结核病实验室常用细菌学、免疫学、分子生物学诊断技术
结核病临床实验室检测
结核病临床实验室检测当前，我国结核病临床实验室检测的分类：光学检测、免疫学检测、分子生物学检测和微生物学检测，其中微生物学检测是结核病检测的金标准，也是我国疾控系统所采用的主要方法。
光学检测包括胸透和X光片，该方法主要是临床用于肺结核的筛查，发现肺部的阴影和继发性结核的病灶，是临床上用于检测继发性结核的主要方法，灵敏度和特异性都非常差。
免疫学检测包括细胞免疫和体液免疫，其中，细胞免疫是利用结核分支杆菌的特异性抗原对患者的免疫细胞进行刺激，致使患者的免疫细胞释放出γ-干扰素等细胞因子，再通过检测细胞因子的含量来间接的判断是否感染结核分枝杆菌，该方法是最近几年比较火的一个项目，特别是在一些综合性医院，因为该项目收费高，各医院开展的积极性也比较高；体液免疫就是利用结核分支杆菌特异性抗原（LAM、38KD、16KD等）来检测患者体液中的lgM或lgG，灵敏度和特异性大概都在70%左右，该方法在前几年比较流行，但现在因为WHO的文章的反驳，大部分临床医院已经放弃了这种方法，还有少量的单位在使用，主要用于临床的辅助诊断。
分子生物学检测包括结核病的临床诊断和结核分支杆菌的药敏检测，结核病的分子生物学诊断主要是通过PCR等方法来检测痰标本或胸腹水等中的DNA或RNA片段，该方法相较于传统的微生物学来说具有快速和灵敏度高的特点，缺点就是操作比较麻烦，对操作人员的要求较高。
结核药敏的分子生物学检测就是检测结核分支杆菌耐药基因的突变位点，该方法也比较快速，但目前研究比较清楚的耐药基因突变位点仅限于一线抗生素中的利福平和异烟肼等仅有的几种药，而我国是一个结核分支杆菌耐药比较严重的国家，仅仅有一线抗生素还不能满足临床的需要。
微生物学检测包括染色、培养和药敏实验，微生物学检测是结核病临床检测的金标准。
染色有抗酸染色和荧光染色两种，是目前我国结防系统进行结核病初期筛查的主要方法，该方法简单、快速费用低，但阳性率比较低，据统计我国根据染色法进行结核病的筛查阳性发现率还不到10%；培养法包括固体培养法和液体培养法，固体培养基分改良罗氏培养基和酸性罗氏培养基，两者的区别在于对标本的要求不同，改良罗氏培养基要求的是PH值中性的标本，酸性罗氏培养基要求接种碱性标本即痰标本经过消化后不经过中和直接接种，据临床统计固体培养的阳性率在10~15%之间，阳性报阳时间21~28天为多，临床收费在10~40元之间。
结核病实验室诊断技术介绍
1．结核分枝杆菌鉴定方法1. 1萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查目前萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查是我国结核病实验室使用最为普遍的方法，其操作简单快捷，特异性高，设备要求低，但是灵敏度较低，不能及时发现病人。
1.2 发光二极管荧光显微镜（LED荧光显微镜）发光二极管荧光显微镜管利用二极管光源，延长了显微镜使用寿命，不需要暗室，且价格低廉，可以提高涂片的阳性检出率。
目前在国内应用评估结果显示灵敏度较明场显微镜明显提高，已在部分区县开始使用。
1.3 交叉引物恒温扩增结核病诊断技术在恒定温度下，特殊的引物和特异性探针在酶的作用下，反应体系在一个密闭的反应管内反应。
扩增反应一般不超过一个小时，最短半小时。
目前应用玻璃化试剂，稳定性好，便于运输。
目前在国内区县级应用评估。
1.4 夹层杯结核病诊断方法将痰标本（或其它标本）用专用消化灭活液充分消化，完全暴露并保留抗酸杆菌，通过自动离心涂片机（或半自动制片染色机）对消化后的标本进行充分集菌。
直接在夹层杯装置中进行抗酸染色，取出基片或膜片置于普通显微镜进行观察。
