大豆转基因检测概述
PCR扩增检测转基因大豆、玉米
【实验步骤】 基因组DNA浓度和纯度的鉴定
取5μL样品溶于95μL三重蒸馏水中，用 Biophotometer分 析DNA的浓度，通过它对提取大豆DNA测OD值。并记 录数据。由OD260nm/OD280nm判定基因组DNA的浓度， 其比值在1.7~2.0之间较好，符合PCR检测要求。
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)是 一种选择性体外扩增DNA的方法，其基本原理类 似 于 DNA 的 天 然 复 制 过 程 。 它 包 括 : 变 性 (Denature) 、 退火(Anneal)和延伸(Extension)三个基
外源基因( EPSPS)特异性扩增 12 3 4567M 12
外源终止子(NOS) 特异性扩增
外源启动子(CaMV35S)特 异性扩增
1 未加模板对照 2 转基因大豆、玉米 3~7 非转基因大豆、玉米
PCR假阳性结果 1． 引物设计不当，应调换引物 2． 循环参数不合适，导致非特异性扩增 3． 靶序列的交叉污染
大豆凝集素(Lectin)基因、玉米特异性内源基
因IVR为内参 ？
西医学是最近三四百年来建立在解 剖学、 生物学 及现代 科学技 术基础 上、发 展起来 的一门 以“解 剖人、 肉体人 ”为概 念的、 新兴的 现代医 学科学 理论体 系。主 要采用 科学实 验方法 ，从宏 观到微 观，直 至目前 的分子 基因层 次水平 ，发展 极为迅 速，超 过其它 任何一 门医学 科学， 成为世 界医学 史上的 主流。 医学、比较医学、后现代医学、行为 医学等 所谓“ 医学” ，都称 不上一 门独立 的医学 科学， 关于这 一点在 灵魂医 学有关 章节中 将有相 关点评 。
【实验步骤】
大豆、玉米DNA 提取--改良的CTAB法
食品中转基因成分检测(大豆)
食品中转基因成分检测第12章ELISA方法定量检测抗农达® (RoundupReady®) 转基因大豆F．Eyquem食品中转基因成分检测 第12章2ELISA 方法定量检测抗农达® (Roundup Ready®) 转基因大豆 目 录第12章ELISA 方法定量检测抗农达® (Roundup Ready®) 转基因大豆引言 3酶联免疫吸附分析 (ELISA) 技术 7 实验部分 10参考文献 20食品中转基因成分检测 第12章3ELISA 方法定量检测抗农达® (Roundup Ready®) 转基因大豆 引言本章介绍一种用免疫学技术检测转基因植物的方法，这种方法是基于对转化事件中转入基因产生的新蛋白的检测。
但是，值得注意的是，基因修饰并不总是直接特异地对应于产生新蛋白，蛋白表达量水平也并不总是足够用于检测的目的。
另外，某些蛋白可能仅在植物的特定部位表达 (如：组织特异性启动子)，或者在不同部位或不同生理时期其表达量水平也不一样。
有报道称植物中转基因产物表达量水平占总可溶性蛋白的0~2%，甚至在一些强启动子植物中也是如此 (Longstaff ，1995)。
然而，在许多情况下，文献资料报道的转入基因蛋白表达量水平 (如：批准的GM 作物) 一般低于2%的表达上限 (henner ，1997)。
免疫学分析是一种用抗体作为检测试剂的分析测定系统。
抗体是一种从动物血清中分离得到的特异性蛋白，它可特异性地结合于诱导它们产物的底物，即抗原。
抗体的制备是通过将待检测的底物 (如：CP4 EPSPS ，是一种产生农达除草剂抗性的蛋白) 注射到动物如兔子或者老鼠体内，然后动物体内的细胞会将此底物识别为外来物质并产生抗体与之对抗。
抗体经过纯化，并用可检测的标记与之连接，然后可作为检测目标底物的试剂。
免疫学检测方法发展和应用的先决条件是：得到可直接和待检测新蛋白作用的高特异性抗体。
大豆转基因检测标准
大豆转基因检测标准1. 背景介绍大豆是世界上最重要的农作物之一，它不仅是一种重要的食物来源，还被广泛用于饲料和工业原料。
然而，随着转基因技术的发展，转基因大豆的种植和使用逐渐增多。
转基因大豆不仅在农业上具有重要意义，还引发了广泛的争议。
因此，制定一套严格的大豆转基因检测标准对于保障食品安全和消费者权益至关重要。
2. 转基因技术概述转基因技术是指通过人工手段将外源基因导入到目标生物体中，并使之在目标生物体中表达。
在大豆中引入外源基因可以使其具有抗虫、抗草甘膦等特性。
然而，转基因技术也引发了人们对食品安全和环境影响等问题的担忧。
