JM109感受态细胞使用说明
JM109,DH5a,BL21等这些感受态有何区别
JM109，DH5a，BL21这些感受态有何区别1：DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS ，Camr4：JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’5：TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型：F- ，mcr AΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)，φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697，galU ，galK ，rps，(Strr) endA1，nupG6：HB101菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-1M110或SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GA TC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。
JM109,DH5a,BL21,TOP10等感受态的区别
JM109，DH5a，BL21，TOP10等感受态的区别相关搜索: 感受态, TOP本帖最后由 wwwkkk83 于 2009-6-4 16:32 编辑1:DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β,半乳糖苷酶氨基端实现α,互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12:BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:F-，ompT， hsdS(rBB-mB,)，gal， dcm(DE3)3:BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:F-，ompT hsdS(rBB-mB,)，gal， dcm(DE3，pLysS ，Camr4:JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α,互补，从而显示β,半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型:recA1，endA1，gyrA96，thi,1，hsdR17，supE44，relA1，Δ(lac,proAB)/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]5:TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
TransEasy TM 超高效感受态细胞制备试剂 说明书
使用说明书TransEasy TM超高效感受态细胞制备试剂盒产品套装编号：U0201A / U0201B / U0201C产品成分包装规格储存条件Solution A1×1ml-20ºC保存。
1×10ml1×50mlSolution B1×1ml-20ºC保存。
1×10ml1×50mlpUC19(10 pg/μl) 1×50μl-20ºC保存。
产品概述本试剂盒是在制备高效感受态细胞的标准方法上结合了一步法制备感受态细胞的方法，既可以一步制备超高效的感受态细胞，又可把常态细胞（包括新鲜培养的菌液,新鲜的或4ºC放置数月的培养基菌落,甘油菌种保存液等）快速制备成感受态细胞。
产品特点一步超高效感受态细胞制备方法快速感受态细胞制备方法(细胞转化液)1. 转化率高：所制备的感受态细胞转化率可达109cfu/µgpUC19 DNA（转化效率根据大肠杆菌细胞系及转化用DNA不同稍有差异）。
2. 操作简单：只需离心一次即可完成感受态细胞的制备。
3. 产率高：制备的感受态细胞数量比普通方法多一倍。
4. 稳定性好：所制细胞在-80ºC保存一年以上，其转化率几乎不会降低。
1. 转化率适中：使用10ng质粒转化一般能得到上万个转化子，效率在105到107cfu/μg质粒之间。
2. 操作简单快捷：不需专门制备感受态细胞，可直接使用常态细胞进行质粒转化，随用随配，整个操作过程在一个1.5ml离心管中即可完成。
3. 设备要求低：无需冷冻离心机和恒温摇床，菌种无需过夜培养，最短只需1小时培养时间。
用户需准备的试剂（相关配置见附录）S.O.B培养基（含有20mM Mg2+）液氮或者乙醇干冰S.O.C培养基LB平板（含有抗生素）用户需准备的设备温控摇床离心机（大量制备需冷冻离心机）超净工作台水浴锅分光光度计（可见光）感受态细胞制备操作流程方法一：一步超高效感受态制备方法1.接种从-80ºC冰箱中取出冻存的甘油菌，直接挑取部分菌液（无需解冻）接种于含100ml S.O.B培养基（含相应抗生素）的500ml三角瓶中，也可挑取已经划线纯化的新鲜单菌落接种于S.O.B培养基中，或者将已隔夜摇好的母液按照1:100比例接种于S.O.B培养基中，以上三种接种方法可以根据需要自主选择（直接从冻存的细菌原种接种培养的细菌，所得到的转化效率高于使用连续传代、4ºC或室温贮存的培养物）。
JM109-DH5a-BL21感受态的区别
JM109，DH5a，BL21感受态的区别 ...1：DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，p hoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RN A聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS ，Camr4：JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，p roAB+，lacIq，lacZΔM15]5：TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)，φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1 ，araΔ139Δ(a ra-leu)7697，galU ，galK ，rps，(Strr) endA1，nupG6：HB101菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，M110或SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。
JM109,DH5a,BL21感受态的区别
