三种药用植物内生真菌抗菌活性菌株的筛选

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第 !" 卷第 " 期 "#$" 年 % 月
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健康研究
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基础医学
三种药用植物内生真菌抗菌活性菌株的筛选
黄银芳范志英章方臖刘=幸姚韶莹王丽薇
杭州师范大学健康管理学院 药学教研室浙江 杭州 !$##!/
摘要目的=筛选具有抗多种植物病原真菌活性的药用植物内生真菌菌株 方法=以常见的植物病原真菌包括灰 葡萄孢 C".78.*4+*1$7$- 尖孢镰孢 H(4-7*(B "G84A"7(B 终极腐霉 '8./*(B (#.*B(B 与立枯丝核菌 I/*:"+."1*- 4"3 #-1* 菌株为指示菌 对分离自天南星多花黄精银杏三种 药 用 植 物 的 9! 株 内 生 真 菌 菌 株 进 行 抗 菌 活 性 筛 选 结 果=共有 "# 株菌株对至少一种指示菌有抑制活性占总菌株数的 "9)%]其 中 天 南 星 内 生 真 菌 cYLVT##/ 茎 点 霉 '/"B- 7,)多花黄精内生真菌 cYL^/$# 变灰青霉 '$1*+*##*(B +-1$4+$14与银杏内生真菌 P\[T$/0 团青霉 '$1*+*##*(B +"BB(1$对四种指示菌均有较强抑制活性 结论=药用植物内生真菌对植物病原菌有较高抑制活性 关键词药用植物内生真菌抗菌活性 中图分类号<">%====文献标识码+====文章编号$/9% ./%%0"#$"#" .##0% .#!
马 铃 薯 葡 萄 糖 培 养 液 W'EBE'JDaE-'7DM-'EG W1` 取 去 皮 马 铃 薯 "## N 切 成 小 块 加 水 $### K?煮沸 !# K68滤去马铃薯块将 滤 液 补 足 至 $### K?加葡萄糖 "# N溶化后分装$$; g灭菌 !# K68 $)"=供试菌株 = 植 物 病 原 真 菌 包 括 灰 葡 萄 孢 C< +*1$7$- 尖 孢 镰 孢 H<"G84A"7(B 终 极 腐 霉 '<(#.*3 B(B立枯 丝核 菌 I<4"#-1*均由 浙江 大学 生物技 术 研究室提供 $)!=内生真菌分 离 培 养 及 纯 化 = 将 采 集 的 植 物 标 本放置于保鲜袋中并于 %> G 内运回实验室 植物 标本先 用 9;] 酒 精 表 面 消 毒 $ K68 然 后 用 浓 度 #i;] R4O 的次氯酸钠进 行表面消 毒 $# K68接 着 用无菌水漂洗三遍后置于无菌滤纸上吸干水用无 菌刀 片 将 经 组 织 消 毒 的 植 物 组 织 切 成 $# n$# KK 左右大小的组 织 片 将 组 织 片 移 接 在 含 $## !N4K? 氨苄青霉素和链霉素的 R4O 水琼脂 V+ 平板上 "% g培养"; g 培养 ! X$# 天 待菌丝长出后将 菌丝顶 端 移 接 到 W1+ 固 体 培 养 基 上 "; g 培 养 反复纯化直至获得纯培养的菌株
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健康研究
"#$" 年=
示菌有抑制作用#占总 菌 株 数 的 "9)%]$ 其 中 天 南 星内生真菌 cYLVT##/%多花黄精内生真菌 cYf^/$# 与银杏内生 真 菌 P\[T$/0 这 三 株 菌 对 四 种 指 示 菌 株均有较强抑制作用#这说明它们的代谢产物对指 示菌具有较广泛的抗菌活性$ 三种药用植物内生真
;<材料与方法 $)$= 培 养 基 = 马 铃 薯 葡 萄 糖 琼 脂 培 养 基 W'EBE' JDaE-'7DBNB- W1+ 取 去 皮 马 铃 薯 "## N 切 成 小 块加水 $### K?煮 沸 !# K68滤 去 马 铃 薯 块将 滤 液补足 至 $### K?加 葡 萄 糖 "# N琼 脂 $; N溶 化 后分装$$; g灭菌 !# K68
$ )% = 抗 菌 活 性 初 筛 = 采 用 平 板 对 峙 培 养 法 将 供 试 内生真菌菌株与指示菌分别培养活化用直径为 ; KK的不锈钢打孔器切取 指 示 菌 接 入 在 0# KK的 W1+平板中央用同样 的 方 法 将 内 生 真 菌 菌 饼 接 入 W1+平板四 侧 距 中 心 !# KK "; g 培 养 " X; 天后观察菌落的生长及抑菌圈情况初步判断具有 抗菌活性的菌株 $ ); = 活 性 菌 株 的 复 筛 = 采 用 平 板 对 峙 培 养 法 选 择 初筛有活 性 的 内 生 真 菌 菌 株 与 指 示 菌 分 别 培 养 活 化用直径为 ;KK的不锈钢打孔器切取内 生真菌菌 饼 接 入 0# KK 的 W1+ 平 板 一 侧 距 中 心 !# KK "; g 培 养 % X; 天 后 在 W1+平 板 另 一 侧 距 中心 !# KK 接入指示菌以 只 接 指 示 菌 指 示 菌 接 在平板距中心 !# KK处 为 空 白 对 照" X; 天 后 观 察菌落的生长及抑菌情况病原菌与内生菌菌落相 交后观察记录内生真菌对病原菌的包围抑制及覆 盖病原菌菌落占领其营养空间的过程筛选出对病 原菌具有较强抑制作用的内生菌 $ )/ = 菌 株 的 鉴 定 = 根 据 活 性 筛 选 结 果 选 取 活 性 较 强和 4或抑菌谱较 广 的 内 生 真 菌 进 行 形 态 学 与 分 子 生物学鉴定
=<结<果 " )$ = 菌 株 分 离 情 况 = 对 天 南 星 多 花 黄 精 与 银 杏 这 三种药用植物的不同组织部位内生真菌进行分离 获得内生真菌菌株共 9! 株 具体分离情况见表 $
表 ;<三种药用植物内生真菌分离情况
药用植物 天南天星 多花黄精
银杏
分离部位 叶 茎 根 叶 茎
收稿日期"#$" .#" .$# 基金项目浙江省新苗人才计划项目"#$$ <%"$#;! 作者简介黄银芳$0>> . 女浙江杭州人硕士研究生 通讯作者王丽薇$09/ . 女浙江金华人讲师博士研究方向药用植物及其内生真菌代谢产物