3. 国际转基因检测标准为了保证食品安全和国际贸易畅通，国际上制定了一系列关于转基因检测的标准。
其中最为知名且被广泛采用的是国际贸易法组织（Codex Alimentarius Commission）制定的转基因食品检测指南。
该指南包括了转基因检测的样品准备、检测方法、结果解释等方面的要求，为各国制定转基因食品标签要求提供了依据。
4. 国内大豆转基因检测标准现状在国内，大豆转基因检测标准的制定和执行也取得了一定进展。
2002年，中国农业部发布了《农业转基因生物安全管理办法》，其中包括了对农产品生产和加工中使用的转基因生物的监管要求。
此外，中国质量认证中心还发布了《农产品质量安全监督管理规范》，其中涉及到对大豆及其加工产品中转基因成分的监管。
5. 大豆转基因检测方法为了准确、可靠地检测大豆中是否存在转基因成分，科研人员开发出多种不同的检测方法。
目前常用的方法包括PCR法、ELISA法和质谱法等。
PCR法是一种通过扩增目标DNA片段来判断是否存在特定外源DNA 序列的方法；ELISA法是一种通过特异性抗体与外源蛋白质结合来判断是否存在特定外源蛋白质的方法；质谱法则是通过检测样品中特定外源蛋白质的氨基酸序列来判断是否存在转基因成分。
6. 大豆转基因检测标准的制定制定一套严格的大豆转基因检测标准对于确保食品安全和保护消费者权益至关重要。
转基因大豆海关质检报告
转基因大豆海关质检报告
海关实验室进口检测：进境转基因大豆经海关关员现场查验完成后，取样送检海关实验室，依据标准进一步进行转基因品系检测、有害生物检疫及品质检验等项目。
1．转基因品系检测：海关实验室根据送检联系单要求，一般重点对安全证书以外(即国家未批准的转基因品系)实施监控、检测，确保进境的转基因大豆品系已通过国家批准。
2．有害生物检疫鉴定海关实验室对转基因大豆中携带的有害生物进行检疫鉴定，主要包括引起植物病害的真菌、细菌、病毒以及携带的昆虫、杂草种子等，并重点对进境植物检疫性有害生物名录中检疫性有害生物进行检疫鉴定，拒有害生物于国门之外，维护国门生物安全。
3．品质检验主要包括转基因大豆水分、蛋白质、脂肪以及杂质、破碎粒，热损伤粒、损伤粒等不完善粒的检验。
实验三 大豆中转基因成分定性PCR检测
大豆中转基因成分定性PCR 检测一、 实验目的 (1)DNA 的原理和操作技术。
(2)DNA 的纯度、含量与分子大小。
(3)学习PCR 的基本原理和操作方法。
(4)掌握高速冷冻离心机、微量移液枪、水平电泳仪、PCR 仪等仪器设备的使用。
二、 实验原理由于现有的商品化转基因产品中绝大多数含35S 启动子和NOS 终止子。
故转基因食品的检测一般基于聚合酶链式反应(PCR)35S 启动子和NOS 终止子进行筛选。
聚合酶链反应(PCR)是近年来常用的一种快速、灵敏的检测转基因产品的方法,但要求待分析的基因组DNA 样品尽可能纯化。
PCR 技术的基本原理类似于DNA物。
PCR 由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。
三、 PCR 引物设计表1 引物序列及扩增产物长度四、 转基因大豆抗草甘膦转基因大豆品种京引D-1 、京引D-2 、京引D-3 、京引D-4获市面上购买的转基因大豆，万能粉碎机粉碎。
五、 DNA 的提取 1、称取约0.1g 2ml 离心管中；2、加入600μl CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)缓冲液震荡均匀，65℃水浴保温30min；3、加入500μl 酚：三氯甲烷：异戊醇(25:24:1)，振荡均匀，12000r/min离心15min；4、吸取上清液，放入另一新管中加入500ul的异丙醇，12000r/min离心10min。
5、弃去上清液，加入70%乙醇溶液洗涤，12000r/min离心1min。
6、弃去上清液，干燥，用50μl TE缓冲溶液溶解沉淀。
7、加入5μl RNA酶溶液，37℃水浴保温30min。
8、加入400μl的CTAB缓冲溶液，振荡均匀。
9、加入250μl的三氯甲烷：异戊醇(1:1)，振荡均匀，12000r/min离心15min。
10、吸取上清液，放入另一个新管中，加入200μl的异丙醇，12000r/min离心10min。
11、弃去上清液，干燥，用50μl TE缓冲液溶解沉淀。
转基因大豆检测方法及标准概述
转 基 因 大 豆 是 商 品 化 最 早、 推 广 应用速度最快、种植面积最广的转基 因粮食作物。由于转基因大豆产品可 能存在潜在的环境污染、食用安全及 生态风险，对人类健康和自然环境带 来不利影响 [1]，因此需要加强对转基 因大豆产品的有效监督、监测和管理。
