MMFSCNG畜禽肉中己烯雌酚的测定方法

MM_FS_CNG_0266畜禽肉己烯雌酚高效液相色谱法
MM_FS_CNG_0266
畜禽肉中己烯雌酚的测定方法
1.适用范围
本方法适用于新鲜鸡肉、牛肉、猪肉、羊肉中己烯雌酚残留量测定。

最小检出限1.25ng（取样5g时，最小检出浓度0.25mg／kg）。

2原理概要
样品匀浆后，经甲醇提取过滤，注入HPLC柱中，经紫外检测器鉴定。

于波长230nm处测定吸光度同条件下绘制工作曲线，己烯雌酚含量与吸光度值在一定浓度范围内成正比，样品与工作曲线比较定量。

3主要试剂和仪器
3.1.主要试剂
甲醇；
0.043mol／L磷酸二氢钠（NaH
2PO
4
·2H
2
O）取1g磷酸二氢钠溶于水成500mL；
磷酸；
己烯雌酚（DES）标准溶液：精密称取100mg已烯雌酚（DES）溶于甲醇，移入100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含DES1.0mg，贮于冰箱中；
己烯雌酚（DES）标准使用液：吸取10.00mL DES贮备液，移入100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含DES100μg。

3.2.仪器
高效液相色谱仪：具紫外检测器；
小型绞肉机；
小型粉碎机；
电动振荡机；
离心机。

4.过程简述
4.1.提取及净化
称取5g（±0.1g）绞碎（小于5mm）肉样品，放入50mL具塞离心管中，加10.00mL甲醇，充分搅拌，振荡20min，于3000r／min离心10min，将上清液移出，残渣中再加10.00mL甲醇，混均后振荡20min，于3000r／min离心10min，合并上清液，此时出现混浊，需再离心10min，取上清液过0.5μm FH滤膜，备用。

4.2.色谱条件
紫外检测器检测波长230nm；
灵敏度：0.04AUFS；
流动相：甲醇∶0.043mol／L磷酸二氢钠；70／30，用磷酸调pH＝5（其中
NaH
2PO
4
·2H
2
O水溶液需过0.45μm滤膜）；
流速：1mL／min；
进样量：20μL；
色谱柱：CLC-ODS-C18（5μm）6.2mm×150mm不锈钢柱；柱温：室温。

4.3.工作曲线绘制
称取5份（每份5.0g ）绞碎的肉样品，放入50mL 具塞离心管中，分别加入不同浓度的标准液（6.0，12.0，18.0，24.0μg ／mL ）各1.0mL ，同时做空白。

其中甲醇总量为20.00mL ，使其测定浓度为0.00，0.30，0.60，0.90，1.20μg ／mL ，按4.1处理方法提取备用。

4.4.测定
分别取样20μL ，注入HPLC 柱中，可测得不同浓度DES 标准溶液峰高，以DES 浓度对峰高绘制工作曲线，同时取样液20μL ，注入HPLC 柱中，测得的峰高从工作曲线图中查相应含量，Rt ＝8.235。

5.结果计算
5.1.计算
X ＝ A ×1000 m × V 2 V 1
式中：X ——样品中己烯雌酚含量，mg ／kg ；
A ——进样体积中己烯雌酚含量，ng ；
m ——样品的质量，g ；
V 2——进样体积，μL ；
V 1——样品甲醇提取液总体积，mL 。

5.2.色谱图
（1）—溶剂峰；（2）—杂质峰；（3）—已烯雌酚标准品峰
6.来源：
GB ／T 14931.2—94
2.718(1) 4.34(2)
8.3(3)。