夹层杯法操作方便快捷，便于标准化操作，通过消化灭活，安全性改善，阳性检出率也比直接涂片法大大提高。
夹层杯的装置有沉降式和虑过式，适用于不同工作量的医疗机构。
1.5 环介导等温扩增方法采用2对引物在等温条件下即可完成DNA的扩增，扩增结果通过肉眼观察荧光进行判定，诊断是否为结核病。
同时整个反应体系采用封闭系统减少了工作区域扩增子的污染，整个反应过程只需一个小时即可完成，通过肉眼观察荧光判读结果。
2．结核分枝杆菌培养方法2.1 固体培养培养是结核病诊断的精标准，也是获得分离菌株开展耐药检测的前提，我国结核病实验室最常用的是固体罗氏培养法，包括简单法和中和离心法。
虽然培养是诊断的精标准，但是花费时间长，需要4-8周时间。
2.2 液体培养液体培养通过添加生长刺激剂，改变检测方法提高检测灵敏度等方式缩短了阳性报告时间。
结核病：临床表现与诊断
结核病：临床表现与诊断一、临床表现1. 肺结核：咳嗽、咳痰是肺结核最典型的症状，常持续较长时间。
痰中可带有血丝或呈脓性。
患者还可出现发热、盗汗、乏力、食欲不振、体重减轻等症状。
部分患者可出现胸痛、呼吸困难等。
2. 肺外结核：根据侵犯的器官不同，临床表现各异。
如骨结核患者可出现局部疼痛、肿胀、活动受限；泌尿系统结核患者可出现尿频、尿急、血尿等症状。
3. 全身性结核：全身性结核是指结核病侵犯全身多个器官，患者可出现发热、盗汗、乏力、食欲不振、体重减轻等全身症状，且伴有相应器官的局部症状。
二、诊断方法1. 实验室检查：细菌学检查是确诊结核病的关键。
通过痰液、分泌物或其他组织样本培养出结核分枝杆菌，可确诊为结核病。
血清学检查也可用于检测结核抗体，辅助诊断。
2. 影像学检查：X线胸片是诊断肺结核的重要手段。
早期可表现为肺纹理增多、模糊，随着病情发展，可出现片状、絮状阴影，甚至空洞形成。
CT检查可更清晰地显示肺部病变及其范围。
3. 组织病理学检查：通过取得患者的病变组织进行病理学检查，可发现结核分枝杆菌及其典型的病理改变，如干酪样坏死、肉芽肿等。
4. 临床表现和病史：结合患者的临床表现和病史，医生可作出初步诊断。
如患者有长期咳嗽、咳痰、低热等症状，且有与结核患者接触史，应高度怀疑肺结核。
5. 结核菌素试验：结核菌素试验是一种用于检测人体对结核分枝杆菌过敏反应的检查方法。
阳性结果表明患者曾感染过结核分枝杆菌，但不一定患病。
结核病的诊断需要综合临床表现、实验室检查、影像学检查等多种手段。
在确诊后，患者应接受规范化治疗，以期早日康复。
一、临床表现结核病是一种具有多样性和复杂性的疾病，其临床表现因感染部位、程度和个体差异而异。
1. 肺结核：依然是结核病的主要形式，症状多表现为慢性咳嗽、咳痰，可持续数周甚至数月。
咳嗽多为干咳，逐渐出现痰中带血，随着病情的发展，可出现咯血。
患者常有午后潮热，夜间盗汗，体重不明原因下降，食欲减退等全身症状。
结核病实验室诊断技术2017.10.13
• 绝对浓度法 • 比例法
• 液体培养法
基于固体培养基；时间：4周 多种药物
基于液体培养基，时间：4-12天 INH/RFP/SM/EMB/PZA
结核分枝杆菌药物敏感试验
不同药敏方法的差异
三者在临界药物浓度接种菌量、结果判读方法等方面都有一定差 别，导致结果有很少一部分不相符
比例法和绝对浓度法检测结果的一致率4 药均高达96 %以上,对于 结核分支杆菌,二种方法测试 SM INH RFP EMB的耐药率均无显著 性差异
涂片显微镜检查的敏感性
观察到的AFB
AFB估计数量 涂片阳性的可能性(%)
数量
( /ml)
• 0 in ≥100 fields
< 1,000
<10
• 1-2 in 300 fields 5,000 – 10,000
