芥子油苷测定方法
芥子油苷检测
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芥子油苷检测
芥子油苷（Glucosinolate）又称硫代葡萄糖苷、硫苷，是十字花科蔬菜中的一种重要的次生代谢产物，根据侧链基团的不同，可以把硫苷分为脂肪族、芳香族和吲哚族三大类。
硫苷在芥子酶的作用下容易水解产生异硫氰酸醋、硫氰酸醋等不同化合物，这些降解产物具有较强抗菌作用及可通过诱导泛醌还原酶的活性成为致癌物质的阻断剂。
迪信泰检测平台采用高效液相色谱（HPLC）和液质联用（LC-MS）技术，可高效、精准的检测芥子油苷的含量变化。
此外，迪信泰检测平台还提供其他多种中药成分检测服务，方法成熟，可高效处理大批量样本。
HPLC和LC-MS测定芥子油苷样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关质谱参数（中英文）。
3. 质谱图片。
4. 原始数据。
5. 芥子油苷含量信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
中药中硫苷化学成分研究进展
中药中硫苷化学成分研究进展摘要：硫代葡萄糖苷（Glucosinolates简称硫苷），也称芥子油苷。
是一种重要的含氮硫阴离子亲水性植物次生代谢产物。
本文主要针对于硫苷的主要化学成分及其药理作用的研究进展进行概述。
关键词：硫苷十字花科化学结构硫苷为次生代谢产物,它们在植物抗昆虫和病原体方面的作用有显著的癌症预防性[1]。
在植物中，硫苷是较稳定的，而且完整的硫苷并没有生物活性。
流行病学和生理学研究均表明十字花科蔬菜中含有硫苷，如饮食十字花科蔬菜可明显降低患癌的机率。
但其在胃肠道细菌酶或内源芥子酶的作用下会水解并且产生多种不同的水解产物组成的糖苷配基、硫酸盐和葡萄糖。
且配基部分是不稳定的，能够重新排列得到异硫氰酸酯（ITC）、腈、硫氰酸盐、吲哚等[2]，异硫氰酸酯盐是迄今为止蔬菜中发现的抗癌效应最好的生物活性物质[3-4]。
目前，对于硫苷的研究已经引起了广大医药、食品、畜牧学等科学家的兴趣。
1.硫代葡萄糖苷的分布硫苷广泛分布于高等植物、红藻类等植物中[5]。
最早发现是1840年从芥菜中分离的硫苷-丙烯基硫苷（Sinigrin），已经被分离鉴定的硫苷大约有120余种。
其中以十字花科植物硫代葡萄糖苷含量最多，主要存在于种子中[6]。
据统计已有11个种属不同的双子叶被子植物含有硫苷[7]，有芸薹科(Cruciferae)、白花菜科（Capparaeae）、多须草科（Tovariaceae）、木犀草科（Resedaeeae）、辣木科（Moringaeceae）、番木瓜科(Caricaceae)、池花科(Limnanthaceae)、旱金莲科(TroPaeolaceae)、环蕊木科（Gyrostemonaceae）、刺茉莉科（Salva doraceae）和大戟科（Euphorbiaceae）。
已发现植物中硫代葡萄糖苷含量最高别脂肪族硫代葡萄糖苷1-67-1415-1819-2021-2223-2829-3132-33H(CH2)n-(n=1-6)CH3(CH2)nC(CH3)(CH2)m-(n=1,2,3;m=0,1,2,3)CH2=CH-(CH2)n-（n=1-3）CH2=C(CH3)(CH2)n-(n=1-2)CH2=C(CH3)(CH2)n-(n=1-2)H(CH2)n(CHOH) (CH2)m-(n=0,1,3;m=1,2,3)CH2OHCH(M) (M=-CH3,-C2H5)MC(OH)(CH3)CH2-(M=-CH3,-C2H5)烷基(直链)硫代葡萄糖苷烷基(支链)硫代葡萄糖苷烯基硫代葡萄糖苷烯基硫代葡萄糖苷烯基硫代葡萄糖苷羟基烷基硫代葡萄糖苷Glucocapparin(n=1)Glucoputranivin(n=0,m=0)Glucocochlearin(n=1,m=0)Sinigrin(n=1)Gluconapin(n=2)Glucobras-sicanapin(n=3)芳香族硫代葡萄糖3435-3839-4748-5657585960-6364-6566-67686970-7879-83CH3(CH)(CHOH)4(CH2)2-CH2=CH-OH-(CH2)n-(n=1-2)CH3-S-(CH2)n- (n=2-11)CH3-SO-(CH2)n-(n=3-11)CH3-SO2-(CH2)n-(n=3)CH3-SO-CH=CH-CH2-CH2-CH3-SO-CH2-CH-CH=-CH2-CH3S(CH2)CO(CH2)2- (n=3-5)CH3SO(CH2)nCHOH(CH2)2-(n=2-3)CH3SO2(CH2)n CHOH(CH2)2-(n=2-3)CH3(CH2)4O(CH2)2CH3CH3-(CH2)2CH(OH)(CH2)2SO2CH3CH3SO2(CH2)nCH2-(n=3-6/8-10)C6H5(CH2)n-(n=0-4)HOC6O4CH2-(OH-邻、间、对）CH3O6H4CH2-(CH3O为邻、对、间位)C6H5CH2OHCH2-3,4-(HO)2-C6H3CH2-3,4-(CH3O)2-C6H3CH2-P-CH3O-C6H4CHOHCH22(R)C6H5CHOHCH2-4,5,6,7-四羟基癸基硫糖苷羟基烯基硫代葡萄糖苷甲硫基烷基硫苷甲基亚砜基硫苷3-甲基亚砜基丙基硫苷4-甲基亚砜基-3-烯丁基硫苷4-甲硫基-4-丁烯基硫苷4-甲硫基-3-丁烯基硫苷甲硫基羰基烷基硫代葡萄糖苷羟基甲亚砜基烷基硫代葡萄糖苷羰基甲亚砜基烷基硫代葡萄糖苷羰基甲磺酰基烷基硫代葡萄糖苷5-氧代辛基硫苷3-羟基-5-戊基硫苷苄基烷基硫代葡萄糖苷羟基苄基硫代葡萄糖苷甲氧基苄基硫代葡萄糖苷2-羟基-2-苯基乙基硫代葡萄糖苷南葶苈苷3,4-二羟基苄基硫代葡萄糖苷3,4-二甲氧基苄基硫代葡萄糖苷2-羟基-2-对甲氧苯基乙基硫代葡萄糖苷2-(R)-2-羟基-2-苯基乙基硫代葡萄糖苷3,4,5-三甲氧基苄基已基硫苷Progoitrin(n=1)Gluconapoloiferin(n=2)Glucoiberverin(n=3)Glucoerucin(n=4)Glucoilberin(n=3)Glucoraphanin(n=4)Glucoalyssin(n=5)Glucocheirolin(n=3)GlucoerysolinDehydroerucinglucocappasalinGlucotropaeolin(n=1)Gluconasturtlin(n=2)Glucosinalbin（对）GlucobarbarindescurainosideGlucomatronalin吲哚族硫代葡萄糖苷84-8687-8990919293949596979899-105106107108-1091101111123,4,5-(CH3O)2-C6H3CH2-P-CH3O-C6H4CHOHCH2-P-CH3O-C6H4CH(CH3)2CH2-C6H5COO(CH2)n-(n=1-6)C6H5COOCH2CH(CH3)-C6H5COOCH2CH(C2H5)-(R1=R2=H)(R1=OCH;R2=H)(R1=H;R2=OH)(R1=H;R2=OCH3)(R1=SO3;R2=H)2-羟基-2-对甲氧苯基乙基硫苷2,2-二甲基-2-对甲氧苯基乙基硫苷苯甲酸基烷基硫代葡萄糖苷1-甲基-苯甲酸基乙基硫代葡萄糖苷1-乙基-苯甲酸基乙基硫代葡萄糖苷苄基硫代葡萄糖苷(邻与对)4-(4-O乙酞-a-L-鼠李糖基)苄基硫代葡萄搪昔2-α-L-阿拉伯糖基-2-苯基乙基硫苔4-甲亚磺酞-3-丁烯基硫代-6-(3,5,-二甲氧基-4,-羟基肉桂酞)葡萄糖昔吲哚-3-甲基硫代葡萄糖苷1-甲氧基吲哚-3-甲基硫苷4-羟基吲哚-3-甲基硫苷4-甲氧基吲哚-3-甲基硫苷N-磺酸基吲哚-3-甲基硫苷GlucobarbarinGlucomalcomiin(n=3)GlucobenzosisymbrinGlucobenzsisaustricinGlucobrassicinNeoglucobrassicin4-hydroxygluco-brassicinN4-Methoxygluco-brassicinSulfogluco-brassicin113 114 115 116 117 118 11991号化合物结构式 107-111号化合物结构式吲哚类化合物结构式3.硫代葡萄糖苷的合成硫苷的合成方式主要有两种，即生物合成与化学合成。
芥子油苷测定方法.
