常用生物化学检验技术
生物化学检验常用技术(共66张PPT)
单色光 均匀介质 吸收物质无相 互作用
5、空白溶液的选择
在分光光度法中，为消除显色剂及样品中各种共存有色物质产生的干扰、抵消比色皿和 试剂对入射光的影响而用来调节仪器百分透光率为100%的溶液。
不
蒸 馏 水
试
样
含 待
剂
品
测
元
不
显 色
素
1、溶剂空白：不加样品和任何试剂，用纯溶剂（如蒸馏水或其他有机溶剂）作参比溶液。 选择原则：当显色剂及其它试剂均无色，被测试样中又无其他有色离子时，选用溶剂参比。
常用的固定化技术有：吸附、试剂交联、共价键合、
包埋法(酶与载体聚丙酰胺混合后直接包在电极 敏感部分形成酶凝胶层)。
几种酶电极的品种与性能
测定物质
酶
检测物 测定范围(mol/L)
葡萄糖 葡萄糖氧化酶
尿素(脲)
脲酶
胆固醇 胆固醇氧化酶
L－谷氨酸 谷氨酸脱氢酶 L－赖氨酸 赖氨酸脱羧酶
O2 NH3 H2O2 NH4+ CO2
单色器
滤光片
棱镜
光栅
吸收池
检测器
玻璃比色皿
石英比色皿
显示器
4
(一)、分光光度技术的基本原理
1、吸光度与透光度
当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光被散射，一部分光 被吸收，另有一部分光透过溶液。设入射光强度为I0，透射光强度为I，I和I0之比称为透 光度，即：
入射光 I0
透射光 I
T = I/I0
10-4～2*10-2 10-5～10-2 10-5～10-2 10-4～10-1 10-4～10-1
离子选择性电极的分析方法
生物化学检验常用分析技术
待测管 2 待测管 1 标准管 试剂空白管
物质颜色和吸收光颜色的关系
物质颜色
黄绿 黄 橙 红
紫红 紫 蓝
绿蓝 蓝绿
吸
颜
色
紫 蓝 绿蓝 蓝绿 绿 黄绿 黄 绿 红
收 波
光 长(nm)
400 ~ 450 450 ~ 480 480 ~ 490 490 ~ 500 500 ~ 560 560 ~ 580 580 ~ 600 600 ~ 650 650 ~ 750
Lambert-Beer定律要求条件 • 1、入射光必须是单色光 • 2、被测样品必须是均匀介质 • 3、吸收过程中，吸收物质之间不发生相互作用
4、Lambert-Beer定律的偏离现象
• 1. 吸收定律本身的局限性 • L-B 定律是一个有限的定律，只有在稀溶液中才能成立。 • 2、仪器因素(非单色光的影响) • 3、化学因素 • 溶液中的溶质可因 c 的改变而有离解、缔合、配位以及与溶剂间的作用等原因而发
最大吸收波长
吸 光 度
波长范围
0.80
Ax 0.60
0.40
0.20
0.00
cx
0 1.0 2.0 3.0 4.0 c(mg/mL)
（二）原子吸收分光光度法 原子吸收分光光度法是基于元素所产生的原子蒸 气中待测元素的基态原子，对所发射的特征谱线的吸收作用进行定量分析的一种技术。 即在一定条件下，原子的吸光度同原子蒸气中待测元素基态原子的浓度成正比。 常用的定量方法有： 标准曲线法、标准加入法、内标法。
如果溶液浓度以质量体积比表示时，此常数称为比吸光系数（ ），它 表示当溶液浓度为1g/L、液层厚度为1cm时，在一定波长下测得的吸光度 值。摩尔吸光系数ε和比吸光系数 可相互换算。
生物化学检验名词解释
生物化学检验名词解释生物化学检验是一种用于研究生物分子结构、功能和相互作用的实验方法。
生物化学检验包括多种技术和实验室技能，用于分析生物分子的组成、测定它们的浓度、检测它们在生物体内的作用和相互作用。
以下是一些生物化学检验常用的名词的解释：1. 质谱：质谱是一种用于测量分子质量的技术。
它利用质谱仪将化合物离子化，并用磁场将这些离子分离。
然后，质谱仪测量离子的质量和相对丰度，从而确定化合物的质量。
2. 电泳：电泳是一种利用电场将带电物质分离的技术。
在生物化学检验中，电泳常用于分离和鉴定蛋白质、核酸和多肽。
蛋白质电泳用于分析蛋白质的分子量和组成，核酸电泳用于分析DNA和RNA的大小和纯度。
3. 分光光度计：分光光度计用于测量溶液中的光吸收或透射。
它通过将不同波长的光射入溶液并测量光的强度，从而确定溶液中特定物质的浓度。
4. 酶活性测定：酶活性测定用于测量酶催化反应的速率。
常用的酶活性测定方法包括测定溶液中底物消耗、产物生成或光学变化的速率。
5. 高效液相色谱法（HPLC）：高效液相色谱法是一种用于分离和测定化合物的方法。
它利用液相色谱仪将样品通过固定相柱，分离出不同化合物。
然后，通过检测器测量化合物的吸光度或荧光信号，并确定它们的浓度。
6. 透射电镜（TEM）：透射电镜是一种用于观察和分析生物样品的结构的技术。
