人组织蛋白酶K(cath-K)说明书
蛋白酶K活性单位测定proteinase K unit assay(超详细 含英文原文)
酶活力单位测定
Enzymatic Assay
蛋白酶 K
Proteinase K
（译自 SIGMA 标准方法）
2021-03-08
原理:
蛋白酶 K 活性单位测定方法
血红蛋白+H2O
蛋白酶 K
TCA 可溶性肽和氨基酸
条件：T = 37℃，pH = 7.5，A750nm，Light path = 1cm
Blank 2.5 5.00
标曲：
Std 1
Std 2 Std 3
溶液 G（L-酪氨酸标液） 0.05
0.10
0.30
溶液 H（HCl）
2.45
2.40
2.20
溶液 E（NaOH）
5.00
5.00
5.00
充分涡旋混匀。各加入 1.5 mL 溶液 F(FC）于各个管中。
Std 4 0.50 2.00 5.00
（tips：某些微量核酸测定仪也可测定，且样品量只需 1-2μL）
方法：比色法
A. 1M 磷酸钾 buffer（pH = 7.5 at 37℃） 配制方法：称取 27.2 g 磷酸二氢钾（KH2PO4)溶于 190 mL 无菌水中，预热 至 37℃并置于 37℃水浴锅中，用 1M KOH 调节 PH 值至 7.5，用无菌水定容 至 200mL。
Folin, O. and Ciocalteu, V. (1927) J. Biol. Chem. 73, 627-650
样品计算:
∆A750nm Sample = A750nm Test - A750nm Standard Blank 将样品 y = ∆A750nm Sample 代入标准曲线公式，可计算出 x，即蛋白酶 K 水解 血红蛋白经蛋白酶 K 水解后释放的酪氨酸的量（单位：µmoles）。
组织蛋白酶K与人椎间盘退变相关性研究
组织蛋白酶K与人椎间盘退变相关性研究（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：王宗亮，刘雅，蔡明，王敏，王尚，史建刚【摘要】目的检测正常和退变人椎间盘细胞中组织蛋白酶K(Cath K)的表达，探讨Cath K与椎间盘退变的相关性。
方法用免疫组化S P法和ELISA法对30例腰椎间盘突出症患者椎间盘组织中Cath K进行检测,并取15例健康成人(尸体)和脊柱骨折手术患者正常椎间盘组织作对照。
结果正常组15例和退变组30例椎间盘中均有Cath K表达,退变组表达水平明显高于正常组,差异显著(P0.05 ) 。
结论Cath K可能参与了椎间盘退变的病理改变。
【关键词】组织蛋白酶K;椎间盘;基质Abstract：Objective To detect the expression of cathepsin K in the cells of normal and degenerative intervertebral disc in humans,and to explore the relationship between them.Methods Immunohistochemical S P method and ELISA method were used to detect the expression of cathepsin K,containing of 30 specimens ofintervertebral disc tissues of patients with prolapse of lumber intervertebral disc.The control group consisted of 15 healthy adults(cadaver) and surgical patients with spinal fracture,whose intervertebral disc tissue was normal.Results Fifteen specimens in normal group and thirty specimens in degeneration group all had cathepsin K expression.The expression in degeneration group was significantly higher than that of control group.The difference was significant(P0.05).Conclusion The cathepsin K may play a role in the pathological process of intervertebral disc degeneration.Key words:cathepsin K;intervertebral disc;matrix组织蛋白酶K(cathepsin K,Cath K)是一种溶酶体半胱氨酸蛋白水解酶，其基因定位于染色体1q21.2,存在于多种组织细胞中，参与结缔组织的分解代谢，通过对比检测Cath K在正常与退变椎间盘中的表达，探讨Cath K与椎间盘退变关系，国内外均未见相关文献报道。
组织蛋白酶k免疫组化
组织蛋白酶k免疫组化
组织蛋白酶K免疫组化是一种常用的免疫组化技术，主要用于检测组织中的特定蛋白。
以下是关于组织蛋白酶K免疫组化的一些基本信息：
1. 原理:组织蛋白酶K是一种特定的蛋白酶，它可以切割某些特定的蛋白结构。
在免疫组化实验中，通过使用特定的抗体来标记目标蛋白，然后使用组织蛋白酶K来切割这些标记的蛋白，从而释放出被标记的片段。
这些被释放的片段可以被其他方法检测和定量。
2. 应用:组织蛋白酶K免疫组化常用于检测组织中的特定蛋白，如细胞周期蛋白、肿瘤标志物等。
3. 优点:
可以检测到非常低浓度的目标蛋白。
可以区分不同的目标蛋白结构。
可以与其他免疫组化技术相结合，提高检测的灵敏度和特异性。
4. 缺点:
需要特定的抗体和组织蛋白酶K。
实验步骤相对复杂。
可能存在交叉反应的问题。
5. 注意事项:
在实验前，需要确保所使用的抗体和组织蛋白酶K都是特异性的。
在实验过程中，需要严格控制反应条件，以确保结果的准确性。
组织蛋白酶L
组织蛋白酶L，人肝脏（Cathepsin L (CatL), Human Liver）-Qwbio产品名称：Cathepsin L (CatL), Human Liver（启维益成有售）货号：16-12-030112分子量：25,000 - 29,000消光系数：1.28储存条件：产品冷冻于20 mM 丙二酸酯, pH 5.5, 1 mM EDTA, 400 mM NaCl。
储存温度：-70°C或者更低活性：大于1U/mg。
1 U被定义为25°C条件下，在400 mM NaAc, pH 5.5，4 mM EDTA，8 mM DTT和Brij存在的反应体系中，每分钟水解1 μmol Z-Phe-Arg-AFC的酶的量。
产品描述：组织蛋白酶L是一种非常有效的溶酶体蛋白酶。
在降解各种蛋白质底物时，其反应活性比组织蛋白酶B和H更高。
组织蛋白酶L的水平为原发性乳腺肿瘤治疗后的复发和治愈情况提供强有力的预测。
（启维益成有售）经过FDA认证测试，组织中制备的组织蛋白酶L对HBsAg，anti-HCV，anti-HBc和anti-HIV 1 & 2均没有活性。
参考文献：Mason, R.W., Green, G.D.J. and Barrett, A.J. 1985. Biochem. J. 226, 233.Klijn et al. 1998. J. Clin. Onc.16, 1013.Barrett, A.J. and Kirschke, H. 1981. Methods Enzoymol. 80, 535.Tchope, J.R. et al. 1991. Biochem. Biophys. Acta. 1076. 149.产品引用文献：Armstrong, Andrea, Niklas Mattsson, Hanna Appelqvist, Camilla Janefjord, Linnea Sandin, Lotta Agholme, Bob Olsson et al. "Lysosomal Network Proteins as Potential Novel CSF Biomarkers for Alzheimer’s Disease." Neuromolecular medicine (2013): 1-11.Miller, Bailey, Aaron J. Friedman, Hyukjae Choi, James Hogan, J. Andrew McCammon, Vivian Hook, and William H. Gerwick. "The Marine Cyanobacterial Metabolite Gallinamide A Is a Potent and Selective Inhibitor of Human Cathepsin L." Journal of natural products (2013).。
