西昌学院基础生物实验中心

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三、【实验原理】
• 层析是利用混合物各组分物理化学性质 （如：溶解度、吸附能力、电荷和分子量
等）的差别，使各组分在支持物上集中分 布在不同区域，借此将各组分分离。
• 层析系统分为两个相：固定相和流动相。
由于各组分受固定相的阻力和受流动相的
推力影响不同，各组分移动速度也各异，
从而使各组分得以分离。此法首先用于有
师批准，严禁携带出室外，有毒物品尤
其如此。借物必须整办理课理件 登记手续。
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实验一 氨基酸的分离鉴定 -----纸层析法
一、【实验目的】 • 学习纸层析的基本原理，掌握氨基酸分离
鉴定的操作技术，学会分析未知样品。 二、【实验仪器与材料】 • 层析缸；喷雾器；层析滤纸；扩展剂；氨
基酸溶液；显色剂
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据操作方式不同分为：柱层析、薄层层析
和纸层析等。 整理课件
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• 纸层析法：以滤纸为载体，滤纸上吸附着
水（约含20%—22%）是经常用的固定
相，此类有机溶剂如醇、酚等为常用的流
动相。把欲分离的物质加在纸的一端，使
流动溶剂经此移动，这样就在两相间发生
分配现象。由于物质分配系数的不同，就
逐渐在纸上集中于不同的部位。在固定相
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3、整洁： 实验台面必须保持整洁， 仪器药品要井然有序，公用试剂用毕，应立 即盖严放回原处，勿使药品试剂撒在实验台 面和地面。
实验完毕，需将药品试剂排列整齐，仪 器要洗净倒置放好。
全体同学由班长安排轮流值日，负责当 天实验室卫生、安全和一些服务性工作，经 教师验收合格后，方可离开实验室。
中分配趋势较大的成份，随流动相移动的
速度就慢；反之，在流动相分配趋势较小
的成分，移动速度就快。
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• 物质在纸上移动的速度可以用Rf表示：
色斑中心至原点中心的距离 Rf = ──────────────
溶剂前缘至原点中心的距离
• 物质在一定溶剂中的分配系数是一定的， 故移动速率（Rf值）也恒定，因此，可 以根据Rf值来鉴定被分离的物质。
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• 纸层析法按操作方
法分成两类，即：
垂直型和水平型。
垂直型是将滤纸条
悬起，使流动相向
上或向下扩散；水
平型是将圆形滤纸
置于水平位，溶剂
由中心向四周扩散。
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• 如果样品成分较多，而且彼此的Rf 值相 近，单向层析分离效果不佳，可用双向层 析法，即在长方形或方形滤纸的一角点样， 卷成圆筒形，先用第一种溶剂系统展开， 展开完毕吹干后转90º，再放于另一种溶 剂系统中，向另一方向进行第二次展开， 如此各成分分离较为清晰。
4、掌握精髓：科学的精髓是实事求是、敢于探
索、善于创新的精神，要对实验中出现的一切 反常现象进行讨论，并大胆提出自己的看法。
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二、 生化实验室规则和要求
1、预习： 课前要预习实验教材，了 解实验目的、原理，熟悉操作规程。
2、秩序： 自觉遵守纪律，维护教学 秩序，不准迟到、早退，保持安静， 严禁谈笑打闹，听从教师指导，未 经教师同意，不得随意离开实验室。
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生物化学实验
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1ຫໍສະໝຸດ Baidu
一、 实验目的
生物化学是一门实验性学科，是生物
系专业基础课程。它的作用是为生物其他 学科提供必要的生物化学基础知识，通过 与各课程相配合的实验使学生受到有关生 物化学的基础实验技术训练，并验证与加 深理解课堂讲授内容，同时与应用测定技 术相结合，使学生扩大生化实验的应用范 围，提高分析问题解决问题的能力。
色物质的分离，故又整理称课件色层析法。
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• 层析法是近代生物化学最常用的分析法之 一，此法可以分离性质极为相似、而用一
般化学方法难以分离的各种化合物，如各 种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。
• 层析法有多种类型，根据所用两组分不同
分为以下几类：吸附层析、分配层析、离
子交换层析、凝胶层析和亲和层析等；根
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4、节约： 使用仪器、药品、试剂 及各种物品必须厉行节约，并节约水电。 应特别注意保持药品和试剂的纯净，严 防混杂、乱用和污染。
使用和洗涤仪器应小心仔细，防止
损坏，贵重仪器使用前应熟悉使用方法， 严格遵守操作规程，严禁随意开动，发 现故障后应立即报告指导教师，不要自 己动手检修，如有损坏按学校规定赔偿。
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5、安全：时刻注意防火、防水、防 电、防危险品、防事故，以免发生意外。
实验室内严禁吸烟。
使用乙醚、苯、乙醇、丙酮等易燃品 时，不允许在电炉、酒精灯上直接加热。
如有危险发生，应首先关掉电源；有 机溶剂着火时，勿用水泼，以免扩大燃 烧面积，可用沙土、灭火器具灭之。
实验室内一切物品未经本室负责教
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• 四、【主要内容】
• 1．将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的 层析缸中。
• 2．取层析滤纸(长22cm、宽14cm)一 张。在纸的一端距边缘2~3cm处用铅笔 划一条直线，在此直线上每间隔2cm作 一记号
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• 3．点样 用毛细管将各氨基酸样品分别点在这 6个位置上，干后再点一次。每点在纸上扩散 的直径最大不超过3mm。
• 4．扩展 用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能 接触。将盛有约20mL扩展剂的培养皿迅速置
于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中 (点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线 1cm)。待溶剂上升15~20cm时即取出滤纸，
用铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风
机热风吹干。
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• 5．显色 用喷雾器均匀喷上0.1％茚三酮 正丁醇溶液然后置烘箱中烘烤5分钟 (100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑 点。
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三、课时安排
本实验总学时数为30学时 每次实验3学时
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实验室要求
一、 实验课的目的
1、加深理解：加深对生物化学基本理论的理解。
2、掌握技术：掌握生物化学的基本实验方法和
实验技术（四大基本技术：离心、电泳、层析、 比色）及分子生物学的一些基本技术和方法。
3、培养能力：培养学生的思维能力、动手能力 和表达能力。
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二、实验要求
生化实验通过学习滴定，比色，层
析，电泳等生化制备基础实验技术，以 及实验方法，操作技术，仪器的使用， 来分析生物体中糖，蛋白质，核酸，酶， 维生素等生化物质及代谢过程，培养学 生具有初步的科学使用能力及严格的科 学作风，掌握基本的生化研究技能为深 入各学科研究打下良好基础。
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