JM109,DH5a,BL21感受态的区别jm109，dh5a，bl21感受态的区别...1:Dh5a菌株dh5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
e.colidh5a在使用puc系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlaczδm15，δ（laczya argf）u169，deor，reca1，enda1，hsdr17（rk-，mk+），phoa，supe44，λ-，thi-1，gyra96，rela12：bl21(de3)菌株该菌株用于高效表达在含有噬菌体T7启动子的表达载体（例如pet系列）中克隆的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，整合在BL21的染色体上。
该菌株适合表达无毒蛋白质。
基因型：f-，ompt，hsds（rbb-mb－），gal，dcm（de3）3:BL21（DE3）plyss菌株该菌株含有质粒plyss，因此具有氯霉素抗性。
plyss含有表达t7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-、ompthsds（RBB MB-、gal、DCM（DE3、plyss、CAMR）4：jm109菌株该菌株经PUC系列质粒载体转化或m13phage载体转染后，载体DNA产生的lacza多肽与jm09δM15α-互补编码的lacZ具有β-半乳糖苷酶活性，易于鉴定重组菌株基因型：reca1，enda1，gyra96，thi－1，hsdr17，supe44，rela1，δ（lac－proab）/f’[trad36，proab+，laciq，laczδm15]5：前10位菌株该菌株适用于高效的dna克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型：F-，McrAδ（mrr-hsdrms-mcrbc），φ80，laczδm15△拉丁美洲ⅹ74，reca1，araδ139δ（ara leu）7697，galu，galk，rps，（strr）enda1，nupg6：hb101菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supe44，hsds20（rb-mb－），reca13，ara－14，proa2，lacy1，galk2，rpsl20，xyl-5，mtl-1，leub6，thi-1M110或scs110大多数大肠杆菌菌株中含有dam甲基化酶和dcm甲基化酶，前者可以在gatc序列中腺嘌呤n-6位上引入甲基，后者在cca/tgc序列的第一个胞嘧啶c-5位置上引入甲基。
JM109感受态细胞说明书
JM109 感受态细胞说明书1.感受态细胞必须用干冰运输，融化后的感受态细胞不能再冻结储存。
如果用户收到感受态细胞后发现泡沫箱中的干冰已经挥发殆尽，应予以拒收。
2.收到感受态细胞后应立即储存在-70℃以下的冰箱中，在6个月内使用不影响转化效率；感受态细胞不可反复冻融，不要与限制性内切酶等经常使用的分子生物学试剂放在一起，避免因温度的波动而影响的效率。
技术支持杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：E-mail:technical@，电话：400-0099-857。
产品介绍本公司生产的JM109感受态细胞是采用大肠杆菌JM109菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用DNA的化学转化。
经pUC19质粒检测，转化效率可达108cfu/μg。
每支感受态可以酌情分装使用，降低了实验的成本。
质量稳定，使用方便，质优价廉。
JM109菌株介绍基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi-1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac-proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]。
特点：本菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补，从而显示β-半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株。
质量标准1. 使用1 ng pUC19 Plasmid质粒DNA转化100 µl Competent Cells DH5α测试，产生的菌落数＞1×108 transformants/1µg pUC19 Plasmid 。
2. β-半乳糖苷酶、α-互补性的确认：对E.coli Competent Cells JM109使用pUC19 DNA进行转化后，在含有100 µg/ml的Ampicillin、40µg/ml的X-Gal的L-琼脂平板培养基上，产生蓝色菌落。
JM109,DH5a,BL21等感受态细菌特点及应用
1：DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coliDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株BL21菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS菌株BL21(DE3) pLysS菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS ，Camr4：JM109菌株JM109菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]5：TOP10菌株TOP10菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)，φ80，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697， galU，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG6：HB101菌株HB101菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-1。
高效JM109感受态细胞制备及转化条件的优化
高效JM109感受态细胞制备及转化条件的优化摘要：采用不同的转化液制备大肠杆菌（Escherichia coli）JM109感受态细胞，并进行pUC18质粒的转化，考察细菌生长状态、转化液、转化的热激时间和转化后所用培养基对转化率的影响。
结果表明，菌液A600 nm为0.705时采用TB转化液制备感受态细胞，在42 ℃热激45 s，转化后采用SOC培养基振荡培养，转化效率最高，可达8.59×108 CFU/μg质粒。