注射用重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂说明书20160608(铭复乐)
核准日期：2015年1月14日批准日期：2015年12月18日注射用重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂说明书请仔细阅读说明书并在医师指导下使用【药品名称】通用名称：注射用重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂商品名称：铭复乐®英文名称：Rebinant Human TNK Tissue-type Plasminogen Activator for Injection（rhTNK-tPA）汉语拼音：Zhusheyong Chongzu Ren TNK Zuzhixing Xianrongmeiyuanjihuoji【成份】本品活性成份是重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂，是通过基因工程技术获得的一种基因重组蛋白。
辅料：精氨酸、磷酸、聚山梨酯80和注射用水。
【性状】白色疏松体，复溶后为无色澄明液体。
【适应症】用于发病6小时以的急性心肌梗死患者的溶栓治疗。
【规格】1.0×107IU /16mg /支。
【用法用量】本品应当由具有溶栓治疗经验的医师开具处方。
应当在急性心肌梗死的临床症状发生后尽早开始给予本品治疗。
用于ST段抬高型急性心肌梗死的溶栓治疗，单次给药16毫克。
将16毫克rhTNK-tPA（1支）用3毫升无菌注射用水溶解后,静脉推注给药，在5～10秒完成注射。
注意：加入无菌注射用水后轻轻摇动至完全溶解，不可剧烈摇荡，以免rhTNK-tPA 溶液产生泡沫，降低疗效。
溶解后的本品应单次静脉推注，其注射时间应超过5秒。
本品溶解后应立即使用。
如果没有立即使用，应避光冷藏保存在2～8ºC并在24小时使用。
合并用药：肝素：参照相关指南执行。
抗血小板药物：阿司匹林和氯吡格雷的用法参照相关指南执行。
【不良反应】本品临床试验中的不良事件：与其他溶栓药物相同，本品临床研究中最常见的不良反应是出血,包括颅出血和其他少量出血不良事件，具体数据见表1。
表1. 本品临床试验中的出血性不良事件rhTNK-tPA 16mg (n=124) rt-PA 50mg (n=127)颅出血1（0.81%）1（0.79%）少量出血不良事件：泌尿道出血牙龈出血皮下瘀斑消化道出血血红蛋白等红系指标下降穿刺部位血肿舌尖出血点8（6.45%）6（4.84%）4（3.22%）3（2.42%）2（1.61%）1（0.81%）6（4.72%）4（3.15%）4（3.15%）5（3.94%）3（2.36%）4（3.15%）1（0.79%）当发现有潜在的大出血倾向，尤其是颅出血，则应停止溶栓治疗。
人结蛋白ELISA试剂盒说明书
人结蛋白ELISA试剂盒说明书人结蛋白ELISA试剂盒说明书供应商：上海乔羽生物有限公司ELISA试剂盒规格：(1) 规格：96T 可以测90个样，5个标准孔，1个空白孔(2) 规格：48T 可以测42个样，5个标准孔，1个空白孔人结蛋白ELISA试剂盒说明书Kit composition:Sealing film: 2 (48) / 2 (96)Specifications: 1 copiesSealing bag: 1Standard: 2700ng / L 0.5 * 0.5ml * 1 bottles, 1 bottles are stored in 2-8ELISA package is board: 1 X 48 x 961 2-8 stored inSample dilution: 3ml * 1 ml * 1 bottles of 6 bottles are stored in 2-8Color agent: Liquid 3ml * 1 ml * 6 bottles of 1 bottles in 2-8Color reagent B Liquid 3ml * 1 ml * 1 bottle 6 bottles stored in 2-8 Termination solution: 3ml * 6ml * 1 bottles and 1 bottles are stored in 2-8Concentrated laundry liquid: (2 * 20) * 1 bottles (20ml * 30) * 1 bottles stored in 2-8elisa试剂盒价格，elisa试剂盒说明书，elisa检测试剂盒人结蛋白ELISA试剂盒说明书试剂准备试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
1. 标准品复溶：试剂盒提供6管标准品，每管已标定浓度，并且冻干。
实验前在每个标准品管中加入0.5mL样本稀释液，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动助其溶解，使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。
1911 蛋白酶K
使用方法： 根据实验需要使用，用纯水稀释。
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本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床1 BB-3121 BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3126 BB-3105 BB-3181 BB-3183 BB-3187
产品说明书
BCA 蛋白定量试剂盒 植物核蛋白提取试剂盒 细菌膜蛋白提取试剂盒 植物总蛋白提取试剂盒 植物膜蛋白提取试剂盒 蛋白酶抑制剂混合物 真菌蛋白提取试剂盒 磷酸酶抑制剂混合物 细菌蛋白提取盒（2D 电泳用） 酵母蛋白提取盒（2D 电泳用） 线粒体蛋白提取盒（2D 电泳用）
蛋白酶 K（20mg/ml）
货号：BB-1911
试剂盒储存条件： -20℃保存。
试剂盒组成：
产品组成 规格
蛋白酶 K（20mg/ml） 使用说明书
有效期： 一年。
BB-1911-1 1ml 1ml 1
BB-1911-2 5ml 1ml*5 1
产品说明书 V2.16
组份编号 31010A
※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
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咨询邮箱：bestbio@ 电话：021-33921235
400-8363-211
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。 ● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清
人缓激肽(BK)酶联免疫吸附测定试剂盒说明书
人缓激肽（BK）酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中缓激肽（BK）含量。
实验原理用纯化的BK抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的BK抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物（TMB）显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的BK呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1、酶标板：一块（96孔）2、标准品（冻干品）：2瓶，请临用前15分钟内配制。
每瓶以样品稀释液稀释至1ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为6,000pg/ml，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成6,000pg/ml，3,000pg/ml，1,500pg/ml，750pg/ml，375pg/ml，188pg/ml，94 pg/ml，样品稀释液直接作为空白孔0pg/ml。
如配制3,000pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）6,000 pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、样品稀释液：1×20ml。
