灌流取脑教学文案
灌流取脑
大鼠灌注固定取脑准备物品：37℃的温生理盐水500ml、10%的中性甲醛或4%的多聚甲醛固定液500ml、500ml的输液瓶2个、输液管2副、三通1个,镊子、剪刀、止血钳各2把、灌注针(将12号注射用针头的针尖掐断磨钝圆、光滑即可)1个、麻醉剂、步骤1)将两个输液瓶中分别装满生理盐水和固定液并将输液管安装在生理盐水瓶上并调整好,使管内没有气泡。
2)将动物麻醉,数分钟后,待动物前后肢放松,即可准备灌注。
3)将已麻醉的动物仰卧在解剖台上,固定四肢,用左手持镊子夹起腹部皮肤,右手持剪刀自腹部剪一小口,由此沿腹中线和胸骨剑突中线向上将皮肤剪至下颌,分离皮下组织,将皮肤翻向两侧,再沿腹中线和胸骨中线向上剪开胸骨,沿膈肌向两侧剪开,并用止血钳将胸骨和胸部的皮肤钳紧,将止血钳翻向外侧以充分暴露心脏。
小心用镊子将心包打开,滴一些生理盐水保持湿润。
4)分离出主动脉,穿一根丝线,准备结扎灌针。
5)将左心室尖用眼科剪刀剪开一小口,将灌注针插入心室并送至主动脉内,用丝线结扎牢固,使之不能退出,打调节阀,灌注生理盐水,灌注时的灌流量约20ml/分钟。
时,剪开右心耳,使血液排出。
观察肝脏逐渐变为白色为止6)旋转三通使之对准灌注液,开始灌注固定液。
固定液进大鼠血管后,逐渐出现四肢抽动,表明灌注液进入大鼠大脑,待抽动完全停止,全身组织器官变硬后即可取材。
7)取脑：枕骨大孔处用剪刀横断，小心地于枕骨大孔斜插入剪刀剪开顶骨，用止血钳掰断两边地顶骨，注意嗅球上地顶骨也要仔细去掉，用剪刀于一侧剪断视神经并探到颅底，就可以将整块的脑组织翘起。
取出的脑在同样固定液中4℃再固定4-6小时。
8)保存或切片注意事项：1、将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键,也是难点。
首先准确找到主动脉,这是此步骤的要点。
可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净,用眼科镊子轻轻夹住心外膜(夹的越少越好,以免影响取材)将心脏向左上方提起,即可看清主动脉,又可使灌注针很容易地插入主动脉内。
大鼠灌注取脑培训资料
大鼠灌注取脑1.用于常规HE 染色，免疫组化分析。
2.冰冻切片可以不做脑组织固定。
3.不可用于western blot 和PCR 。
4.如果观察脑组织的缺血、损伤或者其它病变时，不作灌注固定，而是在取出脑组织后作固定，将大大影响效果。
心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织的前固定,避免了组织的自溶现象,是脑组织切片观察的常用方法。
多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不变，从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。
1.脑组织较软，且细胞成份不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。
2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。
3.脑内血液都在，HE 染色后，可去除红细胞背景影响。
1) 麻醉2)开胸3)心脏左心室穿针,剪开右心耳4)生理盐水冲水5)4%多基甲醛固定6)取脑7)保存或者切片.大鼠经深度麻醉后，固定于自制的手术木板上,置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏,经左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳,先灌注冰冻无菌生理盐水(4℃)XmL，直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注冰冻(4℃)4% 多聚甲醛XmL,断头取脑,多聚甲醛浸泡固定24 小时。
1.多聚甲醛的配置：普通方法为：4％多聚甲醛PBS 缓冲液配法：称取40g PFA 溶于装有500mlDEPC 水的玻璃容器(烧杯或者烧瓶)中，持续加热磁力搅拌至60 ~ 65℃，使成乳白色悬液。
用1.0mol/L 的NaOH 值至7.4，使呈清澈状(滴加)，再加入约500ml PBS，充分混匀(在冰浴或者冷水浴中)，可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或者4℃保存备用。
简便方法：先配好PBS ，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或者温箱密封放置2 天，就能全溶。
若是很急，55℃水浴一天，期间不时震荡。
注意，4%的多聚甲醛需临用前配制,配制后需过滤去除小的杂质,避免心脏灌流时造成栓塞影响灌流效果。
