免疫组化临床应用PPT课件
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免疫组化PPT课件
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未封闭内源性过氧化物酶
29
30
胃固有膜腺体
31
3．假阴性反应：
⑴ 组织固定不当或固定时间过长； ⑵ 抗体效价过低或久置失效； ⑶ 组织中抗原被粘稠基质或分泌物阻隔； ⑷ DAB或H2O2的浓度不当。
32
五、免疫组织化学在肿瘤诊断和鉴别诊断 中的应用
（一）在肿瘤诊断中应用免疫组织化学染色的原因： １在常规病理活检中,通常有５～１０％的疑难病例不能明确诊断。 ２形态结构相似的肿瘤可为不同的组织来源（如未分化癌和恶性
在病理学外检工作中可用于对不同来源，HE难以诊断的的肿瘤进行确诊 和鉴别诊断。
其基本原理是应用抗原与抗体接触后可形成“抗原－抗体复合物”的化学 反应，以检测组织或细胞内抗原（或抗体）的技术。
2
Immunohistochemistry
Esophageal carcinoma
E-cad + in membrane Wu Ming-Yao et al.
图8
图9
图10 免疫组化结果： 肿瘤细胞Vimentin（+）
图11免疫组化结果：
肿瘤细胞（CD117+）
58
59
60
61
62
63
64
抗原修复
从应用病理技术观点来看，福尔马林组织标本固定 术就像一把双刃剑：
福尔马林（10%甲醛溶液）是一经典的常规病理 诊断用组织样本固定剂，然而缺点是其对免疫组 织化学及原位杂交信号检测是有损害作用。
⑵ 背景染色低（相对）； ⑶ 双PAP敏感性更高，但背景相对较重。
12
（四）ABC法： 1981年美籍华人许世明发明了ABC法
Vector
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未封闭内源性过氧化物酶
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胃固有膜腺体
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3．假阴性反应：
⑴ 组织固定不当或固定时间过长； ⑵ 抗体效价过低或久置失效； ⑶ 组织中抗原被粘稠基质或分泌物阻隔； ⑷ DAB或H2O2的浓度不当。
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五、免疫组织化学在肿瘤诊断和鉴别诊断 中的应用
（一）在肿瘤诊断中应用免疫组织化学染色的原因： １在常规病理活检中,通常有５～１０％的疑难病例不能明确诊断。 ２形态结构相似的肿瘤可为不同的组织来源（如未分化癌和恶性
在病理学外检工作中可用于对不同来源，HE难以诊断的的肿瘤进行确诊 和鉴别诊断。
其基本原理是应用抗原与抗体接触后可形成“抗原－抗体复合物”的化学 反应，以检测组织或细胞内抗原（或抗体）的技术。
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Immunohistochemistry
Esophageal carcinoma
E-cad + in membrane Wu Ming-Yao et al.
图8
图9
图10 免疫组化结果： 肿瘤细胞Vimentin（+）
图11免疫组化结果：
肿瘤细胞（CD117+）
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抗原修复
从应用病理技术观点来看，福尔马林组织标本固定 术就像一把双刃剑：
福尔马林（10%甲醛溶液）是一经典的常规病理 诊断用组织样本固定剂，然而缺点是其对免疫组 织化学及原位杂交信号检测是有损害作用。
⑵ 背景染色低（相对）； ⑶ 双PAP敏感性更高，但背景相对较重。
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（四）ABC法： 1981年美籍华人许世明发明了ABC法
Vector
免疫组化标记物临床意义ppt课件
术(immunocytochemistry)。
• 显色剂
抗体
抗原
2
检查目的
• 1、确定细胞类型
• 2、辨认细胞产物
• 3、了解分化程度
• 4、鉴定病变性质
• 5、发现微小转移灶
• 6、探讨肿瘤起源或分化表型
• 7、确定肿瘤分期