1 转基因大豆检测技术研究进展
农业农村部公告第 111 号 -9-2018
SN/T 3767.16-2014
SN/T 3767.17-2014
SN/T 3767.18-2014
SN/T 3767.19-2014
3 讨论与建议
目 前， 我 国 转 基 因 大 豆 的 检 测 方 法主要以 PCR 方法为主。PCR 实验成 败的关键在于模板 DNA 的提取质量， 对于不同加工过程的产品，应选择不 同 的 DNA 提 取 方 法， 同 时 采 用 紫 外 分光光度计给出 DNA 的浓度及 A260 nm/A280 nm 的比值，以判断其是否 适合进行 PCR 检测。实验中还应该注 意污染问题，建议实验过程中注意添 加阴性和空白对照。实验室的布局以
及检测工作应严格遵循国家标准中转
基因通用标准的规定。
参考文献 [1] 王南 , 李海燕 . 转基因大豆概况
及其安全性 [J]. 吉林农业 ,2016(19):118. [2] 王颢潜 , 陈锐 , 李夏莹 , 等 . 转基
因产品成分检测技术研究进展 [J]. 生物 技术通报 ,2018,34(3):31-38.
农业部 1485 号公告 -8-2010
GB/T 19495.4-2018
农业部 1782 号公告 -1-2012
GB/T 19495.5-2018
农业部 1782 号公告 -4-2012
转基因大豆检测实验设计
转基因大豆的检测实验设计生物技术安全评估 092012年5月目录前言........................................................................3. 实验一大豆样品的准备 (4)实验二大豆DNA的提取和纯化 (4)实验三靶标基因的扩增 (6)实验四反应产品检测 (10)实验五结果分析 (12)参考文献 (12)前言随着转基因工程技术的迅速发展与在生物改良及遗传育种中的大规模应用，转基因生物（Genetically Modified Organism）及其产品的种类越来越多，含有的外源基因类型也越来越多。
抗草甘膦（glyphosate）大豆（商品名，roundup ready soybean）是在传统大豆株Variety A5403中转入外源基因CAMV-35S启动子、抗草甘膦基因CP4-EPSPS和NOS终止子而得到。
它是目前使用最广的转基因作物之一，每年至少有800万吨转基因大豆进入我国市场。
因此，研究抗草甘膦大豆的快速检测方法具有重要意义。
基于核酸的检测技术主要有PCR 方法和基于PCR 原理的其他检测方法如多重PCR、巢式PCR 等等。
普通PCR 方法已经成为转基因检测中常用的方法，通常是作为定性检测方法，早在2003 年就成为出入境检验检疫系统的行业标准。
这些标准涉及的转基因作物有大豆（SN/T 1195-2003）、玉米(SN/T 1196-2003)、棉花(SN/T 1199-2003)、油菜籽(SN/T 1197-2003)、烟草(SN/T 1200 -2003) 和马铃薯(SN/T 1198 -2003)。
目前广泛应用于进出口商品的转基因成分检测。
随后在2004 年又制定了转基因定性检测的国标(GB/T 19495.4-2004)，该国标中用的方法还是普通PCR。
因此，普通PCR 方法的研究主要在于新的转基因作物的鉴定研究。
如何检测转基因大豆
PCR检测转基因大豆：[目的]定性检测转基因大豆。
[方法]以非转基因大豆和CP4-EPSPS转基因大豆为材料,以大豆内源基因Lectin和外源基因5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因(CP4-EPSPS)为检测的目的片段,建立PCR反应体系。
采用改进CTAB法提取大豆基因组DNA,并对所提DNA进行PCR扩增和电泳检测,确定转基因大豆的PCR检测限。
实时荧光定量PCR技术检测转基因大豆方法的建立：采用实时荧光定量PCR技术,通过使用特异的引物和探针,对大豆中的内源基因Lectin和转基因大豆中的外源基因EPSPS进行了定量检测,建立了Monsanto公司生产的商业化转基因大豆Roundup Ready○R的定量PCR检测方法。
