9-1-化学键合相色法

比Si－O－C键型固定相的水解稳定性和热稳定
性好，但适用pH值范围窄（pH＝4～8），因此
实用价值亦不大。
中国药科大学药物色谱分析课程
如硅胶、氧化铝、硅藻土等表面都具有化 学反应的官能团，一般以硅胶最为理想和 常用。 ② 有机分子应含有能与担体表面发生反应的 官能团。
中国药科大学药物色谱分析课程
5
2013-11-11
硅胶（SiO2·xH2O）的性质
良好的机械强度 容易控制的孔结构和比表面积 较好的化学稳定性和热稳定性 专一的表面化学反应 表面存在着足够的可反应硅羟基
sTehteatco中2l0u7国mnnm药te. mT科hpee大riant学juerce药tiwon物asvmo色lauim谱ntea分iwnae析sd 2a课0t 3µ程0L°.C
3
2013-11-11
3、化学键合相的稳定性
1．在较低pH值条件下（pH<2） 键合相中Si―O―Si键易受Lewis 酸等亲电试剂的进攻而断裂：
色 学键合相色谱（bonded phase
谱 chromatography，BPC），
简称键合相色谱。
中国药科大学药物色谱分析课程
2、化学键合相的特点
1. 与液－固吸附色谱相比，消除了担体上的表 面活性作用点，清除了某些可能的催化活性。
2. 与液－液分配色谱相比，耐溶剂冲洗，使用 过程中固定相不流失。
150℃ Si OH + HOR
3~8h
Si O R + H2O
单分子层的硅酸酯
易水解、醇解，热稳定性差，现已不大使用。
中国药科大学药物色谱分析课程
② Si－N或Si－C键型
Si OH + SOCl2 磺酰氯
MgBr
Si Cl 氯化硅胶 NH2 CH2CH2 NH2
Si
+ MgXCl
Si NHCH2CH2NH2 + HCl
×6.0 mm, i.d., 5 μm). Acetonitrile-water (5248, v/v) was used as the mobile phase and
the flow rate was set at 1.0 mL·min-1. and the UV detection wavelength was
Si Si O
Si OH + -Y +Si
Y-H+
2．化学键合固定相在较高pH值条件下的稳定性（pH>9）
键合相中Si―O―Si键很容易被KOH和NaOH这一类强碱性亲
核试剂所切断：
Si Si O
Si OH
+
Si O-M+
M+OH-
pH大于8.0时，硅胶中开国始药溶科大解学，药柱物床色塌谱陷分析课程
中国药科大学药物色谱分析课程
（3）衍生化反应
（1）Si－O－C键型 （2）Si－N或Si－C键型 （3）Si－O－Si－C键型
中国药科大学药物色谱分析课程
8
2013-11-11
① Si－O－C键型
• 酯化反应是最早用于制备化学键合相的反应。 这类固定相是直接用硅羟基Si－OH与醇类 R－OH通过酯化反应制得。
2013-11-11
药物色谱分析
第九章－1 化学键合相色谱法
吴春勇 中国药科大学药物分析教研室
中国药科大学药物色谱分析课程
一、化学键合相的 特点和分类
1
2013-11-11
1、化学键合相色谱的定义
化 借助于化学反应的方法将有机
学 分子以共价键连接在色谱担体
键 上形成化学键合相，以化学键
合 相
合相为固定相的色谱法称为化
色谱条件
流动相:乙腈-甲醇- pH 5.6的30mmol/L NaH2PO4溶液(300∶200∶500)
流速: 0.9mL/min 检测波长: 250nm
6
S
4
7
5
3
色谱图
8 9
N10
1 2 R'
R
HPLC检测血清中12种吩噻嗪类药物的色谱图各药物的浓度均为50ng/mL。1.哌氰 嗪；2.异丙嗪；3.普罗吩胺；4.左美丙嗪；5.硫丙拉嗪；6培拉嗪；7.氯丙嗪；8. 奋
4、化学键合相的分类
* 按键合相的表面结构： 单分子键合 聚合键合
* 按键合有机硅烷的官能团： 极性键合相 非极性键和相 离子交换键合相
中国药科大学药物色谱分析课程
4
2013-11-11
二、化学键合相制备 和性能评价
1、化学键合相的制备
形成化学键合固定相的两个必要条件： ① 所用的担体材料应有某种化学反应活性，
3. 热稳定性好，一般在70℃以下稳定。 4. 表面改性灵活，容易获得重复性产品。 5. 化学性能稳定，耐受范围为pH 2～8。 6. 载样量大，比硅胶约高一个数量级。 7. 梯度洗脱平衡快。
中国药科大学药物色谱分析课程
2
2013-11-11
应用1：血浆药物浓度的测定
色谱柱：C18柱 (250mm×4.6mm, 5m)
是各种 化学键 合相理 想基质 材料
中国药科大学药物色谱分析课程
1、化学键合相的制备
硅胶预处理
溶剂与试剂 预处理
衍生化反应
端基封尾 Baidu Nhomakorabea国药科大学药物色谱分析课程
6
2013-11-11
(1)硅胶的预处理
作为担体的硅胶需要酸处理： * 洗去制备、运输和保存过程中引入的污染物； * 除去表面层的金属氧化物杂质，如Na+、Ca2+、
Al3+、Fe3+等； * 使表面的硅氧烷键打开，形成尽可能多的自由
羟基，有利于反应。
中国药科大学药物色谱分析课程
酸处理
用0.1 mol/L的 盐酸，于90℃ 下浸泡24 h， 或以10%的盐 酸在回流状态 处理8 h 。
中和
中和，水洗至 无Cl- ，经酸处 理后的硅胶表 面的羟基浓度 已达到理论值8 μmol/m2左右 。
乃静；9.硫利达嗪；10.氟奋乃静；11.丙氯中拉嗪国；药12科.三大氟拉学嗪药；物13.色地西谱泮分(内析标课, 程
40ng/mL)
应用2：药物纯度检查-有关物质
The chromatographic sepaHraPtLioCn检w测as柠ac檬hi苦ev素ed的o有n 关a L物ic质hrospher C18 column (150 mm
干燥
在200℃以下真 空烘干除去物 理吸附水，注 意不得超过 200℃，否则硅 醇基脱水形成 硅氧烷结构。
中国药科大学药物色谱分析课程
7
2013-11-11
（2）溶剂与试剂预处理
• 硅烷化试剂对水很敏感，因而有机溶剂、硅烷 化试剂或玻璃仪器在使用前必须进行干燥。
• 溶剂常以蒸馏方式进行纯化或以玻璃棉将其中 的悬浮物滤去。