• 8、指导治疗和预后
• 9、辅助疾病诊断和分类
3
4
大肠癌套餐
• (CEA)癌胚抗原 • P53蛋白 • nm23转移抑制基因 • Ki-67细胞增殖相关核抗原 • MRP多药耐药相关蛋白
主要表达于细胞增殖分裂的各个时期（G1、 G2、M、S期），但是在静息的细胞（G0期）
中不表达，常用于检测肿瘤细胞的生长指
数（免疫组化利用计算洗脑总数中的Ki-67 阳性细胞数所占比例得到Ki-67指数），反 映肿瘤细胞的增殖程度。
• 细胞增殖相关核抗原Ki-67在多种肿瘤及癌
前病变中均有异常表达，且与肿瘤的种植、
器官的腔面，以及体腔腔面。
• 肿瘤的命名：良性肿瘤一般称为瘤，来源于上
皮组织的恶性肿瘤称为癌，来源于间叶组织的 恶性肿瘤为肉瘤，既有癌又有肉瘤者称为癌肉 瘤。
• CEA阳性表达的提示大肠癌，阳性强度越高，6
P53蛋白
• P53基因可分为野生型和突变型，野生型是
抑癌基因，可以抑制肿瘤的增殖，但突变 型则起反作用。
浸润、转移潜能密切相关。
9
MRP
• MRP属ABC转运蛋白超家族成员，MRP基因
定位于16号染色体p13.1带上，由6500bp组 成，编码1531个氨基酸的跨膜糖蛋白，分 子量为190kD。耐药的发生与依赖ATP的谷 胱甘肽S结合载体（glutathione-Sconjugate carrier）活性提高的缘故，谷胱 甘肽S结合的输出载体又称为"GS-X泵"，它 可将阴离子的共轭物排泄出细胞，并在清 除外源性毒素中发挥作用。MRP能介导药物 中的谷胱甘肽硫共轭物、葡萄糖醛酸甙共 10
免疫组化应用PPT
详细描述
间接法提高了特异性，降低了非特异性染色，但操作步骤增多，需要更多的抗 体和试剂。
夹心法
总结词
夹心法是将标记的抗体置于两层非标记抗体之间，形成夹心 结构，以增加抗原抗体的结合量。
详细描述
夹心法增强了信号的强度和特异性，但操作复杂，需要更多 的抗体和试剂。
竞争法
总结词
竞争法是利用标记的抗原和未标记的抗原共同与组织抗体结合，竞争性地抑制未 标记抗原的结合。
05
03
1941年
Coons等人首次将荧光素标记的抗体 用于组织染色，开创了免疫荧光技术 。
04
1968年
peroxidase-antiperoxidase (PAP) 方法建立，成为免疫组化技术的经典 方法。
免疫组化技术的应用范围
01
02
03
04
05
肿瘤诊断与鉴别诊断
细胞来源与分化 状态鉴定
感染性疾病诊断
鉴别转移性肿瘤
通过检测肿瘤细胞是否表达某些特定抗原，可以 判断肿瘤是否转移以及原发部位。
肿瘤的分级与分期
分级诊断
根据肿瘤细胞的分化程度，利用免疫 组化技术检测特定蛋白的表达，对肿 瘤进行分级诊断。
分期诊断
通过检测肿瘤细胞浸润和转移的相关 蛋白，评估肿瘤的进展程度和扩散范 围，为制定治疗方案提供依据。
自身免疫病研究
药物靶点筛选与 作用机制…
检测肿瘤组织中的特异性 抗原，有助于肿瘤的分类 、分级和预后判断。
通过检测细胞表面的标记 物，确定细胞的来源、分 化程度和功能状态。
检测病原体抗原或抗体， 辅助诊断感染性疾病。
检测自身抗体，研究自身 免疫病的发病机制和病理 过程。
用于研究药物作用机制、 筛选药物靶点以及评估治 疗效果。
间接法提高了特异性，降低了非特异性染色，但操作步骤增多，需要更多的抗 体和试剂。
夹心法
总结词
夹心法是将标记的抗体置于两层非标记抗体之间，形成夹心 结构，以增加抗原抗体的结合量。
详细描述
夹心法增强了信号的强度和特异性，但操作复杂，需要更多 的抗体和试剂。
竞争法
总结词
竞争法是利用标记的抗原和未标记的抗原共同与组织抗体结合，竞争性地抑制未 标记抗原的结合。
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1941年
Coons等人首次将荧光素标记的抗体 用于组织染色，开创了免疫荧光技术 。
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1968年
peroxidase-antiperoxidase (PAP) 方法建立，成为免疫组化技术的经典 方法。
免疫组化技术的应用范围
01
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03
04
05
肿瘤诊断与鉴别诊断
细胞来源与分化 状态鉴定
感染性疾病诊断
鉴别转移性肿瘤