小鼠灌注取脑
成年小鼠心脏灌流及取脑组织步骤
实验步骤：
1、小鼠麻醉后立即将其用针头固定在泡沫板上（用针头插住四肢）。
用镊子扯起胸部皮肤，另一只手用剪刀剪开胸腔的皮肤和肋骨，暴露出心脏和肝脏。
2、将注射针头插入小鼠左心室，同时将小鼠肝脏减掉，以使血液流出。
灌注生理盐水，时间维持在1min（10~20ml）灌注液左右，血液排除后四肢、肝脏和舌头会变白。
3、待小鼠四肢、肝脏和舌头变白之后，用4%PFA灌流固定，当PFA 流至大脑处可能会使小鼠尾巴略有反射现象（有时可能没有），此时可将灌流速度下调，以使固定更加充分。
整个PFA灌流时间约为5min。
（固定原理：多聚甲醛可以使蛋白质交联）
4、将导管始端从PFA中拿出，待管中液体流尽后，将心脏上的针头拔下，如果固定的较好，可发现小鼠眼球呈现白色。
将托盘中的血液倒至废液桶内，并准备下一步的取脑操作。
取脑及脱水：
1、剪开头部皮肤，露出白色头盖骨。
将延髓上包被的软骨剪开，除去多余的结缔组织。
需要注意的时，眼睛要由剪刀剪下，不能够直接扯下来，因为眼睛后部连着视神经，如果扯的话有可能会损坏视交叉上核等其他脑部组织。
2、将头盖骨小心剥开，露出白色的脑部，在剥嗅球部位时要格外小心，必要的话可以先将嗅球前部的碎骨留着待进一步固定之后再去除。
3、将头盖骨剥开后，将脑下部连接的神经逐条剪短（可看到视神经交叉），待全部剪断后将脑整个剥离出来。
4、将剥离出来的脑浸泡在4%PFA中，过夜固定。
5、将PFA液换为30%蔗糖进行脱水（防止冷冻切片时形成冰晶和孔洞），初始脱水时脑会浮在蔗糖上面，待完全脱水后脑会沉底。
此时可将脑取出进行冷冻切片。
急性脑梗机械取栓教学文案48页PPT
35、不要以为自己成功一次就可以了 ，也不 要以为 过去的 光荣可 以被永 远肯定 。
急性脑梗机械取栓教学文案
31、别人笑我太疯癫，我笑他人看不 穿。(名 言网) 32、我不想听失意者的哭泣，抱怨者 的牢骚 ，这是 羊群中 的瘟疫 ，我不 能被它 传染。 我要尽 量避免 绝望， 辛勤耕 耘，忍 受苦楚 。我一 试再试 ，争取 每天的 成功， 避免以 失败收 常在别 人停滞 不前时 ，我继 续拼搏 。
Thank you
Байду номын сангаас
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
血液灌流操作流程ppt课件
（二）灌流器静态肝素化
• 1、使用一次性注射器抽取肝素50mg（1ml) • 2、轻拍灌流器后，打开灌流器上端保护螺帽（按 照灌流器上血流方向顺序）
7
3、将打开的螺帽放置于无菌治疗巾内 4、用5ml空针先抽出2ml的空气 5、将抽取的肝素注射液去除头，直接注入灌流器内 保存液中
8
6、取出治疗巾中的保护螺帽，覆盖拧紧
11
（五）撤除灌流器
1、治疗2h 2、检查盐水是否充足200ml左右、 检查管路是否连接紧密 3、调节血流量150ml/min以下
12
4、开补液口夹，关动脉端夹 灌流器颜色变浅
开动脉端夹，关补液口夹 血液到达动脉壶
关泵，关超滤，关灌流器连接管夹子，关动、静脉端夹 撤灌
开动、静脉夹，开泵，开超滤，排气 检查管路连接是否紧密，调节泵速，核对各类参数
3
一、适应症
1
2
急性药物或食物 中毒
尿毒症
3
肝衰竭
4
严重感染（脓毒 症等）
5
自身免疫性疾病、 银屑病
6
其他（甲状腺危 象、肿瘤化疗、 精神分裂症）
4
二、相关操作流程
•（一）物品准备 •（二)灌流器静态肝素化 •（三）预冲程序 •（四）血液灌流上机操作流程 •（五）撤除灌流器
5
（一）物品准备
•灌流器（小型号80-130，用于透析串 联灌流对于尿毒症中分子的吸附） •透析器 •循环管路 •生理盐水 •抗凝剂（肝素）
（4）启动血泵待灌流器充满盐水后血泵调至250ml/min， 排尽灌流器内气体，预冲生理盐水量1000ml
2、透析器预冲
（1）灌流器预冲结束后与透析器连接
（2）启动血泵100ml/min，预冲生理盐水1000ml
灌流取脑
大鼠灌注固定取脑准备物品：37℃的温生理盐水500ml、10%的中性甲醛或4%的多聚甲醛固定液500 ml、500 ml的输液瓶2个、输液管2副、三通1个,镊子、剪刀、止血钳各2把、灌注针(将12号注射用针头的针尖掐断磨钝圆、光滑即可)1个、麻醉剂、步骤1)将两个输液瓶中分别装满生理盐水和固定液并将输液管安装在生理盐水瓶上并调整好,使管内没有气泡。
2)将动物麻醉,数分钟后,待动物前后肢放松,即可准备灌注。
3)将已麻醉的动物仰卧在解剖台上,固定四肢,用左手持镊子夹起腹部皮肤,右手持剪刀自腹部剪一小口,由此沿腹中线和胸骨剑突中线向上将皮肤剪至下颌,分离皮下组织,将皮肤翻向两侧,再沿腹中线和胸骨中线向上剪开胸骨,沿膈肌向两侧剪开,并用止血钳将胸骨和胸部的皮肤钳紧,将止血钳翻向外侧以充分暴露心脏。