50
• 1-9 in 100 fields about 30,000
80
• 1-9 in 10 fields
结核分枝杆菌药敏试验-菌型鉴定
利用固体罗氏鉴别培养基的鉴别：
中性罗氏 培养基
+
噻吩-2-羧酸 肼TCH
+
对硝基苯 甲酸PNB
+
菌型鉴定 NTM
+
+
-
人型Mtb
+
-
-
牛型Mtb
结核分枝杆菌药敏试验-菌型鉴定
• 原理：硝基苯甲酸还原酶机制
绝大部分非结核分枝杆菌能将对硝基-苯甲酸（PNB ）还原为细菌能够利用的对氨基-苯甲酸（PABA），而 绝大部分（98%以上）MTBC缺乏对硝基-苯甲酸（PNB ）还原酶活性，为对氨基-苯甲酸（PABA）将对硝基苯甲酸（PNB）还原为细菌能够利用的对氨基-苯甲酸 （PABA） • 局限：鉴定周期长15天-30天，特异性不高
结核病分子生物学及分子流行病学
培养操作方法
接种
用无菌吸管取前处理后的 标本 接种0.1ml至酸性罗氏培 养基斜面 尽量使菌液均匀铺满斜面 作方法
• 结果的观察与报告
接种后第3、7天各观察一次菌落生长情况
此后每周观察一次，直至满8周，每次观察记录菌落生长 及污染情况 分枝杆菌培养阴性： 斜面无菌落生长
生长缓慢
肺结核样病变 结节与溃疡 儿童淋巴结炎 结核样病变， 多见于肺与肾 极少致病 麻风病
偶发分枝杆菌
结核分枝杆菌
• 是一类细长略弯曲的长杆菌，由于细胞壁 含有大量脂质，能抵抗酸酒精脱色能力， 抗酸染色阳性。 • 缓慢生长菌。 • 致病性与菌体成分有关，荚膜-多糖；脂质索状因子、磷脂、蜡质D；蛋白质。 • 易发生形态、耐药、毒力、免疫性变异。 • 对干燥抵抗力强，对湿热、紫外线敏感。
体积相同性质不同病灶与含菌量
肺结核的传染性决定病人痰中结核菌的数量和病人 的咳嗽症状。涂阳病人排菌量大，是主要传染源，涂阴 培阳病人传染性小。 直径 2cm的空洞含菌数108-9 直径 2cm的干酪病灶菌量约105-6 直径 2cm的结节病灶或闭合干酪灶102-3
化疗前后结核杆菌的定量分析
• 对痰菌阳性病人在化疗前后做结核杆菌培养的定 量分析 • 化疗前每ml细菌数106(1000000/ml-4+）
结核病实验室诊断及新诊断工具
安徽省结核病防治研究所 安徽省胸科医院 王 庆
一.结核病细菌学基础
二.结核病实验室诊断方法 三.结核病实验室新诊断工具
一.结核病细菌学基础
—结核分枝杆菌
分枝杆菌
1882年KOCH发现，至今已经发现100多种，有 结核分枝杆菌复合群、非结核分枝杆菌、麻风杆菌。 • 引起肺结核的主要有人型、牛型、非洲、田鼠等结核 分枝杆菌，称结核分枝杆菌复合群； (结核分枝杆菌是缓慢生长菌） • 大部分非结核分枝杆菌不致病, 部分非结核分枝杆菌 可引起人体类似结核样病变—非结核分枝杆菌肺病； • 麻风分枝杆菌引起麻风病。
结核病实验室诊断技术
阴、 无 痰及 Ｌ型结核 菌的肺结 核病人则难以诊断 。Ｐ Ｐ Ｄ试验 、 血 清结 核抗 体检查对结核病 的诊断有一定参 考价值 ， 但 无法区分 Ｂ Ｃ Ｇ接种 、 既往感染 和正在感染 ， 而且其 灵敏性和特异性不理想 。随着 分子生 物学技 术 的发展 ， 基因诊断技术 因具有较高 的敏感性 、 特异性而 日益显示其优越性 。 目前用 于结核 分枝 杆菌诊断 的方法有聚合酶链反应 （ Ｐ Ｃ Ｒ） 、 Ｄ Ｎ Ａ探针技 术 、 基 因芯片技术 。Ｐ Ｃ Ｒ技术具 有快速 、 特异、 灵 敏和 可无培 养依赖性特征 。Ｄ Ｎ Ａ探针技术用于结核病 的诊 断 ， 及进行菌种鉴定 与分类 。Ｄ Ｎ Ａ序列 测定 不但 为结 核病 的诊断和鉴别诊断提供准确病原学依据 而且 作为鉴定结核分枝杆菌耐药基 因突变 的重 要手段。基因芯片 法（ Ｇ Ｃ Ｔ ） 具有高效率 、 微 型化 、 自动化 、 成本低 、 防污染 等特 点。总之将这些诊断方法不断进行改进 。在临 床工作 中将各种诊断技术有机 的结 合 ， 综合分析 ， 合理 的为临床服务 ； 从而做出正确 的诊断 ， 以使结核病能