通过检测肿瘤细胞是否表达某些特定抗原，可以 判断肿瘤是否转移以及原发部位。
肿瘤的分级与分期
分级诊断
根据肿瘤细胞的分化程度，利用免疫 组化技术检测特定蛋白的表达，对肿 瘤进行分级诊断。
分期诊断
通过检测肿瘤细胞浸润和转移的相关 蛋白，评估肿瘤的进展程度和扩散范 围，为制定治疗方案提供依据。
自身免疫病研究
药物靶点筛选与 作用机制…
检测肿瘤组织中的特异性 抗原，有助于肿瘤的分类 、分级和预后判断。
通过检测细胞表面的标记 物，确定细胞的来源、分 化程度和功能状态。
检测病原体抗原或抗体， 辅助诊断感染性疾病。
检测自身抗体，研究自身 免疫病的发病机制和病理 过程。
用于研究药物作用机制、 筛选药物靶点以及评估治 疗效果。
《免疫组织化学技术》PPT课件
PTP课件
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双桥PAP法原理
• 该法是PAP法的改良法，通过两次连接桥 抗体和PAP，在抗原抗体复合物上结合比 PAP法更多的酶分子，形成Ag-Ab1-Ab2PAP-Ab2-PAP复合物，最后通过PAP复合 物中的HRP催化底物显色。
PTP课件
25
双桥PAP法技术要点
• （1）、（2）、（3）、（4）和（5）同 PAP法。
PTP课件
21
PAP法的原理
PTP课件
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PAP法技术要点
• （1）、（2）、（3）和（4）同间接法。 • （5）加PAP复合物，温育，使形成Ag-
Ab1-Ab2-PAP复合物，洗涤. • （6）加底物，光镜下观察显色结果。
PTP课件
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PAP法的方法评价
• PAP法未经化学交联，故避免了抗体和酶活性 的降低，并省去酶标记抗体需纯化的繁琐过程。 PAP是由2个抗酶抗体和3个过氧化物酶分子组 成的复合物，稳定性好，酶分子不易在染色冲 洗过程中脱落。PAP中不存在游离的免疫球蛋 白，不易产生非特异性染色，因而特异性、敏 感性和重复性良好，比直接染色法、间接染色 法和酶桥法更敏感。缺点是PAP复合物制备过 程较复杂。
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免疫组化技术要点
• 标本的制作 • 抗体的选择 • 温育 • 改善标本的透过性 • 设立对照试验 • 免疫组化的结果判断
PTP课件
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标本的制作
• 标本的类型
1.组织切片：①冷冻切片；②石蜡切片 2.印片 3.涂片
• 标本的固定 • 标本的保存 • 酶消化处理
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设立对照试验
• （6）加Ab2，温育，形成Ag-Ab1-Ab2PAP-Ab2复合物，洗涤。
免疫组化PPT精选课件
IgAN
FSGS
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● SLE 血浆 － 自身抗体种类多
肾组织 － 复合物中球蛋白和补体种类多、数量大、 范围广
皮肤 － 狼疮带
IgG
IgA
IgM 27
SLE
C3
C1q
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● 变态反应性血管炎（结节性多A炎、显微镜型多血管炎） IgG、IgM、IgA沉积 ANCA － CANCA（胞浆型） － 韦格纳肉芽肿 pANCA（核周型） － 显微镜型多血管炎等
4.单核巨噬细胞
CD16、CD23、CD32、CD115 酶类：α1抗胰蛋白酶、α1抗糜蛋白酶
溶菌酶
肺α1-ACT
肿瘤溶菌酶
肾小球MAC387+细22 胞
代表性疾病：
● 移植物排异反应 ● 甲状腺炎 ● 干燥综合征 ● 病毒性肝炎
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㈡ 抗体介导的变态反应性疾病
免疫球蛋白 － IgG、IgA、IgM、IgE、 λ、κ链
肝 HBsAg+
肝 HBcAg+
肝 HCV Ag+ 9
肾小球肾炎 （乙、丙型肝炎病毒）肾小球 HBcAg Nhomakorabea+
肾小管 HBcAg +
