物体表面微生物监测标准操作规程

物体表面微生物监测标准操作规程

1.目的

规范物体表面采样及监测标准操作规程。

2.适用范围

2.1医院感染高风险部门，每季度进行检测。

2.2 发生有暴发流行。

3.采样时间

潜在污染区、污染区消毒后采样，清洁区根据现场情况确定。

4.职责

医院感染管理专职人员或兼职人员应遵守本程序。

5.采样面积

被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。

6.采样方法

用5 cm×5 cm灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有无菌0.03 mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS）或生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样1~4个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有10 ml采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体采样。若采样物体表面有消毒剂残留时，采样液应含相应中和剂。见表（5.5）。

表5.5化学消毒剂的常用中和剂

消毒剂相应中和剂浓度（%）

含氯消毒剂硫代硫酸钠0.2～1.0

复合含氯消毒剂硫代硫酸钠+吐温80+卵磷脂0.2～1.0+2.0+0.3

过氧乙酸硫代硫酸钠0.1~0.5

过氧化氢硫代硫酸钠+吐温80+卵磷脂0.5～1.0+2.0+0.3

碘酊碘伏硫代硫酸钠+吐温800.5+2.0

甲醛双甲酮+马林 1.0+0.6

戊二醛甘氨酸+吐温80 2.0+2.0

乙醇吐温80+卵磷脂 3.0+0.3

氯已定吐温80+卵磷脂

苯扎溴铵吐温80+卵磷脂

注：配制各种中和剂均使用磷酸盐缓冲液（PBS）为基础溶剂。

7. 检测方法

将采样管充分振荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0ml接种平皿，将冷至40℃~45℃的熔化营养琼脂每皿倾注15ml~20ml；36℃±1℃恒温箱培养48h，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。

8.结果计算：

8.1规则物体表面

物体表面菌落总数计算方法见式（A.2）：

物体表面菌落总数(CFU/cm2)=平均每皿菌落数×洗脱液稀释倍数

.........（A.2）采样面积(cm2)

8.2小型物体表面的结果计算，用cfu/件表示。

9.结果判定

9.1 I、II类环境：物体表面细菌菌落总数≤5 cfu/cm2。

9.2 III、IV类环境：物体表面细菌菌落总数≤10 cfu/cm2。

参考文献

GB15982-2012 医院消毒卫生标准