高效液相色谱对芥子油苷的提取和分离I 准备阶段：1. 水浴锅设置80℃2.配制两瓶70%的甲醇，其中一瓶置于水浴锅中温浴。
3.5mM苄基芥子油苷.2.33mg/ml4.0.5M醋酸盐（PH=5）[30mlHAC，960ml H2O，加10-20g NaOH 粉末，调至PH=5]5.20mM的醋酸盐，PH=5：将4中的稀释25倍6.DEAE sephadex A-25：称取3g 树脂，加90ml 0.5M 醋酸盐（PH=5）室温过夜溶解。
7.硫酸酯酶：15mg溶解于6ml 20mM 醋酸钠中，PH=5（16100uM/hour/g）II 芥子油提取1. 取新鲜莲座叶，鲜重5-10mg2. 放入1.5mlEP管中，迅速放入液氮。
3. 研磨成粉末后并加入1ml 预热的70%的甲醇。
4. 加入50ul 5mM 的苄基芥子油苷5. 盖好盖子漩涡震荡置于冰上，剩下的样品重复步骤3-4。
6. 所有的样品置于80℃10min。
7. 4000rpm，10min。
8. 将上清液转移至1.5 的离心管。
9. 用预热的甲醇重新提取两次，收集所有的上清液至4ml，-20℃保存。
III 芥子油苷的脱硫纯化1. 搅拌DEAE sephadex A-25 树脂成溶液，用1ml的移液器取1ml 加入BioRad 管中，让其沉淀。
2. 用5ml 的灭菌水清洗（禁止干燥）。
3. 加入所有的芥子油苷提取液。
4. 用2ml的70%的甲醇清洗两次，2ml 的灭菌水清洗5次，2ml 20mM 醋酸盐PH=5清洗一次。
5. 加入0.5ml 硫酸酯酶，直至上侧的橡胶管中剩余1-2mm的液相。
IV 脱硫芥子油苷的洗脱1. 用1ml 灭菌水洗脱3次。
2. 浓缩至EP 管中剩余0.5ml 液体V HPLC分离脱硫芥子油苷1. 取60ul 洗脱液于HPLC管中，吸入30ul2. 检测：PDA 190nm-370nm （或者DV229nm和260nm）3. 流速：1ml/min4. 运行梯度：灭菌水（A）和甲醇（B），60minA100%,B0% 2minA to 60%B线性48min，60%B to 100% B 线性3minA 0%，B100% 3minB to 100% A 线性4minVI 芥子油苷的HPLC-MS5. 取60ul 洗脱液加入HPLC管中，吸入6ul6. 检测：质谱，[M+Na+]7. 流速：0.25ml/min8. 运行梯度：混有50uM的醋酸钠灭菌水（A）与甲醇（B），60minA100%,B0% 2minA to 60%B线性40min，60%B to 100% B 线性5minA 0%，B100% 5minB to 100% A 线性8min液相色谱质谱联用分离、鉴定芥蓝中脱硫芥子油苷腊贵晓,方萍,李亚娟,王月1.芥子油苷的提取和纯化称取0. 20 g冻干样品,加入3 mL 70%甲醇(甲醇∶水= 70∶ 30),在70℃的水浴锅中提取10 min,然后4000 r min- 1离心10 min.沉淀再按照上述方法提取2次,合并上述提取液.同时做2个平行.取2 mL提取液流经DEAESephadex A-25萃取柱,待提取液全部流出小柱后,加入200 L硫酸酯酶(0. 1%)溶液.室温反应16 h后用4× 0. 5 mL 超纯水洗脱.洗脱液过0. 45μm微膜,4℃下保存,待HPLC分析.利用2-丙烯基芥子油苷(sinigrin)作为外标进行定量.2.芥子油苷的测定与鉴定测定芥子油苷的主要方法包括气相色谱法测定其降解产物异硫代氰酸盐化合物;高效液相色谱法测定脱硫芥子油苷和完形芥子油苷.对芥子油苷的鉴定一般采用质谱法,包括化学电离、快速原子轰击电离及热喷雾电离等方法.1.超高效液相色谱法测定拟南芥芥子油苷[J]东北农业大学学报，石璐，李梦莎，国静等摘要：将已有的拟南芥芥子油苷高效液相色谱（HPLC）检测方法转换为超高效液相色谱（UPLC）方法，通过条件优化改进，建立拟南芥芥子油苷UPLC检测方法。
芥子油苷名词解释
芥子油苷名词解释
芥子油苷是一种植物产生的含硫化合物，广泛存在于十字花科植物中，如西兰花、花椰菜、卷心菜、芥菜等。
芥子油苷是由葡萄糖与不同的氨基酸结合而成的糖苷，其分子结构中含有一个硫代葡萄糖基和一个或多个氨基酸残基。
在植物中，芥子油苷通常与黑芥子硫苷酸酶共存，当植物组织受到损伤时，黑芥子硫苷酸酶会将芥子油苷水解，生成异硫氰酸酯、硫氰酸酯和腈等活性成分。
这些活性成分具有多种生物活性，如抗菌、抗炎、抗氧化、抗癌等。
此外，芥子油苷还具有调节植物生长、防御害虫和病原体等作用。
由于芥子油苷的生物活性，它在食品和医药领域得到了广泛关注。
在食品工业中，芥子油苷被用于提取芥末油和其他调味品，也被用于生产保健食品和功能性食品。
在医药领域，芥子油苷及其衍生物被用于治疗癌症、心血管疾病、炎症等多种疾病。
需要注意的是，芥子油苷及其衍生物具有一定的毒性，过量摄入可能会对人体造成损害。
因此，在使用芥子油苷及其衍生物时，需要严格控制剂量和使用条件。
植物化学物芥子油苷
对肿瘤的预防和抑制作用
● 流行病学研究表明，十字花科蔬菜能够降低多种癌症的患病 危险。
● 作用机制:
✓ 诱导Ⅱ相致癌物解毒酶：主要机制 GST，QR，NQO1，UGT等 主要由ARE介导， Nrf2 起关键作用
✓ 抑制I相代谢酶——细胞色素P450酶系 ✓ 阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡 ✓ 提高机体免疫功能等
【食物来源】
●广泛存在于十字花科蔬菜中（花椰菜、甘蓝、包心 菜、白菜、芥菜、小萝卜、辣根、水田芥等）
【摄入量】
●人体每日从膳食中摄入约10～50mg ，素食者可高 达100mg 以上。
●生蔬菜中的生物利用率较煮熟的蔬菜高。
【生物学作用】
● 对肿瘤的预防和抑制作用：主要作用 ● 对氧化应激的双向调节作用 ● 抗菌作用 ● 其他作用
感谢聆听
天天学营养
来，促使GS酶解。
非酶解：主要生成异硫氰酸盐和腈类。 肠道内微生物：类似MYR活性,使GS水解成
ITCs。பைடு நூலகம்
ITCs
●GS只有在水解成ITCs后才能体现出活性。
●ITCs具有共同的—N = C = S 结构
● 莱菔硫烷（SFN） ● 苯乙基异硫氰酸盐（PEITC） ●苯甲基异硫氰酸盐 （BITC ） ● 烯丙基异硫氰酸盐（AITC） ● 吲哚-3-甲醇（IC）
对氧化应激的双向调节作用
●抗氧化作用：
✓增加细胞内抗氧化蛋白水平 ✓诱导Ⅱ相酶
●致氧化作用：
✓引起细胞内谷胱甘肽的耗竭 ✓诱导活性氧的产生
抗菌作用
● 抑制细菌：SFN和日本辣根中的AITC，芸苔属中的AITC，西兰花中的ITCs ● 抑制真菌
其他作用
● 调节免疫 ● 抗炎 ● 抑制组蛋白去乙酰化和微管蛋白多聚化 ● 用作食品添加剂 （主要风味物质）
超高效液相色谱法测定拟南芥芥子油苷
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不同干燥方式对白萝卜干制品品质的影响
不同干燥方式对白萝卜干制品品质的影响王鑫;车刚;万霖;刁显琪;李海龙;王敬轩【摘要】为了解不同干燥方式对白萝卜干制品品质和微观结构的影响及变化情况,以新鲜白萝卜为原料,采用振动远红外干燥方式和传统远红外干燥方式对白萝卜进行干燥,研究其对营养成分、复水比、干燥时间、脱水速率、感官品质以及微观结构的影响.结果表明:振动远红外干燥方式干制的白萝卜样品中蛋白质、维生素C、芥子油苷、总糖、脂肪和复水比明显高于传统远红外干燥方式制得的样品;相比于传统远红外干燥方式,干燥时间缩短了0.67 h,脱水速率提高了40.58％;干制品感官品质和微观结构均优于传统远红外干燥方式.研究为远红外干燥方式在白萝卜方面的应用提供理论依据与技术参考.【期刊名称】《黑龙江八一农垦大学学报》【年(卷),期】2017(029)002【总页数】6页(P58-63)【关键词】白萝卜;远红外;干燥;品质【作者】王鑫;车刚;万霖;刁显琪;李海龙;王敬轩【作者单位】黑龙江八一农垦大学工程学院,大庆163319;黑龙江八一农垦大学工程学院,大庆163319;黑龙江八一农垦大学工程学院,大庆163319;黑龙江八一农垦大学工程学院,大庆163319;黑龙江八一农垦大学工程学院,大庆163319;黑龙江八一农垦大学工程学院,大庆163319【正文语种】中文【中图分类】S375白萝卜又叫莱菔、芦菔、土人参等，是根菜类蔬菜的主要品种之一。
从古代至今已有千年历史，在食品和中医药方面都有广泛应用。
白萝卜中含有蛋白质、脂肪、多糖、膳食纤维、芥子油苷、胡萝卜素、维生素C、维生素E、钙、铁、锌等，具有丰富的营养价值和防病保健功能[1-2]。
中医理论认为，该品味辛甘，性凉，入肺胃经，可以治疗或辅助治疗多种疾病，本草纲目称之为“蔬中最有利者”[3]。
近几年来，脱水白萝卜已成为蔬菜产业的重要组成部分，市场前景广阔，需求量大。
已有很多研究者对脱水白萝卜的干燥工艺和生产方法进行了报道。
COI1参与茉莉酸调控拟南芥吲哚族芥子油苷生物合成过程
COI1参与茉莉酸调控拟南芥吲哚族芥子油苷生物合成过程石璐;李梦莎;王丽华;于萍;李楠;国静;阎秀峰【摘要】芥子油苷是一类具有防御作用的植物次生代谢产物,外源激素茉莉酸对吲哚族芥子油苷的合成具有强烈的诱导作用,但茉莉酸调控吲哚族芥子油苷生物合成的分子机制并不清楚.以模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)的野生型和coi1-22、coi123两种突变体为研究材料,通过茉莉酸甲酯(MeJA)处理,比较了拟南芥野生型和coi1突变体植株吲哚族芥子油苷含量、吲哚族芥子油苷合成前体色氨酸的生物合成基因(ASA1、TSA1和TSB1)、吲哚族芥子油苷生物合成基因(CYP79 B2、CYP79B3和CYP83B1)及调控基因(MYB34和MYB51)的表达对MeJA的响应差异,由此确定茉莉酸信号通过COI1蛋白调控吲哚族芥子油苷生物合成,即茉莉酸信号通过信号开关COI1蛋白作用于转录因子MYB34和MYB51,进而调控吲哚族芥子油苷合成基因C YP79 B2、C YP79 B3、CYP83B1和前体色氨酸的合成基因ASA1、TSA1、TSB1.并且推断,COI1功能缺失后,茉莉酸信号可能通过其他未知调控因子或调控途径激活MYB34转录因子从而调控下游基因表达.【期刊名称】《生态学报》【年(卷),期】2012(032)017【总页数】7页(P5438-5444)【关键词】茉莉酸;COI1;吲哚族芥子油苷;拟南芥【作者】石璐;李梦莎;王丽华;于萍;李楠;国静;阎秀峰【作者单位】温州大学生命与环境科学学院,温州325035;温州大学生命与环境科学学院,温州325035;温州大学生命与环境科学学院,温州325035;温州大学生命与环境科学学院,温州325035;温州大学生命与环境科学学院,温州325035;温州大学生命与环境科学学院,温州325035;温州大学生命与环境科学学院,温州325035【正文语种】中文芥子油苷(glucosinolate)是一类含氮、含硫的植物次生代谢产物，主要分布于十字花科植物。
液相色谱质谱联用分离鉴定芥蓝中芥子油苷
