培养基配制
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1、接种前的准备：如实验一准备的培养基等；接种 室的准备（超净台的准备） 2、培养材料表面灭菌：选用嫩茎为材料，取带芽的 茎段，一般以顶端以下第3-10节上的芽为好，采 回枝条剪去叶柄，再剥去附在茎上的皮刺，先用 自来水冲洗枝条表面的尘土，然后把枝条段截成 2-3cm小段，每段带1-2个侧芽，（此处开始在超 净台上操作）用70%酒精灭菌20s，再用0.1%氯 化汞溶液浸泡10min，再用无菌水冲洗3-5次，无 菌水浸泡备用。
实验三 月季的快繁
一、实验目的：对月季茎段进行快繁 ，掌握 利用茎段作为外植体进行无性繁殖的方法 二、实验用品： 1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验 一已灭菌）酒精灯、酒精棉球 2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、 75%酒精、吐温、无菌水 三、实验材料：植物茎段（月季）
四、实验步骤
EDTA：乙二胺四乙酸是最常见的螯合剂
注意事项：该母液用棕色瓶保存。
（4）有机化合物 （100倍液，500ml） 药品名称 甘氨酸 盐酸硫胺素(B1) 盐酸吡哆醇(B6) 烟酸 肌醇 配方用量mg/L 2.0 0.4 0.5 0.5 100 扩大50倍称量mg 100 20 25 25 5000 定容至500ml 每升培养基取 此液10ml
植物组织培养实验
实验一植物组织培养培养基的配制
一、实验目的：掌握培养基母液的配制及培 养基的制备与灭菌的操作方法。 二、实验用品： 1、仪器用具：电子天平、高压灭菌锅、试剂 瓶、烧杯、玻棒、移液管、培养瓶、电炉、 pH试纸、量筒等 2、试剂：见MS培养基配方
三、实验步骤：
1、母液的配制： 1）大量元素：配制成10倍液，1000ml；钙盐单独 配制 2）微量元素：配制成100倍液，500ml； 3）铁盐 200倍液 500ml 4）有机物质100倍液 500ml 5）激素：BA、NAA、2,4 D 各配成1mg/ml母液 100ml 其他还需配制：70%-75%乙醇1000ml；0.1%升汞 500ml
Na2MoO4 · 2O 2H
KI CoCl2·6H2O
0.25
0.83 0.025
12.5
41.5 1.25
液10ml
（3）铁盐 （200倍液，500ml） 药品名称 FeSO4 · 2O 7H Na2 –EDTA 配方用量mg/L 27.8 37.3 扩大100倍称量mg 2780 3730 定容至500ml 每次取用5ml
准备各种器具等： 洗涤三角烧瓶、移液管、准备器具（枪形镊、 剪刀、解剖刀）、烧杯、搪瓷缸、电炉、 棉线、脱脂棉、滤纸、报纸、（聚丙烯塑 料薄膜）、培养皿、蔗糖、琼脂、吐温-80 或吐温-20等
3.灭菌
• 准备好需要灭菌的物品：培养基分装包扎 并做好标记；滤纸裁剪放入培养皿中包扎； 接种器具一副（剪刀、镊子、解剖刀）包 扎；250ml及100ml小烧杯包扎；蒸馏水装 瓶包扎 • 灭菌 ：加水、盖严、0.5Pa放气、121摄氏 度保温灭菌20min，降压到0，开盖，取出
实验四 玉米成熟胚的培养
一、实验目的：玉米成熟胚培养，掌握胚培 养的方法 二、实验用品： 1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验 一已灭菌）酒精灯、酒精棉球 2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、 75%酒精、吐温、无菌水 三、实验材料：玉米种子
四、实验步骤
1、接种前的准备：如实验一准备的培养基等； 接种室的准备（超净台的准备） 2、培养材料表面灭菌：剥取玉米成熟胚； （此处开始在超净台上操作）75%酒精浸 泡30秒，倒出酒精；0.1%升汞5-8 min，倒 出升汞；无菌水洗涤3-5次，无菌水浸泡备 用。
四、实验步骤
3、接种：取出玉米胚置于培养皿中的滤纸上， 吸取水分，接种到适当培养基中。重新包扎 好瓶口，写好标签（时间、材料等） 4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养， 温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时 清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
四、实验步骤
1、接种前的准备：如实验一准备的培养基等； 接种室的准备（超净台的准备） 2、培养材料表面灭菌：洗涤、清理；（此处 开始在超净台上操作）75%酒精浸泡30秒， 倒出酒精；0.1%升汞5-8 min，倒出升汞； 无菌水洗涤3-5次，无菌水浸泡备用。
四、实验步骤
3、接种：取出叶片置于培养皿中的滤纸上， 吸取水分，剪去被升汞杀死的叶片边缘，将 叶片剪成适当大小（3-5mm见方），接种到 适当培养基中。重新包扎好瓶口，写好标签 （时间、材料等） 4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养， 温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时 清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
பைடு நூலகம்
