缓冲液的配制

孕酮

1包被缓冲液，

（1）碳酸盐缓冲液（PH9.6 +0.2 0.05M）《激素酶免疫测定技术》石老师编著

CO3 1.59g

Na

2

NaHCO3 2.93g

加蒸馏水至1000ml。

（2）tris缓冲液（0.05mol/L）50ml 0.1mol/L

（Tris）溶液与x ml 0.1mol/L 盐酸混匀后，加水稀释至100ml 《酶免疫测定技术》杨立国等编著

各种pH值的Tris缓冲液的配制

所需pH值（25℃）0.1mol/L HCl的体积

7．1 45．7

7．2 44．7

7．3 43．4

7．4 42．0

7．5 40．3

7．6 38．5

7．7 36．6

7．8 34．5

7．9 32．0

8．0 29．2

8. 1 26.2

8.2 22.9

8.3 19.9

8.4 17.2

8.5 14.7

8.6 12.4

8.7 10.3

8.8 8.5

8.9 7.0

某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制：将50ml 0.1mol/L Tris碱溶液

0.1mol/L盐酸的配置：

买来的浓盐酸是12 mol/L的，以配制1L 0.1mol/L的盐酸为例：

先用量筒量取8.3 mL的浓盐酸倒入容量瓶，然后将溶液加蒸馏水稀释至体积为1 L，此时的溶液就是0.1mol/L的盐酸。

0.1mol/Ltris的配置：0.1 mol/L溶液为12.114 g/L

3）0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)

磷酸二氢钾0.2g

磷酸氢二钠 2.90g

氯化钠8g

加去离子水定容到1000ml。

2洗涤缓冲液（pH7.4 0.15mol/L）《激素酶免疫测定技术》石老师编著

0.05%Tween-20 0.5ml

加在PBS缓冲液1000ml中。

PBS缓冲液：

KH2PO40.2g

Na2HPO4·12H2O 2.9g

NaCl8.0g

KCl0.2g

加蒸馏水至1000ml。

3测定缓冲液(Ph7.0 含0.87﹪NaCl 和0.1﹪BSA的0.1M磷酸缓冲液)用于标

准孕酮，孕酮酶标物及奶样的稀释。《激素酶免疫测定技术》石老师编著Na2HPO4·12H2O 21.85g

NaH2PO4·2H2O 6.08g

NaCl 8.70g

BSA 1.00g

溶于1000mL蒸馏水中

4封闭缓冲液

牛血清白蛋白(BSA)2% 2g

（或5%脱脂奶粉）加洗涤缓冲液100 ml。

0.05mol/L碳酸盐缓冲液(pH9.6)+2.0%BSA

2.0gBSA加配好的0.05mol/L碳酸盐缓冲液溶解定量至100ml

5底物缓冲液（pH5.4）磷酸盐-柠檬酸缓冲液

0.2M Na2HPO4(无水28.4g/L，带12结晶水71.7g/L) 取25.7ml

0.1M 柠檬酸(无水19.2g/L，带1结晶水21.01g/L) 取24.3ml

加蒸馏水至100ml。

或

柠檬酸（C6H8O7·H2O）0.47g

Na2HPO4·12H2O 2.00g

6（1）TMB(四甲基联苯胺)显色液（蓝色）

A液(3，3’，5，5’-四甲基联苯胺，TMB):称取TMB20mg溶于10ml无水乙

醇中，完全溶解后，加双蒸水至100ml。

B液(0.1mol/L柠檬酸-0.2mol/L磷酸氢二钠缓冲液，pH5.0-5.4):称取Na2HPO4·12H2O14.34g，柠檬酸1.87g溶于180ml双蒸水，加0.75%过氧化氢尿素1.28ml，定容至200ml，调pH至5.0-5.4。

将A液和B液按1：l混合后即成TMB-过氧化氢尿素应用液

或

TMB(2mg/ml水)0.05ml

底物缓冲液0.95ml

30% H2O20.001ml

总体积1ml。

（2）OPD(邻苯二胺)显色液（黄棕色）（现配避光）

OPD（干粉）0.004g

底物缓冲液10ml

30% H2O2 0.015ml

总体积10ml。

（3）TMBS底物液（用于显色）《激素酶免疫测定技术》石老师编著10mg四甲基联苯胺硫酸盐（TMBS）的二甲基亚砜溶液，用底物缓冲液配成0.2mg/ml的TMBS底物液。用前加H2O2溶液30﹪左右。

7 终止液2mol/LH2SO4 用于终止反应

在178.3ml水中，逐滴加入浓硫酸(18M，约98%)21.7ml，边加边摇。（浓H2SO4：蒸馏水=1:9）