4、检测稀释液A：1×10ml。
5、检测稀释液B：1×10ml。
6、检测溶液A：1×120/瓶（1:100）。
临用前以检测稀释液A1:100稀释（如：10检测溶液A/990检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
7、检测溶液B：1×120/瓶（1:100）。
临用前以检测稀释液B1:100稀释。
稀释方法同检测溶液A。
8、底物溶液：1×10ml/瓶。
cath-JCelisa检测试剂盒,人 ELISA JCit
cath-JCelisa检测试剂盒，人 ELISA JCitcath-JCelisa检测试剂盒，人ELISA JCit供应商：上海乔羽生物有限公司cath-JCelisa检测试剂盒，人ELISA JCit计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠绒毛膜促性腺激素?水平。
用纯化的小鼠绒毛膜促性腺激素?抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胶原酶?，再与HRP标记的胶原酶?抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胶原酶?呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠绒毛膜促性腺激素?浓度。
cath-JCelisa检测试剂盒，人ELISA JCit ELISA试剂盒规格：(1) 规格：96T 可以测90个样，5个标准孔，1个空白孔(2) 规格：48T 可以测42个样，5个标准孔，1个空白孔cath-JCelisa检测试剂盒，人ELISA JCit Elisa kit test rules:1, to ensure the accuracy of the gun, the error can not be more than 2%. Available water and electronic balances are determined. But it's better to have professional personnel to correct it.2, to be equipped with 20ul, 50ul, 100ul, 1000ul and a volley. Draw different liquids, to replace the gun head. That is to learn standard.3, in the 1 hours before the experiment the kit from the refrigerator, make all kinds of reagents are restored to room temperature, in order to make the results more stable.4, the experiment, to make the substrate away from light.5, used a gun to suck the liquid when the speed is not too fast, so as to avoid air bubbles and the suction amount is not accurate.6, learn to use liquid, and close to the gun range need to suck, reduce the error.7, add the fluid to the microplate hole, avoid liquid in contact with a gun head and a hole, can make the gun drops on the head and the hole wall contact, the droplet will naturally flow down.8, all add liquid after the enzyme label plate on the table parallel gently shaking 30 seconds, mixing liquid. Can also use the microplate shaking function.9, should try to do two experiments, so as to ensure the accuracy of the data. 10, the question sample should be confirmed by other methods.cath-JCelisa检测试剂盒，人ELISA JCit Kit composition:Sealing film: 2 (48) /2 tablets (96)Specification: 1 copiesSealing bag: 1Standard: 2700ng/L 0.5ml * 0.5ml * 1 bottles 1 bottles of stored at 2-8ELISA plates coated: 1 X 48 x 96 1 2-8 stored atSample dilution: 3ml * 1 ml * 1 bottle 6 bottle stored at 2-8Chromogenic agent A: Liquid 3ml * 1 ml * 6 bottle 1 bottles of stored at 2-8Chromogenic agent B: Liquid 3ml * 1 ml * 6 bottle 1 bottles of stored at 2-8Stop solution: 3ml * 6ml * 1 bottles 1 bottles of stored at 2-8Concentrated washing liquid: (20ml x 20) x 1 bottles (20ml x 30) x 1 bottles stored at 2-8elisa试剂盒价格，elisa试剂盒说明书，elisa检测试剂盒上海乔羽生物有限公司专业的提供elisa试剂盒，进口/国产elisa试剂盒，elisa试剂盒价格，elisa试剂盒说明书，专业elisa试剂盒说明书生产商,老品牌ELISA试剂盒,ELISA试剂盒报价,elisa试剂盒品牌,生化试剂，血清，标准品|对照品、培养基等科研生化试剂，品质保证，技术严格，无效果退款退货，欢迎来电咨询及订购。
蛋白酶K溶液说明书
北京索莱宝科技有限公司
蛋白酶K溶液（10mg/ml）说明书
货号：P1120
规格：1ml/5ml
保存：-20℃储存，有效期至少12个月。
产品说明：
Proteinase K，中文名为蛋白酶K。
进口产品配置，不含DNase，不含RNase，可直接使用。
可以用于消化各种蛋白。
用于各种常见的分子生物学、细胞生物学等相关实验，例如基因组DNA抽提、酶的消化去除等。
酶活力>30U/mg。
在37ºC、pH7.5条件下，每分钟可水解底物酪蛋白生成1µmol酪氨酸所需蛋白酶K的量，定义为一个单位（U）蛋白酶K酶活力。
在很宽的pH范围内有效，有效的pH范围为pH4.0-12.5，最佳pH范围为pH7.5-8.0。
蛋白酶K的最佳反应温度为65℃，但在65℃或更高的温度蛋白酶K自身的也非常迅速地降解。
很多时候反应温度选择50-55℃。
在0.2-1%SDS或约10mM尿素存在的情况下，蛋白酶K显示更高的酶活性。
蛋白酶K的常用工作浓度为0.05-1mg/ml，根据所用缓冲液是否含有SDS、尿素、pH是否适合、温度是否适合等因素确定具体的工作浓度。
常用浓度的EDTA、Triton X-100、Tween20、Sarkosyl、盐酸胍对蛋白酶K的活力影响不大。
注意事项：
如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
第1页共1页。
蛋白酶k
作用
值得注意的是，蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增 加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞 的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果.EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作 用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果.