该方法的检测灵敏度<001%,是国际上设定的转基因最低限量的100倍用巢式和半巢式PCR检测转基因大豆Roundup Ready及其深加工食品：用从转基因大豆(Glycinemax )颗粒中提取的DNA作为模板,经过稀释,形成不同浓度梯度的DNA溶液,然后用巢式和半巢式PCR进行扩增反应。
结果表明,巢式和半巢式PCR均可以扩增DNA浓度为10-14g/μL的溶液。
用巢式和半巢式PCR对市场的食品原料和深加工食品进行检测,可以从大豆油、酱油、面酱、大豆磷脂、豆腐、豆浆等食品原料和深加工食品的17个品牌的食品中检测出大豆内标基因(housekeepinggene)。
ELISA方法定量检测转基因大豆及其产品的研究：以美国、阿根廷、巴西转基因大豆等为材料,建立了ELISA法定量检测抗草甘膦转基因大豆CP4 EP- SPS蛋白的方法,成功检测出美国转基因大豆含量为3.768%、阿根廷转基因大豆含量为2.820%、巴西转基因大含量为1.920%,转基因豆粉、转基因豆粕和中国大豆未检测到CP4 EPSPS蛋白。
此方法具有简便、快速、稳定等优点,其检测灵敏度可达到0.0075%,并且稳定性良好,为抗草甘膦转基因大豆中CP4EPSPS蛋白的定量检测提供了有效的手段。
大豆转基因检测
讨论：
本次实验基本达成实验目的，有些地方需要注意。 （1）提取DNA的时候要仔细，DNA的质量高低影响后续实验。
比如蛋白质等物质需要除尽。 （2）使用RNArase需要注意，不然容易导致实验失败。 （3）在配制PCR体系的时候，发现配制母液再分装到各个管
时，导致最后一管的体积不够，导致之后影响PCR。 （4）跑电泳前 使用氯仿异戊醇擦拭电泳槽发现结果较好。 （5）本实验使用EB染色，但个人认为可以尝试核酸染料，感
觉本次实验染色不如以前使用核酸染料效果佳。
谢谢
L
C
MM
L
C
图二
第二次：
图三
实验结果分析
❖ 如图一：（1）提取出的大豆基因组成色较好。电泳条带
清晰。但颜色较淡，可能是点样的体积过少。
（2）跑电泳前使用氯仿/异戊醇擦拭电泳槽面检 测DNA的结果较好
图二：此为第一次跑PCR的电泳图。
图中有明亮且清晰的条带，但Maker跑的质量不是很好。 经分析可能是凝胶的质量不够好本实验采用定性pcr方法检测大豆是否为转基 因。
实验结果
1.大豆基因组提取质量检测 1.1琼脂糖电泳：
图一 吸光值检测：DNA浓度=OD260/OD280=1.85 在1.7-2.0之间，符合PCR的标准。
❖ PCR结果：
由于第一次结果不是很好，本实验经过两次pcr结果。 第一次：
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1．水稻：取 10 粒水稻种子，充分压碎，转移到做好标记的提取 管中（注意：充分压碎能够提高测试准确度），加400µl 缓冲液 ；（浓度比例按照 10 粒种子加 400µl 缓冲液进行）,充分溶解 。 全称：豆瓣网 2．玉米：取 2 粒玉米种子，充分压碎，转移到做好标记的提取 简称：豆瓣 管中（注意：充分压碎能够提高测试准确度），加800µl 缓冲液 ；（浓度比例按照 2 粒种子加 800µl 缓冲液进行），充分溶解 。 3．盖好提取管的盖子，用力上下振荡提取管 20~30 秒，确保样 品与缓冲液充分混匀。静臵等待固体物质沉淀在管底。 4．请注意不要交叉污染，每个样品采用单独的提取管。
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转基因大豆食用安全性探究及检测
摘要由于基因工程技术的迅速发展，于是食品工业中产生了转基因食品，但是转基因食品的食用安全性一直受到人们的质疑。
本文对转基因大豆进行了概述，并介绍了转基因大豆在食用中可能产生的安全性问题以及一些与转基因大豆安全性相关的实验探究，然后总结了转基因大豆的一些检测技术。
最后对转基因大豆食用安全性的评价方法作了展望。
关键词：转基因大豆安全性基因AbstractAs the rapidly development of genetic engineering technology technology，it is applied to the food industry to produce a genetically modified food but the genetically modified food safety has been questioned．