电化学发光法报告解读与注意事项共48页文档
电化学发光免疫分析法-精品文档
Electro-Chemiluminescence Immunoassay (ECLI )
免疫分析法 发光和化学发光 化学发光免疫分析法 电化学发光 电化学发光免疫分析法
免疫分析
基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的 一种手段； 免疫标记技术是将一些既易测定又具有高 度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体 分子上，通过这些标记物的增强放大效应 来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含 量。
化学发光是指在某些特殊的化学反应中， 反应的中间体或产物由于吸收了反应释 放的化学能而处于电子激发态，当其回 到基态时伴随产生的光辐射现象。
化学发光 反应包括 两个关键 步骤，即 化学激发 和发光。
化学发光反应能级图
化学发光分析
根据化学发光反应在某一时刻的发光强 度或反应的发光总量来确定反应中相应 组分含量的分析方法，称为化学发光分 析。
免疫分析法 发光和化学发光 化学发光免疫分析法 电化学发光 电化学发光免疫分析法
电致化学发光（ECL)
电致化学发光 (ECL) 是通过在电极上施 加一定波形的电压或电流信号进行电解 反应的产物之间或与体系中共存组分反 应产生化学发光的现象。
电致化学发光（ECL)
ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光 反应，而CL是通过化合物混合启动发光 反应。因此ECL反应易精确控制，具有 灵活性。
电化学发光原理图
T P A T P A R u ( b p y ) R u ( b p y )
基态
3 + 3
● +
●
激发态
* R u ( b p y ) 3
2 + 3
不稳定
光 子 ( 6 2 0 n m )
化学发光介绍-PPT
肿瘤标志物
组织多肽抗原（TPA） 临床意义：主要见于恶性肿瘤；也可见于急性肝炎、胰腺炎、肝 炎等，但增高程度较轻。 前列腺特异性抗原（PSA） 临床意义：主要见于前列腺癌，是前列腺癌首选和最有应用价值 的肿瘤标志物。前列腺增生、前列腺炎、良性前列腺瘤、肾脏和泌 尿生殖系统疾病时，PSA可轻度升高
乙肝五项标志物的检测 3、HBeAg和HBeAb（HBeAg作为乙肝病毒复制增殖的间接指标） HBeAg阳性：说明病毒复制活跃，传染性强，是乙肝患者具有传
染性指标。可见于急、慢性乙肝和乙肝病毒携带者，如持续阳性， 表明乙肝转为慢性迁延性肝炎 HBeAb 在急性肝炎时，此抗体阳性表明乙肝复制缓解或终止，在慢性肝 炎或肝硬化患者，此抗体阳性说明乙肝病毒DNA与肝细胞发生整 合，提示病情较长，预后不佳。
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肿瘤标志物
游离前列腺特异抗原（F-PSA）与F-PSA/PSA比值 临床意义：F-PSA 见于前列腺增生和前列腺癌，但前列腺癌增高 程度不如前列腺增生明显。 F-PSA/PSA降低 见于前列腺癌和前列腺增生，但前列腺癌的降低 程度明显高于前列腺增生 前列腺酸性磷酸酶（PAP） 临床意义：见于前列腺癌、前列腺增生，但前列腺癌增高更明显
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肿瘤标志物
甲胎蛋白（AFP）
临床意义：常见于原发性肝炎、大多数卵巢和睾丸胚胎性肿瘤或 畸胎瘤，生殖腺外生殖细胞瘤，肝母细胞瘤，肝细胞瘤，转移性肝 癌等，也可见于婴幼儿肝炎，肝硬化、急性肝炎、重症肝炎恢复等， 但多为一过性升高，胎盘梗塞、剥离、羊水栓塞、高危妊娠、母儿 血型不合、糖尿病孕妇等血清AFP也升高。
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感染性疾病检测