关键词：JM109；感受态细胞；转化效率Preparation and Transformation Conditions for Efficient JM109 Competent CellsAbstract：Competent cells of Escherichia coli JM109 were prepared by different transformation liquid，and pUC18 was transformed into the competent cells. The effects of different growth state of bacteria，transformation liquid，heat shock time and culture medium after heat shock on transformation efficiency were studied. The results showed that the highest transformation rate could be obtained by preparing the competent cells by TB transformation liquid when bacteria A600 nm was 0.705，heat shocked at 42 ℃for 45 s and then culturing in SOC medium. The transformation efficiency could reach to 8.59×108 CFU/μg plasmid.Key words：JM109；competent cell；transformation efficiency在自然条件下很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内，而人工构建的质粒载体一般缺乏此种转移所必需的mob基因，因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移；如需将质粒载体转移进受体细胞，需诱导受体细胞产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。
常用大肠杆菌感受态的区别
常用大肠杆菌感受态JM109，DH5a，BL21等的区别1：DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS ，Camr4：JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]5：TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)，φ80 ，lacZΔM15，△lac Ⅹ74，recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697，galU ，galK ，rps，(Strr) endA1，nupG6：HB101菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-17：M110或SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。
E.coli Electro-Cells JM109 说明书
E.coli Electro-CellsJM109使 用 说 明 书TaKaRa Code : D9022包 装 量Electro-Cells JM109 50 μl × 10 支Control DNA（pUC19，0.01 ng/μl） 10 μl × 1 支保 存 : -80℃制品说明用高电压脉冲电流瞬间击穿大肠杆菌，从而使外源DNA转入大肠杆菌内的转化方法称为电穿孔法。
电穿孔法是各种转化方法中效率最佳的方法之一，比经Ca2+处理而获得的感受态细胞的转化效率高。
在制作基因文库、进行亚克隆时，尤其在转化少量DNA时，特别能发挥其威力。
GenotyperecA1，endA1，gyrA96，thi-1，hsdR17，supE44，relA1，△(lac-proAB)/F’ [traD36，proAB+，lac I q，lacZ△M15]细胞种类α-互补性选择宿主 E.coli JM109E.coli JM109在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 Phage载体进行转染时，由载体DNA产生的LacZα多肽和由JM109 F’编码的lacZ△M15产生的ω Fragment结合，表现出β-半乳糖苷酶活性（α-互补性）。
利用这一特性，可以很容易鉴别重组体菌株。
携带有F’质粒的E.coli Competent Cells JM109，除可用于制作基因文库、进行亚克隆等之外，也可作为M13 phage载体DNA的宿主菌，制备单链DNA。
细胞浓度 : 1～2×1010 Bacteria/ml质量标准1. 使用10 pg的质粒DNA进行转化时：50 μl E.coli Electro-Cells JM109/10 pg pUC19 Plasmid＞1×109 transformants/μg pUC19 Plasmid。
2. F’质粒的稳定性检测对E.col i Electro-Cells JM109使用pUC19 DNA进行电穿孔法转化后，在含有100 μg/ml的Ampicillin、0.2 mM的IPTG、40 μg/ml的X-Gal的L-琼脂平板培养基上，产生的白色菌落在1％以下。
JM109(DE3)大肠杆菌使用说明
养。细菌在 30-‐35℃培养箱中培养 24-‐48h，真菌在 23-‐28℃培养箱中培养 24-‐72h
（必要时，可适当延长培养时间）。
菌 株 传 代 ：
将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量
增大接种量：如用无菌吸管吸取≥50μl 新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓
菌落进行后续操作。
冷 冻Байду номын сангаас管 开 封 ：
用浸过 75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌 株 复 溶 ：
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取 1ml 左右复溶液，加入到冷冻
管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌株复壮：
用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培
JM109(DE3)大肠杆菌
编号
名称
