【CN109776660A】一种制备高活性无毒破伤风类毒素的方法以及破伤风疫苗【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910205721.9

(22)申请日 2019.03.18

(71)申请人 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿

生研究所

地址 215000 江苏省苏州市工业园区若水

路398号

(72)发明人 原丽华　李炯　

(74)专利代理机构 北京超凡志成知识产权代理

事务所(普通合伙) 11371

代理人 郭莲梅

(51)Int.Cl.

C07K 14/33(2006.01)

C12N 15/70(2006.01)

A61K 39/08(2006.01)

A61P 31/04(2006.01)

(54)发明名称

一种制备高活性无毒破伤风类毒素的方法

以及破伤风疫苗

(57)摘要

本发明公开了一种制备高活性无毒破伤风

类毒素的方法以及破伤风疫苗，涉及生物技术领

域。该方法包括将用以表达毒破伤风类毒素的表

达盒插入至破伤风杆菌基因组或大肠杆菌基因

组；其中，所述毒破伤风类毒素的形式选自：TeNT

(RY)、LN+TTC和2TTC中的至少一种。通过对破伤

风杆菌基因组改造，在其中插入表达TeNT(RY)、

LN+TTC或2TTC等形式的毒破伤风类毒素抗原的

表达盒，使得所表达的抗原具有无毒性和活性高

的特点，可用于制备破伤风疫苗，提高疫苗的安

全性。

权利要求书1页 说明书10页序列表6页 附图3页CN 109776660 A 2019.05.21

C N 109776660

A

权　利　要　求　书1/1页CN 109776660 A

1.一种制备高活性无毒破伤风类毒素或片段串联体的方法，其特征在于，其包括：将用以表达无毒破伤风类毒素或片段串联体的表达盒插入至破伤风杆菌基因组或大肠杆菌基因组；

其中，所述无毒破伤风类毒素或片段串联体的形式选自TeNT(RY)、LN+TTC和2TTC中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的制备高活性无毒破伤风类毒素或片段串联体的方法，其特征在于，LN+TTC和2TTC的接头序列各自独立地选自如下序列中的至少一种：PAPAP、(GGGGS)n、(XP)n、(EAAK)n和(EAAKA)n；其中n为的1-10的任意一自然数。

3.根据权利要求1所述的制备高活性无毒破伤风类毒素或片段串联体的方法，其特征在于，将含有所述表达盒的质粒转染所述破伤风杆菌以使所述表达盒插入至所述破伤风杆菌基因组中；

其中，所述质粒还具有如下元件中的至少一种：

I-SceI酶表达盒、I-SceI酶识别位点、目标插入位点的上游同源序列和目标插入位点的下游同源序列。

4.根据权利要求3所述的制备高活性无毒破伤风类毒素或片段串联体的方法，其特征在于，所述目标插入位点位于所述破伤风杆菌的假基因区域。

5.根据权利要求4所述的制备高活性无毒破伤风类毒素或片段串联体的方法，其特征在于，所述假基因位于所述破伤风杆菌基因组如下区域：第3886至4870之间的序列区域或第12173至12872之间的序列区域。

6.根据权利要求3所述的制备高活性无毒破伤风类毒素或片段串联体的方法，其特征在于，I-SceI酶表达盒中的驱动I-SceI酶表达的启动子为持续性驱动表达启动子或诱导性驱动表达启动子；

优选的，所述持续性驱动表达启动子为ptb启动子或Thi启动子；

优选的，所述诱导性驱动表达启动子选自木糖诱导型启动子、乳糖诱导型启动子、radiation诱导型启动子、昆布二糖诱导型启动子和树胶醛糖诱导型启动子中的至少一种。

7.根据权利要求1-6任一项所述的制备高活性无毒破伤风类毒素或片段串联体的方法，其特征在于，所述破伤风杆菌选自如下菌株中的一种：Harvard E88、Harvard C2、Harvard strain A2、Harvard CN655、ATCC19406、ATCC9441、ATCC453、ATC454和CMCC64008。

8.根据权利要求1-6任一项所述的制备高活性无毒破伤风类毒素或片段串联体的方法，其特征在于，所述毒破伤风类毒素的形式为TeNT(RY)，插入至所述破伤风杆菌基因组上的所述表达盒的数量为2个。

9.根据权利要求1-6任一项所述的制备高活性无毒破伤风类毒素或片段串联体的方法，其特征在于，所述无毒破伤风类毒素或片段串联体的形式为LN+TTC，插入至所述破伤风杆菌基因组上的所述表达盒的数量为2个；

或者，所述毒破伤风类毒或片段串联体素的形式为2TTC，插入至所述破伤风杆菌基因组上的所述表达盒的数量为3个。

10.一种破伤风疫苗，其特征在于，其含有无毒破伤风类毒素或片段串联体，所述无毒破伤风类毒素或片段串联体的形式为TeNT(RY)、LN+TTC或2TTC。

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