乙肝五项标志物的定量检测
4、HBcAb
阳性：表示既往感染乙肝病毒，如高抗体水平持续存在提示乙肝 病毒可能还在复制，乙肝病毒感染后，此抗体是最早出现的标志 性抗体，持续时间长，并且几乎所有患者均产生抗体，所以此抗 体是流行病学调查指标。
化学发光法的原理技术要点及评价应用讲课文档
第十七页
分离技术
1.磁颗粒分离法：用抗原或抗体包被磁颗粒,与标
本中相应抗原或抗体和酶标的抗体或抗原通过 一定模式的免疫学反应后,最终通过磁场将结合
酶标记物IC和游离酶标记物进行分离的技术。
2.微粒子捕获法：所用颗粒是无磁性微粒子作为
抗体或抗原的包被载体, 然后用纤维膜柱子进
行酶标记物的结合状态和游离状态的分离。
• 产生许多光子，使光信号增强
T P A +●
●
TPA
电极
R u ( b p y )33 +
激发态
R u ( b p y )3 *
R
u
(
p
y
)
2 3
+
不稳定
基态
光 子 ( 6 2 0 n m ) 返回
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技术要点
1.抗原抗体结合反应 将已包被了抗体的乳胶微
粒和待测标本加入反应杯中，经温育一定时间
强的荧光强度，通过测定荧光强度进行定量。
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化学发光酶免疫测定技术反应原理图
E
E E
洗涤
E
弃上清
E
E
E
AMPPD发 光
E
碱性磷酸酶
抗 塑
体料是通包微利过被珠 用光酶强对度标发记的光抗 测底体 定物而催样抗 化直本原 作接用进而A 行M 直P 定P 接D 量发。光，
第十五页
电化学发光原理图
• 这一过程可在电极表面周而复始地进行
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化学发光剂应符合以下几个条件
①能参与化学发光反应； ②与抗原或抗体偶联后形成稳定的结合物试剂； ③偶联后仍保留高的量子效应和反应动力； ④应不改变或极少改变被标记物的理化特性，
化学发光法的原理技术要点及评价应用
化学发光法的原理技术要点及评价应用1.发光基团选择：选择能够被化学反应激活产生发光的基团非常重要。
常用的发光基团包括草酰酸酯（ACRIDINIUMESTER）、酶标记物及化学荧光（CHEMILUMINESCENCE）等。
2.激发剂选择：选择适当的激发剂也是化学发光法的关键。
可以使用过氧化物、过氧硫酸钾等能够与发光基团发生氧化还原反应的物质作为激发剂。
3.基质调节：对反应体系的pH值、温度等进行调节，可以影响到反应速率和光强度。
通过对基质的调节，可以提高化学发光的灵敏度和稳定性。
4.光学检测系统：使用光电探测器或光电倍增管等器件，可以检测到反应产生的光信号。
对光信号进行放大、滤波等处理，可以提高检测灵敏度和准确度。
1.生物分析：化学发光法可以被用于检测生物标志物、蛋白质、核酸等分子，并用于生物分子的定量分析、免疫测定等。
该方法具有高灵敏度、高选择性、快速反应等优点，适用于临床诊断、药物研发等领域。
2.生命科学研究：化学发光法在生命科学研究中被广泛应用于信号转导、细胞活性检测、蛋白质相互作用等实验。
例如，荧光素酰物酶标记技术可以用于检测酶的活性、细胞内信号的传递等。
3.环境监测：化学发光法可以用于环境中有毒有害物质的快速检测。
例如，利用一些发光基团与特定污染物发生化学反应，可以检测到其存在，并对其浓度进行定量分析。
虽然化学发光法具有许多优点，但也存在一些限制和挑战：1.实验条件控制要求高：化学发光法对实验条件的控制要求较高，包括反应温度、pH值等因素。
这对实验室人员的技术和仪器设备的要求较高。
2.反应可逆性：化学发光法大多利用氧化还原反应产生发光，这种反应通常是可逆的。
因此，光强度的持续时间较短，需要在短时间内进行光信号的检测。
总的来说，化学发光法是一种快速、灵敏度高的分析方法，在生命科学研究和临床诊断中具有广泛的应用前景。