10
人类免疫缺陷病毒 乳头状瘤病毒
单纯疱疹病毒 巨细胞病毒 EBV病毒
人类T细胞病毒Ⅰ型 Ⅱ型
AIDS 病 湿疣（6，11型） 宫颈癌（16，18，31型） 宫颈癌 巨细胞病毒性肺炎等 Burkitt 淋巴瘤 鼻咽癌 传染性单核细胞增生症 急性T细胞白血病 蕈样霉菌病
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(一)物质基础
● 间质细胞群 － A壁平滑肌样细胞 肝星状细胞 肾小球系膜细胞 肺成纤维细胞
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● ECM
免疫组化技术ppt课件
免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗 体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋 巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合 杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体 是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从 动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋 巴细胞克隆所产生的抗体混合物。
免疫组化的作用
组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原， 如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、 受体、酶、激素、核酸及病原体等都可 用相应的特异性抗体进检测。
7、SP反应 • 加入SP后放入37度烤箱中30 min。 • 用PBS洗5次×5 min； 8、显色 • 加入DAB（快速滴入，观察染色情况，倒掉染 液），显色时间控制在约5 min（3～10 min）， 由镜下观察颜色控制时间。0.05％DAB（避光） （1:20储备液）：5 ul 20×DAB＋0.1 ul 30% H2O2＋95 ul PBS。1%DAB储备液的配制:50mg DAB+5ml 0.05 mol/L PBS充分溶解，-20 ℃保 存。
2、细胞通透、封闭内源性过氧化物酶 • 用封闭通透液浸润切片30 min（RT避 光）。配法是用预热40 ml PBS加120ul TritonX-100（曲拉通X-100又称清洁剂） 加热几分钟后，临用前加400 ul 30％ H2O2。 • PBS溶液洗3次×3 min。 3、抗原修复暴露抗原决定族 • 切片放入0.01 M柠檬酸钠缓冲溶液 （pH6.0）后，在微波炉里高火4 min至 沸腾后，再加热约6 min×4次，每次间 隔补足液体，防止干片
4、封闭非特异性蛋白 • PBS溶液洗3次×3 min； • 将切片取出,周围水分用滤纸吸干,用组化笔在组织周 围画上圈,在圆圈内组织滴入5%羊血清（与二抗来源 一致）后放入湿盒中,室温30（10～30）min； 5、一抗孵育 • 甩去切片上的羊血清,用滤纸擦干组织周围残留血清， 直接加入已稀释的一抗（1：250、500、1000）后， 放入湿盒中室温1小时，然后4度过夜，从冰箱中取出 需37 ℃复温45 min。 6、二抗孵育 • 将一抗倒掉并用PBS洗5 min×5次； • 用滤纸将圆圈周围的水吸去，加入已稀释的二抗后放 入37 ℃恒温烤箱中30 min（回收）。 • 用PBS洗5次×5 min；
免疫组化的作用
组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原， 如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、 受体、酶、激素、核酸及病原体等都可 用相应的特异性抗体进检测。
7、SP反应 • 加入SP后放入37度烤箱中30 min。 • 用PBS洗5次×5 min； 8、显色 • 加入DAB（快速滴入，观察染色情况，倒掉染 液），显色时间控制在约5 min（3～10 min）， 由镜下观察颜色控制时间。0.05％DAB（避光） （1:20储备液）：5 ul 20×DAB＋0.1 ul 30% H2O2＋95 ul PBS。1%DAB储备液的配制:50mg DAB+5ml 0.05 mol/L PBS充分溶解，-20 ℃保 存。