简介
从林伯氏白色念球菌（tritirachium album limber）中纯化得到。据资料显示：该酶有两个Ca2+结合位点， 它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去Ca2+，由于出现远程的结 构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋 白酶k消化过程中通常加入EDTA（以抑制依赖于Mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化对蛋白酶k具有较强耐 性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/l Ca2+而不含EDTA的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前 要加入EGTA（ph8.0）至终浓度为2mmol/l,以鳌合Ca2+。
蛋白酶K，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯 化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力，因而它应用很广 泛，包括制备脉冲电泳的染色体DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作浓度是 50—100μg/ml。在较广的pH范围内（pH 4-12.5）均有活性。
蛋白酶k
强力蛋白溶解酶
肉毒碱乙酰转移酶(CRAT)ELISA试剂盒说明书
肉毒碱乙酰转移酶(CRAT)ELISA试剂盒说明书本试剂仅供研究使用标本：体液肉毒碱乙酰转移酶(CRAT)ELISA试剂盒说明书试验原理：BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。
人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。
肉毒碱乙酰转移酶(CRAT)ELISA试剂盒说明书自备材料1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
肉毒碱乙酰转移酶(CRAT)ELISA试剂盒说明书操作注意事项1．试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3．不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9．按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
肉毒碱乙酰转移酶(CRAT)ELISA试剂盒说明书样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
CHO-K1 人类角质生长液说明书
Material ProvidedCells: 2 x 1 mL frozen aliquots (ES-072-AV)Format:~2.5 x 106 cells / mL in freezing mediumProduct InformationCellular Background:CHO-K1Cell Line Development:Our proprietary bicistronic expression plasmid containing the sequence coding for the human Angiotensin AT 1 receptor was transfected in CHO-K1 cells stably expressing the mitochondrially targeted Aequorin and G α16. Geneticin-resistant clones were obtained by limit dilution and compared for their response to a reference agonist using the AequoScreen ® assay.DNA Sequence: Identical to coding sequence of GenBank NM_000685.4.Corresponding Protein Sequence:Identical to GenBank P30556.1.Receptor expression level (B MAX ): Estimated to be 24 pmol/mg protein, using [125I](Sar 1,Ile 8)-Angiotensin II.K D for the above radioligand:0.39 nMShipping Conditions: Shipped on dry ice. Please ensure dry ice is still present in the package upon receipt or contact Customer Support.Storage Conditions:Store in liquid nitrogen (vapor phase) immediately upon receipt.TECHNICAL DATA SHEETAequoScreen ® GPCR Cell LineCaution: For Laboratory Use. A research reagent for research purposes onlyhuman Angiotensin AT 1 Receptor Aequorin Cell LineProduct No.: ES-072-A Lot No.: M1W-A3Quality ControlThe EC50 for a reference agonist was determined in an AequoScreen® assay performed on a MicroLumat Plus (Berthold) instrument. A mycoplasma test was performed using MycoAlert® Mycoplasma (Lonza) detection kit. We certify that these results meet our quality release criteria.Angiotensin II (EC50): 0.045 nMStability: Cells were kept in continuous culture for at least 60 days and showed nodecrease in functional response (EC50, E max).Mycoplasma:This cell line tested negative for mycoplasma.Assay ProceduresWe have shown for many of our GPCR cell lines that freshly thawed cells respond with the same pharmacology as cultured cells. All of our products validated in this way are available as frozen ready-to-use cells in our catalogue. PerkinElmer also offers a custom service for the preparation of large quantities of frozen cryopreserved cells either from a catalogue cell line or a customer’s own cell line. This demonstrates that cells can be prepared and frozen in advance of a screening campaign simplifying assay logistics.Recommended Cell Culture Conditions (CHO-K1)•The recommended media catalogue number and supplier reference information are listed in this Product Technical Data Sheet (last page). Media composition is specifically defined for each cell type and receptor expression selection. The use of incorrect media or component substitutions can lead to reduced cell viability, growth issues and/or altered receptor expression.•Cells undergo major stress upon thawing, and need to adapt to their new environment which may initially affect cell adherence and growth rates. The initial recovery of the cells, and initial doubling time, will vary from laboratory to laboratory, reflecting differences in the origin of culture media and serum, and differences in methodology used within each laboratory.