小心用镊子将心包打开,滴一些生理盐水保持湿润。
4)分离出主动脉,穿一根丝线,准备结扎灌针。
5)将左心室尖用眼科剪刀剪开一小口,将灌注针插入心室并送至主动脉内,用丝线结扎牢固,使之不能退出,打调节阀,灌注生理盐水,灌注时的灌流量约20 ml/分钟。
时,剪开右心耳,使血液排出。
观察肝脏逐渐变为白色为止6)旋转三通使之对准灌注液,开始灌注固定液。
固定液进大鼠血管后,逐渐出现四肢抽动,表明灌注液进入大鼠大脑,待抽动完全停止,全身组织器官变硬后即可取材。
7)取脑：枕骨大孔处用剪刀横断，小心地于枕骨大孔斜插入剪刀剪开顶骨，用止血钳掰断两边地顶骨，注意嗅球上地顶骨也要仔细去掉，用剪刀于一侧剪断视神经并探到颅底，就可以将整块的脑组织翘起。
取出的脑在同样固定液中4℃再固定4-6小时。
8)保存或切片注意事项： 1、将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键,也是难点。
首先准确找到主动脉,这是此步骤的要点。
可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净,用眼科镊子轻轻夹住心外膜(夹的越少越好,以免影响取材)将心脏向左上方提起,即可看清主动脉,又可使灌注针很容易地插入主动脉内。
大鼠灌注固定取脑
优点：可用单人用注射器直接完成，不用输液管架，而且平均每只仅需5～10ml固定液，时间也仅为5～10min。
注意事项:1)开胸时不要伤到心脏 2)心脏穿刺最好用留置针,软,不宜穿通室间隔,见血即退针芯.插针部位是心尖部,方向向中线.3)生理盐水冲血管,到右心耳流出无色液体.4)多基甲醛固定成功的表现是SD鼠四肢抽搐.5)先断头再一步一步取脑6)根据你实验设计,需要切片的部位,有重点的取,常见的体表标志是前囟和外耳道.7)去颅骨后脑表面有一层硬脑膜,要去掉.
5 灌流：缓慢灌注PBS 10ml，见到老鼠两前肢及两肺变白可改灌注多聚甲醛，多聚甲醛的灌流也同PBS。
6 灌注成功的标志：刚开始灌注时老鼠剧烈抽动；成功后老鼠后肢绷直，尾部竖起成一直线；所灌注的脑组织白而硬。
7 取脑：分离除去后颈部肌肉 ，用弯镊小心取出脑组织。
8 后固定：灌流后的脑组织置于4％PFA置4度冰箱内进行后固定，时间>2h，过夜最好。
3.制作灌注装置，用两瓶塑料包装的生理盐水，一瓶底部开口，倒出盐水，倒置灌入多聚甲醛，悬挂，输液器链接，远端结一个三通后到一个输液器粗针头端
2. 经心脏行灌注固定：麻醉，剪开胸廓，见到搏动的心脏，心尖插入灌注针头，止血钳固定，剪开右心耳，开放静脉血，首先快速滴入生理盐水100－200ml，再注入4%多聚甲醛300-350ml固定液
大鼠灌注固定取脑科研实验
具体方法：
1. 配好4％多聚甲醛PBS缓冲液，配法：称取40g PFA溶于装有500ml DEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。用1.0mol/L的NaOH直至7.0，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。
血液灌流操作课件
血液灌流操作
11
血液灌流规范化操作
• 要点详解之抗凝
• 患者凝血状况评估指标： 1．PLT ： PLT低于50000/mm3时，即可有“出血”倾向，但仅说明数量是否足够，
而并不能说明其质量和功能。
2．BT：正常值为3-8min，反映血小板的质量及数量。
3．活动凝血时间（ACT）：正常值为90-120s，常以之估计内源性凝血系统的 异常。以肝素治疗者，均应监测之。
5（低浓度≤100ml/min）+1（高浓度≤50ml/min） +1（空盐置换体外循环系统中的高浓度肝素盐水） =充分预冲！
足量预冲+充分预冲=完整预冲！
血液灌流操作
9
血液灌流规范化操作
• 上机前1~10分钟从静脉注射首剂肝素，引血上机
血液灌流操作
组
合
型
意 图
人 工 肾
治
疗
示
10
血液灌流规范化操作
• 要点详解之抗凝 • SOP抗凝方案： ✓普通肝素一般首剂量0.5～1.0mg/kg，追加剂量10～20mg/h，间歇性静脉注
射或持续性静脉输注（常用）；预期结束前30分钟停止追加。肝素剂量应依 据患者的凝血状态个体化调整。 ✓低分子肝素60IU~80IU/Kg(讨论和详解）。 • 灌流治疗时宜以100 ml/min的速度引血，如病人病情平稳应尽快将血液速度 调至180-200 ml/min为宜。治疗中提醒操作者注意观察体外循环情况，防止 凝血，有条件者最好在上机后15分钟内查APTT、PT值，调整维持量肝素用 量。
用生理盐水回血时，吸附剂表面的毒素冲洗重新入血的量非常 小（实验证实使用后的灌流器经生理盐水连续冲洗2小时后其吸 附的毒素可被洗脱的极其微量血，液灌流其操作中PTH的解吸附率为≤0.26%，13
蛙心灌流讲稿
蛙心灌流今天的实验的要紧内容是观看某些因素对离体蟾蜍心脏的阻碍。