它利用电子束通过样品并通过透射电镜来放大和捕捉电子图像。
透射电镜可以用于观察细胞和细胞器的超微结构。
7. 核磁共振（NMR）：核磁共振是一种用于分析化合物结构的技术。
它利用磁场和射频辐射来激发和探测样品中的原子核。
根据原子核的化学位移和耦合常数，核磁共振可以确定化合物的结构。
8. 能谱法：能谱法是一种用于分析样品中元素及其组成的方法。
它利用能谱仪测量样品辐射的能量分布，并根据其能量和强度来确定样品中的元素浓度和种类。
生物化学检验是现代生物学和医学研究中不可或缺的重要方法之一。
通过生物化学检验，我们可以了解生物分子的组成、浓度和功能，从而深入研究生物体内各种生物过程和疾病的发生机制。
临床生物化学检验技术笔记
临床生物化学检验技术笔记
临床生物化学检验技术是一种用于诊断和治疗疾病的重要技术。
它通过测量和分析体液中的生化指标，如血清中的蛋白质、酶、电解质等，来评估机体的生理状态，发现异常情况，并提供相关的诊断和治疗建议。
以下是一些临床生物化学检验技术的基本原理和常见应用：
1. 光度法：利用物质对特定波长的光的吸收特性进行分析。
常用于测量血清中的蛋白质、酶、代谢产物等。
2. 电化学法：利用电化学原理测量电流、电压等电学参数，用于测量电解质、血气、肾功能等。
3. 酶法：利用酶对底物的特异性催化作用，测量酶的活性或底物、产物的浓度。
常用于检测肝功能、心脏损伤等。
4. 免疫测定法：利用抗原与抗体的特异性结合关系进行分析，常用于检测激素、肿瘤标志物等。
5. 质谱法：通过测量样品中分子的质量-荷电比，分析样品的组成和结构。
常用于药物测定、代谢产物分析等。
6. 核酸分析技术：通过测量DNA或RNA的含量、序列和结构，用于疾病的遗传性检测、基因表达分析等。
临床生物化学检验技术在临床诊断和治疗中起到了重要的作用。
它不仅可以用于早期发现疾病、评估疾病的严重程度，还可以用于监测治疗效果、指导治疗方案的选择。
然而，需要注意的是，临床生物化学检验技术的结果需要结合临床病史和其他检查结果进行综合分
析和解释，以确保最终的诊断和治疗方案的准确性和有效性。
常用临床生物化学检验技术
5
500 0.42 250000 210
合计 1500 1.32
477
平均 300
550000 0.264
b
Σxy Σx 2
Σ xn· Σ y （Σnx）2
477
1500· 1.32 5
550000
（1500）2 5
0.00081
X为ALT单位,Y为吸光度
b
Σxy
Σx 2
Σ xn· Σ y （Σnx）2
射频区
• 波长 0.1～100cm
微波
• 波长 760～1000nm 远红外射线
• 波长 400～760nm
可见光
• 波长 200～400nm
紫外光
• 波长 10～200nm
远紫外光
• 波长 10-３～10nm
x射线
• 波长 5×10-3～0.14nm γ射线
二、波长与颜色
不同波长光线的颜色
光的波长（nm） 颜 色
第四章 常用临床生物化学检验技术
临床生化检验教研室 李 艳
常用临床生物化学检验技术
• 光谱分析技术: 最基本和最常用 • 电化学分析技术 • 电泳分析技术 • 层析和离心分析技术 • 自动化分析技术
教学目的和要求
掌握：分光光度技术的基本原理及定性和定量方法 自动生化分析仪的工作原理及参数设置
熟悉: 分光光度计的的基本结构 操作方法光源检查和波长校正 离心机相对离心力公式
20×30cm2比例坐标纸， • 浓度全距占多少格，A的全距也应占多
少格 • 空白A等于0，则绘出的曲线通过原点，
成45o角的直线，若曲线大于或小于45o 都不能准确
②样品浓度的选择
• 一般包括待测样品的可能变异的最高值与最 低值。例如血LDH比色法测定，正常波动范 围在190~437金氏单位，疾病时可能低至190 金氏单位，高至750金氏单位，所以标准曲线 浓度应从125~1000金氏单位
临床生物化学检验技术笔记(一)
临床生物化学检验技术笔记(一)临床生物化学检验技术什么是生物化学检验技术生物化学检验技术是一种研究生物分子的化学性质和结构的科学技术。
它主要通过对生物分子进行分离、纯化、鉴定、定量和结构分析等方法，从而了解生物体内分子的组成和功能。
生物化学检验技术在临床上的应用生物化学检验技术在临床上广泛应用于疾病的诊断、治疗和预防。