This paper describes the safety problems in the consumption of transgenic soybean and some security exploration experiments about transgenic soybeans，and summarizes the safety evaluation of these issues and testing methods．Keywords:transgenic soybean; security; gene目录1 转基因大豆概述 (1)2 转基因大豆的安全性 (1)2.1 外源基因毒性 (1)2.2 抗药性 (1)2.3 过敏性 (2)2.4 产生有毒物质 (2)2.5 转基因大豆营养组成及生物利用率的变化 (2)2.6 抗营养因子的变化 (2)3 转基因大豆食用安全性的实验探究 (2)3.1 转基因与非转基因大豆营养及次生物质的比较 (2)3.2 转基因大豆对雄性鼠生殖系统的安全性评估 (2)3.3 转基因大豆膳食纤维食用安全性研究 (3)3.4 摄食转基因大豆罗非鱼各组织中转基因成份的检测研究 (3)4 转基因大豆检测技术 (3)4.1 蛋白质检测 (4)4.2 核酸检测 (4)5 展望 (5)参考文献 (6)转基因大豆食用安全性探究及检测技术转基因技术是指将外源基因通过生物、物理或化学手段导人其他生物基因组，以获得外源基因稳定遗传和表达的遗传改良体的技术。
大豆遗传转化实验报告
一、实验目的本研究旨在通过农杆菌介导法对大豆进行遗传转化，将目的基因导入大豆基因组中，并成功获得转基因大豆植株。
通过本实验，旨在探索大豆遗传转化技术，为大豆育种提供新的技术手段，提高大豆的产量和品质。
二、实验材料1. 大豆品种：Williams822. 农杆菌菌株：E. coli DH5α3. 转化载体：含有目的基因的质粒pBI1214. 实验试剂：抗生素、植物激素、DNA提取试剂盒等5. 实验设备：离心机、PCR仪、凝胶成像系统、组织培养室等三、实验方法1. 质粒提取与鉴定（1）采用DNA提取试剂盒提取质粒DNA。
（2）通过PCR扩增质粒中的目的基因，并进行琼脂糖凝胶电泳鉴定。
2. 农杆菌培养与活化（1）将农杆菌菌株E. coli DH5α接种于含有抗生素的LB培养基中，37℃培养过夜。
（2）将活化后的农杆菌接种于含有抗生素的YEB培养基中，28℃培养过夜。
3. 转化载体的构建（1）将目的基因插入到质粒pBI121的T-DNA区域。
（2）通过PCR和琼脂糖凝胶电泳鉴定转化载体。
4. 农杆菌介导的大豆遗传转化（1）将转化载体与活化后的农杆菌共培养，使农杆菌吸收转化载体。
（2）将农杆菌接种于含有抗生素的YEB培养基中，28℃培养过夜。
（3）将农杆菌悬浮液滴加到大豆子叶节上，进行农杆菌介导的大豆遗传转化。
5. 转基因大豆植株的再生与筛选（1）将转化后的大豆子叶节接种于含有抗生素和植物激素的培养基上，进行组织培养。
（2）通过PCR和琼脂糖凝胶电泳筛选阳性植株。
6. 转基因大豆植株的鉴定（1）采用RT-PCR技术检测目的基因在转基因大豆植株中的表达。
（2）通过Western blot技术检测目的蛋白在转基因大豆植株中的表达。
四、实验结果1. 质粒提取与鉴定：成功提取质粒DNA，并通过PCR和琼脂糖凝胶电泳鉴定出目的基因。
2. 农杆菌培养与活化：成功活化农杆菌菌株E. coli DH5α。
3. 转化载体的构建：成功构建含有目的基因的转化载体。
如何检测转基因大豆
PCR检测转基因大豆：[目的]定性检测转基因大豆。
[方法]以非转基因大豆和CP4-EPSPS 转基因大豆为材料,以大豆内源基因Lectin和外源基因5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因(CP4-EPSPS)为检测的目的片段,建立PCR反应体系。
采用改进CTAB法提取大豆基因组DNA, 并对所提DNA进行PCR扩增和电泳检测,确定转基因大豆的PCR检测限。
实时荧光定量PCR技术检测转基因大豆方法的建立：采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对大豆中的内源基因Lectin和转基因大豆中的外源基因EPSPS进行了定量检测 ,建立了Monsanto公司生产的商业化转基因大豆Roundup Ready○R 的定量PCR检测方法。
该方法的检测灵敏度 <0 0 1% ,是国际上设定的转基因最低限量的 10 0倍用巢式和半巢式PCR检测转基因大豆Roundup Ready及其深加工食品：用从转基因大豆(Glycinemax )颗粒中提取的DNA作为模板,经过稀释,形成不同浓度梯度的DNA溶液,然后用巢式和半巢式PCR进行扩增反应。