浙江大学学报（农业与生命科学版） ３４（５）：５５７～５６３，２００８ＪｏｕｒｎａｌｏｆＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ畅＆ＬｉｆｅＳｃｉ畅）文章编号：１００８‐９２０９（２００８）０５‐０５５７‐０７ＤＯＩ：１０．３７８５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８‐９２０９．２００８．０５．０１２ 收稿日期：２００７‐１２‐２０基金项目：国家重点基础研究发展计划资助项目（２００７ＣＢ１０９３０５）．作者简介：腊贵晓（１９８１—），男，河南淅川人，博士研究生，主要从事蔬菜抗癌次生代谢物的植物营养调控方面的研究．Ｔｅｌ：０５７１‐８６９７１７２９；Ｅ‐ｍａｉｌ：ｚｊｕ‐ｌ＠１６３．ｃｏｍ．通讯作者：方萍，女，教授，博士生导师，从事植物营养研究．Ｔｅｌ：０５７１‐８６９７１７２９；Ｅ‐ｍａｉｌ：ｐｆａｎｇ＠ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ．液相色谱质谱联用分离、鉴定芥蓝中脱硫芥子油苷腊贵晓，方萍，李亚娟，王月（浙江大学环境与资源学院教育部环境修复与生态健康重点实验室，浙江杭州３１００２９）摘 要：从芥蓝菜薹中提取芥子油苷，经阴离子交换柱ＤＥＡＥ‐ＳｅｐｈａｄｅｘＡ‐２５纯化和硫酸酯酶脱硫，得到脱硫芥子油苷提取液．比较了两种高效液相色谱的流动相体系（甲醇与水体系和乙腈与水体系）及两种长度（２５０ｍｍ×４畅６ｍｍ和１５０ｍｍ×４畅６ｍｍ）的Ｃ１８色谱柱（ＰｒｏｎｔｏｓｉｌＯＤＳ２，粒径５μｍ）对芥蓝脱硫芥子油苷的分离效果，确定分离条件为乙腈与水流动相体系和２５０ｍｍ×４畅６ｍｍＣ１８柱．采用质谱联用及紫外扫描，在芥蓝菜薹中检测出７种脂肪族芥子油苷和４种吲哚族芥子油苷，其中４‐甲硫基丁基芥子油苷为第一次在芥蓝中检测到．芥蓝中主要以脂肪族芥子油苷为主，占总芥子油苷含量的９１畅６％，而吲哚组芥子油苷的含量仅占８畅４％．其中，３‐丁烯基芥子油苷和４‐甲基亚硫酰丁基芥子油苷为主要芥子油苷组分，分别占总含量的４７畅９％和３５畅５％，而含量最低的为４‐羟基‐３‐吲哚甲基芥子油苷，只占总芥子油苷含量的０畅２％．关 键 词：芥蓝；芥子油苷；ＤＥＡＥ‐ＳｅｐｈａｄｅｘＡ‐２５；硫酸酯酶；液相色谱‐质谱联用；紫外扫描中图分类号：Ｓ６３５畅９；ＴＳ２０１ 文献标识码：ＡＬＡＧｕｉ‐ｘｉａｏ，ＦＡＮＧＰｉｎｇ，ＬＩＹａ‐ｊｕａｎ，ＷＡＮＧＹｕｅ（ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＲｅｍｅｄｉａｔｉｏｎａｎｄＥｃｏｌｏｇｉｃａｌＨｅａｌｔｈ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌａｎｄＲｅｓｏｕｒｃｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００２９，Ｃｈｉｎａ）Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｄｅｓｕｌｐｈｏ‐ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓｉｎｂｏｌｔｉｎｇｓｔｅｍｓｏｆＣｈｉｎｅｓｅｋａｌｅｂｙｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ‐ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ畅＆ＬｉｆｅＳｃｉ畅），２００８，３４（５）：５５７‐５６３Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｃｒｕｄｅｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓ（ＧＳｓ）ｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｂｏｌｔｉｎｇｓｔｅｍｓｏｆＣｈｉｎｅｓｅｋａｌｅ（Ｂｒａｓｓｉｃａａｌｂｏｇｌａｂｒａ）ａｎｄｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙａｃｏｌｕｍｎｐａｃｋｅｄｗｉｔｈＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ‐２５．Ｔｈｅｄｅｓｕｌｐｈｏ‐ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄａｆｔｅｒｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚｉｎｇｏｆＧＳｓｂｙｓｕｌｆａｔａｓｅ．Ｉｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔｄｅｓｕｌｐｈｏ‐ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓｗｅｒｅｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙｓｅｐａｒａｔｅｄｂｙＨＰＬＣｗｉｔｈＣ１８ｃｏｌｕｍｎｏｆ２５０ｍｍ×４畅６ｍｍ（ＰｒｏｎｔｏｓｉｌＯＤＳ２，ｇｒａｉｎｄｉａｍｅｔｅｒｏｆ５μｍ）ａｎｄｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｏｆｔｈｅａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ／ｗａｔｅｒｓｙｓｔｅｍｉｎｃｏｎｔｒａｓｔｔｏｔｈｅｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅｓｅｐａｒａｔｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｗｉｔｈＣ１８ｃｏｌｕｍｎｏｆ１５０ｍｍ×４畅６ｍｍａｎｄ／ｏｒｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｏｆｔｈｅｍｅｔｈａｎｏｌ／ｗａｔｅｒｓｙｓｔｅｍ畅Ｆｉｎａｌｌｙ，１１ＧＳｃｏｍｐｏｕｎｄｓｉｎＣｈｉｎｅｓｅｋａｌｅｂｏｌｔｉｎｇｓｔｅｍｓｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｂｏｔｈｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙａｎｄｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｓｅｖｅｎｋｉｎｄｓｏｆａｌｉｐｈａｔｉｃＧＳｓａｎｄｆｏｕｒｋｉｎｄｓｏｆｉｎｄｏｌｙｌＧＳｓ畅Ａｍｏｎｇｔｈｅｍ，４‐ｍｅｔｈｙｌｔｈｉｏｂｕｔｙｌＧＳｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎＣｈｉｎｅｓｅｋａｌｅｆｏｒｔｈｅｆｉｒｓｔｔｉｍｅ畅ＡｌｉｐｈａｔｉｃＧＳｓｗｅｒｅｔｈｅｄｏｍｉｎａｎｔｔｙｐｅｏｆＧＳｓｉｎＣｈｉｎｅｓｅｋａｌｅ，ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｆｏｒ９１畅６％ｏｆｔｈｅｔｏｔａｌＧＳｓｃｏｎｔｅｎｔ，ｗｈｅｒｅａｓ，ｔｈｅｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｏｆｉｎｄｏｌｙｌＧＳｓｗａｓｏｎｌｙ８畅４％．ＴｈｅｍａｉｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆＧＳｓｗｅｒｅ３‐ｂｕｔｅｎｙｌＧＳａｎｄ４‐ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｉｎｙｌｂｕｔｙｌＧＳ，ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｆｏｒ４７畅９％ａｎｄ３５畅５％ｏｆｔｈｅｔｏｔａｌＧＳｓｃｏｎｔｅｎｔ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＷｈｉｌｅｔｈｅｌｏｗｅｓｔｃｏｎｔｅｎｔｏｆＧＳｗａｓ４‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐３‐ｉｎｄｏｌｙｌｍｅｔｈｙｌＧＳ，ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｆｏｒ０畅２％ｏｆｔｈｅｔｏｔａｌＧＳｓｃｏｎｔｅｎｔ．浙江大学学报（农业与生命科学版）Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｃｈｉｎｅｓｅｋａｌｅ（Ｂｒａｓｓｉｃａａｌｂｏｇｌａｂｒａ）；ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅ；ＤＥＡＥ‐ＳｅｐｈａｄｅｘＡ‐２５；ｓｕｌｆａｔａｓｅ；ＨＰＬＣ‐ＥＳＩ／ＭＳ；ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ 芥子油苷（ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅ，ＧＳｓ）为β‐硫葡萄糖苷Ｎ‐羟硫酸盐，是十字花科植物中的一类重要次生代谢物．自１８４０年Ｂｕｓｓｙ从芥菜籽中分离出第一种芥子油苷‐黑芥子苷（ｓｉｎｉｇｒｉｎ）至今，已在十字花科、山柑科、辣木科等１１个科的植物体中发现了１２０多种芥子油苷［２］，其中在十字花科中发现的就有２０多种［１］．芥子油苷在结构上极其相似：都是由１个β‐Ｄ‐硫代葡萄糖基、１个磺化肟基和１个侧链组成（图１）［３］．其侧链分别为甲硫氨酸、苯丙氨酸和色氨酸，据此可以把芥子油苷分为脂肪类、芳香类和吲哚类［４］．芥子油苷本身不具有生理活性，但在黑芥子酶的作用下，可分解为异硫代氰酸盐、硫代氰酸盐和乙腈等主要产物，这些降解产物与十字花科蔬菜的特殊芳香气味、对微生物生长的抑制及对某些昆虫和草食动物的威慑等有重要的关系［５］．近年来，关于芥子油苷在抗癌方面的有益作用日益受到人们的重视，特别是富含芥子油苷的芸薹属植物已经成为研究的热点．对芸薹属芥子油苷的分离、鉴定也随着研究的深入而得到不断地改进和优化．目前测定芥子油苷的主要方法包括气相色谱法测定其降解产物异硫代氰酸盐化合物；高效液相色谱法测定脱硫芥子油苷和完形芥子油苷［６］．对芥子油苷的鉴定一般采用质谱法，包括化学电离、快速原子轰击电离及热喷雾电离等方法［７‐９］．图１ 芥子油苷的一般结构Ｆｉｇ．１ Ｇｅｎｅｒａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓ 芥蓝是我国特产的十字花科芸薹属甘蓝型蔬菜，以花薹和嫩叶为主要食用器官，目前对其芥子油苷的纯化分离、鉴定的报道尚少［１０‐１１］．本文对芥蓝菜薹中的芥子油苷通过脱硫纯化，用ＨＰＬＣ比较了测定脱硫芥子油苷常用的两种流动相体系（甲醇／水和乙腈／水）及两种长度的ＯＤＳ２Ｃ１８分析柱（１５０ｍｍ×４畅６ｍｍ和２５０ｍｍ×４畅６ｍｍ，粒径为５μｍ）的分离效果，确定分离方法；经质谱联用（ＥＳＩ／ＭＳ）及紫外扫描，成功鉴定出１１种芥子油苷组分．１ 材料与方法１畅１ 仪器与试剂 主要仪器：高效液相色谱仪（Ｂｅｃｋｍａｎ，ＵＳＡ），化学工作站，Ａｇｉｌｅｎｔ１１００；液相色谱‐质谱联用仪（Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＬＣ／ＭＳＤ，Ａｇｉｌｅｎｔ公司），ＴＵ‐１８１０型紫外扫描仪． 主要试剂：ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ‐２５、ｓｉｎｉｇｒｉｎ购于ｓｉｇｍａ公司；ＯＤＳ２Ｃ１８柱（１５０ｍｍ×４畅６ｍｍ，２５０ｍｍ×４畅６ｍｍ，粒径为５μｍ）购于大连依利特公司；甲醇、乙腈为色谱纯（Ｈｏｎｅｙｗｅｌｌ，ＵＳＡ）；水为超纯水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＵＳＡ）．１畅２ 芥蓝栽培与样品处理 芥蓝栽培试验在浙江大学智能温室进行．种子于２００７年４月２０日播于装有泥炭∶蛭石（１∶１）为基质的塑料穴盘中．昼夜温度分别控制在２０℃／１８℃．于三叶一心时，移栽于装有８Ｌ霍格兰营养液的不透光塑料容器中，每天不间断通气，３ｄ更换营养液一次．移栽后４０ｄ收获，取芥蓝菜薹，经冷冻干燥（ＣＨＲＩＳＴ，ＡＬＰＨＡ１‐４，Ｇｅｒｍａｎｙ）、粉碎（ＲｅｔｓｃｈＭＭ３０１，ＵＳＡ）后，迅速放入干燥器，贮存于－２０℃冰箱待用．１畅３ 芥子油苷的提取和纯化 称取０畅２０ｇ冻干样品，加入３ｍＬ７０％甲醇（甲醇∶水＝７０∶３０），在７０℃的水浴锅中提取１０ｍｉｎ，然后４０００ｒ爛ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ．沉淀再按照上述方法提取２次，合并上述提取液．同时做２个平行．取２ｍＬ提取液流经ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ‐２５萃取柱，待提取液全部流出小柱后，加入２００Ｌ硫酸酯酶（０畅１％）溶液．室温反应１６ｈ后用４×０畅５ｍＬ超纯水洗脱．洗脱液８５５第３４卷 腊贵晓，等：液相色谱质谱联用分离、鉴定芥蓝中脱硫芥子油苷过０畅４５μｍ微膜，４℃下保存，待ＨＰＬＣ分析．利用２‐丙烯基芥子油苷（ｓｉｎｉｇｒｉｎ）作为外标进行定量．１畅４ 液相条件和质谱条件 ＨＰＬＣ分离条件：色谱柱为ＰｒｏｎｔｏｓｉｌＯＤＳ２Ｃ１８柱（粒径均为５μｍ），分别采用两种长度：长柱２５０ｍｍ×４畅６ｍｍ，短柱１５０ｍｍ×４畅６ｍｍ．