以下是一些常见的检验项目：•血糖：用于诊断和监测糖尿病•肝功：检测肝功能异常，如肝炎等•肾功：检测肾功能异常，如肾炎等•血脂：监测血脂异常，如高胆固醇等•血常规：检测贫血、白细胞异常等•电解质：检测血液中钠、钾、钙等电解质浓度生物化学检验技术的方法生物化学检验技术主要有以下几种方法：•毛细管电泳：用电场将荷电化合物分离，根据其不同的运动速度进行鉴定和定量•高效液相色谱：利用色谱柱对混合物分离，根据吸收峰的特点鉴定和定量物质•质谱：通过精确测量分子的质量和荷质比鉴定和定量物质•免疫学方法：利用抗体和抗原的特异性结合，鉴定和定量物质生物化学检验技术的注意事项生物化学检验技术需要严格掌握操作规程和标准化程序，同时还需要注意以下几点：•样本的采集、保存、运输应符合规范要求•仪器的日常维护和保养要得到重视，确保准确性和可重复性•熟悉并遵守相关法律法规，保护患者隐私和安全以上就是生物化学检验技术的相关内容。
作为教师，我们需要在教学过程中强调注意事项，帮助学生熟练掌握技术，提高检验结果的准确性和可靠性。
生物化学检验技术的发展与趋势随着生物技术的快速发展，生物化学检验技术也在不断创新和完善。
以下是几个趋势：•自动化：自动化分析系统可提高生物化学检验结果的效率和准确性•多参数检测：多参数生物化学分析可检测更多的生物标志物，提高检测精确度•个体化医疗：生物化学检验技术将更多应用于个体化的诊断和治疗•数据共享：生物化学检验技术的数据可共享，促进多学科协作生物化学检验技术的发展对社会的影响生物化学检验技术的发展对社会产生了积极的影响：•提高了医疗保障水平，帮助医生更准确地诊断和治疗疾病•对个体化医疗的发展提供了技术支持，为未来医疗事业的升级升级和发展奠定了基础•促进了生物技术的进一步发展，同时也推动了其他相关领域的研究和创新总之，生物化学检验技术在诊断、治疗和预防疾病方面的应用广泛，随着技术的不断创新和发展，其优势和作用将在医学领域中得到更广泛的应用和推广。
临床生物化学检验技术 pdf
临床生物化学检验技术
临床生物化学检验技术是医学检验技术专业的一门核心课程，它涉及到应用生物化学原理和技术来分析人体样本（如血液、尿液等），以诊断疾病、监测治疗效果、评估健康状况等。
这门课程的内容通常包括以下几个方面：
1.蛋白质和蛋白质组学：研究蛋白质的生理功能、结构性质以及在疾病状态下的变化，包括血浆蛋白如白蛋白、球蛋白等的检测。
2.酶学检测：酶在生物体内的代谢过程中扮演着关键角色，酶学检测可以用来诊断特定的疾病，如肝功能、心肌损伤等。
3.代谢物检测：分析血液或尿液中的代谢物，如葡萄糖、血脂、电解质等，以评估代谢异常。
4.酸碱平衡检测：通过测定血液pH来评估体内的酸碱平衡状态，这对诊断和监测某些疾病（如肾脏疾病、呼吸系统疾病）非常重要。
5.激素检测：检测血液中的激素水平，如甲状腺激素、胰岛素等，对于内分泌疾病的诊断和治疗至关重要。
6.血栓与止血检测：包括凝血因子活性、血小板功能等的检测，对于血栓性疾病和出血性疾病的诊断与治疗具有重要作用。
7.免疫学检测：利用免疫学技术检测血液中的抗体、抗原、细胞因子等，以诊断感染性疾病、自身免疫性疾病等。
8.遗传性疾病检测：通过分析DNA或RNA来诊断遗传性疾病，这在现代医学中越来越重要。
临床生物化学检验技术的目的是培养学生具有独立完成临床生
化检验项目的工作能力，包括理解检验的原理、操作技术、结果解释等。
此外，该课程还会涉及到实验室质量控制、临床应用评价等方面，以确保检验结果的准确性和临床有效性。
通过本课程的学习，学生将能够为未来的职业生涯做好准备，包括在医院、诊所、科研机构或体外诊断公司等领域的工作。
常用生物化学检验技术
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3、缓冲液
❖组成成分 pH
pH与pI比较，4.5-9.0,正极pH 负极
❖离子强度
离子强度越大，缓冲容量越大，pH越稳定，电 泳速度越慢，标本扩散，产热多，蒸发快； 0.05-0.1mol/L
常用生物化学检验技术
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4、支持物
❖吸附作用 ❖电渗作用
5、蒸发作用 6、样品
常用生物化学检验技术
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常用生物化学检验技术
23
原理
COOH H C NH3+ pH<pI
R OH- H+
COOH C NH3+ pH = pI
R
H+ OH-
COO-
H C NH2 pH>pI
R
常用生物化学检验技术
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人血清蛋白的等电点和电泳迁移率
蛋白质 等电点 电泳迁移率cm2.s-1.v-1
白蛋白 球蛋白 球蛋白 球蛋白 球蛋白
常用生物化学检验技术
