牛奶中抗生素残留及其三种检测方法的比较分析研究

1 牛奶中抗生素残留的来源
1.1 滥用、超量使用抗生素、不遵守休药期规定
加剂已十分广泛，其中含量有一定比例的抗生素， 主要作用是预防疾病的发生，这也是牛奶抗生素 残留重要原因。据统计，美国大约8O％的食品动
收稿日期：2010-06-04； 作者简介：褚立群，女，质量员，从事化验和质量控制方 面的工作。
《乳业科学与技术》 2010 年第 4 期 （总第 143 期）
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牛奶中抗生素残留及其三种检测方法的比较分析研究
褚立群
光明荷斯坦牧业有限公司，上海 200443
摘 要：抗生素残留不仅危害人类健康，同时也影响牛奶的品质，造成经济损失。本文讨论了牛奶中抗
生素残留的来源与途径和危害，通过比较分析三种检测方法，找出一种能够相对的可同时检测多种样品
1.3 其他原因 此外，在高温季节，一些不法交奶户为防止
牛奶的酸败，往往向牛奶中掺杂各种抗生素。由 于牧场管理不善，挤奶、储奶没有严格的卫生制 度和配套的设施，人为添加或造成牛奶抗生素的 污染。其中这也是奶中抗生素残留的两个来源重 要。
鲜奶中抗生素残留的检测方法大致分为三 类：生物测定法（微生物测定法、放射受体测定 法）、免疫法（放射免疫法、荧光免疫法、酶联 免疫法）、理化分析法（波谱法、色谱及联用技 术）。下面介绍三种常用的牛奶中抗生素残留检 测方法。通过这三种检测方法比较找出一种最经 济最有效的检测方法。
物在其一生中或多或少地服用过药物，而在我国 则几乎所有的食品动物都使用过药物或饲料添加
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褚立群：牛奶中抗生素残留及其三种检测方法的比较分析研究
剂。畜禽饲料中添加的抗生素在畜禽机体内发挥 了抑菌和杀菌作用，有效地阻止了肠道有害菌的 增殖，使畜禽机体得以保持正常的微生态平衡， 从而减少了发病率。其次，添加的抗生素能使畜 禽肠道变薄，增加肠黏膜通透性，有利于畜禽对 营养成分的吸收，起到促生长作用。但由于科学 知识的缺乏和经济利益的驱动，不合理地使用和 滥用饲料添加剂的情况经常发生，造成抗生素在 动物组织中的残留，并通过食物链进人人体，对 人类健康构成威胁。
℃±5 ℃。 （2）用吸管吸奶样至吸管刻度处。将奶样滴
入药粉管中，摇匀。 （3）将药粉管和检测试剂盒放在加热器上，
加热 5 min。 （4）5 min 后，将奶样倒入检测试剂盒的样
品槽中，当奶样流到反应环，使兰色反应环湿润 时，立即按下反应键，反应 4 min。
（5）4 min 后，将检测试剂盒放入读数仪中， 按键进行读数。
2.1.1菌液的置备 将菌种（嗜热乳酸链球菌）移种脱脂乳（10 g
无抗脱脂奶粉+100 ML蒸馏水），经36 ℃±10 ℃， 15 h培养后，以灭菌脱脂乳（经113 ℃，20 min灭 菌）1:1稀释待用。
2.1.2步骤 取检样 9 mL，置 15 mm×150 mm 试管，80 ℃
水浴加热 5 min，冷却 37 ℃以下，加菌液 1 mL， 36 ℃±1 ℃水浴 2 h，加 TTC 0.3 mL，36 ℃±1 ℃水 浴 30 min，观察，如阳性，再水浴培养 30 min 做 第二次观察。每份检样做二份，另外再做阴性、
益。但抗生素的不规范使用导致动物体内药物的 生素残留。尤其是使用乳房灌注法治疗乳腺炎时，
滞留、蓄积，并以残留的方式进入人体内和生态 易造成牛奶中抗生素残留。休药期的长短是根据
系统，给人类健康和环境带来危害。随着世界各 药物进入动物体内吸收、分布、转化、排泄与消
国对食品安全性的重视加强，美国、欧盟等国家 除过程的快慢而制定的。即使同一种药物用法不
近年来畜牧业在迅速发展，“绿色”“环保”
一般认为，对奶牛用药不当或不注意安全时
“有机”食品倍受老百姓的欢迎。牛奶作为营养 间是牛奶中抗生素残留的重要因素，奶牛饲养环
最全面、消化率最高的有机食品之一，其质量及 境中存在大量的化脓性细菌，如葡萄球菌、链球
其安全性倍受关注。自 1949 年美国首次发现抗生 素对畜禽有促生长作用，此后，许多国家将抗生