本次实验用到的标本与前几回实验有所不同，前几回实验都是在体实验，本次实验是离体实验，也是咱们第一次做离体实验。
通过讲义基础知识的学习咱们明白，心脏的正常节律性活动必需在适宜的理化环境里才能够维持，一旦适宜的理化环境被干扰或破坏，心脏的活动就会受到阻碍。
蟾蜍心脏离体后，用任氏液灌流，心脏在一按时刻内可维持节律性收缩与舒张。
改变灌流液的成份，心脏跳动的频率和幅度会随之发生改变。
在今天的实验中，咱们第一人为地改变细胞外液中离子、递质和酸碱度，然后通过观看心跳的曲线，看其对心肌活动的阻碍。
第一简单讲解下本次实验涉及的大体理论知识：（1）化学离子：关于心肌细胞来讲，细胞生物电的活动要紧受K+、Na+和Ca2+的阻碍。
A）高K+：1）高K+对兴奋性阻碍：①【K+】轻度升高：当K+浓度轻度升高时，一是改变静息电位的数值，另一个是改变细胞膜对K+通途性的阻碍。
正常情形下，细胞外的【K+】>细胞内【K+】，如细胞外【K+】升高→那么细胞内外K+浓度差减少→静息电位的绝对值减少→因此使静息电位与阈电位之间的差值减少→心肌细胞的兴奋性升高。
②【K+】继续升高：当大于7mmol/L时，由于细胞膜电位的绝对值过小，会阻碍快Na+通道，使其部份失活，心肌细胞的兴奋性是先升高后降低（因为0期去极化时，部份Na通道失活）。
2）高K+对传导性阻碍：由于高K+可使0期去极化时，部份Na通道失活→因此使0期去极化的速度减慢和幅度降低→致使心肌细胞的传导性降低，因此有可能造成传递阻滞。
3）高K+对收缩性阻碍：由于K+与Ca2+有竞争性抑制那个作用，因此，细胞外【K+】升高→ Ca2+内流减少→心肌收缩力减弱。
B）低K+：1）低K+对兴奋性阻碍：低K+时→心肌细胞对K+通透性降低→静息电位值降低→与阈电位的差值降低→心肌细胞兴奋性升高。
（这与高K+时一样都可使心肌细胞的兴奋性升高）2）低K+对传导性阻碍：低K+时→ 0期去极化的速度减慢和幅度降低，致使心肌细胞的传导性降低。
灌注取脑
大鼠灌注取脑流程一、麻醉10%水合氯醛（0.4ml/100g）腹腔注射二、开胸1、沿两侧肋弓剪开皮肤，打开腹腔，用一血管钳夹持剑突并向上提拉。
2、用弯剪在膈肌与胸骨柄相连处剪一小口，造成人工气胸，然后向两侧顺延，剪断膈肌及肋骨，夹持剑突的血管钳将剑突连带胸廓上翻固定，充分暴露心脏。
三、穿刺将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键，也是难点。
1、首先准确找到主动脉，这是此步骤的要点。
可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净，用眼科镊子轻轻夹住心外膜（夹的越少越好，以免影响取材）将心脏向左上方提起（剪开心包壁层的前壁，暴露升主动脉和肺动脉干的根部）。
2、穿刺之前要用适当大小的血管钳夹住心室以固定心脏，但不要夹得过紧，要让心腔内留有一定的间隙。
用小剪刀在心尖处先剪开一个小口，再插入穿刺针。
3、插入时动作要慢，针尖方向不要偏向右侧，以免刺入右心房，如果感到有阻力，则将针退后、调整方向重新进针，直到进入主动脉，灌注针进入主动脉后可在心脏的上方看到其位置，灌注针进入主动脉的长度最好为3~5毫米，然后用丝线扎紧。
4、灌注针插入成功后，用小剪刀剪开右心耳。
四、灌注1、用量（夹闭腹主动脉）4℃生理盐水（50-100ml/只），4℃的4%多聚甲醛（50-100ml/只）2、速度先快后慢，共用30分钟左右3、成功标志生理盐水：右心耳流出液体血色较浅基本澄清，肺脏、眼珠、爪子迅速变白是排出血液的有效观察指标。
多聚甲醛：刚开始灌注时老鼠前肢剧烈抽动（下肢不抽动证明腹主动脉夹闭完全）；前肢及颈部僵硬；所灌注的脑组织白而硬。
五、取脑1、枕骨大孔处用剪刀横断，小心地于枕骨大孔斜插入剪刀剪开顶骨。
2、用止血钳掰断两边地顶骨，注意嗅球上地顶骨也要仔细去掉。
3、用剪刀于一侧剪断视神经并探到颅底，就可以将整块的脑组织翘起。
六、保存取出的整个脑组织块再置于4%多聚甲醛4℃保存。
《脑室引流的护理折授课教案》
授课方式：理论课
授课题目：脑室引流的护理
任课教师：孙颖（6B）
授课对象：临床实习护生
基本教材和主要参考资料：人民卫生出版社出版的《外科护理学》第4版及《外科学》第2版
教学目的：通过本次授课，同学们能应用所学的知识为脑室引流的患者提供相应的护理和健康指导。
教学要求：掌握脑室引流的定义、操作流程、护理措施，熟悉脑室引流的适应症、并发症的观察和处理，了解脑室引流的置管部位。
6并发症的观察及护理
1）颅内感染
很少发生，可因操作中无菌观念不强、穿刺器械及引流装置消毒不严、穿刺部位有炎症或感染，持续引流时间过长等引起。
预防措施：
(1)保持病室清洁，定时消毒，最好将患者安置在单人房间。
(2)进行各种操作时应严格遵守无菌技术要求，整个引流系统应保持密闭和无菌，不可任意拆卸或在引流袋上穿刺，引流袋每天更换一次。