流动相：分别采用（１）超纯水和乙腈体系，（２）超纯水和甲醇体系，梯度条件：０～５ｍｉｎ乙腈（或甲醇）浓度保持１畅５％；５～２０ｍｉｎ，乙腈（或甲醇）梯度变化：１畅５％～２０％；２０～４０ｍｉｎ，乙腈（或甲醇）浓度保持２０％．柱温３０℃，进样量５０Ｌ，检测波长２２６ｎｍ，流速１畅０ｍＬ爛ｍｉｎ－１． 鉴定条件：采用ＬＣ‐ＥＳＩ／ＭＳ鉴定，数据由Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＬＣ／ＭＳＤ化学工作站采集．ＭＳ条件为：离子源：电喷雾电离（ＥＳＩ）；离子极性：正离子（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）；喷雾器压力（ｎｅｂｕｌｉｚｅｒｐｒｅｓｓｕｒｅ）：６０ｐｓｉ；干燥气（Ｎｚ）流速（ｄｒｙｉｎｇｇａｓｆｌｏｗ）：１３Ｌ爛ｍｉｎ－１；干燥气温度（ｄｒｙｉｎｇｇａｓｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）：３５０℃；毛细管电压（ｃａｐｉｌｌａｒｙｖｏｌｔａｇｅ）：４０００Ｖ；碎片电压（ｆｒａｇｍｅｎｔｏｒ）：１００Ｖ；扫描离子范围：ｍ／ｚ１００畅００～６００畅００．１畅５ 紫外扫描 收集液相分离的各脱硫芥子油苷组分，以流动相做参比进行紫外扫描，扫描波长为２２０～３５０ｎｍ［１２］．２ 结果与讨论２畅１不同ＨＰＬＣ柱和流动相体系对脱硫芥子油苷的分离效果 采用正交设计方法，比较两个长度的Ｃ１８柱（１５０ｍｍ×４畅６ｍｍ和２５０ｍｍ×４畅６ｍｍ）及两种流动相体系（乙腈／水和甲醇／水）对芥蓝菜薹脱硫芥子油苷的分离效果．结果表明，在短柱中，５～１２ｍｉｎ之间图谱中出现的４个峰在两种流动相体系下均不能完全分离，发生了部分重叠；而在长柱中无峰重叠现象出现，在１５ｍｉｎ以后长柱和短柱都有良好的分离效果．在长柱中，采用甲醇／水体系流动相的ＨＰＬＣ色谱图中出现了多个鬼峰，且基线漂移严重，分离结果重现性差；采用相同配比的乙腈／水流动相体系，色谱图鬼峰较少，基线平稳，组分保留时间稳定，重现性好．确定芥蓝菜薹中脱硫芥子油苷分离条件为：乙腈／水流动相体系；２５０ｍｍ×４畅６ｍｍＰｒｏｎｔｏｓｉｌＯＤＳ２柱子；流速１ｍＬ爛ｍｉｎ－１；检测波长２２６ｎｍ，分离结果见图２．图谱中各编号对应脱硫芥子油苷名称及其结构见表１．图２ 芥蓝菜薹脱硫芥子油苷ＨＰＬＣ色谱图Ｆｉｇ．２ ＨＰＬＣｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｄｅｓｕｌｐｈｏ‐ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓｉｎｂｏｌｔｉｎｇｓｔｅｍｏｆＣｈｉｎｅｓｅｋａｌｅ２畅２ 芥子油苷的鉴定 芥子油苷类物质在结构上只有侧链Ｒ基团的微小差别，因此不同芥子油苷组分的分离提纯显得非常困难．目前市场上能够提供的芥子油苷标准物质只有ｓｉｎｉｇｒｉｎ和ｇｌｕｃｏｔｒｏｐｅａｏｌｉｎ两种，这给液相色谱分离中利用芥子油苷标准物质对各种芥子油苷组分进行定性和定量分析带来了很大困难．液相色谱‐质谱联用可以得到各组分物质的分子离子峰，是近几年流行的芥子油苷鉴定方法．同时不同种类的芥子油苷的紫外特征光谱不同，通过紫外波长扫描可以进一步确认其类型和结构． 在正离子电喷雾撞击下，脱硫芥子油苷失去１个葡萄糖基（Ｇ，Ｃ６Ｈ１０Ｏ５‐）而形成１个ＭＳ信号很强的碎片离子［Ｍ－Ｇ＋Ｈ］＋（ｍ／ｚ＝１６２畅１），它是脱硫芥子油苷ＭＳ图中的１个重要特征离子，也是鉴定芥子油苷的一种有效依据［１３］．同时脱硫芥子油苷容易与正离子Ｈ＋、Ｎａ＋和Ｋ＋分别形成质子化分子、钠化分子和钾化分子，可以通过［Ｍ＋Ｈ］＋、［Ｍ＋Ｎａ］＋、［Ｍ＋Ｋ］＋等特征离子来判断芥子油苷的分子结构［１４］．以ｔｉｍｅ＝８畅２６９：８畅８７９为例，ＭＳ图谱中（图３），在低质谱区出现了丰度最大的的碎片离９５５ 第５期浙江大学学报（农业与生命科学版）子即［Ｍ－Ｇ＋Ｈ］＋ｍ／ｚ１８２畅０，由此推测该化合物的分子量可能是３４３．同时，在高质谱区出现了ｍ／ｚ３８２（［Ｍ＋Ｋ］＋）和ｍ／ｚ３４４（［Ｍ＋Ｈ］＋）２个丰度较高的碎片，可验证此化合物的分子量为３４３，据已知芥子油苷结构，可以推知此化合物为３‐甲基亚硫酰丙基芥子油苷．对其紫外图谱分析发现，紫外区只在２２７畅４ｎｍ有一个特征吸收峰（λｍａｘ），参考Ｋｉｄｄｌｅ等［１５］对多种芥子油苷的质谱、色谱鉴定结果的报道，可以确定此化合物为３‐甲基亚硫酰丙基芥子油苷．采用该分析方法，确定了芥蓝菜薹脱硫芥子油苷提取液质谱中的１１种化合物，结果见表１．表１ 芥蓝中脱硫芥子油苷的化学名、英文名、侧链结构、脱硫分子量、紫外特征吸收峰和响应因子Ｔａｂｌｅ１ Ｃｈｅｍｉｃａｌｎａｍｅ，ｔｒｉｖｉａｌｎａｍｅ，ｓｉｄｅ‐ｃｈａｉｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ａｎｄｄｅｓｕｌｐｈｏ‐ＭＷ，λｍａｘａｎｄｒｅｓｐｏｎｓｅｆａｃｔｏｒｏｆｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓｉｎｂｏｌｔｉｎｇｓｔｅｍｏｆＣｈｉｎｅｓｅｋａｌｅ图谱编号 化学名 英文名 侧链结构脱硫分子量紫外特征吸收波长／ｎｍ响应 因子倡１ ３‐甲基亚硫酰丙基芥子油苷ＧｌｕｃｏｉｂｅｒｉｎＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＳＯＣＨ３３４３２２７畅４１畅０７２ ２‐羟基‐３‐丁烯基芥子油苷ＰｒｏｇｏｉｔｒｉｎＣＨ２ＣＨＣＨＯＨＣＨ２３０９２２６畅２１畅０９３ ２‐丙烯基芥子油苷ＳｉｎｉｇｒｉｎＣＨ２ＣＨＣＨ２２７９２２６畅２１４ ４‐甲基亚硫酰丁基芥子油苷ＧｌｕｃｏｒａｐｈａｎｉｎＣＨ２（ＣＨ２）３ＳＯＣＨ３３５７２２１畅６１畅０７５ ５‐甲基亚硫酰戊基芥子油苷ＧｌｕｃｏａｌｙｓｓｉｎＣＨ２（ＣＨ２）４ＳＯＣＨ３３７１２２２畅３１畅０７６ ３‐丁烯基芥子油苷ＧｌｕｃｏｎａｐｉｎＣＨ２ＣＨ２ＣＨＣＨ２２９３２２５畅１１畅１１７ ４‐羟基‐３‐甲基吲哚芥子油苷４‐ＨｙｄｒｏｘｙｇｌｕｃｏｂｒａｓｓｉｃｉｎＮＨＣＨ２庎ＯＨ３８４２２１畅６０畅２８８ ４‐甲硫基丁基芥子油苷ＧｌｕｃｏｅｒｕｃｉｎＣＨ２（ＣＨ２）２ＣＨ２ＳＣＨ３３４１２２２畅７１倡倡９ ３‐吲哚甲基芥子油苷ＧｌｕｃｏｂｒａｓｓｉｃｉｎＮＨＣＨ２庎３６８２２１畅６０畅２９１０ ４‐甲氧基‐３‐吲哚甲基芥子油苷４‐Ｍｅｔｈｏｘｙｇｌｕｃｏ‐ｂｒａｓｓｉｃｉｎＮＨＣＨ２庎ＯＣＨ３３９８２２１畅６０畅２５１１ １‐甲氧基‐３‐吲哚甲基芥子油苷ＮｅｏｇｌｕｃｏｂｒａｓｓｉｎｃｉｎＮＯＣＨ３ＣＨ２庎３９８２２１畅６０畅２ 注：倡为国际标准化组织（ＩＳＯ９１６７‐１，１９９２）；倡倡为目前国际标准化组织还未鉴定其响应因子．０６５第３４卷 腊贵晓，等：液相色谱质谱联用分离、鉴定芥蓝中脱硫芥子油苷１６５ 第５期浙江大学学报（农业与生命科学版） 对芥蓝中芥子油苷种类的报道不多，何洪巨等［１０］报道了芥蓝中含有７种芥子油苷，最近陈新娟等［１１］又报道了另３种芥子油苷．在本试验中，除了检测出前面已报道的１０种芥子油苷外，还检测到１种脂肪族芥子油苷（４‐甲硫基丁基芥子油苷）．其中，３‐甲基亚硫酰丙基芥子油苷、２‐羟基‐３‐丁烯基芥子油苷、２‐丙烯基芥子油苷、４‐甲基亚硫酰丁基芥子油苷、５‐甲基亚硫酰戊基芥子油苷、３‐丁烯基芥子油苷、４‐甲硫基丁基芥子油苷属于脂肪族芥子油苷，而其余的４‐羟基‐３‐吲哚甲基芥子油苷、３‐吲哚甲基芥子油苷、４‐甲氧基‐３吲哚甲基芥子油苷和１‐甲氧基‐３‐吲哚甲基芥子油苷等４种芥子油苷属于吲哚族芥子油苷，但是没有检测到芳香族芥子油苷，这和何洪巨、陈新娟等的结果一致．２畅３ 芥蓝菜薹中芥子油苷的含量 芥蓝中不同组分芥子油苷含量见表２．其中脂肪族芥子油苷占到总芥子油苷含量的９１畅６％，而吲哚族芥子油苷仅占总芥子油苷含量的８畅４％．在脂肪族芥子油苷中，３‐丁烯基芥子油苷的含量最高，为４６５１畅０６μｇ爛ｇ－１ＤＷ，占总芥子油苷含量的４７畅９％，５‐甲基亚硫酰戊基芥子油苷含量最低，仅为５９畅３１μｇ爛ｇ－１ＤＷ，占总芥子油苷含量的０畅６％．４‐甲基亚硫酰丁基芥子油苷（ｇｌｕｃｏｒａｐｈａｎｉｎ）的降解产物萝卜硫素（ｓｕｌｆｏｒａｐｈａｎｅ）是迄今发现的最强的Ⅱ相酶诱导剂，能使癌基因失去活性［１６‐１７］，在芥蓝中，其含量仅次于３‐丁烯基芥子油苷，为３４４５畅４７μｇ爛ｇ－１ＤＷ，占总芥子油苷含量的３５畅５％，它和３‐丁烯基芥子油苷共占总芥子油苷含量的８２畅３％．２‐羟基‐３‐丁烯基芥子油苷在肠胃内经过自发环化过程形成的降解产物可导致动物甲状腺肿大［１８］，但在芥蓝菜薹中含量比较低，仅为３１２畅３７μｇ爛ｇ－１ＤＷ．在吲哚族芥子油苷中，１‐甲氧基‐３‐吲哚甲基芥子油苷含量最高，为２８４畅３２μｇ爛ｇ－１ＤＷ，占总芥子油苷含量的２畅９％，４‐羟基‐３‐吲哚甲基芥子油苷含量最低，为２２畅９４μｇ爛ｇ－１ＤＷ，只占总芥子油苷含量的０畅２％．不过，本实验检测出的各芥子油苷组分的含量都高于何洪巨和陈新娟等的报道，与李建文［１９］报道的含量水平一致，这可能与芥蓝品种、栽培方式和分析测试方法等有关．表２ 芥蓝菜薹中芥子油苷的含量及组成Ｔａｂｌｅ２ ＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｃｏｎｔｅｎｔｏｆｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｉｎｂｏｌｔｉｎｇｓｔｅｍｏｆＣｈｉｎｅｓｅｋａｌｅ芥子油苷种类含量／（μｇ爛ｇ－１ＤＷ）占总芥子油苷含量的百分比／％脂肪族芥子油苷８９０５．０６±２１０．３４９１．６３±２．１６其中：３‐甲基亚硫酰丙基芥子油苷１７７．０８±８．１８１．８２±０．０８４ ２‐羟基‐３‐丁烯基芥子油苷３１２．３７±１２．９４３．２１±０．１３ ２‐丙烯基芥子油苷１６５．３４±５．２０１．７０±０．０５４ ４‐甲基亚硫酰丁基芥子油苷３４４５．４７±１６２．３４３９．５０±０．３７ ５‐甲基亚硫酰戊基芥子油苷５９．３１±２．４２０．６１±０．０２５ ３‐丁烯基芥子油苷４６５１．０６±４６．８１４７．８６±０．４８ ４‐甲硫基丁基芥子油苷９４．４３±４．２３０．９７±０．０４４吲哚族芥子油苷８１３．２６±１０．８４８．３７±０．１１其中：４‐羟基‐３‐吲哚甲基芥子油苷２２．９４±１．５７０．２４±０．０１６ ３‐吲哚甲基芥子油苷２５８．６０±１６．８７２．６６±０．１７ ４‐甲氧基‐３吲哚甲基芥子油苷２４７．４０±６．７３２．５４±０．０６９ １‐甲氧基‐３‐吲哚甲基芥子油苷２８４．３２±１３．４６２．９２±０．１４总芥子油苷９７１８．３２±２２１．０６３ 结 论３．１ 比较测定脱硫芥子油苷常用的两种流动相体系及两种长度的离子交换柱对芥蓝菜薹脱硫芥子油苷的分离效果发现，采用乙腈和水体系的流动相体系和Ｃ１８长柱（２５０ｍｍ×４畅６ｍｍ，５μｍ）使芥蓝中提取的脱硫介子油苷组２６５第３４卷 腊贵晓，等：液相色谱质谱联用分离、鉴定芥蓝中脱硫芥子油苷分得到很好地分离．３．２ 经过ＥＳＩ／ＭＳ及紫外扫描，在芥蓝菜薹中共检测到１１种芥子油苷，其中４‐甲硫基丁基芥子油苷为第一次在芥蓝中检测到．３．３ 利用２‐丙烯基芥子油苷外标定量，芥蓝菜薹中含有两类芥子油苷，其中脂肪族芥子油苷占总含量的９１畅６％，吲哚族仅占８畅４％．脂肪族芥子油苷中，最强的Ⅱ相酶激活剂萝卜硫素的前体４‐甲基亚硫酰丁基含量为３４４５畅４７μｇ爛ｇ－１ＤＷ，占总含量的３５畅５％，仅次于３‐丁烯基芥子油苷，再次证明芥蓝是理想的抗癌蔬菜．Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ：［１］ ＣＨＥＮＳｉ‐ｘｕｅ，ＥｒｉｋＡ．Ｕｐｄａｔｅｏｎｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｔｒａｎｓｐｏｒｔ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００１，３９（９）：７４３‐７５８．［２］ ＫｉｒｋｅｇａａｒｄＪＡ，ＳａｒｗａｒＭ．Ｂｉｏｆｕｍｉｇａｔｉｏｎｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｆｂｒａｓｓｉｃａｓ．Ｉ．