四、实验步骤
3、接种：取出茎段置于培养皿中的滤纸上， 吸取水分，剪去被升汞杀死的茎段上下切口， 将茎段剪成适当大小（带茎节，约0.5cm）， 接种到适当培养基中。重新包扎好瓶口，写 好标签（时间、材料等） 4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养， 温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时 清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
母液的配制
以MS培养基为例，一般配四种母液。配方如下：
（1）无机大量 （10倍液，配制1000ml）：
药品名称 配方用量mg/L 扩大10倍称量mg KNO3 1900 19000 定容于1000ml NH4 NO3 1650 16500 蒸馏水中。配 MgSO4 · 2O 7H 370 3700 制每升培养基 KH2 PO4 170 1700 取此液100ml
→ 调节pH
琼脂 + 水→ 加热溶解 + 糖 玻璃器皿或其他 →分装→ 灭菌→冷却→凝固→接种
配制的培养基配方
• MS+BA 3 mg/L+ NAA 0.1 mg/L +琼脂0.7%+ 蔗糖3% • MS+BA 5 mg/L+ NAA 0.5 mg/L +琼脂0.7%+ 蔗糖3% • MS+BA 2 mg/L+ 2,4 D 2 mg/L +琼脂0.7%+ 蔗糖3% • pH5.8 • 每小组配制1种培养基 500ml，一大组配制3种 培养基各1000ml，可分装约100瓶；两大组共 配培养基2000ml，分装200-250瓶
实验二 植物愈伤组织的诱导
一、实验目的：对植物的叶片诱导愈伤组织 ， 掌握无菌操作方法，学习诱导植物外植体 形成愈伤组织的方法。 二、实验用品： 1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验 一已灭菌）酒精灯、酒精棉球 2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、 75%酒精、吐温、无菌水 三、实验材料：植物叶片（月季或菊花）
生长调节物质的配制
各配成1mg/ml母液100ml（称取0.1g样品，配100ml)
① NAA：先用少许95%酒精或热水溶解后再加水定容。 ② 2,4-D：先用少许1N NaOH溶解后再加水定容。 ③ 6-BA：先用少许1N HCl溶解后再加水定容。
2．培养基配制
以MS1升培养基为例
水
药品
→ 配成母液 → 混合
CaCl2· 2O 2H 440 4400 单独配制成10倍1000ml
（2）无机微量(100倍液，配制500ml）
药品名称 MnSO4 · 2O 4H ZnSO4 · 2O 7H CuSO4 · 2O 5H H3BO3 配方用量mg/L 扩大50倍称量mg 22.3 1150 8.6 0.025 6.2 430 1.25 310 定容于500ml 蒸馏水中。每 升培养基吸此
实验三 月季的快繁
一、实验目的：对月季茎段进行快繁 ，掌握 利用茎段作为外植体进行无性繁殖的方法 二、实验用品： 1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验 一已灭菌）酒精灯、酒精棉球 2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、 75%酒精、吐温、无菌水 三、实验材料：植物茎段（月季）
四、实验步骤
EDTA：乙二胺四乙酸是最常见的螯合剂
注意事项：该母液用棕色瓶保存。
（4）有机化合物 （100倍液，500ml） 药品名称 甘氨酸 盐酸硫胺素(B1) 盐酸吡哆醇(B6) 烟酸 肌醇 配方用量mg/L 2.0 0.4 0.5 0.5 100 扩大50倍称量mg 100 20 25 25 5000 定容至500ml 每升培养基取 此液10ml
植物组织培养实验
实验一植物组织培养培养基的配制
一、实验目的：掌握培养基母液的配制及培 养基的制备与灭菌的操作方法。 二、实验用品： 1、仪器用具：电子天平、高压灭菌锅、试剂 瓶、烧杯、玻棒、移液管、培养瓶、电炉、 pH试纸、量筒等 2、试剂：见MS培养基配方
三、实验步骤：
1、母液的配制： 1）大量元素：配制成10倍液，1000ml；钙盐单独 配制 2）微量元素：配制成100倍液，500ml； 3）铁盐 200倍液 500ml 4）有机物质100倍液 500ml 5）激素：BA、NAA、2,4 D 各配成1mg/ml母液 100ml 其他还需配制：70%-75%乙醇1000ml；0.1%升汞 500ml
Na2MoO4 · 2O 2H
KI CoCl2·6H2O
0.25
0.83 0.025
12.5
41.5 1.25
液10ml
（3）铁盐 （200倍液，500ml） 药品名称 FeSO4 · 2O 7H Na2 –EDTA 配方用量mg/L 27.8 37.3 扩大100倍称量mg 2780 3730 定容至500ml 每次取用5ml
准备各种器具等： 洗涤三角烧瓶、移液管、准备器具（枪形镊、 剪刀、解剖刀）、烧杯、搪瓷缸、电炉、 棉线、脱脂棉、滤纸、报纸、（聚丙烯塑 料薄膜）、培养皿、蔗糖、琼脂、吐温-80 或吐温-20等
3.灭菌