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3、根据电泳媒介的不同分为 自由电泳 （溶液） 区带电泳 （支持介质）
4、根据电泳系统是否均一分为 连续电泳 不连续电泳
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影响电泳的因素
1、分子的形状和性质 2、电场强度
电场强度大，速度快，产热多，变性； 电场强度小，速度慢，产热少，区带模糊
常用生物化学检验技术
常用生物化学检验技术
※ 光谱分析技术 ※ 电化学技术 ※ 电泳技术 ※ 层析技术
※ 自动生化分析技术
常用生物化学检验技术
1
光谱分析
概念：利用物质具有吸收、发射或散 射光谱谱系的特点，对物质进行定性 或定量的分析方法
常用生物化学检验技术
临床生物化学检验-第5章 常用分析技术
(affinity chromatography)
19
离子交换层析 (ion exchange chromatography, IEC)：是依据各种离子或离子 化合物与固定相离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化的方法。
色谱技术 ，发现了液-液即分配色谱法
固定相-
流动相-
20世纪60年代高效液相色谱，high performance liquid chromatography即HPLC
16
1. 按流动相种类分类
气相层析
液相层析
超临界流体 层析 电层析
气体
液体
超临界流体 缓冲溶液、 电场
挥发性有机物
可以溶于水或 有机溶剂中的 各种物资
20
高效液相层析法 (high performance liquid chromatography，HPLC)： 是在经 典液相色谱和气相色谱的基础上发展起来的分析技术。 由于高效固定相填料颗粒小而 均匀（1.7~10μm） ，会引起高阻力（小颗粒具有高柱效），因此采用高压输液泵输送 流动相 ，可大大加快分析速度 ，故又称高压液相层析法。
临床应用：作为参考方法测定钙、镁定值或建立新常规方法作比较试验。 优点： 灵敏度高、选择性好、分析速度快。 缺点：需校准物、分析条件要求高、操作较复杂、测定每一种元素需特 定的空心阴极灯、有些反应的显色剂本身的颜色会影响测定的专一性。
8
1. 校准曲线法：以校准物浓度（系列浓度）为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线 ，在相同条件 下测定待测样品 ，然后在标准曲线上查找待测物质浓度。影响因素较多 ，每次需绘制新标准曲线。
临床生物化学检验常规项目分析质量指标以及临床化学常用分析技术
临床生物化学检验常规项目分析质量指标以及临床化学常用分析技术临床生物化学检验是一种常规医学检验方法，通过检测人体血液、尿液、体液等样本中的化学成分，评估人体的生理功能和病理变化，为临床医生提供确诊、治疗和监测疾病的重要依据。
在临床生物化学检验中，常见的项目包括血糖、血脂、肝肾功能等指标。
本文将对临床生物化学检验常规项目的分析质量指标以及临床化学常用的分析技术进行探讨。
一、临床生物化学检验常规项目分析质量指标临床生物化学检验常规项目分析质量指标主要包括准确性、精确性和灵敏度。
准确性是指检验结果与实际值之间的接近程度。
为了保证准确性，临床生物化学检验常规项目需要使用准确可靠的检验方法和仪器，保证样品采集和保存的标准化，以及质量控制的有效性。
精确性是指同一样本在不同条件下重复检验的结果的一致性。
为了保证精确性，临床生物化学检验常规项目需要使用稳定可靠的试剂和仪器设备，并进行严格的质量控制和质量评价。
此外，操作人员的培训和技术水平也对结果的精确性有重要影响。
灵敏度是指检验方法能够检测样本中低浓度分析物的能力。
临床生物化学检验常规项目中，一些指标如甲状腺相关激素、肿瘤标志物等需要具备较高的灵敏度，能够提供更加精准的诊断和治疗。
二、临床化学常用分析技术临床化学常用的分析技术包括光度法、比色法、电化学法、质谱法等。
光度法基于分析物在特定波长的光线下吸收光的原理。
通过光度计测量样品吸光度的变化，可以计算出样品中分析物的浓度。
光度法广泛应用于临床生物化学检验中的各种项目，如血糖、血脂等。
比色法基于分析物在染色试剂作用下产生显色反应的原理。
通过比较比色试剂与样品显色的程度，可以确定样品中分析物的浓度。
比色法常用于临床生物化学检验中的糖化血红蛋白、尿液蛋白等项目。
电化学法基于分析物在电极上发生氧化还原反应产生电流的原理。
根据电流的大小可以计算出样品中分析物的浓度。