•For the initial period of cell growth (i.e. until cells have reached Log-phase, typically 4-10 days), we strongly recommend removal of the antibiotics (G418, Zeocin™, Puromycin, Blasticidin, Hygromycin, Penicillin and Streptomycin) from the culture media. Immediately after thawing, cells may be more permeable to antibiotics, and a higher intracellular antibiotic concentration may result as a consequence. Antibiotics should be re-introduced when cells have recovered from the thawing stress.Growth Medium: Ham's F-12, 10% FBS, 0.4 mg/mL Geneticin (receptor expressionselection), 0.25 mg/mL Zeocin (Aequorin and Gα16 expression selection). Freezing Medium:Ham's F-12, 10% FBS with 10% DMSO, without selection agents. Thawing Cells:Using appropriate personal protective equipment, rapidly place the frozen aliquot in a 37°C water bath (do not submerge) and agitate until its content is thawed completely. Immediately remove from water bath, spray aliquot with 70% ethanol and wipe excess. Under aseptic conditions using a sterile pipette, transfer content to a sterile centrifuge tube containing 10 mL growth medium without antibiotics, pre-warmed at 37°C, and centrifuge (150 x g, 5 min). Discard supernatant using a sterile pipette. Resuspend cell pellet in 10 mL of pre-warmed growth medium without antibiotics by pipetting up and down to break up any clumps, and transfer to an appropriate culture flask (e.g. T-25, T-75 or T-175, see recommended seeding density below). Cells are cultured as a monolayer at 37°C in a humidified atmosphere with 5% CO2.Recommended Seeding Density: Thawing: 15 000 – 33 000 cells/cm2Log-phase: 11 000 – 15 000 cells/cm2Troubleshooting: Initial doubling time can vary between 18 and 96 hours (Average = 25 hours). If cells are still not adhering after 48 hours or grow very slowly, we recommend maintaining the cells in culture and not replacing the media before 5-6 days (cells secrete factors that can help with adherence and growth). If confluence is still <50% after 5-6 days, it is recommended that you replace the media with fresh media (without antibiotics). Do not passage the cells until they reach 80-90% confluence (Log-phase). If cells have not recovered after 10-12 days, please contact our Technical Support.Culture Protocol: Under aseptic conditions, cells are grown to 80% confluence (Log-phase) and trypsinized (0.05% trypsin / 0.5 mM EDTA in calcium and magnesium-free PBS). See recommended seeding density for Log-phase above.Banking Protocol: Cells are grown to 70-80% confluence (Log-phase). Under aseptic conditions, remove medium and rinse the flask with an appropriate volume of calcium and magnesium-free PBS (example 10 mL for T-175). Trypsinize (0.05% trypsin / 0.5 mM EDTA in calcium and magnesium-free PBS) to detach cells (example 5 mL for T-175), let stand 5-10 min at 37°C. Add fresh, room temperature growth medium (without antibiotics) to stop trypsinization and dilute EDTA (example 10 mL for T-175). Transfer cells to a sterile centrifuge tube and centrifuge (150 x g, 5 min). Discard supernatant using a sterile pipette. Resuspend cell pellet in ice-cold freezing medium by pipetting up and down to break up any clumps. Count cells and rapidly aliquot at the selected cell density (e.g. 2.5 x 106 cells/mL) in sterile polypropylene cryovials. Use appropriate material to ensure slow cooling (about -1°C/min) until -70°C. Transfer vials into a liquid nitrogen tank (vapour phase) for storage.Typical Product Data – AequoScreen ® AssayFigure 1: Agonist Response in AequoScreen ® assayAn agonist dose-response experiment was performed in 96-well format using 25 000 cells/well. Luminescence was measured on a MicroLumat Plus (Berthold). Data from a representative experiment are shown.Figure 2: Antagonist Response in AequoScreen ® assayAn antagonist dose-response experiment was performed in 96-well format using 25 000 cells/well with the reference agonist (Angiotensin II) injected at a final concentration equivalent to the EC 80 (0.1 nM). Luminescence was measured on a MicroLumat Plus (Berthold). Data from a representative experiment are shown.AgonistEC 50 (M) % of Digitonin response Angiotensin II4.5 x 10-11102Antagonist IC 50 (M) [Sar 1, IIe 8] Ang II2.2 x 10-10 ZD 71554.7 x 10-10Typical Product Data – Calcium Assay (Fluorescence)Please enquire for fluorescent calcium data availabilityTypical Product Data –Radioligand Binding Assay (Filtration)Figure 3: Saturation Binding Assay Curve (Filtration)A saturation binding assay was performed in in polyethylene MiniSorp (Nunc) format using 0.5 µg