通过比较分析，我建议使用价格合理，检测 良好的 ECLIPSE 50 试剂盒来进行检测。
参考文献
[1] 何继军，王彪．牛奶中抗生素残留的检测分析[J]．中国农业科 技导报，2009，(S1).18-19
问题。对此，检测技术也迅速发展，以寻求简便、 后，未按规定遵守休药期就将产品出售，这是造
快速、准确、敏感性高的检测方法满足日趋严格 成抗生素药物残留量超标的主要原因之一。
的残留限量要求，保障人们饮用牛奶的卫生和安 全。
1.2 饲料添加剂中增加了高残留的抗生素含量 随着畜牧业的发展，在牛饲料中添加饲料添
阳性对照各一份，阳性对照管用无抗生素的乳 8 mL 加抗生素及菌液和 TTC。阴性对照管用无抗生 素乳 9 mL 及菌液和 TTC。
2.1.3判断方法 准确培养 30 min，观察结果，如为阳性，再
继续培养 30 min 做第二次观察。在观察要迅速， 避免光照过久干扰，乳中有抗生素存在，则在向 检样中加入菌液培养时细菌不增殖，此时由于加 入的指示剂 TTC 不还原，所以不显色。与此相反， 如果没有抗生素存在，则加入菌液即进行增殖， TTC 被还原而显红色，也就是说检样呈乳的原色 时为阳性，成红色为阴性，具体判断标准见表 1。
用 ECLIPSE 50 试剂盒测定乳中抗生素的残 留，操作简单，灵活性强，无需对样品进行任何 的处理，只需严格按照说明书上规定的方法进行 操作，就能获得理想的效果，且不易出现假阳性 现象，同时不要求检测人员具备较高的专业知识， 被检样品的需要量少，只需 50 μL 样品即可测定。 平均批量检测每个样品约花费 3~5 元，检测价格 相对合理。
的方法，更有效的使牛奶供应去抗生素化。
关键词：牛奶；抗生素残留；TTC 法；SNAP 快速检测法；ECLIPSE50 检测法
中图分类号: TS252.54
文献标识码：A
文章编号：1671-5187(2010)04-0193-03
Study on Antibiotic Residues in Milk and its Comparative Analysis of Three kinds of Detection Methods
losses. In this article, how antibiotics transferred into milk and how to take effect actions to prevent antibiotics contaminate the
milk are illustrated. After comparative analysis of three kinds of detection methods, we can choose one method, which can test
已相继颁布一系列法律，禁止或限制抗生素的使 同休药期长短也不相同，休药期的长短还与用药
用。牛奶是人们尤其是婴幼儿的主要营养食品， 剂量有很大关系。饲养者使用标有休药期的抗生
牛奶中残留抗生素会危害饮用者身体健康。如何 素药物及含抗生素药物饲料添加剂后，未按规定
防止牛奶中抗生素残留是值得我们关注和探讨的 遵守休药期，或是使用含抗生素药物饲料添加剂
2 牛奶中抗生素残留的检测方法比较
2.1 TTC法 TTC法，即 氯化三 苯基 四氮唑 法( tripheye
tetrazolium chloride)，是目前我国食品卫生标准中 规定的检查牛乳中抗生素残留的检测方法 (GB5409-85)。该法简便、快速，无需特殊设备，1 h~2 h可见报告，很适合牧场、乳品厂及食品卫生 检测部门采用。检测各种抗生素所用的TTC法试验 的灵敏度（最低检出量）分别为：青霉素0.004 U/mL，链霉素0.5 U/mL，庆大霉素0.4 U/mL，卡 那霉素5 U/mL。
more milk samples within shorter time，the milk chain can provide antibiotic free dairy products to consumer in more effective
way.