3）颅内出血
发生原因：穿刺不力，穿刺针固定不牢，在颅内活动引起脑组织脉络丛血管损伤而导致脑室内出血，或因颅内压降得过低，脑组织塌陷，使桥静脉撕裂，造成硬膜下血肿。
预防和护理措施：
(1)引流管位置要妥善固定，预防脱落，对儿童及躁动患者应加强头部及引流系统的固定和保护，防止坠床;变换体位时，头部和引流管的方向保持一致，以免引起脑组织和血管损伤而出血。
↓
整理床单位，合理安置病人
↓
指导患者，取舒适卧位，引流袋位置不能随意移动，保持伤口敷料清洁，不可抓挠伤口
推车至病房
↓
核对解释，取得患者合作，夹管松固定，铺治疗巾
↓
观察患者意识瞳孔，生命体征的变化
↓
戴手套，用酒精棉球消毒引流管与引流装置衔接处2遍
↓
第三个酒精棉球消毒固定，更换引流装置
血液灌流 ppt课件
25
6、结束治疗与回血
• 急性药物中毒抢救结束后可采用空气回血。
26
回血时动脉端向上，静脉端向下 可减少灌内残存血量和空气进入内
• 动脉端
血液灌流
1
定义与概述 适应证与禁忌证 血管通路的建立 操作流程 影响疗效的因素 并发症及处理
2
• 一、血液灌流定义与概述
3
• 血液灌流技术 • 是将患者血液从体内引到体外循环系统内， • 通过灌流器中吸附剂吸附毒物、药物、代谢产物， • 达到清除这些物质的一种血液净化治疗方法或手段。 • 与其它血液净化方式结合可形成不同的杂合式血液净化疗法。
10
• 2、血管通路的建立与选择 • 插管 临时 长期 • 造瘘
11
• 3、体外循环的动力模式 • （1）无血泵 • （2）有血泵 • 加温装置
12
• （1）无血泵 • 非外源性动力模式依靠患者良好的心功能与血压，推动体外血路
中血液的循环。仅限于医院无专用设备的急诊抢救时，而且患者无 循环衰竭时的治疗。
4
• 二、适应证与禁忌证
5
（一） 适应证
• 1、急性药物或毒物中毒。 • 2、尿毒症，尤其是顽固性瘙痒、难治性高血压。 • 3、重症肝炎，特别是暴发性肝衰竭导致的肝性脑病、高胆红素
血症。 • 4、脓毒症或系统性炎症综合征。 • 5、银屑病或其它自身免疫性疾病。 • 6、其它疾病，如精神分裂症、甲状腺危象、肿瘤化疗等。
理； • 如果经过上述处理症状不缓解并严重影响生命体征而确系生物不
相容导致者应及时中止灌流治疗。
灌流取脑的原理-概述说明以及解释
灌流取脑的原理-概述说明以及解释1.引言1.1 概述灌流取脑是一种用于实验室动物的神经科学研究中的常用技术。
该技术的原理是通过将药物或其他物质直接注入动物的脑组织中，以模拟特定疾病或研究特定神经通路的功能和调控机制。
灌流取脑技术可以帮助科研人员更好地理解神经系统的结构和功能，探索与神经相关的疾病的发病机制，并寻找新的治疗方法。
本文将对灌流取脑技术的定义、原理和应用进行详细解析，以期为神经科学领域的研究和发展提供有益的参考。
1.2 文章结构本文主要分为引言、正文和结论三个部分。
在引言部分，将对灌流取脑的概述进行介绍，包括其定义、背景和目的。
通过引入相关背景知识，引出本文的研究重点和意义。
在正文部分，将进一步展开对灌流取脑的定义和背景进行深入分析，探讨其原理解析和应用领域。
通过对灌流取脑的原理解析，读者可以更清晰地了解其工作机制和实现原理；同时，探讨其应用领域，展示其在实际生活中的重要性和应用前景。
在结论部分，将对整篇文章进行总结，强调灌流取脑的重要性，并展望其未来发展方向。
通过对灌流取脑的未来发展进行展望，可以为读者提供更具体的参考意见和思考方向，为相关研究和实践提供指导。
最后，通过结束语，对整篇文章进行总结，并为读者留下深刻印象和思考。
1.3 目的本文的目的在于探讨灌流取脑技术的原理，并分析其在不同领域的应用潜力。
通过深入剖析灌流取脑的工作机制，我们可以更好地理解其在神经科学领域的重要性和意义。
此外，对于该技术未来的发展趋势和可能的应用场景进行展望，有助于启发更多相关领域的研究和创新。
最终，希望能够为读者提供全面的信息，促进灌流取脑技术在科学研究和医学实践中的广泛应用。
2.正文2.1 灌流取脑的定义和背景灌流取脑是一种特殊的技术手段，用于在动物实验或医学研究中获取活体动物的脑组织。
通过将药物或缓冲液注入动物的血管系统，可以使脑组织保持生物活性，以进行进一步的实验或研究。
这种技术起源于20世纪初期的生物医学研究中，主要用于研究神经系统、药物作用等方面。
灌流取脑的原理
灌流取脑的原理全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：灌流取脑，是一种特殊的治疗手段，主要应用于脑部疾病的治疗和研究。
其原理是通过将特定药物或液体注入患者的头部，从而实现对脑部组织的治疗或取样。
灌流取脑的原理虽然看似简单，但背后却有许多复杂的生理和医学机制。
灌流取脑的关键在于通过注射液体直接到达脑部组织，以达到治疗疾病或提取样本的目的。