membranes/tube. Counts per minute (CPM) were measured on the TopCount®. Data from a representative experiment are shown.AequoScreen® Assay Procedure (MicroBeta® JET)Assay Buffer:DMEM / HAM’s F12 with HEPES, without phenol red (Invitrogen # 11039-021) +0.1 % protease-free BSA (from 10% solution sterilized by filtration at 0.22 µm).Store at 4°C.Coelenterazine h:To prepare a 500 µM Coelenterazine h stock solution, solubilize 250 µg ofCoelenterazine h (Promega # S2011 or Invitrogen # C6780) in 1227 µLmethanol. Store at –20°C in the dark.Digitonin: To prepare a 50 mM Digitonin stock solution, dissolve 1 g of Digitonin (Sigma #D5628) in 16.27 mL of DMSO. Aliquot and store at -20°C.1. Cell Culture andHarvesting: Grow cells (mid-log phase) in culture medium without antibiotics for 18 hours, Detach gently with PBS / 0.5 mM EDTA, pH 7.4. Recover by centrifugation. Resuspend in Assay Buffer at a concentration of 3x105 cells/mL.2. CoelenterazineLoading: Under sterile conditions, add “Coelenterazine h” at a final concentration of 5 µM to the cell suspension, mix well. Incubate at room temperature protected from light and with constant gentle agitation for at least 4 hours (incubation can be extended overnight).3. Cell Dilution: Dilute cells 3x in assay buffer and incubate as described above for 60 min.4. Ligands and platespreparation: Prepare serial dilutions of ligands in assay buffer (2x concentration for agonists, 2x concentration for antagonists). Dispense 50 µL of diluted ligand in a 96-well Optiplate™.Note: Assay can be miniaturized to 384-well and 1536-well formats.5. Agonist ModeReading: Using the reader’s automatic injection system, inject 50 µL of cells (i.e. 5 000 cells) per well and immediately record relative light emission for 20-40 seconds. Digitonin at a final concentration of 100 µM in assay buffer is used in control wells to measure the receptor independent cellular calcium response.6. Antagonist ModeReading: After 15 minutes of incubation of the cells with the ligand, using the reader’s automatic injection system, inject 50 µL of the reference agonist at a final concentration equivalent to the EC80and immediately record relative light emission for 20-40 seconds.7. Data Analysis: Sigmoidal dose-response curves are generated using average LuminescentCounts Per Second (LCPS) recorded for 20-40 sec immediately after cells aremixed with the agonist in agonist mode or the EC80of a reference agonist inantagonist mode.Important Notes:•Temperature should remain below 25°C during the coelenterazine loading of the cells, and until using the cells for the readings. Excessive heating by the cell stirrer for example will result in signal loss.•Depending on (1) sensitivity of the reader used, (2) plate format used, and (3) assay characteristics wanted, it is possible to load cells at (a) different concentrations of cells and coelenterazine, (b) with different subsequent dilution factors, and (c) using different cell numbers per well. This is part of the validation work when importing an assay to a new reader.•For tips and examples on running AequoScreen®assays on different readers, please refer to the AequoScreen® Starter Kit Manual available at /CellLines.Membrane Radioligand Binding Assay Procedure (Filtration)Note: The following are recommended assay conditions and may differ from the conditions used to generate the typical data shown in the above section.Assay Buffer:50 mM TRIS-HCl pH 7.4, 5 mM MgCl2Wash Buffer:50 mM TRIS-HCl pH 7.4 (ice cold)Radioligand: [125I](Sar1,Ile8)-Angiotensin II (PerkinElmer # NEX248)Filters: Unifilter 96 GF/C (PerkinElmer #6005174)Membrane Binding Protocol:Binding assays were performed in 200 µL total volume according to the following conditions. All dilutions are performed in assay buffer:1. Membrane dilution: 0.5 µg of membranes per well, diluted in order to dispense 150 µL/well. Keepon ice.2. Assembly on ice (in 96 Deep well plate) Saturation Binding:Competition Binding: •25 µL of assay buffer or of unlabeled ligand ((Sar1,Ile8)-Angiotensin II,1 µM final) for determination of non specific binding•25 µL of radioligand at increasing concentrations (see figure 3)•150 µL of diluted membranes•25 µL competitor ligand at increasing concentrations•25 µL of radioligand (0.03 nM final)•150 µL of diluted membranes3. Incubation: 60 min at 27 °C.4. Filters preparation: GF/C filters were presoaked in 0.5 % BSA at room temperature for at least 30min.5. Filtration: Aspirate and