芦丁的提取分离和鉴别

芦丁的提取分离和鉴别

槐花米系豆科槐属植物槐树（Sophora japonica L）的花蕾。味苦性凉，入肝、大肠经。具有清热凉血、止血的功效，常用于治疗便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血和赤血下痢等，常炒炭应用。槐花米主要化学成分为芦丁（芸香甙），具有维生素P样作用，可降低毛细血管脆性、调解其渗透性。临床用于防治高血压脑病、视网膜出血和慢性气管炎等。芦丁羟基化衍生物曲克芦丁能抑制血小板聚集，防止血栓形成的作用，同时能对抗内源性血管损伤，增加毛细血管抵抗力，降低其脆性，防止水肿，对急性缺血性脑损伤有显著保护作用，临床用作抗血小板药物。

一、实验目的：

1．掌握酸碱法提取黄酮苷类的原理及方法；

2．掌握黄酮类成分的主要性质及鉴别方法。

二、仪器与试药

（一）仪器

SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵 HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器

圆底烧瓶（250mL） ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）（二）试药

槐花米粗粉硼砂氧化钙乙醇盐酸浓硫酸硅胶 CMC-Na 镁粉

α-萘酚甲醇乙酸乙酯脱脂棉三氯化铝试液芦丁和槲皮素对照品

甲酸丙酮

三、主要成分的结构与性质：

*

皂苷（Saponin ），粗品为白色粉末，mp 210～220℃，易溶于吡啶，能溶于200倍的甲醇中，

酸水解得上述两种苷元及糖。糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。

R=H 槲皮素

R=–glu –rha 芦丁

白桦脂醇 槐花二醇

四、实验原理：

1．芦丁分子结构中含有酚羟基，具有弱酸性，能与碱反应生成盐而溶于水，此盐加酸酸化，又析出芦丁，利用此性质进行提取。并可利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差悬殊，用水重结晶。

2．芦丁在酸性溶液中可被水解，生成槲皮素和糖。 五、实验内容

O

O

RO

OH OH

O

H O H O

H CH 2OH

O

H OH

（一）芦丁的提取分离和纯化

60-70℃用浓盐酸调pH3-4[注3]，

滤液（弃去）1:200的溶解度加蒸

滤液

冷却、静置、析晶，过滤 芦丁精品

（60-70℃干燥，称重）

注1：硼砂因能与芦丁结合，起保护邻二酚羟基的作用，使其不与Ca 2+

络合，生成钙盐沉淀，使提取收率下降。

注2：加石灰乳既能达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐花米中的鞣质、粘液质和酸性树脂（形成钙盐沉淀）等杂质，但pH 不能过高和长时间煮沸，因为会导致芦丁的降解。

注3：pH 过低会使芦丁形成锌盐而降低收率。

槐花米粗粉（20g ）

，硼砂1g[注1]在加热至沸腾时，投入槐花米，8.5~9[注2]保持酸沉淀

在60~70℃下用浓盐酸调pH 至4[注3]。静置6小时以上析出沉淀。抽滤，用蒸馏水洗沉淀1~2次至中性。

沉淀（芦丁粗品）

粗称重后按芦丁在热水中1∶200的溶解度加蒸馏水进行重结晶。将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15分钟，趁热过滤。

滤液

充分静置，过滤，60~70℃干燥，称重。

（二）芦丁的水解

80mL，水浴加热1小时，放冷后抽滤

（保留作糖份的鉴定）冷水洗涤至中性，抽干，干燥

槲皮素粗品

加95%乙醇重结晶

槲皮素精品

（三）鉴别实验

1．芦丁的化学检识

（1）盐酸-镁粉反应：取芦丁少许，乙醇溶解，加镁粉少量，加入浓盐酸1mL，产生红色反应。

（2）M olish反应：取芦丁和槲皮素少许，放入两支试管中，加入α-萘酚试剂少许，振摇，沿试管壁加浓硫酸0.5mL，观察两层溶液界面的颜色变化。

2．糖的鉴别——纸层析法

取水解母液20mL，于水浴上加热，同时于搅拌下加BaCO3细粉中和至中性，滤除BaSO4后，滤液在水浴上浓缩至2-3mL，得样品液，以葡萄糖和鼠李糖标准品作对照。

展开剂：正丁醇-醋酸-水（BAW）（4：1：5）上层，上行展开。

显色剂：苯胺-邻苯二甲酸试液，喷后105℃烘10分钟，显棕红色斑点。

3．芦丁和槲皮素的鉴定——薄层层析法

吸附剂：青岛硅胶G以0.4%CMC-Na水溶液制板，105℃活化40分钟。

展开剂：（1）芦丁：乙酸乙酯–甲酸–水（8:1:1）

（2）槲皮素：乙酸乙酯–丙酮–水（25:5:1）

显色剂：喷三氯化铝试液显色，分别置254nm和365nm紫外灯下检视。

六、实验结果

1．详细记录定性反应结果。

2．绘制色谱图，并计算R f值。

3．总结实验过程中遇到的问题和解决方法。

七、思考题

1．黄酮类化合物还有哪些提取方法？芸香苷的提取还可用什么方法？

2．酸水解常用什么酸？为什么用硫酸比用盐酸水解后处理更方便？

3．本实验中各种色谱的原理是什么？解释化合物结构与R f值的关系。4．黄酮类化合物定性反应机理。