的 检 测 方 法 较 常 用 的有 ： 斑点金免疫金渗滤试验 （ Ｄ Ｉ Ｇ Ｆ Ａ） ， 是
一
、
痰涂片镜检 、 痰 结 核 菌 培 养 法
结核病 的 实 验 室诊 断 主要 依 赖 细 菌 学 涂 片 和 培 养 检 查 Ｊ ， 痰样本涂 片抗酸 染色 显微 镜检 查 和痰 抗酸 杆菌 培养 ， 是结 核病实验室诊断的主要方法 。具有简便 、 快速 、 价廉 等特 点， 对结核病早期诊 断起着 重要作 用 。痰样本 涂 片检查无 法 区分死 菌 和 活 菌 ， 且 敏 感 性低 ， 阳 性检 出率 约 为 １ ９ ． ９ ％ 一 ３ ５ ％ 。目前杨松等 研究临床报道较 高 的也 只有 ３ ６ ． ４ ％。
结核病实验室诊断技术进展
结核病实验室诊断技术进展结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，其发病规律和流行特点决定了在今后相当长的时期内其危害将持续存在。
结核病被列为我国重大传染病之一，是严重危害人民群众健康的呼吸道传染病。
世界卫生组织的统计资料显示，约三分之一的世界人口曾经感染结核菌，亚洲地区感染者占全世界的三分之二。
据WHO估计，2007年全球约有927万新发结核患者，175万人死于结核病，我国是全球22个结核病流行严重的国家之一，同时也是全球27个耐多药结核病流行严重的国家之一。
目前我国三分之一左右的人口已感染了结核菌，受感染人数超过4亿。
据研究，受结核菌感染的人群中，10%的人会发展为结核病。
我国现有肺结核病人约500万，主要集中在25岁及以上人群；每年约有13万人死于结核病，死亡平均年龄为55.2岁。
如果不采取有效的控制措施，在未来的10年，我国可能有近5000万的感染者发生结核病。
历年来全国结核病流行病学调查结果显示，全国肺结核患病率继续呈现下降趋势。
特别是传染性肺结核患病率下降尤为明显，由2000年的122/10万下降到66/10万，十年降幅近50%。
结核分枝杆菌从分类上看是分枝杆菌科、分枝杆菌属中引起人类患病最多的致病菌。
结核病实验室检查，尤其是细菌学检查是结核病诊断的最主要和最基本技术，也是选择治疗方案、考核疗效、评价防治效果的主要指标。
目前结核病实验室检查技术包括：全菌体为基础的病原微生物学检测、细菌核酸为靶标的分子生物学检测和机体免疫相关反应及其产物的检测。
一、全菌体为基础的病原微生物学检查技术与其它传染性疾病相同，从检测原理和临床检验目的上，结核病的病原微生物学检查，分为基于形态学的显微镜镜检、基于微生物表型的分离培养、药物敏感性实验和菌种鉴定实验。
1. 分枝杆菌形态学检查——抗酸染色镜检：是结核病临床诊断最基本的方法之一，简单快速，在不考虑生物安全防护的前提下，２-４小时即可发报告，对于结核病的诊断、指导和评价临床用药具有重要意义。
结核病实验室诊断技术新进展
染者全血或单个核 细胞体 外 ３ ℃ 孵育过 夜 ， 定致敏 Ｔ细 ７ 测
胞 受抗原刺激后 ＩＮ一 释放水平 ， 而判 定是否有 ＭＴ Ｆ 从 Ｂ感 染。Ｉ Ｒ Ｇ Ａ的刺激抗原分 为 Ｐ Ｄ和特 异 ＭＴ Ｐ Ｂ抗原 两类。前 者存在 的缺 点与 Ｔ相 同 ， 不能 区分 出 Ｍ Ｂ潜伏感 染者与 Ｔ
一
酸杆菌均可着色， 需进一 步试验才可确 定是否为结核 菌。此
方 法 由于检 测 原 理 的 限制 ， 不可 能 出现 突破 性 的进 展 。