随着科学技术的不断发展，化学发光法的应用也将进一步拓展和深化。
电化学发光法报告解读与注意事项
常见的甲状腺疾病
2、原发性甲状腺功能亢进 又称Grave's 病，多发生于20-40岁 女性， 病因：自身免疫（主要）、环境、 遗传有关，感染，外伤，精神刺激， 过度疲劳，妊娠（早期妊娠），碘 摄入过多，某类药物 表现：弥漫性肿大，50%突眼症状 （与严重程度无关），浸润性皮肤 病变（足背胫前，酷似橘皮） T3、T4型甲亢 亚临床型甲亢（无任何症状）、淡 漠型甲亢，继发性甲亢（40y，结甲， 药物） 高功能腺瘤（单个自主分泌的结节， 无突眼）
一、性激素六项
FSH、LH（脑垂体） 1、正常情况下，二者相差不大。 2、基础的FSH、LH 在5-10IU/L 3、若FSH、LH<5 低促性腺激素性闭经（垂体、下丘脑的问题） 4、若FSH、LH> 10 提示卵巢早衰，功能差。 5、若FSH、LH> 40 高促性腺激素性闭经 一般是无法怀孕 6、LH/FSH> 2-3 多囊卵巢综合征的参考指标之一
甲 状 腺 激 素 的 合 成 与 调 节
甲 状 腺 激 素 的 合 成 与 调 节
甲状腺功能实验室检查指标
1、功能指标类： TSH、 TT3、 TT4、 FT3、 FT4、 2、抗体类： TPOAb、 TGAb、 TRAb
TRAb（TSH-受体抗体）
1、TSH结合抑制球蛋白 2、甲状腺刺激性抗体（Grave‘s 病致病抗体，90%以上的GD阳性） 3、甲状腺刺激阻断抗体（可能部分甲状腺炎产生甲减的原因） 4、与TSH有相同的功能，但是不受负反馈限制。
一、性激素六项
E2（卵巢分泌） 1、基础分泌 25-45pg/ml。 2、若是基础分泌 >45-80 提示生育能力下降 3、E2 >100 pg/ml 卵巢早衰
电化学发光免疫分析法课件
通过实验技巧的分享，帮助读者更好地掌握电化学发光免 疫分析法的实验操作和优化方法。
案例三：疑难问题解答
案例名称
解决电化学发光免疫分析法中的常见问题
案例描述
列举一些在电化学发光免疫分析法中常见的疑难问题，如信号干扰、非特异性吸附等，并 提供相应的解决方案和注意事项。
案例总结
通过疑难问题解答，帮助读者更好地规避实验中可能出现的问题，提高实验的准确性和可 靠性。
03
实验步骤
样本准备
样本采集
采集血液、尿液等生物样本，确 保样本质量和代表性。
样本处理
对样本进行离心、分离、稀释等 操作，以去除杂质并获得纯度较 高的待测组分。
加样和反应
加样
将处理后的样本加入到电化学发光免 疫分析试剂中，确保加样量准确。
反应条件
控制温度、pH值等反应条件，确保反 应顺利进行。
电化学发光免疫分析法PPT课件
目录
• 引言 • 工作原理 • 实验步骤 • 仪器与试剂 • 结果解读 • 应用与优势 • 案例分析
01
引言
目的和背景
01
介绍电化学发光免疫分析法的目 的和背景，包括其在医学、生物 、环境等领域的应用。
02
分析电化学发光免疫分析法的发 展历程，以及当前的研究热点和 挑战。
定期对仪器进行校准和维护，保 证检测结果的准确性和可靠性。
05
结果解读
结果判读方法
确定参考值范围
根据不同年龄、性别和生理状态 ，确定各项指标的正常参考值范
围。
观察指标变化趋势
注意各项指标的变化趋势，如逐 渐升高或降低，可能提示某种疾
病或生理变化。
综合分析
结合其他检查结果和患者的临床 表现，进行综合分析，以得出准
化学发光法的原理技术要点及评价应用教学资料
分离技术
1.磁颗粒分离法：用抗原或抗体包被磁颗粒,与标 本中相应抗原或抗体和酶标的抗体或抗原通过 一定模式的免疫学反应后,最终通过磁场将结合 酶标记物IC和游离酶标记物进行分离的技术。
2.微粒子捕获法：所用颗粒是无磁性微粒子作为 抗体或抗原的包被载体, 然后用纤维膜柱子进 行酶标记物的结合状态和游离状态的分离。
3.包被珠分离法：用聚苯乙稀等材料制成小珠,在 小珠上包被抗原或抗体,经抗原抗体反应后,将 结合状态和游离状态的酶标记物进行分离.