Ｖａｒｉａｔｉｏｎｉｎｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｐｒｏｆｉｌｅｓｏｆｄｉｖｅｒｓｅｆｉｅｌｄ‐ｇｒｏｗｎｂｒａｓｓｉｃａｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔａｎｄＳｏｉｌ，１９９８，２０１（１）：７１‐８９．［３］ ＤｏｕｇｌａｓＧＣ，ＳｔｅｆｆｅｎＡ．Ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｉｔｓｃｏｎｔｒｏｌ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓｉｎＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２００６，１１（２）：８９‐１００．［４］ ＦｅｎｗｉｃｋＧＲ，ＨｅａｎｅｙＲＫ，ＭｕｌｌｉｎＷＪ．Ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｂｒｅａｋｄｏｗｎｐｒｏｄｕｃｔｓｉｎｆｏｏｄａｎｄｆｏｏｄｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＣｒｉｔｉｃａｌＲｅｖｉｅｗＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＮｕｔｒｉｔｉｏｎ，１９８３，１８（１）：１２３‐２０１．［５］ ＤｅｌａｑｕｉｓＰＪ，ＭａｚｚａＧ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅｓｉｎｆｏｏｄｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＦｏｏｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９５，４９（１１）：７３‐７９．［６］ ＣＨＥＮＪｉｎｇ‐ｍｉｎｇ，ＢＡＯＺｏｎｇ‐ｈｏｎｇ（陈精明，包宗宏）．Ｒｅｖｉｅｗｏｎｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＦａｔｓ（中国油脂），２００３，２８（５）：４４‐４７．（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅ）［７］ ＥａｇｌｅｓＪ，ＦｅｎｗｉｃｋＧＲ，ＧｍｅｌｉｎＲ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｉｏｎｉｚａｔｉｏｎｍａｓｓｓｐｅｃｔｒａｏｆｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓ（ｍｕｓｔａｒｄｏｉｌｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ）ａｎｄｄｅｓｕｌｐｈｏｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓ．Ａｕｓｅｆｕｌａｉｄｆｏｒｓｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．ＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，１９８１，８（６）：２６５‐２６９．［８］ ＦｅｎｗｉｃｋＧＲ，ＥａｇｌｅｓＪ，ＳｅｌｆＲ．Ｔｈｅｆａｓｔａｔｏｍｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔｓｍａｓｓｓｐｅｃｔｒａｏｆｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓａｎｄｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓｍｉｘｔｕｒｅｓ［Ｊ］．ＯｒｇａｎｉｃＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，１９８２，１７（１１）：５４４‐５４６．［９］ ＭａｌｌｏｎＦＡ，ＣｈａｐｍａｎＪＲ，ＰｒａｔｔＪＡ．Ｔｈｅｒｍｏｓｐｒａｙｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ／ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙｉｎｆｏｏｄａｎｄａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌｒｅｓｅａｒｃｈ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，１９８７，３９４（１）：２０９‐２２２．［１０］ ＨＥＨｏｎｇ‐ｊｕ，ＳＯＮＧＳｈｕ‐ｈｕｉ，ＷＡＮＧＷｅｎ‐ｑｉ，ｅｔａｌ．（何洪巨，宋曙辉，王文琪，等）．ＨＰＬＣｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｉｎｔａｃｔｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｉｎＣｈｉｎｅｓｅｋａｌｅ［Ｊ］．ＭｏｄｅｒｎＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（现代仪器），２００２（５）：１０‐１２．（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅ）［１１］ ＣＨＥＮＸｉｎ‐ｊｕａｎ，ＺＨＵＺｈｕ‐ｊｕｎ，ＹＡＮＧＪｉｎｇ，ｅｔａｌ．（陈新娟，朱祝军，杨静，等）．ＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｃｏｎｔｅｎｔｏｆｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓｉｎｌｅａｖｅｓａｎｄｂｏｌｔｉｎｇｓｔｅｍｓｏｆＣｈｉｎｅｓｅｋａｌｅｑｕａｎｔｉｆｉｅｄｂｙＨＰＬＣ［Ｊ］．ＡｃｔａＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ（园艺学报），２００６，３３（４）：７４１‐７４４．（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅ）［１２］ ＹＵＡＮＬｉ‐ｆｅｎｇ，ＧＵＯＷｅｉ‐ｑｉａｎｇ，ＷＡＮＧＺｈｉ‐ｇａｎｇ（袁丽凤，郭伟强，王志刚）．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓｂｙｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ‐ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：ＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ（浙江大学学报：理学版），２００４，３１（２）：１８０‐１８３．（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅ）［１３］ Ｍａｔｔｈ惫ｕｓＢ，ＬｕｆｔｍａｎｎＨ．ＧｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓｉｎｍｅｍｂｅｒｓｏｆｔｈｅｆａｍｉｌｙＢｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ：ｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｂｙＬＣ／ＥＳＩ‐ＭＳ‐ＭＳ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０００，４８（６）：２２３４‐２２３９．［１４］ ＣＨＥＮＸｉｎ‐ｊｕａｎ（陈新娟）．ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆＧｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓａｎｄＴｈｅｉｒＥｆｆｅｃｔＦａｃｔｏｒｓｉｎＣｈｉｎｅｓｅＢｒａｓｓｉｃａＶｅｇｅｔａｂｌｅｓ（中国芸薹属蔬菜硫代葡萄糖苷及其影响因子研究）［Ｄ］．Ｈａｎｇｚｈｏｕ：ＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００６：２１‐２２．（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅ）［１５］ ＫｉｄｄｌｅＧ，ＢｅｎｎｅｔｔＲＮ，ＢｏｔｔｉｎｇＮＰ，ｅｔａｌ．Ｈｉｇｈ‐ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｎａｔｕｒａｌａｎｄｓｙｎｔｈｅｔｉｃｄｅｓｕｌｐｈｏｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｃｈｅｍｉｃａｌｖａｌｉｄａｔｉｏｎｂｙＵＶ，ＮＭＲａｎｄｃｈｅｍｉｃａｌｉｏｎｉｓａｔｉｏｎ‐ＭＳｍｅｔｈｏｄｓ［Ｊ］．ＰｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌＡｎａｌｙｓｉｓ，２００１，１２（４）：２２６‐２４２．［１６］ ＢｏｎｅｓＡＭ，ＲｏｓｓｉｔｅｒＪＴ．Ｔｈｅｍｙｒｏｓｉｎａｓｅ‐ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓｙｓｔｅｍ，ｉｔｓｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌＰｌａｎｔ，１９９６，９７（１）：１９４‐２０８．［１７］ ＤｏｕｇｈｔｙＫＪ，ＫｉｄｄｌｅＧＡ，ＰｙｅＢＪ，ｅｔａｌ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓｉｎｏｉｌｓｅｅｄｒａｐｅｌｅａｖｅｓｂｙｍｅｔｈｙｌｊａｓｍｏｎａｔｅ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９５，３８（２）：３４７‐３５０．［１８］ ＶｅｇｅｅｘｈｂａｂｕＨＳ，ＣｈｏｐｒａＶＬ．Ｇｅｎｅｔｉｃａｎｄｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌａｐｐｒｏａｃｈｅｓｆｏｒｒｅｄｕｃｉｎｇｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓｆｒｏｍｒａｐｅｓｅｅｄ‐ｍｕｓｔａｒｄｍｅａｌ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｌａｎｔＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９７，６（２）：５３‐６２．［１９］ ＬＩＪｉａｎ‐ｗｅｎ（李建文）．ＳｔｕｄｉｅｓｏｆＰｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌＳｕｂｓｔａｎｃｅｓ，ＧｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓａｎｄＦｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｎＶｅｇｅｔａｂｌｅｓ（蔬菜中次生代谢物质硫代葡萄糖苷及类黄酮化合物的研究）［Ｄ］．Ｂａｏｄｉｎｇ，Ｈｅｂｅｉ：ＨｅｂｅｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００３：２９‐３０．（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅ）３６５ 第５期。
浙江省地方芥菜种质资源苦味评价与优异种质筛选