１２ 痰结核 菌常规培 养法 是 鉴定死 茵活菌的 “ 标 准” ． 金 。
缺 点 是 时 间 长 ， ２—８周 才 能报 出 结 果 ， 敏 感 性 低 ， 片 需 且 涂
采用双重皮试法 ， Ｐ Ｄ引起 的反 应扣 除迟发致敏素 引起的 将 Ｐ 反应后作 出诊 断， 一定程度上提 高了Ｐ Ｄ的特性。 Ｐ ２ ２ ２ ＩＮ一 释放试验（Ｇ Ｕ） 即用 ＭＴ ．． Ｆ Ｉｒ Ｂ抗原与 可疑感
性水平。这项试验通 常在痰结核茵培养的基础上进行 ， 需 故
菌素（ Ｔ 和第二代 纯蛋 白衍 生物 （ Ｐ ， Ｐ Ｏ） Ｐ Ｄ） Ｐ Ｄ是 Ｏ Ｔ滤液的 沉淀物 ， Ｏ 比 Ｔ的效价更稳 定， 有更 高的敏感性和特异性 。近
一
个世纪来， ｓ Ｔ Ｔ一直是诊 断 Ｍ Ｂ感染 的传 统方 法之 一， Ｔ 常
用于辅助诊 断 Ｍ Ｂ感染、 Ｔ 筛选 Ｂ Ｇ接 种对 象、 Ｃ 了解接种效果、 作流行病 学调 查等。但 由于 Ｐ Ｄ 中的 大多数蛋 支 Ｔ 杆 菌感染及 Ｂ Ｇ接种方面还存在特异性差的问题 ， Ｃ 以及 １％ ０
１４ 分支杆菌菌种鉴定 利 用分子 生物 学技 术可精 确地鉴 ． 定分支杆菌的不同菌种， 操作复杂。 但 １５ 痰结核菌快速培养 系统 ２ ． ０世纪 ７ ０年代发展 的一种 新的结核病细菌学检查 方法。该 系统根 据分 支杆 菌生长 时
结核病实验室诊断技术PPT课件
结核病实验室诊断技术
医者人之司命，如大将提兵，必谋定而后战。
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结核病 — 全球的公共健康问题（2018报告）
全球范围内，结核病是导致死亡的十大原因之一，每年有数百万人患上结核病。2017年， HIV阴性人群中，结核病导致约157万人死亡;而且在HIV阳性人群中，也有30万人死于结核。 2017年，估计有1000万人新感染结核:中国估计有88.9万人新感染结核。
• 菌株是革兰氏阳性菌，很难被染色，有 些甚至不能被染色，细胞壁含60%脂质， 一般用萋尼（Ziehl-Neelsen）抗酸染色法
• 棒状，无运动能力，专性需氧 • 生长缓慢 • 每16-20小时分裂一代，需4-6周才能长成
菌落。 由于结核分枝杆菌的遗传特性决定其生长
周期长，致使常规细菌学检查方法存在着灵 敏度低、操作复杂，需时间较长和影响因素 较多，不易标准化等缺陷，使细菌学诊断发 展缓慢，无法充分满足临床诊断的需要。
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抗原MPT-64
耐多药 泛耐药
细菌学检查
• 结核病人的细菌学检查不8 仅是发现传染源的主 要途径和手段，也是结核病确诊和制订化疗方 案，考核疗效、评价治疗效果的可靠标准。
• 涂片法 抗酸染色 荧光染色 液基夹层杯
• 培养法 改良罗氏培养 液体培养（BD960)
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细菌学检查-涂片法
抗酸染色
总体而言，90%的结核患者是成年人(≥15岁);9%同时伴随HIV感染(其中有72%是在非洲); 三分之二的结核患者来自8个国家:印度(27%)、中国(9%)、印度尼西亚(8%)、菲律宾(6%)、 巴基斯坦(5%)、尼日利亚(4%)、孟加拉国(4%)和南非(3%)。全球病例中只有6%出现在欧洲 地区(3%)和美洲地区(3%)。
结核病的实验室诊断方法
结核病的实验室诊断方法结核病实验室检查主要有；涂片染色显微镜检查、分枝杆菌分离培养、分枝杆菌药物敏感性试验、分枝杆菌菌种鉴定、分枝杆菌基因分型、分枝杆菌血清学及核酸扩增检测等。