电化学法常用于临床生物化学检验中的血液电解质、血气分析等项目。
生物化学检验常用技术
生物化学检验常用技术生物化学检验是医学领域中非常重要的一个环节，它通过对人体体液、组织和细胞中的化学成分进行分析和测定，为疾病的诊断、治疗和预防提供重要的依据。
在生物化学检验中，有许多常用的技术，下面我们就来一一介绍。
一、光谱分析技术光谱分析技术是利用物质对不同波长的光的吸收、发射或散射特性来进行分析的方法。
其中，最常见的是分光光度法。
分光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法。
它通过测量物质在特定波长下的吸光度，来计算物质的浓度。
这种方法操作简单、快速、灵敏度较高，广泛应用于测定蛋白质、核酸、糖类、酶等生物大分子的含量。
另外，原子吸收光谱法也是光谱分析技术中的一种重要方法。
它主要用于测定金属元素的含量，在生物化学检验中常用于检测血液、尿液等样本中的微量元素，如铁、锌、铜等。
二、电化学分析技术电化学分析技术是基于物质在溶液中的电化学性质而建立的分析方法。
其中，电位分析法是一种常见的电化学分析技术。
电位分析法通过测量电极电位来确定溶液中物质的浓度。
例如，在pH 测定中，使用玻璃电极和参比电极组成电池，根据测量的电位值计算溶液的 pH 值。
此外，电导分析法通过测量溶液的电导来确定物质的含量。
这种方法常用于水质分析和电解质浓度的测定。
三、色谱分析技术色谱分析技术是一种分离和分析混合物中各组分的有效方法。
常见的色谱技术包括气相色谱法和液相色谱法。
气相色谱法适用于分析挥发性和热稳定性较好的化合物。
在生物化学检验中，可用于检测血液中的药物浓度、脂肪酸组成等。
液相色谱法则适用于分析热不稳定、不易挥发的大分子化合物，如蛋白质、核酸等。
高效液相色谱法（HPLC）具有分离效率高、灵敏度高、分析速度快等优点，广泛应用于生物化学检验中的药物分析、激素测定等领域。
四、免疫分析技术免疫分析技术是利用抗原与抗体的特异性结合反应来进行检测的方法。
常见的免疫分析技术包括酶联免疫吸附测定（ELISA）、放射免疫分析（RIA）和化学发光免疫分析（CLIA）等。
常用生物化学检验技术
常用生物化学检验技术
目 录
• 生物化学检验技术概述 • 常用生物化学检验技术 • 生物化学检验技术的应用领域 • 生物化学检验技术的挑战与解决方案 • 生物化学检验技术的前景展望
01 生物化学检验技术概述
定义与特点
定义
生物化学检验技术是通过生物学 、化学等手段，对生物体或生物 样品进行检测和分析的技术。
详细描述
为了确保检测结果的准确性和可靠性，必须建立完善的标准化体系和质量控制体系。这包括制定统一 的检测标准和方法、建立完善的质控流程和质控标准、加强实验室管理等措施。同时，还需要加强国 际合作和交流，推动生物化学检验技术的标准化和质量控制。
05 生物化学检验技术的前景 展望
高通量自动化检测技术
签提供数据支持。
食品添加剂检测
02
通过检测食品中的添加剂种类和浓度，确保食品添加剂使用符
合国家规定。
食品中有害物质检测
03
利用生物化学检验技术检测食品中的有害物质，如农药残留、
重金属等，保障食品安全。
环境监测
水质检测
利用生物化学检验技术检 测水体中的有害物质，如 重金属、有机污染物等， 评估水质状况。
利用物质在紫外可见光激发下产生的 荧光特性，通过测量荧光信号，用于 检测物质的存在和含量。
气相色谱法
利用不同物质在色谱柱上的吸附或溶 解性能不同，通过测量各组分的保留 时间和峰高或峰面积，用于检测混合 物中各组分的存在和含量。
微生物学检验技术
01
02
03
细菌培养与鉴定
通过培养、分离、鉴定微 生物，用于检测感染性疾 病的病原体。
大气污染监测
通过检测大气中的有害气 体和颗粒物，了解大气污 染状况，为环境治理提供 依据。
临床生物化学检验常规项目分析质量指标以及临床化学常用分析技术
临床生物化学检验常规项目分析质量指标以及临床化学常用分析技术在临床医学领域中，生物化学检验是一项至关重要的工作，用于评估患者的身体健康状况及疾病诊断。
本文将着重介绍临床生物化学检验常规项目的质量指标，并分析临床化学中常用的分析技术。
一、血液项目分析质量指标临床生物化学检验中，血液项目是最为常见的一类检验项目。
其中包括了血糖、血脂、肝功能、肾功能等指标。
这些指标对于评估患者的身体健康状况及疾病诊断起着重要作用。
1. 血糖指标分析质量指标血糖是一个反映体内糖代谢状态的指标。
在临床生物化学检验中，对于血糖的分析质量指标主要包括准确性、稳定性和精确度。
准确性：血糖仪的准确性指其测量结果与真实值之间的偏差程度。