2、细胞通透、封闭内源性过氧化物酶 • 用封闭通透液浸润切片30 min（RT避 光）。配法是用预热40 ml PBS加120ul TritonX-100（曲拉通X-100又称清洁剂） 加热几分钟后，临用前加400 ul 30％ H2O2。 • PBS溶液洗3次×3 min。 3、抗原修复暴露抗原决定族 • 切片放入0.01 M柠檬酸钠缓冲溶液 （pH6.0）后，在微波炉里高火4 min至 沸腾后，再加热约6 min×4次，每次间 隔补足液体，防止干片
4、封闭非特异性蛋白 • PBS溶液洗3次×3 min； • 将切片取出,周围水分用滤纸吸干,用组化笔在组织周 围画上圈,在圆圈内组织滴入5%羊血清（与二抗来源 一致）后放入湿盒中,室温30（10～30）min； 5、一抗孵育 • 甩去切片上的羊血清,用滤纸擦干组织周围残留血清， 直接加入已稀释的一抗（1：250、500、1000）后， 放入湿盒中室温1小时，然后4度过夜，从冰箱中取出 需37 ℃复温45 min。 6、二抗孵育 • 将一抗倒掉并用PBS洗5 min×5次； • 用滤纸将圆圈周围的水吸去，加入已稀释的二抗后放 入37 ℃恒温烤箱中30 min（回收）。 • 用PBS洗5次×5 min；
《免疫组化技术》课件
特点
高灵敏度、高特异性、定位准确、可 定量分析等。
免疫组化技术的应用领域
肿瘤诊断与鉴别诊断
检测肿瘤标志物，辅助 临床诊断。
病理学研究
探索疾病发生、发展机 制，为新药研发提供依 据。
药物作用机制研究
研究药物作用靶点，评 估治疗效果。
生物医学研究
用于基因表达、蛋白质 定位等研究。
免疫组化技术的发展历程
结果解读的注意事项
排除非特异性染色
非特异性染色可能导致假阳性或假阴性结果， 需通过设立对照等方式排除。
结合临床资料
结合患者的临床资料，如病史、症状、体征等 ，综合分析免疫组化结果的临床意义。
参考相关文献和指南
查阅相关文献和指南，了解目标蛋白的表达与疾病的关系，提高结果解读的准 确性。
05 免疫组化技术的优缺点
抗原的修复与暴露
去除抗原的掩蔽作用，使 抗原暴露出来。
使用蛋白酶、抗原提取液 等。
热修复、酸修复等。
暴露方法 修复方法
目的
抗体孵育与洗涤
抗体选择
单克隆抗体、多克隆抗体等 。
孵育条件
温度、时间、抗体浓度等。
洗涤目的
去除未结合的抗体，减少非 特异性结合。
显色反应与复染
显色反应
酶促反应、化学反应等。
提高特异性
开发更特异的抗体或采用多重免疫组化技术 ，降低交叉反应的发生率。
增强结果稳定性
通过标准化实验操作和质控，确保实验结果 的稳定性和可靠性。
06 免疫组化技术的应用案例
肿瘤诊断与鉴别诊断
肿瘤诊断
通过免疫组化技术检测肿瘤组织中的 特异性抗原，有助于确定肿瘤的性质 和来源，为临床提供准确的诊断依据 。
19世纪末
高灵敏度、高特异性、定位准确、可 定量分析等。
免疫组化技术的应用领域
肿瘤诊断与鉴别诊断
检测肿瘤标志物，辅助 临床诊断。
病理学研究
探索疾病发生、发展机 制，为新药研发提供依 据。
药物作用机制研究
研究药物作用靶点，评 估治疗效果。
生物医学研究
用于基因表达、蛋白质 定位等研究。
免疫组化技术的发展历程
结果解读的注意事项
排除非特异性染色
非特异性染色可能导致假阳性或假阴性结果， 需通过设立对照等方式排除。
结合临床资料
结合患者的临床资料，如病史、症状、体征等 ，综合分析免疫组化结果的临床意义。
参考相关文献和指南
查阅相关文献和指南，了解目标蛋白的表达与疾病的关系，提高结果解读的准 确性。
05 免疫组化技术的优缺点
抗原的修复与暴露
去除抗原的掩蔽作用，使 抗原暴露出来。
使用蛋白酶、抗原提取液 等。
热修复、酸修复等。
暴露方法 修复方法
目的
抗体孵育与洗涤
抗体选择
单克隆抗体、多克隆抗体等 。
孵育条件
温度、时间、抗体浓度等。
洗涤目的
去除未结合的抗体，减少非 特异性结合。
显色反应与复染
显色反应
酶促反应、化学反应等。
提高特异性
开发更特异的抗体或采用多重免疫组化技术 ，降低交叉反应的发生率。
增强结果稳定性
通过标准化实验操作和质控，确保实验结果 的稳定性和可靠性。
06 免疫组化技术的应用案例
肿瘤诊断与鉴别诊断
肿瘤诊断
通过免疫组化技术检测肿瘤组织中的 特异性抗原，有助于确定肿瘤的性质 和来源，为临床提供准确的诊断依据 。
19世纪末