北京华越洋生物 NRR00980 JM109(DE3)大肠杆菌
基 本 信 息 ：
名称：JM109(DE3)大肠杆菌
规格：300ul 甘油菌
下进行菌种保藏。JM109（DE3）转化质粒采用的是 42℃热激处理的方法。
操作说明：
1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表
面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数
的增加，细菌的活力会逐渐下降。
2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆
贝 。 如 果 克 隆 至 载 体 上 的 基 因 包 含 了 核 糖 体 结 合 位 点 ， JM109（ DE3） 就
可以对位于 T7 启动子下游的基因序列进行高水平的表达。但是要注意的
JM109感受态的制备与转化
【材料 】
重组质粒及空载体质粒，JM109大肠杆菌感受态 细胞 ，1.5ml塑料离心管，离心管架，1-10 ul、 1000 ul、200ul枪头，9cm培养皿，一次性滤膜 （0.22um），大量碎冰
方法2 PEG介导的感受态细胞制备
【材料 】
重组质粒PUC-U6及空载体质粒PUC119， JM109大肠杆菌，1.5ml塑料离心管，离心管架， 1-10 ul、1000 ul、200ul枪头，9cm培养皿，一 次性滤器（0.22um），大量碎冰
【设备 】
微量移液器(2μl,200μl,1000μl)，高压蒸汽消 毒器(灭菌锅)，培养箱，恒温水浴锅，恒温摇 床，离心机， 超净工作台，双蒸水器，冰箱， 制冰机等。
E.COLI JM109感受态细胞的制备与转化
1.目的（1）掌握大肠杆菌感受态细胞的原理 和方法
（2）掌握制备大肠杆菌感受态细胞的
操作方法
实验原理:
感受态就是细菌吸收转化因子的生理状态，只有发展为感 受态的细胞才能稳定摄取外来的DNA分子。目前常用的感 受可态以细满胞 足制 一备 般方 实法验有的C要a求Cl2,制法备，出简的便感易受行态,且细其胞转暂化时效不率用完时全, 可加入占总体积15％的无菌甘油于-70℃保存(半年),因此 C细时a菌CCal2处2法+使于为细0使℃胞用的膜更C磷a广C脂l泛2低层。渗形C溶a成C液l液2法中晶制，结备菌构感体，受细使态胞位细膨于胞胀外的成膜原球和理形内是，膜：同间 隙中的部分核酸酶解离，诱导形成感受态细胞。待转化 DNA和Ca2+形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸盐复合物粘附于细胞 表面（羟基来源于细胞壁上的糖，磷酸来源于DNA），经 42℃短时间热激处理，细菌细胞膜的液晶结构发生改变， 出现许多间隙，通透性增加，促进细胞吸收DNA复合物。 在营养丰富的培养基上生长数小时后，受体细菌分裂增殖， 被转化到细菌细胞中的重组子基因得到表达，在选择性培 养基平板上，可筛选出所需的阳性转化子。
分子生物学实验2 大肠杆菌感受态细胞的制备
实验大肠杆菌感受态细胞的制备实验原理：转化是将异源DNA分子引入另一细胞系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段。
受体细胞一般是限制-修饰系统缺陷的变异株，经过CaCl2等化学试剂的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许带有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞。
经过转化的细胞在选择性培养基上，可以筛选出转化体，即带有外源DNA分子的受体细胞。
实验目的：学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞过程。
实验内容：JM109感受态细胞的制备、一、实验材料和试剂大肠杆菌JM109或DH5α，LB固体/液体培养基，0.1mol/LCaCl2溶液。
二、主要设备台式高速离心机，超净工作台，低温冰箱，恒温水浴锅，制冰机，分光光度计，微量移液器、恒温摇床，等。
三实验方法1.受体菌的培养从于37℃培养16-20小时的新鲜LB平板上挑取新活化单菌落，接种于3~5ml LB液体培养基中，37℃下振荡培养（300rpm）12小时左右，直至对数生长后期。
将该菌悬液以1：100~1：50（V：V）的比例接种于100ml LB液体培养基，37℃下振荡培养2~3小时至OD600=0.35～0.5左右。
2.感受态细胞的制备（1）在无菌条件下，将培养液转入预冷的1.5ml离心管中，冰上放置20min，使其停止生长。
（2）4℃下，4000rpm离心5min，弃去上清。
（3）加入0.75ml预冷的0.1mol/L CaCl2溶液悬浮细胞，冰上放置30分钟，4℃下4000离心5min。
（4）弃去上清，加入0.2ml预冷的0.1mol/L CaCl2溶液悬浮细胞，贮存于4℃备用。
或贮存于-70℃（加10-30%的甘油），可保存半年。
四.注意事项：1、整个实验都应在无菌的条件下操作。
2、整个操作均在冰上进行，不能离开冰浴，否则细胞转化率会降低。
JM109感受态细胞说明书
JM109感受态细胞说明书货号：C1300规格：10×100ul/20×100ul保存：-70℃保存，运输为干冰包装。
自收货之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6个月。
产品简介：JM109感受态细胞是采用大肠杆菌JM109菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。
使用pUC19质粒检测，转化效率可达108，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。
基因型：recA supE44endA1hsdR17gyrA96relA1thiΔ(lac-proAB)F’[traD36proAB+lacIq lacZ ΔM15]特点：一种琥珀抑制型F’重组缺陷菌株。
支持M13噬菌体载体的生长，对转染的DNA有修饰作用，但无限制作用。
该菌株中的F’带有lacZΔM15，后者使得与在λZAP中编码的β-半乳糖苷酶氨基端进行α-互补，可用于蓝白斑筛选。
操作方法：（以下各步骤均为无菌操作）1、将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以100ul感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA，注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置30分钟。
3、将离心管置于42℃水浴中放置60-90秒，然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟，注意不要摇动离心管。