细菌学检查细菌学检验结果的准确性首先取决于标本的质量。
正确地采集、转送标本，是直接影响检验结果的重要因素和取得准确结果的前提。
各种标本(痰液、血液、伤口分泌物和各种感染组织等)采集时应充分考虑到选择恰当合理的时问，考虑到可能存在的病原菌的性质，按要求采集标本，这样可使标本包含细菌，并为后续检验步骤打下良好的。
合格的痰标本在低倍镜视野里上皮细胞应<10个，白细胞数应>25个。
涂片染色显微镜检查根据我国结核病防治规划的要求，对咳嗽、咳痰>13周或有咯血或血痰的肺结核可疑症状者，应留取3份痰标本(夜间痰、清晨痰和即时痰)进行痰涂片抗酸染色检查。
即时痰为病人就诊时咳出的痰液：清晨痰为清晨深咳出的痰液；夜间痰为就诊前1天晚睡前咳出的痰液。
留取的痰液标本常规涂片后，进行要尔－尼尔逊氏染色法(ziehl-Neelen)染色。
分枝杆菌分离培养结核分枝杆菌是兼性需氧菌，最适生长温度为37℃，最适pH为6.5～7.2。
分枝杆菌分离培养检查法，是结核病确诊最可靠的方法。
是获得纯培养物进行菌种鉴定、药物敏感性试验以及其他生物学研究的。
当前，我国普遍采用改良L-J(改良罗氏)培养基来分离培养结核分枝杆菌。
通常情况下，当每1ml标本中微生物含量达102～3CFU(菌落形成单位)时，即可培养阳性。
分枝杆菌快速培养检查是使用分枝杆菌快速培养仪(MIGT、BacT/A1err、ESP)，通过测定细菌生长代谢检测分枝杆菌生长情况的方法。
在进行分枝杆菌快速培养检查时，标本接种前的祛污染处理，必须严格按照系统说明书中给定的方法进行。
孵育检测过程中系统报告阳性时，相应标本的培养液必须首先进行抗酸染色镜检，发现抗酸菌后方可发出阳性报告。
分枝杆菌药物敏感性试验分枝杆菌药物敏感性试验对于结核病人合理的药物选择、合适的药物剂量以及针对耐药病人的预防控制具有积极的作用。
结核病的实验室诊断分析
率较高，此技术已趋向淘汰
瓶外检测技术
瓶内检测技术 易导致污染及生物安全问题
15－21天
不详
无药敏试剂提供
只有3种一线药物
BACTEC ? MGIT? 960/320
指示器系统
阴性培养2 O2
CO2 O2 CO2
O2 O2
FFFOOF22OFF2FOO22FFFOO22
? 1882年由德国医生Koch发现。 ? 结核分枝杆菌属于厚壁门、裂殖菌
纲、放线菌目、分枝杆菌科、分枝 杆菌属。 ? 分枝杆菌复合群共包括人型、牛型、 非洲型和田鼠型，而人型结核分枝 杆菌是人类主要的致病菌。
2018/6/17
GDTB
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结核分枝杆菌 (M.tuberculosis)
生物学主要特点： 1. 细胞壁中含有大量 脂质 2.引起的疾病都呈慢性， 并伴肉芽肿 3.抗酸染色阳性
生长特点：
生长缓慢，繁殖一代在人工培养基内 约需要15～20小时，在静脉感染未经 免疫小鼠肺中约需要15小时，在巨噬 细胞内约需要15～20小时，在家兔角 膜中约需要20～22小时。
实验室检查方法的历史
1880s
1900s 1920s
1930s 1940s 1950s
Tubercle bacilli 的发现 Ziehl-Neelsen 染色方法 Mantoux test (TST with tuberculin) Petragnani medium Purified Protein Derivative （PPD ） Lewenstein-Jensen 培养基 Dubos agar, Ogawa 培养基 Middlebrook 7H9
结核病的实验室诊断
主要内容
1 结核病的流行情况 32 结核病的病原学 3 结核病的实验室诊断 34 结核病的分子药敏