998㊀㊀2024年第65卷第5期收稿日期:2024-03-10基金项目:浙江省 三农九方 科技协作计划 揭榜挂帅 项目(2023SNJF044);浙江省瓜菜种质资源表型精准鉴定(芥菜)作者简介:刘文琦(1998 ),女,江苏南通人,硕士研究生,从事芥菜表型及品质性状的研究,E-mail:2955084342@㊂通信作者:胡齐赞(1973 ),男,浙江乐清人,副研究员,博士,从事蔬菜新品种选育与推广,E-mail:huqizan@㊂文献著录格式:刘文琦,赵彦婷,祝玮,等.浙江省地方芥菜种质资源苦味评价与优异种质筛选[J].浙江农业科学,2024,65(5):998-1004.DOI:10.16178/j.issn.0528-9017.20240191浙江省地方芥菜种质资源苦味评价与优异种质筛选刘文琦1,3,赵彦婷1,祝玮2,陈小央2,李燕2,岳智臣1,陶鹏1,雷娟利1,王华森3,李必元1,胡齐赞1∗(1.浙江省农业科学院蔬菜研究所,浙江杭州㊀310021;2.浙江省种子管理总站,浙江杭州㊀310020;3.浙江农林大学,浙江杭州㊀311300)㊀㊀摘㊀要:浙江省芥菜种质资源丰富,芥菜产业发达,其中榨菜和雪菜的加工产品享有盛名,相比之下,浙江鲜食芥菜产业还有待发展㊂鲜食芥菜栽培管理不当极易出现苦味加重的现象,极大地限制了浙江省鲜食芥菜产业的发展㊂以浙江省芥菜种质资源为材料,对芥菜的不同部位(叶片㊁叶柄㊁嫩叶㊁老叶)及不同季节(秋冬季㊁夏季)的芥菜进行苦味评价,结果发现软叶比叶柄苦㊁嫩叶比老叶苦㊁夏季芥菜比冬季芥菜苦㊂分析芥子油苷的数据,发现软叶中的总芥子油苷含量高于叶柄㊁嫩叶中的总芥子油苷含量高于老叶㊁夏季芥菜的总芥子油苷含量高于冬季芥菜,即总芥子油苷含量与苦味的变化趋势一致㊂通过以上研究最终筛选出5份苦味适中芥菜种质,为浙江省鲜食芥菜产业的发展奠定基础㊂关键词:鲜食芥菜;感官评价;苦味;硫代葡萄糖苷中图分类号:S637㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀文章编号:0528-9017(2024)05-0998-07Evaluation of bitter taste of local mustard germplasm resources andscreening of superior germplasm in Zhejiang ProvinceLIU Wenqi 1,3,ZHAO Yanting 1,ZHU Wei 2,CHEN Xiaoyang 2,LI Yan 2,YUE Zhichen 1,TAO Peng 1,LEI Juanli 1,WANG Huasen 3,LI Biyuan 1,HU Qizan 1∗(1.Institute of Vegetables,Zhejiang Academy of Agricultural Sciences,Hangzhou 310021,Zhejiang;2.Zhejiang General Seed Management Station,Hangzhou 310020,Zhejiang;3.Zhejiang Agriculture and Forestry University,Hangzhou 311300,Zhejiang)㊀㊀Abstract :Zhejiang Province is rich in mustard germplasm resources and has a developed mustard industry,in whichthe processed products of squash and snow mustard are famous,compared with the fresh mustard industry in Zhejiang Province,which still needs to be developed.In contrast,the fresh mustard industry in Zhejiang Province has yet to bedeveloped.Improper cultivation and management of fresh mustard is prone to increased bitterness,which greatly restricts the development of the fresh mustard industry in Zhejiang Province.In this study,mustard germplasm resources in ZhejiangProvince were used as materials to evaluate the bitterness of different parts of mustard (leaf blade,petiole,young leaf,oldleaf)and mustard in different seasons (winter and summer),and it was found that the soft leaf was more bitter than the petiole,the young leaf was more bitter than the old leaf,and the summer mustard was more bitter than the winter mustard.Analysing the data of erucicosides,it was found that the total erucicoside content in soft leaves was higher than petiole,total erucicoside content in young leaf was higher than old leaf,and total erucicoside content in summer mustard was higher than winter mustard,i.e.,the total erucicoside content was in agreement with the trend of bitterness.Through the aboveresearch,five mustard germplasm with moderate bitterness were finally screened out to lay the foundation for thedevelopment of fresh mustard industry in Zhejiang Province.Keywords :fresh mustard;sensory evaluation;bitterness;glucosinolate㊀㊀浙江省芥菜栽培历史悠久,地方芥菜种质资源丰富,大头芥㊁茎瘤芥㊁笋子芥㊁分蘖芥㊁结球芥㊁花叶芥㊁宽柄芥㊁叶瘤芥㊁小叶芥等变种在浙江省各地均有分布[1]㊂浙江省是芥菜生产和加工的大省,芥菜产业发达,以榨菜和雪菜加工为主,基本实现了工厂化和规模化,在桐乡㊁海宁㊁余姚㊁宁波等地聚集了一批名优芥菜加工企业㊂芥菜亦可鲜食,相比加工,浙江鲜食芥菜产业还有待发展,鲜食芥菜的种植和销售还未形成规模㊂近年来,随着生活水平的提高,市场对于菜品丰富性和保健性的需求越来越高,鲜食芥菜因具有独特的风味㊁清爽的口感和较高的保健功能,越来越受到消费者的喜爱㊂此外,芥菜抗逆性强,也是耐热速生叶菜开发利用的优异资源[2]㊂但是鲜食芥菜栽培管理不当极易出现苦味重㊁适口性差等品质劣变问题,尤其在夏季高温期种植,苦味尤其严重,影响了鲜食叶用芥菜产业的发展㊂因此亟需对浙江省的芥菜种质资源开展苦味鉴定评价,筛选苦味淡且不易累积的优异芥菜种质资源,为浙江省鲜食叶用芥菜的开发和利用提供助力㊂芥菜富含芥子油苷,2-丙烯基芥子油苷是芥菜中最主要的芥子油苷组分[3-4]㊂研究发现,芥子油苷是赋予十字花科蔬菜特殊风味的重要次生代谢产物,此外,部分的芥子油苷及代谢产物会呈现苦味[5],普遍认为芥菜及其他十字花科蔬菜如萝卜㊁结球甘蓝㊁羽衣甘蓝㊁花椰菜㊁抱子甘蓝㊁青花菜的苦味均与不同的芥子油苷组分有关[6]㊂本研究以浙江省地方种质资源为材料,分别在秋冬季和夏季开展了鲜食芥菜口感的鉴定评价,以期筛选苦味淡且不易累积的优异芥菜种质资源,并探究芥菜的苦味与芥子油苷间的关系,为后续鲜食芥菜品种的选育鉴定基础㊂1㊀材料与方法1.1㊀试验材料㊀㊀本研究所用材料为288份浙江省地方芥菜种质资源,包括126份 浙江省第三次全国农作物种质资源普查与收集行动 收集到的芥菜地方种质资源和162份从浙江省种子库引种的芥菜种质资源㊂供试芥菜种质资源分别于2022年11月和2023年6月种植于浙江省农业科学院杨渡科研创新基地㊂1.2㊀感官鉴定㊀㊀分别于2023年3月和2023年8月对秋冬季和夏季芥菜进行感官评价㊂由10位专家组成评审小组,取芥菜样品相同部位的叶片,食用油爆炒3~4min后进行品尝鉴定并进行打分㊂参考李晨旭等[7]方法,将苦味分为4个等级,具体评分标准见表1㊂表1㊀感官评价的评分标准Table1㊀Scoring criteria for sensory evaluation苦度口感描述苦度值的等级苦度值范围几乎无苦味Ⅰ0略有苦味Ⅱ1~2可接受的苦味Ⅲ3~4不能忍受的苦味Ⅳ51.3㊀芥子油苷提取及分析㊀㊀分别于2023年3月和2023年8月进行芥子油苷样品的取样㊂挑选生长整齐㊁无病虫害的3~4片芥菜叶片进行取样㊂取样后立即液氮处理,置于-80ħ冰箱保存,随后将样品放置低温真空冻干机中冻干,之后研磨成粉备用㊂称取约0.2g冻干粉加入到2mL90%甲醇里,室温静置1h,离心3min取上清液即为芥子油苷粗提液㊂之后过柱纯化,1mL甲醇清洗1次, 2mL ddH2O清洗2次,加100μL水解酶,过夜水解之后用1mL ddH2O洗脱㊂用HPLC进行芥子油苷组分和含量分析,根据226nm积峰面积和标准样品的响应系数计算芥子油苷的含量㊂1.4㊀数据分析㊀㊀利用Excel2019软件进行数据整理,利用Prism软件进行图表制作㊂2㊀结果与分析2.1㊀感官评价分析2.1.1㊀叶片不同组织部位感官评价㊀㊀芥菜夏季高温期苦味显著(表2),而且在品尝过程中发现夏季芥菜苦味不均一,不同部位的叶片苦味存在差异㊂同一植株中嫩叶(图1-A)的苦味高于老叶(图1-B)㊂同一叶片的不同组织部位的苦味也不同,其中叶片软叶部分(图1-C)的苦味显著高于叶柄的苦味(图1-D㊁E),而且中部叶柄(图1-D)比基部叶柄(图1-E)的苦味重㊂为筛选出苦味最淡的种质,我们在后续的种质资源筛选鉴定中选择了植株中苦味较重的部位 最大叶的软叶,进行品尝鉴定㊂2.1.2㊀浙江省芥菜种质资源感官评价㊀㊀依据表1,对288份浙江省芥菜种质资源最大1000㊀㊀2024年第65卷第5期A 嫩叶;B 老叶;C 软叶;D 叶柄中部;E 叶柄基部㊂图1㊀芥菜不同组织部位取样示意Fig.1㊀Schematic representation of differenttissue parts sampled from mustard㊀㊀叶的软叶进行感官评价结果发现,秋冬季节的芥菜几乎没有苦味,评分均为0分,相比之下夏季芥菜的苦味显著加重,评分均在0分以上,不同种质间的苦味也存在明显差异,其中,粗梗芥菜夏季苦味最淡,评分的平均分只有0.5分,而衢州芥菜夏季苦味最重,感官鉴定的平均分达到最高分5.0分(表2)㊂对288份芥菜种质资源夏季品尝得分进行统计,发现夏季芥菜苦味基本呈现正态分布,即苦味等级Ⅰ(几乎无苦味)和苦味等级Ⅳ(不能忍受的苦味)的数量较少,苦味等级2(略有苦味)和苦味等级Ⅲ(可接受的苦味)的数量较多,其中可接受苦味的芥菜种质(145份)约占50.3%;略有苦味的芥菜种质(117份)约占40.6%;不能接㊀㊀表2㊀288份浙江省芥菜苦味评价结果表2(续)1002㊀㊀2024年第65卷第5期受苦味的芥菜种质(25份)约占8.7%;几乎无苦味的芥菜种质(1份)约占0.3%(图2)㊂依据评分结果,从288份芥菜种质资源中筛选出5份夏季苦味较低的芥菜种质资源,分别是粗梗芥菜(0.5分)㊁苔用芥(1分)㊁根芥菜(1分)㊁紫叶芥菜(1.2分)和大肉包心芥(1.3分)(图3)㊂2.2㊀芥子油苷含量差异分析㊀㊀芥菜是富含芥子油苷的十字花科蔬菜,有研究指出芥子油苷化合物会带来苦味[8]㊂为探究芥子油苷是否是影响夏季芥菜产生苦味的因素,因此选择苦味等级2(略有苦味)㊁3(可接受的苦味)和4(不能忍受的苦味)的代表性芥菜种质进行研究㊂2.2.1㊀浙江省芥菜嫩叶和老叶芥子油苷含量分析㊀㊀对不同部位的叶片(嫩叶和老叶)进行芥子㊀㊀图2㊀品尝得分统计图Fig.2㊀Tasting