结果表明,巢式和半巢式PCR均可以扩增DNA浓度为10-14g/μL的溶液。
用巢式和半巢式PCR对市场的食品原料和深加工食品进行检测,可以从大豆油、酱油、面酱、大豆磷脂、豆腐、豆浆等食品原料和深加工食品的17个品牌的食品中检测出大豆内标基因(housekeepinggene)。
ELISA方法定量检测转基因大豆及其产品的研究：以美国、阿根廷、巴西转基因大豆等为材料,建立了ELISA法定量检测抗草甘膦转基因大豆CP4 EP- SPS蛋白的方法,成功检测出美国转基因大豆含量为3.768%、阿根廷转基因大豆含量为2.820%、巴西转基因大含量为1.920%,转基因豆粉、转基因豆粕和中国大豆未检测到CP4 EPSPS蛋白。
此方法具有简便、快速、稳定等优点,其检测灵敏度可达到0.0075%,并且稳定性良好,为抗草甘膦转基因大豆中CP4 EPSPS蛋白的定量检测提供了有效的手段。
利用蛋白质SDS_PAGE电泳方法检测转基因大豆的初步研究
利用蛋白质SDS_PAGE电泳方法检测转基因大豆的初步研究转基因大豆是指通过遗传工程技术改变了其基因组的大豆。
由于转基因大豆在农业生产中的广泛应用，对其进行检测变得非常重要。
蛋白质SDS_电泳方法是一种常用的蛋白质分析方法，可以用来检测基因改造对大豆蛋白质组成的影响。
在本文中，我们将详细介绍利用蛋白质SDS_电泳方法进行转基因大豆检测的初步研究。
首先，我们需要准备实验所需的试剂和设备。
实验所需的试剂主要包括SDS-凝胶缓冲液、蛋白质提取缓冲液和电泳样品缓冲液等。
设备包括垂直SDS-电泳仪、透明模板和电源等。
此外，还需要种植和提取转基因大豆和野生大豆的样品。
接下来，我们需要进行蛋白质的提取。
首先将转基因大豆和野生大豆的样品分别切碎并加入蛋白质提取缓冲液中，然后用离心机离心，将上清液收集下来。
接着，将上清液中的蛋白质含量测定，以保证样品含有足够的蛋白质进行电泳。
然后，我们需要制备SDS-凝胶。
首先准备SDS-凝胶缓冲液，并将其倒入平板中。
然后，在设备的底部插入透明模板，并将模板固定住，以确保凝胶可以充分凝胶化。
接下来，将凝胶缓冲液注入模板中，并等待其凝胶化。
凝胶凝胶化后，我们可以开始进行电泳实验了。
首先，将转基因大豆和野生大豆的蛋白质提取液分别加入电泳样品缓冲液中，并将其加热至95°C，以去除蛋白质的二级结构和使其变为线性构象。
然后将样品加载到凝胶孔中，接着将电泳仪的正负端子分别连接到电源上，并设置合适的电压和电流进行电泳。
电泳完成后，我们可以进行凝胶染色。
通常使用Coomassie蓝或银染色方法。
在染色前，将凝胶浸泡在染色剂中，然后进行洗涤和显色。
染色后，我们可以使用图像分析软件进行蛋白质条带的分析和比较。
通过蛋白质SDS-电泳方法，我们可以比较转基因大豆和野生大豆的蛋白质组成差异。
如果在转基因大豆中发现了新的蛋白质条带，或者野生大豆中的一些蛋白质缺失或表达量改变，这可能意味着基因改造对该大豆的蛋白质组成产生了影响。
转基因大豆检测手段的研究
转基因大豆检测手段的研究【摘要】中国很多大豆制品是利用进口转基因大豆进行加工的，产品中一定含有转基因大豆的成分，但是却未被标明，所以亟待对转基因大豆进行检测的手段，本文对转基因大豆的几种检测方法进行了综述。
【关键词】转基因大豆成分PCR SDS-PAGE 基因芯片酶联免疫吸附分析技术我国为大豆的原产国也是大豆的主产国之一，但是近年来，国外的转基因大豆大量涌入中国，中国国产大豆失去了价格优势，很多企业选择低成本的转基因大豆作为原料。
中国是个饮食文化上很依赖大豆的国家，各种大豆制品充斥着我们的餐桌，但是由于转基因大豆可能存在安全性问题，很多消费者选择不食用转基因食品，但是有调查显示我国存在很多大豆制品中是使用转基因大豆制作的，但是都没有进行标示，所以在食品安全监测方面，亟待一种有效的检测产品中是否含有转基因成分的手段。
本文列出几种大豆制品的转基因成分的检测方法，并对其优缺点进行了综述。
1 PCR法1.1 PCR（polymerase Chain Reaction）目前，种植最广的是抗草甘膦大豆由美国孟都山公司生产的转基因大豆，转基因大豆的外源基因epsps（5-enolypyruvy lshikimate-3-phosphate synthase，来源于A.tumefaciens菌株cp4），调控元件上游为花椰菜花叶病毒CaMV35S启动子，下游终止子为NOS，检测时主要针对这三种基因进行检测，而且还包括大豆的内源基因lectin，用于鉴别大豆。