wash 9 x 500 µL with ice cold wash buffer using a FilterMateHarvester (PerkinElmer).6. Counting: Add 30 µL/well of MicroScint™-O (PerkinElmer # 6013611), cover filter with aTopSeal-A (PerkinElmer # 6050195) and read on a TopCount® (PerkinElmer).References1. Dupriez VJ, Maes K, Le Poul E, Burgeon E, Detheux M. (2002) Aequorin-based functional assays for G-protein-coupled receptors, ion channels, and tyrosine kinase receptors. Receptors Channels 8:319-302. Rizzuto R. Simpson AWM, Brini M, Pozzan T. (1992) Rapid changes of mitochondrial Ca2+ revealed byspecifically targeted recombinant aequorin. Nature 358:325-327.3. Stables J., Green A., Marshall F., Fraser N., Knight E., Sautern M., Milligan G., Lee M., Rees S. (1997) Abioluminescent assay for agonist activity at potentially any G-protein-coupled receptor. Anal. Biochem.252:115-126.4. Milligan G, Marshall F, and Rees S. (1996) Gα16 as a universal G protein adapter: implications for agonistscreening strategies. TIPS 17:235-237.5. Offermanns S, Simon M. (1995) Gα15 and Gα16 couple a wide variety of receptors to phospholipase C. J.Biol. Chem. 270:15175-15180.6. Mauzy C.A., Hwang O, Egloff AM, Wu LH, Chung FZ. (1992) Cloning, expression, and characterization ofa gene encoding the human angiotensin II type 1A receptor. Biochem. Biophys. Res. Commun., 186 (1),277-2847. De Gasparo M. (2002) AT(1) and AT(2) angiotensin II receptors: key features. Drugs, 62, 1-10Materials and InstrumentationThe following tables provide the references of compounds and reagents used for the characterization of the human Angiotensin AT1 receptor Aequorin cell line, as well as some advice on how to use these compounds:Table 1. References of compounds used for functional characterization and binding assaysName Provider Cat n° Working Stock Solution Angiotensin II Bachem H-1705 10 mM in H2O(Sar1,Ile8)-Angiotensin II Bachem H-1730 10 mM in H2OZD 7155 Tocris 1211 10 mM in H2O[125I](Sar1,Ile8)-Angiotensin II PerkinElmer NEX248 N/ATable 2. References of cell culture media and additives.Note: The table below lists generic media and additives typically used for PerkinElmer cell lines. For product specific media and additives, please refer to the “Recommended Cell Culture Conditions” section.Name Provider Cat n°HAM’s F-12 Hyclone SH30026.02DMEM Hyclone SH30022.02UltraCHO (serotonin receptors) BioWitthaker 12-724-QEMEM BioWitthaker 06-174GDHFR-HAM’s F-12 (for DHFR deficient cell lines) Sigma C8862FBS Wisent 80150FBS dialyzed Wisent 80950G418 (geneticin) Wisent 400-130-IGZeocin Invitrogen R25005Blasticidin invitrogen R210-01Puromycin Wisent 400-160-EMStandard HBSS (with CaCl2 and MgCl2) GIBCO 14025HEPES MP Biomedicals, LLC 101926BSA, Protease-free Sigma A-3059PEI Sigma P3143Trypsin-EDTA Hyclone SH30236.02Sodium Pyruvate GIBCO 11360L-Glutamine GIBCO 25030NEAA (non-essential amino acids) GIBCO 11140Please visit our website: /CellLines for additional information on materials, microplates and instrumentation.This product is not for resale or distribution except by authorized distributors.PerkinElmer, Inc.940 Winter StreetWaltham, MA 02451 USAP: (800) 762-4000 or(+1) 203-925-4602。
组织蛋白酶
组织蛋白酶组织蛋白酶是存在于所有动物和其他生物体中的蛋白酶（降解蛋白质的酶）。
这个家族大约有十几个成员，它们的区别在于它们的结构、催化机制以及它们切割的蛋白质。
大多数成员在溶酶体中发现的低pH值下被激活。
因此，这个家族的活动几乎完全在这些细胞器中进行。
但是，也有例外，例如组织蛋白酶K，它在骨吸收过程中由破骨细胞分泌后在细胞外起作用。
组织蛋白酶在哺乳动物细胞更新中起着至关重要的作用。
组织蛋白酶涉及：•癌症，组织蛋白酶D是一种有丝分裂原，“它会减弱衰变趋化因子的抗肿瘤免疫反应，从而抑制树突细胞的功能”。
组织蛋白酶B和L参与基质降解和细胞侵袭。
•中风•创伤性脑损伤•阿尔茨海默病•关节炎•已发现埃博拉病毒、组织蛋白酶B和在较小程度上的组织蛋白酶L是病毒进入宿主细胞所必需的。
•慢阻肺•慢性牙周炎•胰腺炎•几种眼部疾病：圆锥角膜、视网膜脱离、年龄相关性黄斑变性和青光眼。
组织蛋白酶A这种蛋白质的缺乏与多种形式的半乳糖唾液酸中毒有关。
恶性黑色素瘤转移性病变的裂解物中的组织蛋白酶A活性显着高于原发灶裂解物中。
组织蛋白酶A在受肌肉萎缩症和去神经支配疾病中度影响的肌肉中增加。
组织蛋白酶B组织蛋白酶B可作为β-分泌酶1发挥作用，裂解淀粉样前体蛋白以产生淀粉样β。
作为肽酶C1家族成员的编码蛋白的过度表达与食道腺癌和其他肿瘤有关。
组织蛋白酶B也与各种人类肿瘤的进展有关，包括卵巢癌。
组织蛋白酶D组织蛋白酶D（一种天冬氨酰蛋白酶）似乎可以切割多种底物，例如纤连蛋白和层粘连蛋白。
与其他一些组织蛋白酶不同，组织蛋白酶D在中性pH下具有一些蛋白酶活性。
肿瘤细胞中这种酶的高水平似乎与更大的侵袭性有关。
组织蛋白酶K组织蛋白酶K是最有效的哺乳动物胶原酶。
组织蛋白酶K与骨质疏松症有关，骨质疏松症是一种骨密度降低导致骨折风险增加的疾病。
破骨细胞是身体的骨吸收细胞，它们分泌组织蛋白酶K以分解胶原蛋白，胶原蛋白是骨骼非矿物质蛋白基质的主要成分。
在其他组织蛋白酶中，组织蛋白酶K通过细胞外基质的降解在癌症转移中发挥作用。
蛋白酶k针对的蛋白
蛋白酶K（Proteinase K）是一种在真菌林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）中发现的丝氨酸蛋白酶，属于枯草杆菌蛋白酶家族。
它能消化角蛋白（keratin），因此被称为“蛋白酶K”。
蛋白酶K具有稳定的结构、极高的酶活力和广泛的底物特异性，但偏好于带有脂肪族及芳香烃的肽链，能优先分解与疏水性氨基酸、含硫氨基酸、芳香族氨基酸羧基端连接的肽键。
因此，它被广泛应用于工业、农业和科学研究领域，也因此吸引了来自学术界、工业和农业团体的研究兴趣。
在实践中，蛋白酶K被广泛应用于多种应用领域。
在生物学和医学研究中，它常用于分离DNA和RNA的过程，例如在制备原位杂交的组织切片中用于去除内源性核酸酶。
此外，它还可以用于去除内毒素结合的阳离子蛋白，如溶菌酶和核糖核酸酶A。
请注意，蛋白酶K的应用和效果可能会因具体的应用环境和条件而有所不同。
在使用蛋白酶K时，建议根据具体的实验条件和需求进行选择和调整。