化学发光法的原理技术要点及评 价应用
化学发光免疫技术的类型
• 按发光剂不同分为 1.发光酶免疫测定（CLEIA） chemiluminescence enzymeimmunoasssay 2.化学发光免疫测定技术(CLIA) chemiluminescence immunoassay 3.电化学发光免疫测定技术(ECLI) electrochemiluminescence immunoassay
R
CH 3 N
O CO O
+ CO2+ 光
3.电化学发光剂
• 是指通过在电极表面进行电化学反应而发出 光的物质。
特点：①反应在电极进行； ②电子供体为：三丙胺（TPA） ③化学发光剂：三联毗啶钌
三联毗啶钌 分子结构图
N
N
N
Ru
N
N
N
O O
N O
O
返回
第二节 发光酶免疫测定（CLEIA）
一、原理 属于酶免疫测定的一种。只是最后一 步酶反应所用底物为发光剂，通过发光反应 发出的光在特定的仪器上进行测定。
二、技术类型 根据酶促反应底物不同可分为： 1.荧光酶免疫测定技术 2.化学发光酶免疫测定技术
化学发光分析法共51页文档
66、节制使快乐增加并使享受加强。 ——德 谟克利 特 67、今天应做的事没有做，明天再早也 是耽误 了。——裴斯 泰洛齐 68、决定一个人的一生，以及整个命运 的，只 是一瞬 之间。 ——歌 德 69、懒人无法享受休息之乐。——拉布 克 70、浪费时间是一桩大罪过。——卢梭
化学发光分析法
1、合法而 逊 2、权力会使人渐渐失去温厚善良的美 德。— —伯克
3、最大限度地行使权力总是令人反感 ；权力 不易确 定之处 始终存 在着危 险。— —塞·约翰逊 4、权力会奴化一切。——塔西佗
5、虽然权力是一头固执的熊，可是金 子可以 拉着它 的鼻子 走。— —莎士 比
化学发光法的原理技术要点及评价应用 (2)课件
chemiluminescence immunoassay 3.电化学发光免疫测定技术(ECLI)
electrochemiluminescence immunoassay • 按分离方法不同分 1.微粒子化学发光免疫测定
简易、快捷。
第二十二页，本课件共有27页
第四节 电化学发光免疫测定技术（ECLI） 一、原理 是一种在电极表面由电化学引发的特
异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化 学发光二个过程。ECL是电启动发光反应，而CL 是通过化合物混合启动发光反应。用化学发光 剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+标记Ab，通过Ag-Ab
关于化学发光法的原理技术要 点及评价应用 (2)
第一页，本课件共有27页
概念
• 化学发光免疫技术：集灵敏的化学
发光分析和特异的抗原抗体免疫测 定于一体的检测技术。 • 特点： 特异性高、敏感性高、分离简便、 快速、试剂无毒、安全稳定、
可自动化。
第二页，本课件共有27页
化学发光免疫技术的类型
• 按发光剂不同分为
光
பைடு நூலகம்
HO
CH 2 COOH
氧化二聚体
第九页，本课件共有27页
AMPPD
• AMPPD在碱性条件下，被AP酶解生成相当稳定的
AMP-D阴离子，其有2～30min的分解半衰期，发 出波长为470nm的持续性光，在15min时其强度 达到高峰，15～60min内光强度保持相对稳定。
1.3 AMPPD
OO
O CH3
2.将链霉亲和素（SA）包被磁珠加入反应杯中，再次
电化学发光法检测铁蛋白_概述说明以及解释
电化学发光法检测铁蛋白概述说明以及解释1. 引言1.1 概述铁蛋白是一种负责储存和调控铁元素的重要蛋白质，它在人体中起着至关重要的生理功能。
因此，准确快速地检测铁蛋白的含量和活性对于疾病诊断、治疗以及药物研发具有重要意义。
传统的检测方法存在操作复杂、时间消耗长等缺陷，并且常常需要使用昂贵的仪器设备，限制了其在实际应用中的推广。
电化学发光法作为一种新兴的检测技术，因其高灵敏度、高选择性和简便易行而受到广泛关注。