这种技术主要通过穿刺手术进入患者的颅内，在脑脊液中或直接灌注到脑组织中。
通过这种方式可以有效地将药物输送到脑部的特定部位，同时避免了药物经过血脑屏障的限制。
灌流取脑的原理涉及到药物的选择和配比。
在灌流取脑过程中，医生需要根据患者的病情和需要，选择合适的药物类型和浓度。
这些药物可以是抗生素、激素、细胞因子等，通过直接注入到脑部实现针对性的治疗作用。
医生还需要根据患者的疾病情况，调整药物的剂量和频率，以达到最佳的治疗效果。
灌流取脑的原理还涉及到操作的精准度和安全性。
由于灌流取脑需要穿刺到患者的颅内，因此手术操作必须非常精细和准确。
医生需要借助影像学技术如CT、MRI等，精确定位到脑部的特定区域，避免误伤重要神经血管结构。
医生还需要注意手术过程中的感染风险和并发症的防范，确保患者的安全和手术的成功。
在临床上，灌流取脑主要应用于脑部疾病的治疗和研究。
对于脑肿瘤患者，医生可以通过灌流取脑的方式将抗肿瘤药物直接输送到肿瘤组织中，以提高治疗效果并减少毒副作用。
对于脑血栓、脑梗死等疾病，灌流取脑也可以帮助患者恢复神经功能并减少并发症的发生。
灌流取脑是一种治疗脑部疾病的有效手段，其原理涉及到药物输送、操作精准和安全性等多方面因素。
通过灌流取脑，医生可以有效地将药物输送到脑部组织，实现针对性的治疗作用，并帮助患者尽快康复。
随着医学技术的不断发展，灌流取脑将在脑部疾病治疗和研究领域发挥越来越重要的作用。
第二篇示例：灌流取脑，又称头颅灌流取脑术，是一种用来保存脑部器官并进行研究的技术手段。
大鼠灌注取脑培训资料
大鼠灌注取脑大鼠灌注取脑用途：1.用于常规HE染色，免疫组化分析。
2.冰冻切片可以不做脑组织固定。
3.不可用于western blot和PCR。
4.如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时，不作灌注固定，而是在取出脑组织后作固定，将大大影响效果。
原理：心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织的前固定,避免了组织的自溶现象,是脑组织切片观察的常用方法。
多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不变，从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。
必要性：1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。
2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。
3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响。
大鼠灌注取脑标准操作规程(SOP)：流程：1)麻醉 2)开胸 3)心脏左心室穿针,剪开右心耳 4)生理盐水冲水 5)4%多基甲醛固定 6)取脑 7)保存或切片.具体过程：大鼠经深度麻醉后，固定于自制的手术木板上,置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏,经左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳,先灌注冰冻无菌生理盐水(4℃)XmL，直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注冰冻(4℃)4%多聚甲醛XmL,断头取脑,多聚甲醛浸泡固定24小时。
Tips：1.多聚甲醛的配置：一般方法为：4％多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。
用1.0mol/L的NaOH值至7.4，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。
简便方法：先配好PBS，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱密封放置2天，就能全溶。
若是很急，55℃水浴一天，期间不时震荡。
灌注取脑实验报告
一、实验目的1. 掌握动物解剖技术，熟悉小鼠心脏灌流及取脑的方法。
2. 了解脑组织在生理学、病理学等研究中的重要性。
3. 提高实验操作技能，培养严谨的科学态度。
二、实验原理灌注取脑实验是研究脑组织生理、生化及病理变化的重要方法。
通过心脏灌流，将生理盐水或特定试剂注入动物体内，达到清除脑组织中的血液、细胞等杂质，便于后续实验研究。
本实验采用小鼠作为实验动物，通过心脏灌流及取脑，获取脑组织样本。
三、实验材料1. 实验动物：成年小鼠2. 仪器：解剖显微镜、手术器械、灌流装置、剪刀、镊子、注射器、注射针、泡沫板、生理盐水、固定液等3. 药品：戊巴比妥钠、肾上腺素、生理盐水、固定液等四、实验步骤1. 麻醉：将小鼠放入戊巴比妥钠溶液中，待小鼠失去意识后，立即用针头固定在泡沫板上。