组织蛋白酶k重组蛋白人源-概述说明以及解释
组织蛋白酶k重组蛋白人源-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述组织蛋白酶k是一种重要的酶类，具有广泛的生物活性和生理功能。
在细胞内参与多种生物学过程，如细胞信号传导、蛋白质降解和基因转录调控等。
鉴于其在细胞调控中的重要作用，人们越来越关注组织蛋白酶k 的功能和机制。
本文主要关注组织蛋白酶k的重组蛋白人源，即将其进行人工合成和改造，使其能够更好地适应人体环境和需求。
重组蛋白人源的研究对于深入了解组织蛋白酶k的结构和功能，并且为相关疾病的治疗提供有效的工具和方法具有重要意义。
在本文中，我们将首先介绍组织蛋白酶k的重要性，包括其在细胞调控中的作用和其与疾病发生发展的关联。
接着，我们将对组织蛋白酶k的结构和功能进行详细的探讨，以便更好地理解其重组蛋白人源的需求和改造方向。
通过对重组蛋白人源的研究，我们可以改善其在医学领域的应用前景，例如用于疾病的预防和治疗。
此外，我们还将探讨重组蛋白的发展趋势，包括基因工程技术在重组蛋白人源中的应用、重组蛋白药物的研发和生产等方面。
综上所述，研究组织蛋白酶k的重组蛋白人源具有重要的现实意义和应用前景，对于推进医学科学的发展和相关疾病的治疗具有重要的意义。
本文将围绕此主题展开讨论，并通过详细的研究和探讨，为相关领域的研究提供有价值的参考和指导。
文章结构部分内容如下：1.2 文章结构本文章主要包含引言、正文和结论三部分。
引言部分介绍了本篇文章的概述、文章结构和目的。
正文部分主要分为两个小节，分别是组织蛋白酶k的重要性和蛋白酶k的结构和功能。
在组织蛋白酶k的重要性一节中，会详细介绍组织蛋白酶k在生物体内的作用和功能，以及其在相关领域的应用价值。
在蛋白酶k的结构和功能一节中，会对其分子结构进行解析，并探讨其在酶学中的功能和作用机制。
结论部分由两个小节组成，分别是重组蛋白的应用前景和重组蛋白的发展趋势。
在重组蛋白的应用前景一节中，会探讨重组蛋白在医药领域、工业生产和科学研究中的应用前景，以及其在新药开发、治疗疾病等方面的潜力。
cathepsin-k蛋白分子量
cathepsin-k蛋白分子量Cathepsin K蛋白是一种半胱天冬氨酸蛋白酶（cysteine protease），属于半胱天冬氨酸蛋白酶超家族（cysteine protease superfamily）。
它在细胞内负责降解和清除骨骼中的胶原蛋白，是骨重塑的关键调节因子，对骨骼生长和疾病的发展具有重要影响。
Cathepsin K蛋白的分子量约为34千道尔顿（kDa），它在人体中主要由骨骼细胞（如成骨细胞和破骨细胞）合成和分泌。
作为一个蛋白酶，Cathepsin K在骨重塑过程中发挥着至关重要的作用。
它参与调控骨骼发育、维持骨骼结构和整体密度。
Cathepsin K蛋白在骨骼生长过程中的作用主要体现在以下几个方面：1.骨吸收：Cathepsin K是破骨细胞中最主要的蛋白酶，它能够降解骨骼中的胶原蛋白，从而使骨骼发生吸收和重塑。
通过分解骨基质，Cathepsin K促进骨骼重塑和再生，使骨骼维持健康和稳定。
2.转化生长因子的释放：在骨吸收过程中，Cathepsin K的活性还能促进骨骼中存储的生长因子（如TGF-β和IGF）的释放。
这些生长因子可刺激成骨细胞增殖和分化，促进骨骼重塑和修复。
3.参与细胞信号途径：Cathepsin K蛋白也参与了一系列的细胞信号途径，如Wnt信号途径和NF-κB信号途径。
这些信号途径对骨骼的生长和发育具有重要的调控作用。
由于Cathepsin K在骨骼生长和疾病中的作用重要且复杂，它成为了许多骨代谢性疾病的研究热点，尤其是骨质疏松症和类风湿性关节炎等。
在骨质疏松症中，Cathepsin K蛋白的过度活化导致骨骼吸收增加，而骨形成减少，从而导致骨质疏松和骨折的发生。
因此，Cathepsin K被视为骨质疏松症治疗的潜在药物靶点，一些Cathepsin K抑制剂已经被开发用于治疗骨质疏松症。
在类风湿性关节炎中，Cathepsin K也发挥了重要的作用。
该疾病主要通过慢性炎症导致关节破坏和疼痛。
组织蛋白酶K与口腔颌面部疾病
组织蛋白酶K与口腔颌面部疾病移丽珍;温宣;薛洋【期刊名称】《口腔医学》【年(卷),期】2015(000)010【摘要】Cathepsin K( CTSK) was once regarded as a collagenase specifically expressed by osteoclasts and played an important role in bone resorption. However,more and more research found that CTSK was expressed in more extensive cells,tissues and organs. It may not only participate in regulating human physiological activity,but also be closely related to a variety of diseases. This paper reviewed the research progress on the role of CTSK in stomatognathic diseases including periodontitis,peri-implantitis,tooth movement,oral and maxillofacial tumor,root resorption and peri-apical disease.%组织蛋白酶K( cathepsin K,CTSK)曾被认为是破骨细胞特异性的胶原酶,在骨吸收过程中发挥重要作用。
但随着研究的深入,人们发现CTSK在更加广泛的细胞、组织及器官中均有表达,不仅参与机体正常生理活动的调节,还与多种疾病的发生发展密切相关。
本文综述了CTSK 在牙周炎、种植体周围炎、牙齿移动、口腔颌面部肿瘤、牙根吸收及根尖周病等口腔颌面部疾病中的研究进展。
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白酶 K(cath-K)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入组织蛋白酶
K(cath-K)，再与 HRP 标记的组织蛋白酶 K(cath-K)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合
物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作
用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的组织蛋白酶 K(cath-K)呈正相关。用酶标仪
大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6 个月
用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值
在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人组织蛋白酶 K(cath-K)
浓度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液
20ml×1 瓶
7 终止液
6ml×1 瓶
2 酶标试剂
6ml×1 瓶
8 标准品（240pg/ml） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板
12 孔×8 条
9 标准品稀释液
1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液
6ml×1 瓶
10 说明书
1份
5 显色剂 A 液
6ml×1 瓶
11 封板膜
2张
6 显色剂 B 液
6ml×1/瓶
12 密封袋
1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
人组织蛋白酶K(cath-K)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 3pg/ml-150pg/ml
96T
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、龈沟液及相关液体样本中组织蛋白酶 K(cath-K)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人织蛋白酶 K(cath-K)水平。用纯化的人组织蛋
计算 以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
120pg/ml
5 号标准品
150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
60pg/ml
4 号标准品
150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
30pg/ml
3 号标准品
150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
15pg/ml
2 号标准品
150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
Байду номын сангаас
7.5pg/ml
1 号标准品
150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl， 然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。 4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同 3。 8. 洗涤：操作同 5。 9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15 分钟. 10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。 操作程序总结：