• 准备好需要灭菌的物品：培养基分装包扎 并做好标记；滤纸裁剪放入培养皿中包扎； 接种器具一副（剪刀、镊子、解剖刀）包 扎；250ml及100ml小烧杯包扎；蒸馏水装 瓶包扎 • 灭菌 ：加水、盖严、0.5Pa放气、121摄氏 度保温灭菌20min，降压到0，开盖，取出
实验四 玉米成熟胚的培养
一、实验目的：玉米成熟胚培养，掌握胚培 养的方法 二、实验用品： 1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验 一已灭菌）酒精灯、酒精棉球 2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、 75%酒精、吐温、无菌水 三、实验材料：玉米种子
四、实验步骤
1、接种前的准备：如实验一准备的培养基等； 接种室的准备（超净台的准备） 2、培养材料表面灭菌：剥取玉米成熟胚； （此处开始在超净台上操作）75%酒精浸 泡30秒，倒出酒精；0.1%升汞5-8 min，倒 出升汞；无菌水洗涤3-5次，无菌水浸泡备 用。
四、实验步骤
3、接种：取出玉米胚置于培养皿中的滤纸上， 吸取水分，接种到适当培养基中。重新包扎 好瓶口，写好标签（时间、材料等） 4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养， 温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时 清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
四、实验步骤
1、接种前的准备：如实验一准备的培养基等； 接种室的准备（超净台的准备） 2、培养材料表面灭菌：洗涤、清理；（此处 开始在超净台上操作）75%酒精浸泡30秒， 倒出酒精；0.1%升汞5-8 min，倒出升汞； 无菌水洗涤3-5次，无菌水浸泡备用。
四、实验步骤
3、接种：取出叶片置于培养皿中的滤纸上， 吸取水分，剪去被升汞杀死的叶片边缘，将 叶片剪成适当大小（3-5mm见方），接种到 适当培养基中。重新包扎好瓶口，写好标签 （时间、材料等） 4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养， 温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时 清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
பைடு நூலகம்
四、实验步骤
3、接种：取出茎段置于培养皿中的滤纸上， 吸取水分，剪去被升汞杀死的茎段上下切口， 将茎段剪成适当大小（带茎节，约0.5cm）， 接种到适当培养基中。重新包扎好瓶口，写 好标签（时间、材料等） 4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养， 温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时 清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
母液的配制
以MS培养基为例，一般配四种母液。配方如下：
（1）无机大量 （10倍液，配制1000ml）：
药品名称 配方用量mg/L 扩大10倍称量mg KNO3 1900 19000 定容于1000ml NH4 NO3 1650 16500 蒸馏水中。配 MgSO4 · 2O 7H 370 3700 制每升培养基 KH2 PO4 170 1700 取此液100ml
→ 调节pH
琼脂 + 水→ 加热溶解 + 糖 玻璃器皿或其他 →分装→ 灭菌→冷却→凝固→接种
配制的培养基配方
• MS+BA 3 mg/L+ NAA 0.1 mg/L +琼脂0.7%+ 蔗糖3% • MS+BA 5 mg/L+ NAA 0.5 mg/L +琼脂0.7%+ 蔗糖3% • MS+BA 2 mg/L+ 2,4 D 2 mg/L +琼脂0.7%+ 蔗糖3% • pH5.8 • 每小组配制1种培养基 500ml，一大组配制3种 培养基各1000ml，可分装约100瓶；两大组共 配培养基2000ml，分装200-250瓶
实验二 植物愈伤组织的诱导
一、实验目的：对植物的叶片诱导愈伤组织 ， 掌握无菌操作方法，学习诱导植物外植体 形成愈伤组织的方法。 二、实验用品： 1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验 一已灭菌）酒精灯、酒精棉球 2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、 75%酒精、吐温、无菌水 三、实验材料：植物叶片（月季或菊花）
生长调节物质的配制
各配成1mg/ml母液100ml（称取0.1g样品，配100ml)
① NAA：先用少许95%酒精或热水溶解后再加水定容。 ② 2,4-D：先用少许1N NaOH溶解后再加水定容。 ③ 6-BA：先用少许1N HCl溶解后再加水定容。
2．培养基配制
以MS1升培养基为例
水
药品
→ 配成母液 → 混合
CaCl2· 2O 2H 440 4400 单独配制成10倍1000ml
（2）无机微量(100倍液，配制500ml）
药品名称 MnSO4 · 2O 4H ZnSO4 · 2O 7H CuSO4 · 2O 5H H3BO3 配方用量mg/L 扩大50倍称量mg 22.3 1150 8.6 0.025 6.2 430 1.25 310 定容于500ml 蒸馏水中。每 升培养基吸此