利用这四个基因片段的特异性基因序列，利用Primer Premier5.0设计四对引物，进行扩增，可以初步确定大豆中是否含有转基因成分。
有研究结果表明，利用CTAB法提取大豆的总DNA，对大豆的CaMV 35S 启动子和内源基因Lection PCR扩增，扩增片段长度为118bp和195bp，表明了大豆中有转基因成分。
另有研究利用GUS标记基因和NOS终止子的pBI221质粒作为PCR检测的阳性对照，在转基因大豆中扩增出了阳性结果，并利用Southern杂交验证了结果的可靠性。
转基因大豆
转基因大豆和大豆蛋白分析:概述摘要为满足日益增长的大豆类食品和饲料的全球需求，高品质性状的新高产品种是必要的。
为了确保农作物的安全，确定种子中蛋白质的变化是非常重要的，作物由于各种压力刺激，育种和基因改造，这些变化的发生可能意想不到的。
理解种子蛋白质的变化在野生和人工栽培的大豆品种由于蛋白表达出现意外的时候是很有用的。
蛋白质组学技术在分析蛋白质由于各种刺激发生变化的时候是有用的。
这个简短的回顾讨论了转基因大豆、不同的大豆蛋白质、用于分析蛋白质的方法。
大豆蛋白的特性将有助于研究人员、营养专家和监管机构处理大豆衍生食物的生产。
引言大豆是在动物饲养方面是一个主要且便宜的蛋白质来源，也是越来越多美国消费者饮食的重要组成部分。
大豆主要用于食用油和蛋白质粉的生产。
大豆蛋白质用于人类各种食品中，包括婴儿配方奶粉、面粉、蛋白质隔离、浓缩和变形纤维。
大豆中蛋白质的数量和质量高于其他任何豆类。
在干重的基础上，大豆种子包含约40%的蛋白质和20%的油。
研究表明，定期食用大豆和其他豆类产品，可以减少癌症的风险，改善心血管疾病和减少其他慢性的比例。
同样的，大豆也成为许多工业产品和药类产品的重要原料。
但是，豆类食品容易引起敏感消费者的过敏反应，过敏反应主要由于大豆中存在转基因蛋白，扰乱了正常的新陈代谢并且妨碍了人体对营养物质的消化和吸收。
为了克服未来的全球粮食安全问题，开发新改善的大豆品种、使用其他方法培育谷物和新基因工程方法变得更加重要。
基因工程包括插入一个设定的已知基因序列的转基因，用于培育一个产品所需的作物特征。
转基因的所有方法改变了初级和次级代谢物的数量和质量，即蛋白质、脂质、碳水化合物和异黄酮。
例如包括通过增加蛋白质、油和碳水化合物的含量来减少过敏原、提高营养物质的吸收。
然而，就像所有新的技术一样，所有新大豆品种必须对其安全和质量进行评估。
一些改进分析方法包括基因、蛋白质组学来对转基因谷物中蛋白质和次级代谢产物进行鉴定。
转基因大豆定性检测方法介绍
Upper signal: GMO
Lower signal： Control
Lane M:100bp DNA Ladder Marker Lane 2: Non GMO Soybean Control Lane 4: GMO Soybean Control 1% Lane 6: GMO Soybean Control 100% Lane 8: Sample 1 Lane 10: Sample 1
1.2 仪器及试剂
仪器： TaKaRa PCR Thermal Cycler DICE (TaKaRa Code:TP600) (TaKaRa 试剂： PCR Screening Kit for GM Soybean Ver.2.0 Code:DRR201A) 1.3 扩增基因及片断长度 重组基因 ： CP4 EPSPS
1、转基因大豆定性PCR检测方法 1、1 原理 采用PCR法，在同一个反应体系中同时加入扩增 Roundup Ready（CP4 EPSPS）大豆重组基因和内 源基因（Actin 蛋白基因）的引物，通过重组基因的是 否被扩增来判断样品是否为转基因大豆，通过内源基因 是否被扩增来监控PCR反应是否正常进行，从而防止 假阴性的结果。 此检测方法操作简单、成本低，可以对转基因大豆 进行定性分析，经大量实验结果证明，此方法的 GMO(genetically modified organism，转基因生物)混入率的检出界限 为0.1%。
Lane 1:Negative Control Lane 3: GMO Soybean Control 0.1% Lane 5: GMO Soybean Control 5% Lane 7: Positive Control Lane 9: Sample 2 Lane 11: Sample 2