常用的评价指标为均方根误差（RMSE），越小表示仪器的准确性越高。
稳定性：血糖仪的稳定性指其测量结果在不同环境条件下的一致性。
常用的评价指标为变异系数（CV），低于10%表示测量结果稳定。
精确度：血糖仪的精确度指可重复性和再现性。
可重复性表示仪器在短时间内进行多次测量得到的结果的一致性，再现性表示在不同实验条件下得到相同结果的能力。
2. 血脂指标分析质量指标血脂是与心血管疾病密切相关的指标之一。
血脂指标包括总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇等。
对于血脂的分析质量指标主要包括灵敏度、特异性和准确度。
灵敏度：血脂检测方法的灵敏度指其能够检测到的最低浓度。
灵敏度越高，表示方法对低浓度样本的检测能力越强。
特异性：血脂检测方法的特异性指其与其他物质的交叉反应程度。
特异性越高，表示方法对血脂的特异性识别能力越强。
准确度：血脂检测方法的准确度指其测量结果与真实值之间的偏差程度。
常用的评价指标为偏差百分比（Bias %），越小表示仪器的准确性越高。
二、临床化学常用分析技术临床化学在临床生物化学检验中起着重要的作用。
以下将介绍几种常用的临床化学分析技术。
1. 光度法光度法是基于物质对特定波长光的吸收或透过能力来测定物质浓度的一种分析技术。
常用生物化学检验技术
I0
It
用数学式表示为：
It 透光度T＝ I0
透光度随溶液厚度增加而减少，其关系 是透光度的负对数（－lgT，吸光度A）与溶 液厚度成正比，即
It I0 A lgT lg lg K L I0 It
2. Beer定律
当一束强度为Io的单色
光透过某种吸光溶液后，若液层厚度不变，
（二）标准曲线法
配制一系列浓度不同的标准液，按一 定操作方法显色后，用选定的波长分别测 定它们的吸光度，然后以吸光度为纵坐标， 标准液浓度为横坐标，在坐标纸上标出各 坐标点，通过连接各点，使其成一直线， 即A-C曲线。
A
0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1
·
·
· · ·
2 4 6 8 10 12
常用生物化学检 验技术
第一节 光谱分析技术 第二节 电化学分析
第三节 电泳技术
第四节 层析技术
第五节 自动生化分析
技术
光谱分析技术是根据物质吸收或发 射辐射能而建立起来的一类分析方法， 因不同分子的原子和原子团，其发射光 谱和吸收光谱不同，而相同的物质在一 定条件下，其发射光谱和吸收光谱的强 度与该物质的含量成正比关系。因此可 对物质进行定性和定量分析，此类技术 称为光谱分析技术。
C
注意事项
1. 测定条件发生变化时（如更换标准品 和试剂等），应重新绘制。 2. 标准品应有高的纯度，标准液的配制 应准确。
3. 当待测液吸光度超过线性范围时，应 将标本稀释后再测定。 4. 标本测定的条件应和标准曲线制作时 的条件完全一致。
五、紫外分光光度法
用波长 200 ～ 400nm 的紫外光谱测定无 色物质的方法称为紫外分光光度法。芳香族 类及含有共轭双键的烯烃、炔烃等不饱和烃 类，在200～400nm波长范围具备光吸收特性， 故不需经显色反应就能直接利用紫外分光光 度法测定，其选择性和灵敏度均高于比色分 析法。
临床生物化学检验常用技术
摩尔吸光系数ε：当溶液层厚度单位为cm，浓度单位为
mol/L时，K即成为摩尔吸精光品医系学ppt数
21
（二）分光光度计的基本结构
光源
单色器
样品室
检测器
显示
1. 光源
在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具 有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。
可见光区：钨灯作 为光源，其辐射波长范 围在320～2500 nm。
（2）定量分析
精品医学ppt
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（一）光吸收的基本定律
1、定律：
单色光通过吸光溶液后，吸光度与溶液的浓 度和厚度之间呈正比关系。
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（1）Lambert定律： 说明吸收与溶液液层厚度间的关系
入射光
透过光
入射光
透过光
I0
L1
I1
I0
L2
I2
L2 ＞ L1 ，I1 ＞ I2
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一、光谱分析技术的基本原理：