2. 解剖：扯起小鼠胸部皮肤，用剪刀剪开胸部肌肉，暴露心脏。
3. 心脏灌流：用注射针连接灌流装置，将生理盐水注入小鼠心脏，使血液流向脑部。
4. 取脑：待生理盐水灌流完成后，将小鼠头部朝下，用剪刀剪开颅骨，暴露脑组织。
5. 固定：将脑组织取出，放入固定液中固定，以便后续实验研究。
6. 清洗：将固定好的脑组织用生理盐水清洗，去除杂质。
7. 标本保存：将清洗后的脑组织放入装有固定液的容器中，密封保存。
五、实验结果与分析1. 实验结果：通过心脏灌流及取脑，成功获取了小鼠脑组织样本。
2. 结果分析：本次实验操作规范，脑组织样本质量良好，为后续实验研究提供了有力支持。
六、实验讨论1. 实验过程中，应注意操作规范，避免损伤脑组织。
2. 灌流速度不宜过快，以免损伤脑组织。
3. 固定液的选择对脑组织样本质量有重要影响，应选用合适的固定液。
4. 实验过程中，应注意动物福利，尽量避免动物痛苦。
七、实验总结本次实验成功进行了小鼠心脏灌流及取脑操作，掌握了动物解剖技术，为后续实验研究奠定了基础。
在实验过程中，我们应注重操作规范，确保实验结果的准确性。
同时，本次实验也使我们认识到动物福利的重要性，为今后实验研究提供了有益经验。
小鼠组织灌流实验报告
实验目的：本次实验旨在学习并掌握小鼠组织灌流技术，通过对小鼠心脏、脑和肾脏的灌流，观察和记录灌流过程中的生理变化，并分析灌流对组织形态学的影响。
实验材料：1. 实验动物：成年小鼠（体重20-25g）若干。
2. 仪器设备：解剖显微镜、手术器械、灌流装置、注射器、剪刀、镊子、生理盐水、4%多聚甲醛固定液、1%肝素钠溶液等。
3. 试剂：生理盐水、1%戊巴比妥钠溶液、0.01mol/L磷酸缓冲液（PB）、4%多聚甲醛溶液等。
实验方法：1. 动物麻醉：使用1%戊巴比妥钠溶液进行腹腔注射，剂量为0.1ml/10g体重，待小鼠麻醉后固定于解剖显微镜下。
2. 心脏灌流：a. 打开小鼠胸腔，暴露心脏。
b. 用剪刀剪开心包膜，暴露心脏表面。
c. 用针头刺入左心室，注入约20ml的生理盐水，观察心脏搏动和血液流动情况。
d. 拔去生理盐水的针头，插入4%多聚甲醛固定液的针头，缓慢灌流固定心脏，直至心脏颜色变白。
3. 脑组织灌流：a. 打开小鼠颅骨，暴露脑组织。
b. 用注射器从心脏注入约20ml的生理盐水，观察脑组织的血液流动情况。
c. 拔去生理盐水的注射器，插入4%多聚甲醛固定液的注射器，缓慢灌流固定脑组织，直至颜色变白。
4. 肾脏灌流：a. 打开小鼠腹腔，暴露肾脏。
b. 用注射器从心脏注入约20ml的生理盐水，观察肾脏的血液流动情况。
c. 拔去生理盐水的注射器，插入4%多聚甲醛固定液的注射器，缓慢灌流固定肾脏，直至颜色变白。
5. 组织固定：将灌流固定后的心脏、脑和肾脏取出，放入盛有4%多聚甲醛固定液的容器中，室温固定过夜。
实验结果：1. 心脏灌流过程中，心脏搏动减弱，血液流动变慢，最终心脏颜色变白。
2. 脑组织灌流过程中，脑组织血液流动变慢，最终颜色变白。
3. 肾脏灌流过程中，肾脏血液流动变慢，最终颜色变白。
实验分析：1. 心脏灌流可以观察到心脏搏动和血液流动的变化，有助于了解灌流对心脏功能的影响。
2. 脑组织灌流可以观察到脑组织的血液流动情况，有助于了解灌流对脑组织的影响。
脑灌注操作流程
脑灌注操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!脑灌注操作流程一、准备工作阶段。
在进行脑灌注操作之前，需要进行充分的准备。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
大鼠灌注固定取脑
准备物品：
37℃的温生理盐水500ml、10%的中性甲醛或4%的多聚甲醛固定液500 ml、500 ml的输液瓶2个、输液管2副、三通1个,镊子、剪刀、止血钳各2把、灌注针(将12号注射用针头的针尖掐断磨钝圆、光滑即可)1个、麻醉剂、步骤
1)将两个输液瓶中分别装满生理盐水和固定液并将输液管安装在生理盐水瓶上并调整好,使管内没有气泡。
2)将动物麻醉,数分钟后,待动物前后肢放松,即可准备灌注。
3)将已麻醉的动物仰卧在解剖台上,固定四肢,用左手持镊子夹起腹部皮肤,右手持剪刀自腹部剪一小口,由此沿腹中线和胸骨剑突中线向上将皮肤剪至下颌,分离皮下组织,将皮肤翻向两侧,再沿腹中线和胸骨中线向上剪开胸骨,沿膈肌向两侧剪开,并用止血钳将胸骨和胸部的皮肤钳紧,将止血钳翻向外侧以充分暴露心脏。
小心用镊子将心包打开,滴一些生理盐水保持湿润。
4)分离出主动脉,穿一根丝线,准备结扎灌针。
5)将左心室尖用眼科剪刀剪开一小口,将灌注针插入心室并送至主动脉内,用丝线结扎牢固,使之不能退出,打调节阀,灌注生理盐水,灌注时的灌流量约20 ml/分钟。