免疫组化实验方法ppt课件
非特异吸附，常用牛血清白蛋白 （5）防腐剂：微生物生长会干扰抗原抗体反应，稀释液和抗体液中加入
适量的叠氮钠或硫柳汞以防腐 （6）温度和时间：较高的反应温度（37℃）可加速抗原抗体结合反应，
低温有利于抗原抗体结合率的提高 （7）洗涤：除去未结合抗原或抗体，除去非特异性吸附造成的背景染色。
选用自来水、生理盐水或PBS等，加去污剂并在洗涤过程中加以振摇
免疫组化实验标本
• 组织标本（石蜡切片和冰冻切片）
• 细胞标本（组织印片、细胞爬片和细胞涂 片）。
• 石蜡切片对于组织形态保存好，且能作连 续切片，有利于各种染色对照观察；还能 长期存档；
3
火灾袭来时要迅速疏散逃生，不可蜂 拥而出 或留恋 财物， 要当机 立断， 披上浸 湿的衣 服或裹 上湿毛 毯、湿 被褥勇 敢地冲 出去
（4）切片经染色后，应及时观察并照相。切片在4℃ 冰箱内过夜，其荧光强度将减弱约30％。
（5）调整抗体稀释度以获得最佳染色效果，以背景 非特异性染色最小为标准，对每一批抗体必须试验 摸索，找出最佳稀释度。
（6）所购抗体应及早使用，尽量减少抗体溶液的冻 融次数。
11
火灾袭来时要迅速疏散逃生，不可蜂 拥而出 或留恋 财物， 要当机 立断， 披上浸 湿的衣 服或裹 上湿毛 毯、湿 被褥勇 敢地冲 出去
（2）非醛类固定剂：适用于多肽类激素的组织固定，常与戊二醛或多聚 甲醛混合使用。
（3）丙酸及醇类固定剂：沉淀蛋白质和糖，保存抗原性较好。但对低分 子蛋白质、多肽及胞浆内蛋白质的保存效果较差，和其它试剂混合使 用加以解决，如加冰乙酸、乙醚、氯仿、甲醛等。
3．常用的固定方法--浸入法和灌注法（适用于动物实验研究）
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火灾袭来时要迅速疏散逃生，不可蜂 拥而出 或留恋 财物， 要当机 立断， 披上浸 湿的衣 服或裹 上湿毛 毯、湿 被褥勇 敢地冲 出去
适量的叠氮钠或硫柳汞以防腐 （6）温度和时间：较高的反应温度（37℃）可加速抗原抗体结合反应，
低温有利于抗原抗体结合率的提高 （7）洗涤：除去未结合抗原或抗体，除去非特异性吸附造成的背景染色。
选用自来水、生理盐水或PBS等，加去污剂并在洗涤过程中加以振摇
免疫组化实验标本
• 组织标本（石蜡切片和冰冻切片）
• 细胞标本（组织印片、细胞爬片和细胞涂 片）。
• 石蜡切片对于组织形态保存好，且能作连 续切片，有利于各种染色对照观察；还能 长期存档；
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火灾袭来时要迅速疏散逃生，不可蜂 拥而出 或留恋 财物， 要当机 立断， 披上浸 湿的衣 服或裹 上湿毛 毯、湿 被褥勇 敢地冲 出去
（4）切片经染色后，应及时观察并照相。切片在4℃ 冰箱内过夜，其荧光强度将减弱约30％。
（5）调整抗体稀释度以获得最佳染色效果，以背景 非特异性染色最小为标准，对每一批抗体必须试验 摸索，找出最佳稀释度。
（6）所购抗体应及早使用，尽量减少抗体溶液的冻 融次数。
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火灾袭来时要迅速疏散逃生，不可蜂 拥而出 或留恋 财物， 要当机 立断， 披上浸 湿的衣 服或裹 上湿毛 毯、湿 被褥勇 敢地冲 出去
（2）非醛类固定剂：适用于多肽类激素的组织固定，常与戊二醛或多聚 甲醛混合使用。
（3）丙酸及醇类固定剂：沉淀蛋白质和糖，保存抗原性较好。但对低分 子蛋白质、多肽及胞浆内蛋白质的保存效果较差，和其它试剂混合使 用加以解决，如加冰乙酸、乙醚、氯仿、甲醛等。
3．常用的固定方法--浸入法和灌注法（适用于动物实验研究）
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火灾袭来时要迅速疏散逃生，不可蜂 拥而出 或留恋 财物， 要当机 立断， 披上浸 湿的衣 服或裹 上湿毛 毯、湿 被褥勇 敢地冲 出去
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，全身浅表淋巴结肿大1年，切除右 颈部淋巴结活检
鉴别诊断
* 套细胞淋巴瘤 * 滤泡性淋巴瘤，1级 * 小淋巴细胞淋巴瘤/慢性淋巴细胞性白血病 * 边缘区淋巴瘤
必须免疫组化分型来指导临床治疗
Bcl-2
CD20
CD3
CD5
Cyclin D1