利用各种化学物质都具有发射、吸收或散射光谱谱系的特征， 以此来确定物质性质、结构或含量。
1、 光谱分析技术分类：
发射光谱分析技术：火焰光度法、原子发射光谱 法和荧光光谱法
吸收光谱分析技术：紫外、可见光分光光度法， 原子吸收分光光度法和红外光谱法
散射光谱分析技术：比浊法
属光谱分析法。
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可见光：
400~700nm, 有色物质溶液
紫外光：
200~400nm, 无色物质
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2、特点：
仪器设备和操作简单 费用少，分析速度快 灵敏度高(10-4~10-7g/mL) 选择性好 精确度和准确度高
临床生物化学检验常用技术
3.将装有溶液的比色皿放置比色架中。 4.旋动波长手轮，把测试所需的波长调节 至刻度线处。
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5.盖上样品室盖，将参比溶液比色皿置 于光路，调节透过率“100%T”旋钮，使数 字显示为“100.0T” （如果显示不到100%T，则可适当增加灵 敏度的档数，同时应重复“2”，调整仪器 的“00.0”）。
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选择吸收 ----组成物质的分子仅吸收与其内能变化(基
态与激发态能量差)相对应的波长或频率的 光，所得到的光谱称为吸收光谱。
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能量释放 ----处于较高能态的分子(激发态分子)不稳定，
当其返回基态时，以热或发射光谱的形式将能 量释放出来。所发射出的相应光谱，称分子发 射光谱。
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激发态 发 射 光 谱
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电池电动势和电极电势
电池电动势：将电位差计接在电池的两个电极之间而直
接测得的电势值习惯上称之为电池的电动势
电极电势：当采用相对电势法时，系用一定的参比电极
与研究电极组成电池， 这一电池的电动势称为相对于给定参比 电极而确定的研究电极电势。(金属和溶液相接触的内电位差即 为金属电极和溶液间的电极电势)
散射光谱分析技术：比浊法
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2、光的基本性质---高速传播的电磁波
微粒性(E=hv)
波粒二象性
波动性(=c/v)
E=hv =hc/
----光的能量与光的波长成反比，与
光的频率成正比
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3、物质对光吸收的基本原理：
能量转移
---- 当光 辐射通 过某种 物质时，组成该物质 的分子（原子）与光 子发生“碰撞”，光 子的能量因此转移至 分子（原子）上，使 它们由基态(低能态)跃 迁到激发态(高能态)， 这种跃迁称为激发。
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四、干片式分析仪 干片式分析仪的核心技术是干化学分析，相 对于需要液体试剂 “湿化学”分析而言，它抛
弃了液体试剂在试管中反应的传统检测过程。
干化学分析是将各种有关试剂分层铺在一透 明薄膜上，一张试纸一个项目，特别适用于急诊 和门诊，无污染。
样品扩散层 反射层 辅助试剂层 试剂层 透明支持层
入射光
0. 1 4 5
三、分立式自动生化分析仪
分立式自动分析仪是目前应用最多的一 类自动生化分析仪，其特点是模仿手工操作 的方式编程，用加样探针将标本加入各自的 反应杯中，试剂探针按一定的时间自动定量 加入试剂，经搅拌器混合后，在一定的条件 下反应。反应杯同时作为比色杯进行比色测 定，比色杯依次通过光路，在不同时间内记 录吸光度变化而进行测定。样品和试剂在各 自的反应杯中起反应。
比例泵是这类分析仪的特殊结构，泵 的作用好比心脏的收缩和舒张，通过它吸 入样品，试剂和空气，推动液流向前流动， 混合管：为一螺旋玻管，让比重不同液体 充分混合。透析器：去蛋白。
透析器的结构示意图
二、离心式自动生化分析仪
离心式分析仪是将样品和试剂放在特制
的圆盘内，圆盘放在离心机上，当离心机开
动后，圆盘内的样品和试剂受离心力的作用，