Key words: milk, antibiotic residues, TTC, SNAP, ECLIPSE50
表 1 显色状态标准判断
显色状态
判断
未显色者
阳性
微红色者
可疑
桃红色
阴性
2.1.4判断方法 牛只奶样 TTC 检测结果是阴性的，及时将该
牛移入正常牛群中；如检测结果是阳性的，继续 跟踪，直至无抗生素残留为止。
2.2 E50试剂盒检测法
2.2.1 将 E50 试剂盒 6 ℃冰箱保存。
2.2.2 步骤 待检测前取出 E50 试剂盒，用专用移液枪取
0.5 mL 牛奶至 E50 试剂盒，贴上黏贴膜 65 ℃水浴 锅恒温 135 min，观察颜色若黄色则阴性，不变色 则阳性。
2.2.3 判断方法 绿黄色或黄色为阴性即无抗生素存在；蓝紫
色为阳性即存在抗生素；绿蓝色为可疑建议重做 检测。
2.3 SNAP快速检测法
2.3.1 加热器的操作方法 （1）将加热器放置在室温，与电源相连。 （2）在加热器左手边有开关按纽，此按纽为
3 比较与分析
表2 三种检测方法的比较分析结果
检测方法
TTC 检测
试剂盒 SNAP 快速 （E50） 检测法
检测样品/份
20
20
20
处理时间
2h
2.5 h
9 min
阴性样品/份
16
15
12
阳性样品/份
0
4
8
可疑对照/份
4
源自文库
1
0
阴性样品的比率
80 %
75 %
60 %
从表 2 的结果可以看出，用国标 TTC 法检测 抗生素残留虽然费用较低但检测方法相对复杂， 消耗时间也相对较长，实验中易出现失败现象， 可疑对照样品交多，即假阳性结果，如果时间处 理时间过长，即 0.5 h 以后全部为阴性，实验结果 不准确。从表 2 中可以看出，TTC 法检抗生素范 围较大。即牛奶中残留抗生素较多。
菌等，容易引起奶牛的乳房炎。为了预防和治疗 奶牛的乳房炎，常常注射大量的抗生素。如青霉
素广泛应用于畜牧业，我国在 20 世纪 50 年代开 始将抗生素作为饲料添加剂，其在防治动物疾病
素、链霉素、庆大霉素等，这些抗菌素会从奶牛 体内移行到乳腺并进入牛奶中。资料表明，用抗
方面起到十分显著的作用，取得了明显的经济效 生素治疗后的奶牛，其挤出的牛奶5 天内都有抗
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温度指示带显示颜色，绿色显示在哪个温度上代 表现在的温度是多少度。轻轻转动低温旋纽，使 绿色位于指示带上 45 ℃上。
（5）稳定 5 min，即可进行测定。 （6）将加热器电源关闭。
2.3.2 测试步骤 （1）打开加热器，等待加热器温度稳定在 45
用 SNAP 快速检测法仪器稳定性良好、结果 重现性好、检测速度快、操作简便。从表格中可 以看出，SNAP 快速检测法仪器检测的牛奶抗生素
残留较少。 本试验通过国标TTC 方法、ECLIPSE 50 试
剂盒与SNAP快速检测法检测20份乳样品中抗生 素残留的对比研究，结果表明：SNAP快速检测法 乳中抗生素残留的灵敏度、准确性显著高于 ECLIPSE 50试剂盒检测同时ECLIPSE 50试剂盒检 测高于国标TTC法，且样品处理的时间可节约很 多，同时SNAP快速检测法在判定检出阳性样品的 时间上比ECLIPSE 50试剂盒检测与TTC法节省， 较TTC法快速。
Chu Liqun
Shanghai Brightdairy Holstan Co., Ltd., ShangHai 200443, China
Abstract: Antibiotic residues are not only harmful to human health, but also affect the quality of milk, and can result in economic
三相按纽：向左按下为低温加热（LOW）、向右按 下为高温加热（HIGH）、保持中间状态为关闭加 热器。
（3）将开关按纽向左按下，同时调节处于加 热器中间位置的低温调温旋纽（LOW），使调温旋 纽上的白色条指示于 4 处，这时调温旋纽右边的 加热器指示灯会亮。
（4）预热 10 min~15 min，直至加热块上的