色谱课件_实验_高效液相色谱法定量分析

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2.注册样品，进样，得到谱图；（未知样品和标准样品） 注意：必须在本次实验完全结束才能进样继续进行下一个实验。 3.分析未知样品的含量。
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4.使用HPLC的步骤
• • • • 启动色谱仪各模块的电源 1-2分钟后启动色谱工作站 打开泵，设定流量和溶剂比例 打开自动进样器、柱温箱和检测器，使其进入工 作状态 • 待一切准备就绪，可以开始分析样品 • 依次关闭工作站、色谱仪。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意 不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯 水易长霉。 6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。 7.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽 量避免产生气泡。 8.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别 是碱性样品。
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Co Cx Ax AO
其中：Cx、Co为待测组分和标准物质的浓度 Ax、Ao为待测组分和标准物质的色谱峰面积
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三、仪器
Agilent 1100 HPLC 四元泵、自动进样器、 C18柱、 DAD检测器 溶剂：甲醇（色谱纯）、水（二次蒸馏） 标准样品、未知样品
四、实验内容
1.待仪器稳定后，设置色谱条件，编制色谱方法；
实验四 高效液相色谱法定量分析
一、实验目的
二、实验原理 三、仪器 四、实验内容 五、问题与讨论 六、注意事项
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பைடு நூலகம்
一、实验目的
1.学习利用峰面积进行色谱定量分析方法； 2.熟悉色谱仪器的开机，关机和操作； 3.熟悉液相色谱工作站的功能。
二、实验原理
物质的浓度与峰面积成正比，因此峰面积可作为一种定量 指标。若待测组分的标准物质容易得到，则可将未知的多组分 混合物进行色谱分析，直到待测组分与其它物质的色谱峰能分 开为止。将待测组分与标准物质的峰面积进行比较，就能确定 其浓度，这就是利用标准物质进行定量分析的原理。该法是色 谱分析中最简单的一种定量方法。
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五、问题与讨论
1.使用自动进样器的注意事项是什么？ 2.该实验中使用的直接利用标准物质的定量方法的优缺点是 什么？
六、注意事项
1.流动相必须用色谱纯试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性 杂质和其它物质。 2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后 使用。 3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵 不进液。 4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路 及柱子一小时，然 后用甲醇(或甲醇水溶液)冲 洗40分钟以 6 上，以充分洗去离子。