相互混合发生反应，反应液最后流入圆盘外 圈的比色槽内，通过比色计进行检测。
离心式自动生化分析仪结构示意图
离心式自动生化分析仪的特点是： (1) 在整个分析过程中，各样品与试剂的混合、 反应和检测等每一步骤几乎都是同时完成的， 不同于连续流动式自动生化分析仪和分立式 自动生化分析仪的“顺序分析”，而是基于 “同步分析”的原理； (2) 标本和试剂用量 更少；（3）分析快速；（4）每次只能完成 相同项目的测定。
检测器
第二节 自动生化分析方法
一、分析方法的种类 （一）终点法 根据反应达到平衡时反应产物的吸收光 谱特征及其吸光度大小，对物质进行定量分 析的方法。此时反应的底物与产物处于动态 平衡，不再有量的改变，故又称为平衡法。 1. 一点终点法 是指在反应达到终点后 选择一个时间点测定吸光度值，从而求得待 测物浓度或活性的方法。
（二）速率法 又称连续监测法，在单位时间内连续读取 吸光度值，并根据吸光度值的变化（ΔA/min） 自动选择零级反应期计算结果的方法。 二、自动生化分析仪的校准方法 自动生化分析仪的校准也称定标，是为计 算结果时提供比对依据。 校准的方法包括一点校准（水定标）、两 点校准（水和已知浓度的校准品）和多点校准 （多个呈浓度梯度的校准品）。
自动生化分析仪能自动完成样本的加载、 试剂分配、搅拌、清洗等机械动作，执行这些 动作的程序已由厂家储存于计算机中用户无权 修改。下面讨论的参数设置是指检测项目的试 验参数。如波长、反应温度、分析方法、样本 量与试剂量等。这些参数设置的正确与否可直 接影响实验结果的准确性。有的仪器要求使用 配套试剂，相应参数已储存于计算机中，用户 不能更改，称为“封闭通道”，用户能根据需 要自由更改的称为“开放通道”。
分立式自动生化分析仪基本结构包括操 作和测定两大部分。操作部分主要由计算机 及操作软件组成。测定部分包括： 1.样品加载单元 由样品盘和加样探针组 成。 2.试剂加载单元 由试剂仓和试剂探针组 成。 3.反应单元 由反应杯、搅拌装置和恒温 装置组成。反应杯同时可作为比色杯进行比 色。
4. 光学检测单元 主要由光源（卤钨灯或 氙灯）、分光装置（干涉滤光片或光栅）和信 号检测器（光电管或光电倍增管）3部分组成。 5. 清洗单元 主要完成对加样针、试剂针、 搅拌棒（动作完成后停留在指定位置立即清洗） 和反应杯（由仪器的清洗站完成）的清洗。 6. 计算机单元 是仪器的控制中心、信号 接收中心和数据处理中心。
自动生化分析技术是将生化分析过程中 的取样、加试剂、去干扰、混合、保温、检 测、结果计算、数据处理和打印报告，以及 实验后的清洗等步骤完全由模仿并代替手工 操作的仪器来完成。这不仅提高了工作效率， 而且减少了主观误差，稳定了检验质量。完 成这一分析过程的仪器称为自动生化分析仪。 这类仪器一般都具有灵敏、准确、快速、节 约和标准化等优点。
管道式自动生化分析仪可分为空气分段 系统式和非分段系统式。空气分段系统式自 动生化分析仪是在吸入管道的每一个标本、 试剂以及混合后的反应液之间，均由一小段 空气间隔开。非分段系统式自动生化分析仪 是靠试剂空白或缓冲液间隔每个标本反应液， 这样，在管道中连续流动的液体不被分段。
管容 易受试剂颜色和标本自身情况干扰（如黄疸、 溶血和脂血等）。 2. 两点终点法 在加入触发实质性反应 发生的试剂前，读取一次吸光度值（A1）， 加入触发实质性反应发生的试剂后，达到平 衡再读取第二次吸光度值（A2），根据两次 吸光度值之差计算结果。 能有效地消除试剂颜色和标本颜色及内 源性干扰物带来的影响。
第六章 自动生化分析 技术
第一节 自动生化分析 的仪类型 第二节 自动生化分析 方法 第三节 自动生化分析 仪的参数设置 第四节 自动生化分析 仪的性能评价
掌握各类型自动生化分析仪的主要特点及 分立式自动生化分析仪的基本结构，自动生化 分析仪分析方法的类型及特点，双波长法和双 试剂法的优点。 熟悉自动生化分析仪的参数设置及其意义， 自动生化分析仪的性能评价。 了解自动生化分析仪的质量保证体系。
第一节 自动分析仪的类型
自动生化分析仪的分类方法有多种。常见
的有：①按反应装置的结构可分为管道式、离
心式、分立式和干片式四类。②按自动化程度
可分为全自动和半自动型。③按同时可测定项
目可分为单通道和多通道两类。④按仪器的复
杂程度及功能可分为小型、中型和大型三类。
一、管道式自动生化分析仪 管道式分析仪主要由样品盘、比例泵、 混合器、透析器、恒温器和检查记录仪等部 件组成。第一代（1957年问世）。 管道式分析仪的特点是测定项目相同的 各待测样品与试剂混合后的化学反应在同一 管道流动的过程中完成。因此，也称为连续 流动式分析仪。