score statistics图3㊀筛选出的5份品质较好的芥菜种质资源Fig.3㊀Screening of five better quality mustard germplasm resources油苷含量的测定㊂结果发现,芥菜的嫩叶和老叶中芥子油苷组分一致,烯丙基芥子油苷是芥菜中芥子油苷的主要组分,其次是3-丁烯基芥子油苷和吲哚-3-甲基芥子油苷(图4)㊂对芥子油苷的含量分析发现,苦味重的芥菜种质嫩叶总芥子油苷含量显著高于老叶,而略有苦味的芥菜种质嫩叶总芥子油苷含量略高于老叶㊂2.2.2㊀浙江省芥菜软叶和叶柄芥子油苷含量分析㊀㊀鉴于叶片软叶和叶柄部分的苦味差异明显,我们进行芥子油苷含量的测定㊂由图5可知,芥菜中软叶与叶柄的芥子油苷组分一致,烯丙基芥子油苷是芥菜中芥子油苷的主要组分,其次是3-丁烯基芥子油苷和吲哚-3-甲基芥子油苷㊂对芥子油苷含量的分析发现,芥菜软叶的总芥子油苷含量显著高于叶柄㊂2.2.3㊀浙江省秋冬季和夏季芥菜芥子油苷含量分析㊀㊀对不同季节(秋冬季和夏季)芥菜种质进行芥子油苷含量的测定㊂研究发现,不同季节芥菜的芥子油苷组分一致,烯丙基芥子油苷是芥菜中芥子油苷的主要组分,其次是3-丁烯基芥子油苷和5-甲硫戊基芥子油苷(图6)㊂对芥子油苷的含量分析发现,大多数夏季芥菜总芥子油苷含量显著高于秋冬季芥菜总芥子油苷含量㊂这表明夏季芥菜与秋冬季芥菜之间苦味的差异可能与芥子油苷含量差异有关㊂3㊀结论与讨论㊀㊀本研究对288份芥菜种质进行感官评价,通过品尝不同部位的叶片发现苦味存在差异,嫩叶比老㊀㊀图4㊀嫩叶和老叶的芥子油苷含量对比Fig.4㊀Comparison of glucosinolate content of young and old leaves图5㊀软叶和叶柄的芥子油苷含量对比Fig.5㊀Comparison of glucosinolate content in soft leaves and petioles叶苦;通过品尝叶片的不同部位发现软叶比叶柄苦;对不同季节的芥菜进行品尝发现夏季芥菜比秋冬季芥菜苦㊂之后分别进行芥子油苷含量的测定发现,嫩叶的总芥子油苷含量高于老叶;软叶的总芥子油苷含量高于叶柄;夏季芥菜的总芥子油苷含量高于秋冬季芥菜㊂我们筛选到5份高温期苦味较淡的种质资源用于后续开发利用㊂我们猜测在夏季高温高湿环境下,苦味积累较少的种质其体内或缺乏苦味物质合成的完整通路,或苦味物质合成通路受阻,故而推测这5份在其他不利的栽培条件下,仍然具有苦味较淡的特点㊂但是不排除以上5份种质中存在对高温胁迫不敏感进而导致苦味物质积累较少,因此,筛选出的5份种质在高温胁迫下苦味物质积累减少的机制有待进一步的验证,其在其他胁迫条件下的苦味变化亦有待进一步的探究㊂芥子油苷及其降解产物是十字花科蔬菜特殊风味的重要来源,研究发现烯丙基芥子油苷的异硫代氰酸盐与芥菜或芥末中辛辣味的形成有关[9]㊂有报道发现烹饪后花椰菜的苦味与1-甲氧基-吲哚-3-甲基芥子油苷和烯丙基芥子油苷有关[10]㊂有研究发现包包青菜(茎瘤芥)和包心芥菜(结球芥)中芥子油苷含量最高的是2-丙烯基芥子油苷[3]㊂本研究测定软叶㊁叶柄㊁嫩叶㊁老叶及秋冬季和夏季芥菜中的芥子油苷,发现丙烯基芥子油苷是芥菜芥子油苷的主要组分,与前人结果一致㊂有研究表明芥菜不同器官和不同品种间芥子油苷存在显著差1004㊀㊀2024年第65卷第5期图6㊀不同季节芥菜的芥子油苷含量对比Fig.6㊀Comparison of glucosinolate content of mustard in different seasons异[3],本研究发现,软叶的总芥子油苷含量高于叶柄,嫩叶的总芥子油苷含量高于老叶,且夏季芥菜的总芥子油苷含量高于秋冬季芥菜,这些研究结果表明芥菜苦味可能与芥子油苷含量有关,但Baik等[11]的研究表明,总芥子油苷含量与苦味之间不存在相关性,因此芥子油苷含量与苦味之间的关系还有待进一步的研究㊂除此以外,含硫的挥发性化合物㊁酚类化合物㊁维生素C㊁奎宁等物质可能影响芸薹属蔬菜苦味的形成;贮藏过程㊁生长过程中使用氮素的量等环境因素也会影响芸薹属蔬菜的风味[8],以上物质和因素是否对芥菜的苦味有影响,还需要进一步地研究㊂相比榨菜和雪菜,鲜食芥菜的开发利用滞后,品种相对较少,尽管如此,仍有一些品种在风味和品质上具有独特的优点,如广东的水东芥㊁ 高花青素+富硒 的叶用芥菜品种紫妃水东芥㊁潮州春菜㊁客家甜芥菜㊁大坪埔包心芥菜等[12]㊂浙江省的鲜食芥菜品种较少,我们的研究结果为浙江省鲜食芥菜的开发利用提供重要参考,也为浙江省芥菜产业的进一步发展提供坚实基础㊂参考文献:[1]㊀孟秋峰,胡美华,王洁,等.浙江省芥菜研究进展[J].浙江农业学报,2020,32(9):1732-1740.[2]㊀赵彦婷,刘文琦,祝玮,等.耐热速生型芥菜种质资源的评价与筛选[J].浙江农业科学,2023,64(5):1110-1115.[3]㊀李燕,王晓艳,王毓洪,等.茎瘤芥的芥子油苷组分及含量的品种间差异[J].园艺学报,2011,38(7):1356-1364.[4]㊀杨涛,石瑜,王晓艳,等.小菜蛾取食对2个芥菜变种芥子油苷组分和含量的影响[J].浙江大学学报(农业与生命科学版),2013,39(5):522-530.[5]㊀李磊,周昇昇.苦味植物化合物和苦味修饰剂的研究进展[J].食品工业,2014,35(6):213-217.[6]㊀ZHU B,LIANG Z L,ZANG Y X,et al.Diversity ofglucosinolates among common Brassicaceae vegetables in China[J].Horticultural Plant Journal,2023,9(3):365-380.[7]㊀李晨旭,任延娜,姚静,等.基于经典人群口尝法的苦味药物 比苦度 定量方法研究[J].中草药,2023,54(9):2758-2764.[8]㊀曾围.芥蓝芽菜中芥子油苷代谢产物功能分析及其调节因子BoaMYB28互作蛋白的筛选[D].杭州:浙江大学,2021.[9]㊀BELL L,OLOYEDE O O,LIGNOU S,et al.Taste and flavorperceptions of glucosinolates,isothiocyanates,and relatedcompounds[J].Molecular Nutrition&Food Research,2018,62(18):e1700990.[10]㊀ENGEL E,BATY C,LE CORRE D,et al.Flavor-activecompounds potentially implicated in cooked caulifloweracceptance[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,2002,50(22):6459-6467.[11]㊀BAIK H Y,JUVIK J A,JEFFERY E H,et al.Relatingglucosinolate content and flavor of broccoli cultivars[J].Journal of Food Science,2003,68(3):1043-1050. [12]㊀李贤斌,邓一文,崔桂芹,等.水东芥菜的现状及发展设想[J].广东农业科学,2008,35(7):172-173.(责任编辑:张韵)。
萝卜芥子油苷组分及含量的分析
萝卜芥子油苷组分及含量的分析李秋云;戴绍军;陈思学;阎秀峰【期刊名称】《园艺学报》【年(卷),期】2008(35)8【摘要】采用HPLC-MS联用分析法,对'心里美'萝卜(Raphanus sativus L.)芽、叶片以及肉质根中芥子油苷的组分与含量进行了鉴定和分析。
结果表明,萝卜芽、叶片和根的芥子油苷组分相同,均检测出8种芥子油苷,其中脂肪族芥子油苷5种(4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基芥子油苷、2-羟基-3-丁烯基芥子油苷、乙基芥子油苷、4-甲硫基-3-丁烯基芥子油苷和6-庚烯基芥子油苷),吲哚族芥子油苷3种(1-甲氧吲哚基-3-甲基芥子油苷、吲哚基-3-甲基芥子油苷和4-羟基吲哚基-3-甲基芥子油苷)。
芥子油苷含量在萝卜芽、叶片和肉质根中差异很大,肉质根中芥子油苷的总含量高于萝卜芽和叶片。
在肉质根和芽中,4-甲硫基-3-丁烯基芥子油苷是主要的芥子油苷,分别占芥子油苷总含量的75.5%和71.5%;而在叶片中吲哚基-3-甲基芥子油苷是主要芥子油苷,占芥子油苷总含量的57.1%。
【总页数】4页(P1205-1208)【关键词】萝卜;芥子油苷;组分;含量;HPLC-MS【作者】李秋云;戴绍军;陈思学;阎秀峰【作者单位】东北林业大学生命科学学院,东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室,哈尔滨150040;佛罗里达大学植物学系,美国盖恩斯维尔FL32611【正文语种】中文【中图分类】S631.1【相关文献】1.芥蓝菜薹不同节间芥子油苷组分及含量分析 [J], 腊贵晓;刘国顺;杨俞娟2.小菜蛾取食对2个芥菜变种芥子油苷组分和含量的影响 [J], 杨涛;石瑜;王晓艳;张新;钱红梅;孟秋峰;汪炳良3.三种色型玛咖芥子油苷组分及含量分析 [J], 甘瑾;冯颖;张弘;何钊;徐珑峰;陈晓鸣4.施氮对萝卜芽芥子油苷含量的影响 [J], 李秋云;戴绍军;陈思学;阎秀峰5.表面活性剂辅助的甲硫氨酸和色氨酸叶面喷施对芥蓝生长及菜薹芥子油苷组分和含量的影响 [J], 腊贵晓;孔海民;方萍;杨铁钢因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
芥子油苷测定方法
高效液相色谱对芥子油苷的提取和分离I准备阶段:1.水浴锅设置80℃2.配制两瓶70%的甲醇，其中一瓶置于水浴锅中温浴。
3.5mM苄基芥子油昔.2.33mg/ml4.0.5M 醋酸盐(PH=5)[30mlHAC，960ml H2O，力口10-20g NaOH 粉末，调至PH=5]5.20mM的醋酸盐，PH=5：将4中的稀释25倍6.DEAE sephadex A-25 :称取3g 树脂，加90ml 0.5M 醋酸盐(PH=5)室温过夜溶解。
7.硫酸酯酶：15mg溶解于6ml 20mM 醋酸钠中，PH=5 (16100uM/hour/g )II芥子油提取1.取新鲜莲座叶，鲜重5-10mg2.放入1.5mlEP管中，迅速放入液氮。
3.研磨成粉末后并加入1ml预热的70%的甲醇。
4.加入50ul 5mM的苄基芥子油昔5.盖好盖子漩涡震荡置于冰上，剩下的样品重复步骤3-4。
6.所有的样品置于80℃10min。
7. 4000rpm, 10min。
8.将上清液转移至1.5的离心管。
9.用预热的甲醇重新提取两次，收集所有的上清液至4ml, -20℃保存。
m芥子油苷的脱硫纯化1.搅拌DEAE sephadex A-25树脂成溶液，用1ml的移液器取1ml加入BioRad管中，让其沉淀。
2.用5ml的灭菌水清洗（禁止干燥）。
3.加入所有的芥子油昔提取液。
4.用2ml的70%的甲醇清洗两次，2ml的灭菌水清洗5次，2ml 20mM 醋酸盐PH=5清洗一次。
5.加入0.5ml硫酸酯酶，直至上侧的橡胶管中剩余1-2mm的液相。
IV脱硫芥子油苷的洗脱1.用1ml灭菌水洗脱3次。