1.2 文章结构本文将首先介绍铁蛋白的重要性，包括其在铁代谢、氧气运输以及身体抵抗氧化损伤等方面的作用。
接下来，我们将详细讲解电化学发光法原理以及其与传统方法相比的优势和应用领域。
然后，我们将阐述实验方法和步骤，包括样品准备与处理、电极制备与选择以及电化学发光实验条件设置及仪器安装等内容。
进一步，我们将展示实验结果并进行详细的解释和分析，比较不同条件对检测结果的影响以及与其他方法进行对比和验证的实验结果讨论。
最后，我们将总结本研究内容和主要成果，并对未来相关研究方向和应用前景提出展望和建议。
1.3 目的本文旨在系统概述电化学发光法在铁蛋白检测中的应用，并详细阐述该方法的原理、实验方法、结果解释与分析以及与其他方法的对比讨论。
通过本文的阐述，读者将能够深入了解电化学发光法检测铁蛋白的优势和挑战，加深对该技术在实际应用中的理解，并为今后相关研究和应用提供参考和指导。
2. 铁蛋白的电化学发光法检测:2.1 铁蛋白的重要性:铁蛋白是一种广泛存在于生物体内的重要蛋白质，它在细胞代谢和储存铁元素中发挥着关键的作用。
铁蛋白能够稳定地结合和储存可溶性的铁离子，从而保持细胞内对铁元素的平衡，并在需要时释放铁供应给细胞代谢所需。
因此，准确、灵敏地检测和分析铁蛋白对研究生物体内微量金属元素动态变化以及相关疾病诊断具有重要意义。
2.2 电化学发光法原理:电化学发光法是一种基于电化学与发光途径结合而成的检测方法。
其基本原理是通过施加电势使得触发液相中存在的荧光物质产生激发态，并随后退激辐射出特定波长的荧光信号。
化学发光法的原理技术要点及评价应用 PPT
技术要点
1.三联吡啶钌标记抗体和生物素标记抗体与待测标本 同时加入一个反应杯中孵育反应
2.将链霉亲和素（SA）包被磁珠加入反应杯中，再次 孵育，使生物素（B）通过与亲和素（A）的结合， 将磁珠、Ab连接为一体，形成双Ab夹心法。
技术要点
1.抗原抗体结合反应 将包被McAb的磁颗粒和待 测标本加入到反应管中，标本中待测Ag与磁珠 上Ab结合，再加上AE标记Ab，经过温育，形成 磁珠Ab-Ag-AE标记Ab复合物。
2.分离技术 在电磁场中进行2-3次洗涤后，很快 地将未结合的多余Ag和标记Ab洗去。
3.化学发光反应 经洗涤的磁珠中，加入H2O2和 pH纠正液NaOH，这时AE不需要催化剂即分解并 发光，由集光器接收，经光电倍增管放大，记 录1S内所产生的光子能，其积分与被测物含量
荧光酶免疫测定技术反应原理图
E
E E
洗涤
Байду номын сангаас
E
弃上清
E
E
E
4MU
E
激发荧光
碱性磷酸酶
是抗 体利包 用被 理想标 的记 酶抗 体荧光样底本 物，生成的产物稳定并有
塑料微珠
抗原
强的荧光强度，通过测定荧光强度进行定量。
化学发光酶免疫测定技术反应原理图
E
E E
洗涤
E
弃上清
E
E
E
AMPPD发 光
E
碱性磷酸酶
抗 塑
2.微粒子捕获法：所用颗粒是无磁性微粒子作为 抗体或抗原的包被载体, 然后用纤维膜柱子进 行酶标记物的结合状态和游离状态的分离。
化学发光免疫测定共46页文档
51、没有哪个社会可以制订一部永远 适用的 宪法， 甚至一 条永远 适用的 法律。 ——杰 斐逊 52、法律源于人的自卫本能。——英 格索尔
53、人们通常会发现，法律就是这样 一种的 网，触 犯法律 的人， 小的可 以穿网 而过， 大的可 以破网 而出， 只有中 等的才 会坠入 网中。 ——申 斯通 54、法律就是法律它是一座雄伟的大 夏，庇 护着我 们大家 ；它的 每一块 砖石都 垒在另 一块砖 石上。 ——高 尔斯华 绥 55、今天的法律未必明天仍是法律。 ——罗·伯顿
谢Байду номын сангаас！
61、奢侈是舒适的，否则就不是奢侈 。——CocoCha nel 62、少而好学，如日出之阳；壮而好学 ，如日 中之光 ；志而 好学， 如炳烛 之光。 ——刘 向 63、三军可夺帅也，匹夫不可夺志也。 ——孔 丘 64、人生就是学校。在那里，与其说好 的教师 是幸福 ，不如 说好的 教师是 不幸。 ——海 贝尔 65、接受挑战，就可以享受胜利的喜悦 。——杰纳勒 尔·乔治·S·巴顿