甘露寡糖

甘露寡糖(Mannose-oligosaccharides,MOS)

1.范围

本标准规定了甘露寡糖的术语和定义、产品分类要求、实验方法、检测规则、标准包装、运输和贮存等。

本标准适用于从酵母培养细胞壁中提取的一类新型抗原活物性物质的生产、检验和销售。

2．规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是

否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。

GB/T602 化学试剂杂质测定用标准溶液的制备

(GB/T602-2002,ISO63531:1982,NEQ)

GB/T603 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备

(GB/T603-2002,ISO6353-1:1982,NEQ)

GB/T5917.1 饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法

GB10648 饲料标签

GB/T14699.1饲料采样(GB/T14699.1-2005,ISO6497:2002,IDT)

3. 术语和定义

下列术语和定义适用于本标准

3.1

甘露寡糖(Mannose-oligosaccharides,MOS)

甘露寡糖又称为甘露低聚糖，是从酵母培养细胞壁中提取的一类新型抗原活性物质，广泛存在于魔芋粉、瓜儿豆胶、田菁胶及多种微生物细胞壁内。与β-葡聚糖为同一工艺开发的一种新的产品，其来源于新鲜的食品啤酒酵母。它是一种多糖，主要化学结构β-1，3葡聚糖和β-1，6葡聚糖，其中前者具有抗肿瘤性质，而且能够极大地提高人体自然免疫力。

3.2甘露寡糖含量

甘露寡糖含量为≥15%

4. 产品分子量

甘露寡糖结构分子示意图

5. 要求

5.1 感官要求

粉状低聚木糖颜色为浅黄色，具有特有的甜味、香气，无异味，无正常视力可见异常。

6. 检测方法

6.1 原理

甘露寡糖经酸水解后形成甘露糖，甘露糖经衍生化后注入高效液相色谱柱进行色谱分离，在245nm波长处用紫外检测器检测甘露糖

的含量。

6.2 试剂

6.2.1 甘露糖标准品

6.2.2 苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）

6.2.3 甲醇

6.2.4 乙腈

6.2.5 三氟乙酸

6.2.6 37%盐酸

6.3 仪器设备

6.3.1 高效液相色谱议

6.3.2 色谱柱：5um,150mm*4.6mmLD。

6.4 试样的制备

6.4.1 甘露寡糖的水解

将400mg样品放入一个由耐热玻璃制的带塞的小试管中，加入6.0mL盐酸（37%），小心的将小瓶盖紧后用旋涡混合器混合，得到均一的悬浮液。将小瓶放入30℃水溶中处理45min,每15min用旋涡混合器震荡混合一次。然后将悬浮物定量的转移到200mL杜氏瓶中（同时用约140-160mL的水洗涤后倒入瓶中），将瓶子放入高压灭菌锅121℃处理6.min.完成后马上冷却，将溶液玻璃PH到6—7，然后定容至200mL。将液体过滤后弃去初滤液10Ml,滤液各用待测。

6.4.2 标准单糖混合液的衍生

称取甘露糖约0.1018g，溶于7.5mL 0.3mol/LNaOH溶液中，取该

溶液75uL现50uL0.5mol/LPMP甲醇溶液混合在70℃下反应30min,冷却至室温加入75uL0.3mol/LHCI进行中和，中和后的溶液放入真空干燥箱中，于100℃下烘干。洪干后的物质用1mL，的水及1mL的氯仿溶解，充分振荡后除去有机相。重复3次，水相溶液经0.45um滤膜过滤后用水稀释至适当浓度，置于冰箱中保存备用。

6.4.3 样品的制备

取甘露寡糖水解液100µL直接进行衍生化反应，步骤同标准单糖混合液的制备。

6.4.4 HPLC 条件

流动相100mmol/L磷酸盐缓冲溶液（pH6.0）-乙腈（体积比为78/22）,等度洗脱，流速1mL/min；紫外检测波长245nm,进样量10µL 注温：室温。

6.5操作步骤

按上述色谱条件，分别取对照品游泳及供试品溶液注入高效液相色谱议进行测定。

6.6 结果计算

X(%)=(A×CO×V) ×0.9×100%/A0×m

式中：X—供试品中甘露寡糖的含量，%；

A—样品的峰面积；

A0—标准品的峰面积；

CO—标准品的进样分析浓度，g/mL；

V—供试品处理后的体积，mL；

M—供试品称取和质量，g；

0.9—甘露糖与甘露寡糖的换算系数。

6.7 精密度

取对照品溶液，连继进样5次，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于5%。