实验四类风湿因子检测知识讲解

操作步骤
（1）在3块载玻片上分别加一滴RF阳性血清、 RF阴性血清及待检血清。
（2）加20ul IgG致敏的胶乳于各血清样品中， 轻微晃动载玻片混匀。
（3）1 min 后观察凝集反应发生情况
结果观察和判断
• 在室内的光线下观察，有清晰的凝集颗粒 出现，且液体澄清者为RF阳性。
• 若需做半定量测定，可将血清作倍比稀释， 重复上述测定，以出现凝集的血清最高稀 释度为RF的效价（滴度）。
• 类风湿因子并非类风湿病所特有，部分正常人及肝 炎病人也可呈阳性反应，75岁以上的老年人阳性率 较高。据报导，在类风湿病活动期内，（多数报导 认为）此期的阳性率为60—80﹪，非活动期的阳性 率为20—50﹪。风湿热的阳性率约为10—40﹪，风 湿病以外的疾病仍有4 —10 ﹪呈阳性。有10﹪的正 常人也呈阳性，并随着年龄的增加而阳性率也升高。 尤其是60岁以上者增高较为常见。
实验四类风湿因子检测
•
RF与体内变性的IgG结合形成免疫复合物后
可活化补体，或被吞噬细胞吞噬。由吞噬细胞释
放的溶酶体酶、活化肽、胶原酶、前列腺素E2等 物质，在细胞因子和炎性粘附分子的参与下，致
组织炎性损伤，可使患者发生骨关节炎及血管炎。
类风ຫໍສະໝຸດ Baidu性关节炎
• 类风湿关节炎( RA)： 其病因及发病机制仍 不完全明了, 推测可能为外源性感染作用于 遗传易感个体, 导致机体免疫系统紊乱, 进而 引起关节滑膜、软骨组织慢性炎症和破坏的 自身免疫性疾病。
胶乳凝集试验检测RF
• 概念：颗粒性抗原与相应抗体，或表面包 被抗原（抗体）的颗粒状物质与相应的抗 体（抗原）在电解质存在的条件下相互结 合，出现肉眼可见的凝集团现象。
正向间接凝集试验—测RF
原理（胶乳凝集试验）
• 类风湿因子（RF）是一组抗变性IgG的自身抗体， 它能与人或动物的变性IgG结合，而不与正常人 IgG发生凝集反应。
• IgG型RF：在RA患者血清或滑膜液中IgG型RF的出现 与患者的滑膜炎、血管炎和关节的症状密切相关， 此类RF常伴随高滴度的IgM型RF在同一RA患者血清 或滑膜液中出现。在正常人及非RA患者中很难检测 出IgG型RF．IgG型RF在关节软骨表面的沉积可激活 补体引起关节的炎性损伤，因此滑膜液中检测出 IgG型RF比血清中检出IgM型RF更具病理意义。
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• 常见的RF有IgM型、IgG型、IgA型和IgE型， 其中IgM和IgA类风湿因子易于检测，而IgG类 风湿因子难于测出。IgA类风湿因子及IgM类 风湿因子对类风湿关节炎诊断有较好的参考 价值。
• IgM型RF：在RA患者血清中IgM型RF效价＞ 80IU/ml并伴有严重关节功能障碍时，通常提 示患者预后不良。
• RF检测方法一般有胶乳凝集试验、双抗原夹心 ELISA法、速率散射比浊法 。
• 一般医院主要采用胶乳凝集法和酶联免疫吸附法测 定类风湿因子。
类风湿因子的检测
• 类风湿因子的主要类型： IgM型 • 特点：高凝集、易于沉淀 • 测定方法为： 1、乳胶凝集法 2、酶联免疫吸附法 3 、乳胶免疫比浊法
• 将处理过的人IgG与胶乳颗粒共价交联，使其吸附 于胶乳颗粒载体上，称为致敏胶乳颗粒。当待检 血清中有RF时，则与致敏胶乳颗粒上的变性IgG发 生反应，出现凝集现象。
（变性IgG）
（正向）间接凝集反应原理示意图
主要的试剂和器材
• 类风湿胶乳诊断试剂 • RF阴性对照 • RF阳性对照 • 反应板 • 搅拌棒
注意事项
（1）器材要洁净、血清要新鲜、以确保结果 可靠
（2）注意阴性、阳性对照的设立 （3）注意血清及致敏胶乳加样量的比例
直接凝集试验（玻片法）--测ABO血型
原理
• 天然的颗粒性抗原（如细胞、细菌等）与相应抗 体在适宜条件下反应，出现肉眼可见的凝集物， 称为直接凝集反应。
• 玻片法属于定性试验。
混合，用肉眼观察有无凝集。
结果观察和判断
• 有凝集时红细胞相互聚集成团，出现大小不等的 颗粒。
注意事项
• 玻片应洁净、干燥、中性，以防止和减少 非特异性凝集。
• 室温低于10℃时，易出现冷凝集而造成的 结果。
临床意义
• 在美国风湿病协会所规定的类风湿性关节炎诊断标 准中，本试验是诊断标准之一。本试验对类风湿性 疾病的阳性率约80~90﹪。
主要的试剂和器材
• 抗A血型定型试剂 • 抗B血型定型试剂 • 搅拌棒 • 玻片
步骤
• 取玻片1块，左上角和右上角分别标上“A”和“B” • 用采血针采指尖血（左手无名指尺侧），将血滴在
玻片的两端。 • 在两血滴上分别滴上抗A标准血清和抗B标准血清，
用搅拌棒搅匀。 • 手持玻片，前后旋转摇动，促使血清与红细胞充分
• RF在RA患者中的阳性检出率很高，可达79.6%， 是RA患者血清中常见的自身抗体。高滴度RF阳性 支持对早期RA的诊断，在RA患者，RF的滴度与患 者的临床表现呈正相关，即随症状加重而效价升高。 但RF不是仅在RA患者中出现，在SLE、进行性全 身性硬化症等自身免疫性疾病患者和部分老年人中 RF的阳性率可达28.9%～50%。因而RF对RA患者 并不具有严格特异性，RF阳性不能作为诊断RA的 惟一标准。尽管在多种疾病中可有RF阳性，但滴均 较低（＜40IU/ml），随着RF滴度增加，RF对RA 的诊断特异性增高。
类风湿因子的病理作用（一）
• 类风湿性血管炎，在外周血液循环中，类 风湿性关节炎特异性RF与自身IgG分子结 合形成稳定的免疫复合物，部分被单核-吞 噬细胞系统清除，部分沉积于血管壁，激 活补体导致血管炎。
类风湿因子的病理作用 （二）
• 关节型损伤由于类风湿关节滑液中缺少正 常的IgG分子，IgG-RF自身结合形成多聚 体复合物，IgG-RF多聚体沉积于关节表面 激活补体引起关节性损伤。