动植物细胞培养产酶

(2)大蒜悬浮细胞培养
将上述在半固体MS培养基上培养18d的愈 伤组织，在无菌条件下转入含有3mg/L 2,4D和 1.2mg/L 6-BA （苄基腺嘌呤） 的液体 MS培养基中，加入灭菌的玻璃珠，25℃， 600lux，12h/d光照条件下震荡培养18d， 使愈伤组织分散成为小细胞团或单细胞。
然后在无菌条件下，经过筛网将小细胞团 或单细胞转入含有3mg/L 2,4-D和1.2mg/L 6-BA 的液体MS培养基中，25℃,600lux， 12h/d光照条件下震荡培养18d。
(3)酶的分离纯化
细胞培养完成后，收集细胞，经过细胞破 碎、提取、分离得到超氧化物式图
1.动物细胞培养的特点
•细胞生长速度慢。（需添加抗生素） •细胞体积大，无细胞壁保护，对剪切力敏感。 •反应过程成本高，产品价格贵。 •细胞具有锚地依赖性。 •原代细胞一般繁殖50代。
愈伤组织：
将上述外植体植入诱导培养基中，于25℃左 右培养一段时间，从外植体的切口部位长出小 细胞团。
外植体
水稻的外植体（幼 胚）和愈伤组织
愈伤组织
4. 培养条件的影响与控制
（1）温度 （2）pH （3）通气与搅拌 （4）光照的控制 （5）前体的添加（饲喂） （6）刺激剂（elector）的应用
2.培养基特点
应用最广的是MS培养基和LS培养基
MS培养基是1962年由Murashinge和 Skoog为烟草细胞培养而设计的培养基。LS 培养基是在其基础上演变而来的。
3.培养方法：悬浮细胞培养
①细胞株的建立；外植体与愈伤组织 ②扩大培养； ③大罐培养；
外植体：
从植株取出，经过预处理后，用于植物组织 培养的植物组织（包括根、茎、叶、芽、花、 果实、种子等）的片段或小块。
5.植物细胞培养产酶实例
以大蒜细胞培养生产超氧化物歧化酶（SOD）为例
(1)大蒜愈伤组织的诱导
选取结实、饱满、无病虫害的大蒜蒜瓣，去 除外皮，先用70%乙醇消毒20s，再用0.1%升 汞消毒10min，然后无菌水漂洗3次。
在无菌条件下，切成0.5cm3的小块，植入 含有3mg/L 2,4-D和1.2mg/L 6-BA 的半固 体MS培养基中，在25℃，600lux，12h/d光 照条件下培养18d，诱导得到愈伤组织，每18 天继代一次。
2.培养基
①天然培养基 ②合成培养基 ③无血清培养基
3.培养方法
(1)悬浮培养(suspension culture) (2)贴壁培养(anchorage-dependent culture)
微载体培养(microcarrier culture)
4.培养条件的影响与控制
（1）温度：一般控制在36.5℃. （2）pH值：一般控制在7.0-7.6的微碱性范围 内。 （3）渗透压: 应与细胞内渗透压相同。
第三章 动植物细胞培养产酶
与微生物细胞相比，动物细胞和 植物细胞具有各自不同的特性，需 采用各自不同的培养工艺。
植物细胞结构
一、植物细胞培养产酶
1.植物细胞培养的特点
植物细胞培养是指在离 体条件下，将愈伤组 织或其它易分散的组 织置于液体培养基中 进行振荡培养，得到 分散成游离的悬浮细 胞，通过继代培养增 殖，获得大量细胞的 一种技术。
（4）溶解氧：根据情况随时调节。