2.浓缩至EP管中剩余0.5ml液体V HPLC分离脱硫芥子油苷1.取60ul洗脱液于HPLC管中，吸入30ul2.检测：PDA 190nm-370nm （或者DV229nm 和260nm）3.流速：1ml/min4.运行梯度：灭菌水（A）和甲醇（B），60minA100%,B0% 2minA to 60%B 线性48min，60%B to 100% B 线性3minA 0%，B100% 3minB to 100% A 线性4minVI芥子油苷的HPLC-MS5 .取60ul 洗脱液加入HPLC 管中，吸入6ul6 .检测：质谱，[M+Na +]7 .流速：0.25ml/min8 .运行梯度：混有50uM 的醋酸钠灭菌水(A )与甲醇(B ), 60min 40min ，60%B to 100% B 线性 5minA 0%，B100% 5minB to 100% A 线性8min 液相色谱质谱联用分离、鉴定芥蓝中脱硫芥子油昔腊贵晓,方萍,李亚娟,王月1 .芥子油昔的提取和纯化称取0. 20 g 冻干样品，加入3 mL 70%甲醇(甲醇：水二70 ： 30), 在70℃的水浴锅中提取10 min,然后4000 r min- 1离心10 min. 沉淀再按照上述方法提取2次,合并上述提取液.同时做2个平行.取 2 mL 提取液流经DEAESephadex A-25萃取柱，待提取液全部流出小柱 后，加入200 L 硫酸酯酶(0. 1%)溶液.室温反应16 h 后用4X 0. 5 mL 超纯水洗脱.洗脱液过0. 45 〃 m 微膜,4℃下保存,待HPLC 分析.利用 2-丙烯基芥子油昔(sinigrin)作为外标进行定量.2 .芥子油昔的测定与鉴定测定芥子油昔的主要方法包括气相色谱法测定其降解产物异硫代氰 酸盐化合物;高效液相色谱法测定脱硫芥子油昔和完形芥子油昔.对 芥子油昔的鉴定一般采用质谱法,包括化学电离、快速原子轰击电离A100%,B0%2minA to 60%B 线性及热喷雾电离等方法.1.超高效液相色谱法测定拟南芥芥子油昔［J］东北农业大学学报，石璐，李梦莎，国静等摘要：将已有的拟南芥芥子油昔高效液相色谱(HPLC)检测方法转换为超高效液相色谱(UPLC)方法，通过条件优化改进，建立拟南芥芥子油昔UPLC检测方法。
小白菜不同叶期及不同叶位硫苷的质量摩尔浓度
小白菜不同叶期及不同叶位硫苷的质量摩尔浓度马永华;陈文妃;陈凌云;韦俊涛;郁有健;朱祝军【摘要】硫代葡萄糖苷简称硫苷,是一种重要的植物次生代谢产物,具有多种生物学活性,与人类的生活密切相关.为研究小白菜Brassica rapa ssp.chinensis不同叶期、不同叶位硫苷质量摩尔浓度的变化,以小白菜品种'黑油冬''Heiyoudong'为试材,利用固相萃取仪和高效液相色谱仪对四叶期、八叶期、十二叶期及八叶期不同叶位的硫苷质量摩尔浓度进行检测.结果表明:小白菜八叶期的总硫苷质量摩尔浓度明显高于四叶期和十二叶期,脂肪族硫苷质量摩尔浓度随叶期升高呈下降趋势,吲哚族、芳香族硫苷变化趋势与总硫苷变化趋势一致;小白菜八叶期内叶位总硫苷质量摩尔浓度高于外叶位,菜心部位硫苷质量摩尔浓度最高,为4.35μmol·g-1,其中脂肪族硫苷质量摩尔浓度高达2.55μmol·g-1,吲哚族硫苷质量摩尔浓度高达1.60μmol·g-1,芳香族硫苷质量摩尔浓度相对较低;此外,叶位Y7吲哚族硫苷占比最高,占总硫苷质量摩尔浓度的56.7％,其他叶位则以脂肪族硫苷为主,占总硫苷质量摩尔浓度的59.0％～79.0％.在所有叶位中,芳香族硫苷质量摩尔浓度最低,占比低于7.1％.图2参20【期刊名称】《浙江农林大学学报》【年(卷),期】2018(035)006【总页数】5页(P1115-1119)【关键词】园艺学;硫代葡萄糖苷;小白菜;叶位;叶期【作者】马永华;陈文妃;陈凌云;韦俊涛;郁有健;朱祝军【作者单位】浙江农林大学农业与食品科学学院, 浙江杭州 311300;浙江农林大学农业与食品科学学院, 浙江杭州 311300;浙江农林大学农业与食品科学学院, 浙江杭州 311300;浙江农林大学农业与食品科学学院, 浙江杭州 311300;浙江农林大学农业与食品科学学院, 浙江杭州 311300;浙江农林大学农业与食品科学学院, 浙江杭州 311300;浙江农林大学浙江省农产品品质改良技术研究重点实验室, 浙江杭州 311300【正文语种】中文【中图分类】S634.3硫代葡萄糖苷（glucosinolates，GS）又称芥子油苷，是一类富含氮、硫的植物次级代谢产物，主要存在于十字花科Cruciferae植物中［1］。
芥子油苷的生物合成——相关基因的发现及后续研究
芥子油苷的生物合成——相关基因的发现及后续研究Ida E. Sønderby, Fernando Geu-Flores and Barbara A. HalkierPlant Biochemistry Laboratory, VKR Research Centre Pro-Active Plants, Department of Plant Biology and Biotechnology, Faculty of Life Sciences, University of Copenhagen, Thorvaldsensvej 40, 1871 Frederiksberg C, Denmark芥子油苷是十字花目植物中的一种富含硫的次生代谢物质，它在植物抗性和人体营养方面都具有重要的生物学意义和经济意义。
利用系统生物学方法研究者鉴定出了芥子油苷生物合成的相关基因。
最近的研究包含了参与合成途径三个阶段（即前体氨基酸的侧链延长、核心结构的合成和侧链的次级修饰）的所有基因。
主要的突破性成果包括发现烟草中可以产生芥子油苷，芥子油苷在拟南芥先天性免疫反应中发挥重要作用，以及更深入地理解了芥子油苷合成与初生硫代谢之间的联系。
扩大芥子油苷基因目录芥子油苷是一种次生代谢产物，因在植物对昆虫和病原物的抗性方面的作用以及对癌症的预防功效而被人们所熟知。
它主要存在于十字花目植物中，包括重要的芸薹属经济和粮食作物，例如油菜（Brassica napus）、结球甘蓝（Brassica oleracea）以及模式植物拟南芥（Ar abidopsis thaliana）[1]。
芥子油苷已经获得了“模式”次生代谢物质的地位，该领域的科学家利用系统生物学方法，从拟南芥中突变体的收集和自然突变成功鉴定出了芥子油苷的生物合成基因。
事实上，根据已知的数量可观的酶，芥子油苷代谢途径中的未知基因的功能可由其与已知基因的共表达来推断，即所谓的“guilt-by-association”原理[2–12]。
芥子油苷及其代谢产物的生物学效应研究与应用
芥子油苷及其代谢产物的生物学效应研究与应用下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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高效液相色谱对芥子油苷的提取和分离
I 准备阶段：
1. 水浴锅设置80℃
2.配制两瓶70%的甲醇，其中一瓶置于水浴锅中温浴。
3.5mM苄基芥子油苷.2.33mg/ml
4.0.5M醋酸盐（PH=5）[30mlHAC，960ml H2O，加10-20g NaOH 粉末，调至PH=5]
5.20mM的醋酸盐，PH=5：将4中的稀释25倍
6.DEAE sephadex A-25：称取3g 树脂，加90ml 0.5M 醋酸盐（PH=5）室温过夜溶解。
7.硫酸酯酶：15mg溶解于6ml 20mM 醋酸钠中，PH=5（16100uM/hour/g）
II 芥子油提取
1. 取新鲜莲座叶，鲜重5-10mg
2. 放入1.5mlEP管中，迅速放入液氮。
3. 研磨成粉末后并加入1ml 预热的70%的甲醇。
4. 加入50ul 5mM 的苄基芥子油苷
5. 盖好盖子漩涡震荡置于冰上，剩下的样品重复步骤3-4。
6. 所有的样品置于80℃10min。
7. 4000rpm，10min。
8. 将上清液转移至1.5 的离心管。
9. 用预热的甲醇重新提取两次，收集所有的上清液至4ml，-20℃
保存。
III 芥子油苷的脱硫纯化
1. 搅拌DEAE sephadex A-25 树脂成溶液，用1ml的移液器取1ml 加入BioRad 管中，让其沉淀。
2. 用5ml 的灭菌水清洗（禁止干燥）。
3. 加入所有的芥子油苷提取液。
4. 用2ml的70%的甲醇清洗两次，2ml 的灭菌水清洗5次，2ml 20mM 醋酸盐PH=5清洗一次。
5. 加入0.5ml 硫酸酯酶，直至上侧的橡胶管中剩余1-2mm的液相。
IV 脱硫芥子油苷的洗脱
1. 用1ml 灭菌水洗脱3次。
2. 浓缩至EP 管中剩余0.5ml 液体
V HPLC分离脱硫芥子油苷
1. 取60ul 洗脱液于HPLC管中，吸入30ul
2. 检测：PDA 190nm-370nm （或者DV229nm和260nm）
3. 流速：1ml/min
4. 运行梯度：灭菌水（A）和甲醇（B），60min
A100%,B0% 2min
A to 60%B线性48min，60%
B to 100% B 线性3min
A 0%，B100% 3min
B to 100% A 线性4min
VI 芥子油苷的HPLC-MS
5. 取60ul 洗脱液加入HPLC管中，吸入6ul
6. 检测：质谱，[M+Na+]
7. 流速：0.25ml/min
8. 运行梯度：混有50uM的醋酸钠灭菌水（A）与甲醇（B），60min
A100%,B0% 2min
A to 60%B线性40min，60%
B to 100% B 线性5min
A 0%，B100% 5min
B to 100% A 线性8min
液相色谱质谱联用分离、鉴定芥蓝中脱硫芥子油苷
腊贵晓,方萍,李亚娟,王月
1.芥子油苷的提取和纯化
称取0. 20 g冻干样品,加入3 mL 70%甲醇(甲醇∶水= 70∶ 30),在70℃的水浴锅中提取10 min,然后4000 r min- 1离心10 min.沉淀再按照上述方法提取2次,合并上述提取液.同时做2个平行.取2 mL提取液流经DEAESephadex A-25萃取柱,待提取液全部流出小柱后,加入200 L硫酸酯酶(0. 1%)溶液.室温反应16 h后用4× 0. 5 mL 超纯水洗脱.洗脱液过0. 45μm微膜,4℃下保存,待HPLC分析.利用2-丙烯基芥子油苷(sinigrin)作为外标进行定量.
2.芥子油苷的测定与鉴定
测定芥子油苷的主要方法包括气相色谱法测定其降解产物异硫代氰酸盐化合物;高效液相色谱法测定脱硫芥子油苷和完形芥子油苷.对芥子油苷的鉴定一般采用质谱法,包括化学电离、快速原子轰击电离
及热喷雾电离等方法.
1.超高效液相色谱法测定拟南芥芥子油苷[J]东北农业大学学报，石璐，李梦莎，国静等摘要：将已有的拟南芥芥子油苷高效液相色谱（HPLC）检测方法转换为超高效液相色谱（UPLC）方法，通过条件优化改进，建立拟南芥芥子油苷UPLC检测方法。
该方法采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱（50 mm×
2.1 mm，1.8 μm），以超纯水和甲醇为流动相进行梯度洗脱，流速为0.40 mL·min-1，检测波长229 nm，进样量5 μL，内标为苯甲基芥子油苷。
2.芥蓝芥子油苷提取条件优化研究
腊贵晓1，孔海民2，方萍3，杨铁钢1*
摘要:采用正交试验设计，研究了提取温度、提取剂甲醇浓度( V/V) 、提取时间和待测物质与提取液比例( 简称“物液比”) 对芥蓝菜薹中芥子油苷( 总芥子油苷含量、总脂肪族芥子油苷和总吲哚族芥子油苷) 提取效果的影响。
结果表明，物液比和提取温度对总芥子油苷、总脂肪族芥子油苷和总吲哚族芥子油苷提取效果影响显著( P＜0．05) ，而甲醇浓度和提取时间对芥子油苷提取率无显著影响( P＞0．05) 。
综合考虑提取效果和成本，芥蓝中芥子油苷最佳提取条件为75℃，物液比1∶45( g ∶mL) ，甲醇浓度70%，提取时间 5 min。
在该条件下，总芥子油苷提取量为8．31 μmol/g DW，总脂肪族芥子油苷提取总量为7．58 μmol/g DW，总吲哚族脂肪族芥子油苷提取总量为0．73 μmol/g DW。
3.中国甘蓝型油菜硫苷含量及组份分析
李培武1，2，赵永国2，张文2，丁小霞2，杨湄3，汪雪芳3，谢从华1，傅廷栋1 （1）硫苷提取：准确称取0.2000 g 已制备好的样品至离心管中，于75℃水浴中保温杀活1 min，加入2 ml 70%甲醇提取液和200 µl 内标，离心、转移上清液至试管中，再加入2ml 70%甲醇提取并离心，共重复3 次，混合上清液，取2 ml 溶液上醋酸型DEAE-Sephadex A-25 阴离子交换柱，加硫酸酯酶500 µl，于36℃培养箱中酶解20 h 后取出，用1 ml 纯水冲洗，待流干后再用1 ml纯水冲洗，共冲洗3 次，混匀收集的洗脱液，用0.45 µm的微孔滤膜过滤、封口，待上液相色谱仪分析。
（2）高效液相色谱分析：使用美国Waters 公司的液相色谱仪，包括两台高压泵，自动进样器，二极管阵列检测器，色谱柱为Spherisorb C18柱（150 mm×4 mm），流动相为20%乙腈，检测波长229 nm，柱温为30℃，进样量10 µl，所有样品重复2 次，按照国际标准方法进行硫苷分量色谱峰定性。
青花菜：在青花菜芽菜中共发现了7种芥子油苷，3种脂肪类芥子
油苷，S4,S5和T4以及4种“吲哚类芥子油苷”:4OHIM，IM,1IM和4IM.
拟南芥中芥子油苷：
拟南芥：
大白菜：。