使用氨基葡糖酸作为内标物。 己氨酸和 a-氨基 –b-胍基丙酸 不适合作为内标物，因为它们分别会随着络氨酸和 3-甲基组氨酸一起 洗脱出来。
氨基酸校正标准
MSUD 病人血清
Phosphoserine 1
磷酸丝氨酸
Taurine 2
牛磺酸
Phosphoethanolamine 3
磷酸乙醇胺
Urea 4
尿素
Aspartic acid
5 天门冬氨酸
Hydroxyproline 6
羟基脯氨酸
Threonine 7
苏氨酸
Serine
8 丝氨酸
Asparagine 9
氨羰丙氨酸(天门冬酰胺)
Glutamic acid 10
谷氨酸
Glutamine
11 谷氨酸盐
Alanine 16
丙氨酸
液相分析条件 柱温: 55°C 进样体积: 100 μL 流速: 0.40 mL/min 流动相: 钾盐洗脱液，钾盐再生试剂
柱后衍生条件
反应器体积: 0.5 mL 反应器温度: 36°C 衍生剂 1: 100μL ，5%次氯酸钠( NaOCl) 衍生剂 2: 100 mg 邻苯二甲醛(o-Phthalaldehyde) 和 2g 巯基乙醇(Thiofluor) 衍生剂流速: 0.3 mL/min each 检测: 荧光检测器 λex: 330nm
λem: 465nm
步骤
0 1 2 3
时间 （min）
0 0-15 15.1-17 17.1-25
间隔 （min）
0 15 1.9 7.9
钾盐洗脱液 （%） 100 100 0 100
钾盐再生试剂 （%） 0 0 100 0
0.40 mL/min
进样 等度分离 阶跃变化 重新平衡
苜蓿和西红柿中草甘膦和氨甲基磷酸残留量含量的色谱图
检测： 荧光计： ex 330 nm, em 465 nm
C18, 4.6 x 250 mm, 5 µm
1 Aldicarb sulfoxide 涕灭威亚砜 2 Aldicarb sulfone 涕灭威砜 3 Oxamyl 草氨酰 4 Methomyl 灭多威 5 3-Hydroxycarbofuran 3-羟基呋喃丹 6 Aldicarb 涕灭威 7 Propoxur 残杀威 8 Carbofuran 克百威 9 Carbaryl 胺甲萘 10 1-Naphthol 1-萘酚 11 Methiocarb 灭虫威
λex: 365 nm λem: 430 nm
黄曲霉毒素 B1，B2，G1，G2，M1，和 M2
荧光检测和柱后衍生法测定氨基甲酸酯类(Carbamate)农药多残留
柱后衍生条件： 衍生剂 1： 0.05mol/L NaOH 水解衍生剂 衍生剂 2： 100 mg 邻苯二甲醛 (O-Phthaladehyde，OPA), 巯基乙醇 (Thiofluor) 反应器 1（水解温度）： 100 °C, 0.5 mL 反应器 2（衍生温度）： 室温，0.1ml 衍生剂流速： 0.3ml/min
甘氨酸
Phenylalanine 27
苯丙氨酸
-Alanine 28
β-丙氨酸
-Amino-i-butyric acid
29 β-氨基-i-正丁酸
Homocystine 30
高胱氨酸
42 Anserine
甲肌肽
43 Carnosine
肌肽
44 Homocarnosine
高肌肽
45 Arginine
精氨酸
柱温箱条件
时间 [min] 0 13 30 67 80 90 95
温度 [°C] 32 32 56 61 70 70 32
HPLC 条件
时间 [min] 0 20 40 57
57.1 78 78.1 95 95.1
Li290 % 100 100 0 0 0 0 0 0 100
Li365 % 0 0
100 100
碘化衍生法测定黄曲霉毒素含量
分析条件： 色谱柱：C18 柱（150 x 4.6 mm，5 pm) 温度：42 °C 流速：1.0 mL/min 流动相：甲醇：乙腈：水=22:22:56，等度 柱后衍生条件： 温度: 90 °C 反应器体积: 1.4 mL 柱后衍生溶液(0.05%碘溶液): 称取 0.1 g 碘，溶解于 20 mL 甲醇后，加纯水定容至 200 mL,，以 0. 45 um 的尼龙滤膜过滤,4℃避光保存。 流速: 0.3 mL/min 检测: 荧光计，氙灯
12 BDMC (internal standard)
甲醇性样品的条件:
时间
水%
甲醇 %
0
85
Байду номын сангаас
15
1
85
15
44
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44.1
0
100
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0
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85
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15
流速： 1ml/min 柱温 42°C, 进样体积 10 µL
OPA 衍生法测定草甘膦类(Glyphosate)除草剂残留
0 0 0 0 0
Li375 % 0 0 0 0
100 100 80 80
0
RG003 % 0 0 0 0 0 0 20 20 0
衍生法测定氨基酸
分析条件： 色谱柱: 高效锂盐阳离子交换色谱柱， 4x100 mm
锂盐阳离子交换保护柱, 2x20 mm. 流速: 0.4 mL/min 流动相: Li292, Li365, Li375, RG003
柱后衍生条件： 反应器体积：0.5 mL 温度: 130 °C 衍生剂: 茚三酮 流速: 0.3 mL/min 检测: UV/VIS 在 570 nm 检测主要的氨基酸
仪器： z 二元液相 z 荧光检测器 z 钾盐阳离子交换柱，4.0 x 150 mm z 钾盐阳离子交换保护柱 3.0 x 20 mm z SPE 小柱，阳离子交换
衍生剂： z 钾盐洗脱液 z 钾盐再生试剂 z 次氯酸盐 z 邻苯二甲醛稀释液（o-Phthalaldehyde） z 巯基乙醇 (Thiofluor) z 邻苯二甲醛 z 5%次氯酸钠溶液 z 二氯甲烷 z 酸性调节剂
异白胺酸
Leucine 25
白胺酸
Tyrosine
26 酪氨酸
31 γ-Aminobutyric acid
γ-氨基丁酸
32 Tryptophan
色氨酸
33 Ethanolamine
乙醇胺
34 Hydroxylysines
羟(基)赖氨酸
35 Ammonia
氨水
36 Creatinine
肌氨酸酐
37 Ornithine