4、向离心管中加入500ul无菌无抗的SOC或LB培养基，37℃180rpm振荡培养1小时。
目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培养12-16小时。
涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的DNA总量较多，可取100ul左右转化产物涂板；反之，如果转化的DNA总量较少，可取200-300ul的转化产物涂板。
过多菌液可以抑制细菌生长。
如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。
常用大肠杆菌感受态的区别
常用大肠杆菌感受态JM109，DH5a，BL21等的区别1：DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS ，Camr4：JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]5：TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)，φ80 ，lacZΔM15，△lac Ⅹ74，recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697，galU ，galK ，rps，(Strr) endA1，nupG6：HB101菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-17：M110或SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。
JM109,DH5a,BL21,TOP10等感受态的区别
JM109，DH5a，BL21，TOP10等感受态的区别相关搜索: 感受态, TOP本帖最后由 wwwkkk83 于 2009-6-4 16:32 编辑1:DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β,半乳糖苷酶氨基端实现α,互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12:BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:F-，ompT， hsdS(rBB-mB,)，gal， dcm(DE3)3:BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:F-，ompT hsdS(rBB-mB,)，gal， dcm(DE3，pLysS ，Camr4:JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α,互补，从而显示β,半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型:recA1，endA1，gyrA96，thi,1，hsdR17，supE44，relA1，Δ(lac,proAB)/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]5:TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
Stable化学感受态细胞使用说明
Stable化学感受态细胞Stable Chemically Competent CellStable感受态细胞基因型F' proA+B+ lacI q∆(lacZ)M15 zzf::Tn10 (Tet R) ∆(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ∆lacX74 galK16 galE15 e14- Φ80dlacZ∆M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (Str R) rph spoT1 ∆(mrr-hsdRMS -mcrBC)Stable感受态细胞说明：Stable菌株是NEB公司开发的高转化效率菌株，是逆转录病毒/慢病毒载体系统推荐使用的菌株，具有与Stbl2，Stbl3完全不同的基因型，但是表现出比Stbl2，Stbl3更优异的性能，特别适合慢病毒或具有末端重复序列DNA片段的克隆。
基因组含有重组酶recA1 rel A1突变，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；同时含有核酸酶endA1突变，避免了提取质粒过程中核酸酶的污染，大大提高了高纯度病毒质粒的产量和质量。
lacZΔM15的存在使Stable可用于蓝、白斑筛选，此菌株具有四环素和链霉素抗性，Stable 感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19检测转化效率>5×108cfu/μg DNA。
Stable感受态细胞优点及应用:1.与Stbl3相比，基因组含有endA突变，提高了病毒质粒的产量和纯度。
2.比Stbl3生长速度快，倍增时间是Stbl3的1.5倍。
3.基因组中含有fhuA突变，赋予其对噬菌体T1的抗性。
4.具有较高的转化效率，pUC19检测转化效率>5×108cfu/μg DNA。
5.基因组中含有lacZΔM15，可用于蓝白斑筛选实验。
6.特别适合于不稳定DNA片段的克隆，及逆转录病毒/慢病毒载体的构建和扩繁。
Stable感受态细胞操作方法:1. Stable感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，6分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
JM109感受态细胞说明书
JM109 感受态细胞说明书1.感受态细胞必须用干冰运输，融化后的感受态细胞不能再冻结储存。
如果用户收到感受态细胞后发现泡沫箱中的干冰已经挥发殆尽，应予以拒收。
2.收到感受态细胞后应立即储存在-70℃以下的冰箱中，在6个月内使用不影响转化效率；感受态细胞不可反复冻融，不要与限制性内切酶等经常使用的分子生物学试剂放在一起，避免因温度的波动而影响的效率。
技术支持杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：E-mail:technical@，电话：400-0099-857。
产品介绍本公司生产的JM109感受态细胞是采用大肠杆菌JM109菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用DNA的化学转化。
经pUC19质粒检测，转化效率可达108cfu/μg。
每支感受态可以酌情分装使用，降低了实验的成本。
质量稳定，使用方便，质优价廉。
