KDY-9820凯氏定氮仪操作规程

KDY-9820凯氏定氮仪操作规程

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一、原理

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蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分4

解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以5

硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。

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二、试剂

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1．35%NaOH溶液：

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35gNaOH溶于65mL水。

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2．2%硼酸溶液：

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2g H3BO3溶于100mL水。

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3．甲基红—溴甲酚绿混合指示剂：

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（参照GB/T 603-2002 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备）

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溶液Ⅰ：称取0.1 g 溴甲酚绿，溶于乙醇(95%)，用乙醇(95%)稀释至100mL

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溶液Ⅱ：称取0.2 g 甲基红，溶于乙醇(95%)，用乙醇(95% )稀释至100mL

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取30 m L溶液I, 10mL溶液Ⅱ，混匀。

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4．盐酸标准滴定溶液：

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（参照GB/T 601-2002 化学试剂标准滴定溶液的制备）

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4.1配制

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按表1的规定量取盐酸，注入1000m L水中，摇匀。

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4.2标定

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按表2的规定称取于270℃- 300℃高温炉中灼烧至恒重的工作基准试剂无水碳酸28

钠，溶于50m L水中，加10滴溴甲酚绿-甲基红指示液，用配制好的盐酸溶液滴29

定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸2 min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。同30

时做空白试验。

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盐酸标准滴定溶液的浓度[c(HCl)]。数值以摩尔每升(mol/L)表示，计算公式如下：34

M

V V m HCl )(1000

)(c 21-⨯=

35 式中：

36 m ——无水碳酸钠的质量的准确数值，单位为克(g)； 37 V 1 ——盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升(mL)；

38 V 2 ——空白试验盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升(mL)

39 M ——[M (32CO Na 2

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) = 52.994]，单位为克每摩尔(g/mol)。

40 注：盐酸浓度根据样品蛋白含量自行选择。 41

42 5．催化剂：

43 硫酸钾:无水硫酸铜=10：1(w/w) 44

45 6．铬酸洗液：

46 将10g 重铬酸钾粉末置于500ml 烧杯中，加水20ml ，加热使其溶解。然后边搅47 拌边慢慢注入180ml 浓H 2SO 4。 48

49 三、实验步骤： 50 （一）、消化

51 称取0.2g 干燥样品（精确到0.0001g ）移入干燥消煮管中。加入0.33g 催化剂及52 10ml 硫酸，稍摇匀后于管口放一小漏斗。放入消化炉中，温度升至300℃后持续1h ，53 再升温至400℃消化4h 。至液体呈无色澄清透明后，冷却。加入10mL 蒸馏水稀释54 样品，冷却至室温。 55

56 （二）、蒸馏

57 1． 蒸馏水桶中加入10L 去离子水，不得有气泄露。

58 配制35%NaOH 溶液3至5L 加入碱桶中，不得有气泄露。 59 配制2%硼酸溶液3至5L 加入酸桶中，不得有气泄露。 60

61 2． 打开冷凝水和电源开关。等待2min 后，检查液桶内空气是否充满，液桶鼓胀62 即可。 63

64 3． 检查空消煮管和三角瓶是否正确放置在托架上。按硼酸键，使硼酸液能够加到65 三角瓶中，待正常后再按硼酸键停止。按加碱键，使碱液能够加到消煮管中，待正66 常后再按加碱键停止。按蒸馏键，一般2-4min ，蒸馏正常即可。 67

68 4． 按转换键，将加硼酸液时间设定为6s ，加碱液时间设定为5s 。将空三角瓶放在69 托盘上，有样品的消煮管放在托架上，要与上端的橡胶塞装紧。按转换键，仪器自70 动蒸馏。蒸馏完毕时，会发出提示响声。 71

72 5．测定结束后，用去离子水冲洗橡胶塞、蒸馏管及硼酸管，将空消煮管和三角瓶正73 确放置在托架上。关闭冷凝水及电源，拔出电源插头。

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76 （三）、滴定

77 取下三角瓶，加入10滴溴甲酚绿-甲基红指示液。用标准盐酸滴定液滴定至灰78 色，若过量一滴则溶液变红。（可参考附图） 79

80 （四）、计算

81 ）

（）（粗蛋白含量：0V -V W

F

M 401.1%P ⨯⨯= 82 其中：

83 M ——标准盐酸滴定液摩尔浓度（mol/L ） 84 W ——样品重量（g ）

85 V ——样品滴定标准盐酸消耗量（mL ）

86 V 0——空白样品滴定标准盐酸消耗量（mL ） 87 F ——粗蛋白转换系数，一般为6.25 88

89 四、注意事项：

90 1．消煮管均用铬酸洗液清洗，去离子水润洗，干燥后使用。 91 2．样品称量前干燥恒重。 92 3．加碱量和加酸量根据样品蛋白含量调整。加碱后消煮管内液体颜色应变为咖啡色93 或褐色。如果仍为乳白或浅蓝色表明碱量不够，需手动加碱。蒸馏完毕后，保证液94 量不超过管体积的1/3。

95 4．每个样品至少重复两次，相对标准偏差应<±1%。 96 5．仪器前部槽皿中，若有积液请擦净。 97

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99 炼铁楼112A 100 2009-2-28

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