时,剪开右心耳,使血液排出。
观察肝脏逐渐变为白色为止
6)旋转三通使之对准灌注液,开始灌注固定液。
固定液进大鼠血管后,逐渐出现四肢抽动,表明灌注液进入大鼠大脑,待抽动完全停止,全身组织器官变硬后即可取材。
7)取脑：枕骨大孔处用剪刀横断，小心地于枕骨大孔斜插入剪刀剪开顶骨，用止血钳掰断两边地顶骨，注意嗅球上地顶骨也要仔细去掉，用剪刀于一侧剪断视神经并探到颅底，就可以将整块的脑组织翘起。
取出的脑在同样固定液中4℃再固定4-6小时。
8)保存或切片注意事项： 1、将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键,也是难点。
首先准确找到主动脉,这是此步骤的要点。
可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净,用眼科镊子轻轻夹住心外膜(夹的越少越好,以免影响取材)将心脏向左上方提起,即可看清主动脉,又可使灌注针很容易地插入主动脉内。
插入时动作要慢,针尖方向不要偏向右侧,以免刺入右心房,如果感到有阻力,则将针退后、调整方向重新进针,直到进入主动脉,灌注针进入主动脉后可在心脏的上方看到其位置,灌注针进入主动脉的长度最好为3~5毫米,然后用丝线扎紧。
切勿将灌注针放在左心室内,这样由于主动脉瓣的关闭,灌注液很难进入主动脉,而是沿着心室的切口流出,致使灌注失败。
另外,灌注针插入成功后,一定要用剪刀剪开右心耳而不是右心室,这是灌流液的出口。
剪开心尖的位置一定要掌握好,不能偏右使灌注针插入右心室。
2、配4％多聚甲醛PBS缓冲液：称取40g PFA溶于装有500ml DEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。
用1.0mol/L的NaOH直至7.0，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。
加热至60～65℃固然融解的快，只需要15分钟左右，不过容易挥发，气味难闻，需配置的量比较大的时候是较合适的方法。
如果有通风厨的可在通风厨内配置，就基本没有气味散发的问题。
在通风较好的地方配置也可以，但配置的时候配溶液的人一定要注意自我防护，味道确实很刺激！。
如果不着急，可先配好pbs，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱密
封放置2天，就能全溶。
3灌注时夹上腹主动脉只灌注上肢及头脑，固定的好又快，又省多聚甲醛。
多聚甲醛用100ml 以下即可。
4 灌注时注意排空输液管中的气泡不然容易气栓，影响灌注效果。
一定要看到大鼠较剧烈抽搐，不然证明灌注不好。
5、处死大鼠后迅速取脑放置于4%多聚甲醛中固定也可以，但取脑组织时未经固定的脑组织非常软，即使是刚刚处死的大鼠，也难免会造成微小的人为损伤，可能会影响切片后的观察。
而且未经灌注的脑组织血管内会残余大量红细胞，观察血管形态会不太理想。
6、开胸时不要伤到心脏，心脏穿刺最好用留置针,软,不宜穿通室间隔,见血即退针芯.插针部位是心尖部,方向向中线.
7、生理盐水冲血管,到右心耳流出无色液体. 8、多基甲醛固定成功的表现是SD鼠四肢抽搐. 9、常见的体表标志是前囟和外耳道.
10、去颅骨后脑表面有一层硬脑膜,要去掉.
11、灌注先快后慢于1小时内灌注完，生理盐水和多聚甲醛一般事先0度预冷，这样效果更佳。
为切片方便，固定时勿必要将动物拉直；
12、多聚甲醛英文名称 Paraformaldehyde。
为白色结晶粉末，易燃，不溶于乙醇，微溶于冷水，溶于稀酸、稀碱。
多聚甲醛可经吸入、食入、经皮吸收。
对呼吸道有强烈刺激性，引起鼻炎、咽喉炎、肺炎和肺水肿。
对呼吸道有致敏作用。
眼直接接触可致灼伤。
对皮肤有刺激性，引起皮肤红肿。
遇明火、高热或与氧化剂接触，有引起燃烧的危险。
如果大量泄漏，用水打湿然后收容回收。
使用时应注意佩带防尘口罩、安全防护眼镜、穿相应的防护服、戴防护手套。
工作现场禁止吸烟、进食和饮水。
工作后，淋浴更衣。
注意个人清洁卫生。
如果皮肤接触：脱去污染的衣着，用肥皂水及清水彻底冲洗。
眼睛接触：立即提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗至少15分钟、就医。
吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。
保持呼吸道能畅。
呼吸困难时给输氧。
呼吸停止时，立即进行人工呼吸后就医。
误服者给饮大量温水，催吐，就医。
做免疫组化用４％多聚甲醛灌注固定，western不用固定，用生理盐水灌注冲洗血液，取材后放入-70冰箱备用，做原位杂交用甲醛，根据不同的用途还有用冰丙酮固定的。
做冰冻切片的话，通常要包括组织固定、取脑固定、蔗糖固定。