JM109菌株介绍基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi-1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac-proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]。
特点：本菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补，从而显示β-半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株。
质量标准1. 使用1 ng pUC19 Plasmid质粒DNA转化100 µl Competent Cells DH5α测试，产生的菌落数＞1×108 transformants/1µg pUC19 Plasmid 。
2. β-半乳糖苷酶、α-互补性的确认：对E.coli Competent Cells JM109使用pUC19 DNA进行转化后，在含有100 µg/ml的Ampicillin、40µg/ml的X-Gal的L-琼脂平板培养基上，产生蓝色菌落。
JM109(DE3)化学感受态使用说明
JM109(DE3)化学感受态JM109(DE3) Chemically Competent CellJM109(DE3)化学感受态细胞基本信息：JM109(DE3)基因型:endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Δ(lac-proAB) e14- [F' traD36 proAB+ lacIqlacZΔM15] hsdR17(rK-mK+) + λ(DE3)JM109(DE3)菌株介绍：JM109(DE3)菌株源自于JM109,它含有T7RNA聚合酶基因的染色体拷贝。
如果克隆至载体上的基因包含了核糖体结合位点，JM109(DE3)就可以对位于T7启动子下游的基因序列进行高水平的表达。
但是要注意的是JM109(DE3)不能用于蓝白斑实验，JM109(DE3)采用经常使用的LB培养基，在37℃有氧的条件下培养，然后使用20%甘油，在-80℃的条件下进行菌种保藏。
JM109(DE3)转化质粒采用的是42℃热激处理的方法。
JM109(DE3)使用说明1、本产品采用干冰运输，收到后请直接冻存于-80℃冰箱。
2、取冻存于-80℃的100μl感受态细胞于冰上融化；3、加入1μl纯质粒，轻轻吹打混匀，冰浴30min；4、将菌液放入42℃水浴中热激45sec，立即放入冰浴中2min；5、加入900μl SOC/LB培养基，于37℃恒温摇床上150rpm×45min温育；6、将菌液5000rpm×5min离心，弃尽上清；7、取100μl新鲜LB培养基将菌体打散，均匀涂布于对应抗性平板表面；8、平板可先正向37℃放置1h,待液体吸收完毕，再倒置37℃培养过夜。
JM109(DE3)注意事项1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、本产品仅可用于实验室研究，不能用于动物，人体以及作为食品添加剂等用途。
3、混入质粒或连接产物时应轻柔操作，感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
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JM109感受态细胞使用说明
货号：C1300
规格：10×100ul/20×100ul
保存：-70℃保存，运输为干冰包装。
自收货之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6个月。
产品简介：
JM109感受态细胞是采用大肠杆菌JM109菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA 的化学转化。
使用pUC19质粒检测，转化效率可达108，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。
基因型：recA supE44endA1hsdR17gyrA96relA1thiΔ(lac-proAB)F’[traD36proAB+ lacIq lacZΔM15]
特点：一种琥珀抑制型F’重组缺陷菌株。
支持M13噬菌体载体的生长，对转染的DNA有修饰作用，但无限制作用。
该菌株中的F’带有lacZΔM15，后者使得与在λZAP中编码的β-半乳糖苷酶氨基端进行α-互补，可用于蓝白斑筛选。
操作方法：（以下各步骤均为无菌操作）
1、将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以100ul感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA，注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置30分钟。
3、将离心管置于42℃水浴中放置60-90秒，然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟，注意不要摇动离心管。
4、向离心管中加入500ul无菌无抗的SOC或LB培养基，37℃180rpm振荡培养1小时。
目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培养12-16小时。
涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的DNA总量较多，可取100ul左右转化产物涂板；反之，如果转化的DNA总量较少，可取200-300ul的转化产物涂板。
过多菌液可以抑制细菌生长。
如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。
涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的平板。
注意事项：
1、收到感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。
2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。
3、转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。
转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。
4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量
5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失将到最低。