基因工程大豆中抗性基因的转化及其表达检测
基因工程大豆中抗性基因的转化及其表达检测随着科学技术的不断进步，生物学的发展也越来越快速。
基因工程作为生物技术的重要分支之一，在不断推进生物领域研究的同时，也为解决实际问题提供了新的思路和方法。
本文将主要介绍基因工程在大豆中抗性基因转化及其表达检测方面的发展。
一、大豆抗性基因转化技术的发展大豆作为世界四大作物之一，在农业生产中具有重要地位。
但其在生长过程中受到多种病害的侵袭，其中尤以根腐病、白粉病、叶斑病等病害的影响最为严重。
这些病害对大豆产量和质量造成了很大的影响，因此研究大豆抗性基因转化技术就显得尤为迫切。
大豆抗性基因转化技术主要分为两种：常规育种和基因工程育种。
常规育种是传统的育种方法，通过选择育种材料，进行杂交、选择、纯化等一系列过程，筛选出抗性较强的品种。
而基因工程育种是通过利用基因编辑等技术，在大豆DNA分子水平上进行改良，将抗性基因转化入大豆种质中，从而获得抗病性强的品种。
目前，大豆抗性基因转化技术主要采用植物农杆菌介导的转化方法（Agrobacterium-mediated transformation）。
这种技术利用植物农杆菌的天然寄主范围广泛的优势，将外源DNA引入到宿主细胞中，实现对目标基因的转化。
通过植物农杆菌介导的转化，可以将多种抗性基因转化入大豆中，从而提高大豆的抗病性。
二、大豆抗性基因表达检测技术的发展在将抗性基因成功转化入大豆后，为了验证其是否在大豆中得到了表达，需要对大豆中的基因表达情况进行检测。
目前，常用的基因表达检测技术主要包括RT-PCR、Northern blotting、Western blotting和ELISA等方法。
RT-PCR是一种分子生物学常用的技术，可以准确地检测特定的mRNA序列在某一细胞或组织中的表达情况。
通过RT-PCR技术，可以检测到抗性基因在大豆中mRNA水平的表达情况。
Northern blotting是一种分子生物学的技术，可以检测mRNA序列的表达量及其大小分布情况。
大豆转基因检测标准
大豆转基因检测标准
大豆转基因检测标准是指用于检测大豆中转基因的方法和要求的规定。
以下是常见的大豆转基因检测标准：
1. 法规标准：不同国家和地区的法规要求可能有所不同。
例如，欧盟对转基因食品有严格的标识和审批要求，而中国国家标准规定了大豆转基因检测的方法和限量要求。
2. PCR法检测：PCR法是一种常用的转基因检测方法，能够检测到外源基因或转基因组分。
检测方法需要明确指明所要检测的外源基因或转基因。
3. 高通量测序检测：近年来，高通量测序技术的应用逐渐增多。
通过对大豆基因组的测序，可以检测到其中的转基因成分。
4. 限量要求：标准中通常规定了转基因成分的限量要求，即检测出来的转基因成分不能超过某个阈值。
不同国家和地区对于转基因成分的限量要求可能有所不同。
5. 检测方法的验证：标准通常要求检测方法的验证，包括准确性、可靠性和精确度等方面的评估。
总的来说，大豆转基因检测标准涵盖了检测方法、限量要求和方法的验证等方面的规定，以确保转基因大豆产品的质量和安全。
不同国家和地区的标准可能有所不同，但都致力于保护消费者的权益和健康。
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觉本次实验染色不如以前使用核酸染料效果佳。
谢谢
大豆转基因检测
❖ 本实验采用定性pcr方法检测大豆是否为转基 因。
实验结果
1.大豆基因组提取质量检测 1.1琼脂糖电泳：
图一 吸光值检测：DNA浓度=OD260/OD280=1.85 在1.7-2.0之间，符合PCR的标准。
❖ PCR结果：
由于第一次结果不是很好，本实验经过两次pcr结果。 第一次：
L
C
MM
L
C
图二
第二次：
（1）提取出的大豆基因组成色较好。电泳条带
清晰。但颜色较淡，可能是点样的体积过少。
（2）跑电泳前使用氯仿/异戊醇擦拭电泳槽面检 测DNA的结果较好
图二：此为第一次跑PCR的电泳图。
图中有明亮且清晰的条带，但Maker跑的质量不是很好。 经分析可能是凝胶的质量不够好，或者是点样点的不好。
图三：为第二次PCR产物电泳，效果较好，有清晰明亮条带， 能看清。
讨论：
本次实验基本达成实验目的，有些地方需要注意。 （1）提取DNA的时候要仔细，DNA的质量高低影响后续实验。
比如蛋白质等物质需要除尽。 （2）使用RNArase需要注意，不然容易导致实验失败。 （3）在配制PCR体系的时候，发现配制母液再分装到各个管