最后诊断
* 套细胞淋巴瘤，经典型
滤泡性淋巴瘤：Bcl2染 色
某些抗原异常表达，提示肿瘤性病变
* ER+/PR+or ER-/PR- — 乳腺、子宫内膜等 * PTEN表达缺失 — 子宫内膜样腺癌等 * Κ+/λ-or Κ-/λ+or Κ-/λ- — 浆细胞肿瘤 * CD5+/CD43+的B细胞 — B细胞淋巴瘤 * CD10 +的T细胞 — T细胞淋巴瘤 * CD5-/CD7-的T细胞 — T细胞淋巴瘤
单纯疱疹病毒（HSV）
单纯疱疹病毒性食道炎
幽门螺杆菌（H.pylori Gastritis）
小结
免疫组化是病理科的常规辅助技术，如同临床医生依
赖B超、CT、MRI一样，对临床各类疾病的病理诊断、疾病 治疗与预后都有非常重要的意义！
浆细胞瘤： Κ+/λ-
未明原发部位转移癌的诊断
器官特异性抗体
* TG：甲状腺滤泡上皮细胞 * TTF-1：甲状腺、肺泡上皮 * PSA：前列腺 * Heppar-1：肝细胞 * GCDFP-15：乳腺
CK7/CK20联合应用判断转移癌原发部位
CK+/Vimentin+的癌
未分化恶性肿瘤的主要筛选抗体
+：几乎总是阳性；S：有时阳性；N：阴性；R：很少阳性
Paget病的鉴别诊断
肿瘤的个体化治疗
* 美诺华 — CD20单抗，DLBCL * Herceptin — HER2过表达的肿瘤，乳腺
癌、胃癌、子宫内膜癌等 * 格列卫 — CD117过表达的肿瘤，GIST、
CML等 * EGFR — 肺非小细胞癌的靶向治疗
免疫组化的临床应用
肿瘤的诊断与鉴别诊断
Case1
患者女，46岁，发现左乳腺外上象限肿物半年， 单纯肿物切除活检
鉴别诊断
* 乳腺腺病 VS 乳腺浸润性导管癌
需要免疫组化协助诊断！
P63
SMA
最后诊断
* 乳腺硬化性腺病
诊断依据
* 免疫组化：P63+、SMA+，显示增生 的腺体上皮细胞周围肌上皮细胞存在！
恶性肿瘤的预后判断
ER、PR阳性 — 预后好 HER2过度表达 — 预后差，对内分泌治疗
反应差
P53高表达 — 预后差 Ki-67高表达 — 预后差 Bcl-2过度表达 — 预后差
MSI (MLH1/MSH2/MSH6/PMS2)检测筛查
HNPCC（遗传性非息肉病性大肠癌）：MSI+的患者预后 好，但对5-FU治疗无反应，而且发生结直肠以外第二种原发 性癌的风险高，其直系亲属需要做遗传学检查。Jass J, Gut,
经典型霍奇 金淋巴瘤
乳腺神经内分泌癌
Syn
乳腺小管癌：ER表达
ER
浸润性乳腺癌：ER+
某些抗原的过度表达，提示可能为肿瘤
* P53 — 癌、黑色素瘤等 * Bcl-2 — 滤泡性淋巴瘤 * CyclinD1 — 套细胞淋巴瘤、黑色素瘤等 * P16 — 子宫颈、平滑肌肿瘤等
宫颈原位腺癌：P16染色
乙型肝炎病毒（HBV）
乙型肝炎病毒（HBV）是感染是慢性肝炎的重要诱发因素。 在许多病例中，由乙肝病毒诱发的肝细胞形态学改变不足以 成为乙肝病毒感染的诊断依据。免疫组化技术相对于敏感。 HBsAg已用于诊断乙肝及对病毒携带者的研究。
巨细胞病毒（CMV）
组织学诊断取决于辨认特异性细胞病变，如细胞质、细胞 内包涵体。组织学检查缺乏敏感性，有些不典型细胞病变特 征可与反应性或退行性病变相混淆。CMV抗原位于被感染的 细胞核或细胞浆内。
1998; Alexander, Am J Pathol, 2001; Jass J, Fam Cancer, 2004; Greenson, Am J Surg Pathol, 2008； J Clin Oncol.2008;26:5783；Genet Med. 2009;11:35.
感染性疾病的诊断
诊断依据
* 免疫组化：CD20+、CyclinD1+、CD5+、 Bcl-2+、CD3-
免疫组化的应用基础及策略
肿瘤细胞起源标记
* 上皮细胞 — CK、EMA * 间叶细胞 — Vimentin * 淋巴造血 — CD系列、MPO * 平滑肌 — Desmin、SMA * 横纹肌 — MyoD1、Myogenin * 黑色素瘤 — S100、HMB45、MelanA * 生殖细胞 — OCT3/4、CD117、PLAP * 神经细胞 — S100、GFAP、NSE * 内分泌细胞 — CD56、CgA、Syn 、NSE * 脉管内皮细胞 — CD31、CD34、D2-40、F8
鉴别诊断
* 套细胞淋巴瘤 * 滤泡性淋巴瘤，1级 * 小淋巴细胞淋巴瘤/慢性淋巴细胞性白血病 * 边缘区淋巴瘤
必须免疫组化分型来指导临床治疗
Bcl-2
CD20
CD3
CD5
Cyclin D1
最后诊断
* 套细胞淋巴瘤，经典型
滤泡性淋巴瘤：Bcl2染 色
某些抗原异常表达，提示肿瘤性病变
* ER+/PR+or ER-/PR- — 乳腺、子宫内膜等 * PTEN表达缺失 — 子宫内膜样腺癌等 * Κ+/λ-or Κ-/λ+or Κ-/λ- — 浆细胞肿瘤 * CD5+/CD43+的B细胞 — B细胞淋巴瘤 * CD10 +的T细胞 — T细胞淋巴瘤 * CD5-/CD7-的T细胞 — T细胞淋巴瘤
单纯疱疹病毒（HSV）
单纯疱疹病毒性食道炎
幽门螺杆菌（H.pylori Gastritis）
小结
免疫组化是病理科的常规辅助技术，如同临床医生依
赖B超、CT、MRI一样，对临床各类疾病的病理诊断、疾病 治疗与预后都有非常重要的意义！
浆细胞瘤： Κ+/λ-
未明原发部位转移癌的诊断
器官特异性抗体
* TG：甲状腺滤泡上皮细胞 * TTF-1：甲状腺、肺泡上皮 * PSA：前列腺 * Heppar-1：肝细胞 * GCDFP-15：乳腺
CK7/CK20联合应用判断转移癌原发部位
CK+/Vimentin+的癌
未分化恶性肿瘤的主要筛选抗体
+：几乎总是阳性；S：有时阳性；N：阴性；R：很少阳性
Paget病的鉴别诊断
肿瘤的个体化治疗
* 美诺华 — CD20单抗，DLBCL * Herceptin — HER2过表达的肿瘤，乳腺
癌、胃癌、子宫内膜癌等 * 格列卫 — CD117过表达的肿瘤，GIST、
CML等 * EGFR — 肺非小细胞癌的靶向治疗
免疫组化的临床应用
肿瘤的诊断与鉴别诊断
Case1
患者女，46岁，发现左乳腺外上象限肿物半年， 单纯肿物切除活检
鉴别诊断
* 乳腺腺病 VS 乳腺浸润性导管癌
需要免疫组化协助诊断！
P63
SMA
最后诊断
* 乳腺硬化性腺病
诊断依据
* 免疫组化：P63+、SMA+，显示增生 的腺体上皮细胞周围肌上皮细胞存在！
恶性肿瘤的预后判断
ER、PR阳性 — 预后好 HER2过度表达 — 预后差，对内分泌治疗
反应差
P53高表达 — 预后差 Ki-67高表达 — 预后差 Bcl-2过度表达 — 预后差
MSI (MLH1/MSH2/MSH6/PMS2)检测筛查
HNPCC（遗传性非息肉病性大肠癌）：MSI+的患者预后 好，但对5-FU治疗无反应，而且发生结直肠以外第二种原发 性癌的风险高，其直系亲属需要做遗传学检查。Jass J, Gut,
经典型霍奇 金淋巴瘤
乳腺神经内分泌癌
Syn
乳腺小管癌：ER表达
ER
浸润性乳腺癌：ER+
某些抗原的过度表达，提示可能为肿瘤
* P53 — 癌、黑色素瘤等 * Bcl-2 — 滤泡性淋巴瘤 * CyclinD1 — 套细胞淋巴瘤、黑色素瘤等 * P16 — 子宫颈、平滑肌肿瘤等
宫颈原位腺癌：P16染色
乙型肝炎病毒（HBV）
乙型肝炎病毒（HBV）是感染是慢性肝炎的重要诱发因素。 在许多病例中，由乙肝病毒诱发的肝细胞形态学改变不足以 成为乙肝病毒感染的诊断依据。免疫组化技术相对于敏感。 HBsAg已用于诊断乙肝及对病毒携带者的研究。
巨细胞病毒（CMV）
组织学诊断取决于辨认特异性细胞病变，如细胞质、细胞 内包涵体。组织学检查缺乏敏感性，有些不典型细胞病变特 征可与反应性或退行性病变相混淆。CMV抗原位于被感染的 细胞核或细胞浆内。
1998; Alexander, Am J Pathol, 2001; Jass J, Fam Cancer, 2004; Greenson, Am J Surg Pathol, 2008； J Clin Oncol.2008;26:5783；Genet Med. 2009;11:35.
感染性疾病的诊断
诊断依据
* 免疫组化：CD20+、CyclinD1+、CD5+、 Bcl-2+、CD3-
免疫组化的应用基础及策略
肿瘤细胞起源标记
* 上皮细胞 — CK、EMA * 间叶细胞 — Vimentin * 淋巴造血 — CD系列、MPO * 平滑肌 — Desmin、SMA * 横纹肌 — MyoD1、Myogenin * 黑色素瘤 — S100、HMB45、MelanA * 生殖细胞 — OCT3/4、CD117、PLAP * 神经细胞 — S100、GFAP、NSE * 内分泌细胞 — CD56、CgA、Syn 、NSE * 脉管内皮细胞 — CD31、CD34、D2-40、F8