级 免疫学 实验 固有 细胞免疫

• 肽聚糖是细菌细胞壁中的重要成分，溶菌酶能够水解 肽聚糖从而使细菌溶解。
•细 菌
。
革兰氏阳性：溶解 革兰氏阴性：肽聚糖外面有一层脂多糖和脂蛋
白，一般情况下不受溶菌酶的影响
实验室准备：
（1） 带菌平板的准备：处理好溶壁微
用。
球菌加入琼脂内,到平板,冷凝备
（2）每平板打4个小孔，如图。
1
2
4
3
同学们操作步骤：
[实验步骤] 4. 剪开皮肤，暴露腹腔，找到脾脏
[实验步骤]
5. 分离，摘除脾脏
[实验步骤 ]
6-1. 冲洗脾脏
[实验步骤]
6-2. 冲洗脾脏
[实验步骤 7-1. 用注射器芯研磨脾脏，获得细胞悬液
]
[实验步骤] 7-2. 用注射器芯研磨脾脏，获得细胞悬 液
[实验步骤 8. 低速离心（2000转/分钟，10min）
10-2 将沉淀细胞重悬于2ml培养液中，进行 细胞形态观察和计数。
]
[实验步骤] 9-1. 离心后弃上清，留沉淀的细胞
[实验步骤] 9-2. 离心后弃上清，留沉淀的细胞
[实验步骤 ]
9-3. 离心后弃上清，留沉淀的细胞
10-1 加入红细胞裂解液1ml，吹打混匀，室 温静置2分钟，加入RPMI-1640液终止反应 。
10-2 低速离心（2000转/min，10min）， 弃上清。
• 细胞浆
–着色 –空泡或伪足
四、小鼠脾细胞的制备
• 目的要求 掌握分离制备小鼠脾细胞悬液的操作方法 。
• 材料
– 动物：小鼠 – RPMI-1640细胞培养液 – Tris-NH4Cl红细胞裂解液 – 75%酒精
[实验步骤]
1. 固定小鼠
[实验步骤]
2. 暴露眼球
[实验步骤] 3. 小镊子夹眼球放血，拉颈椎处死小鼠
级 免疫学 实验 固有 细 胞免疫
2020年4月30日星期四
一、非特异性免疫功能的测定 （一）、天然免疫的组成
• 屏障结构 （1）体表屏障:
物理屏障 化学屏障 生物学屏障 （2）体内屏障结构 全身淋巴结屏障 血-脑屏障 血-胎屏障
• 参与天然免疫的效应分子
–防御素 –补体系统 –细胞因子 –溶菌酶 –其他效应分子
清水漱口 将唾液涂于空平板中 用吸管吸出，按下图滴入孔内
37℃过夜 明天上午测量溶菌环的直径，记录分析
PBS
1
2
阴性对照
4
3
鸡蛋清 阳性对照
Байду номын сангаас1，4加入唾液标本
二、E玫瑰花环形成实验
实验原理
• T细胞表面标志CD2，即绵羊红细胞受体 • 绵羊红细胞表面CD58可与CD2结合 • 可用于T细胞的计数与分离
• 参与天然免疫的效应细胞 –吞噬细胞 –NK细胞 –T细胞 –肥大细胞 –NK T细胞 –上皮细胞及其附属成分
1、吞噬细胞及吞噬作用
• 吞噬作用是指白细胞游出到炎症灶，吞噬 病原体以及组织碎片的过程。
• 完成此功能的吞噬细胞主要有两种，其吞 噬异物的过程基本相同，但其结构和化学 成分则有所不同。
中性粒细胞吞噬葡萄球菌
实验方法：巨噬细胞的吞噬作用
10%鸡红细胞悬液注入小白鼠腹腔内
分别于1,6,24小时抽取腹腔液涂片、染色
观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象
巨噬细胞吞噬鸡红细胞
3、溶菌酶试验
• 溶菌酶是正常体液与分泌液中所含的一种低分子量的 碱性蛋白质，主要来源于巨噬细胞，是天然免疫中一 种重要的体液杀菌成分。
效应细胞 细菌、病毒、原虫、其他异物
吞噬过程
吞噬发生的最初1-2小时，吞噬细胞 趋化因子
聚集于微生物附近
粘附于微生物表面
吞入胞浆，形成吞噬体
一系列反应，杀灭微生物
实验方法：中性粒细胞的吞噬作用
金黄色葡萄球菌1-2ml，注入小白鼠腹腔内 5小时后，解剖，腹腔液涂片、染色
观察小吞噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌的现象
– 中性粒细胞 – 巨噬细胞
中性粒细胞
名称 部位
小吞噬细胞 外周血中
大小
直径10～12μm
胞核 呈杆状或分叶状,常为2-5叶
核质 核染色质呈块状,着色深
胞浆 富含中性颗粒
寿命
短,更新快
特点 应答迅速,在早期起主要作用 主要
吞噬范围 主要是化脓性细菌
单核-吞噬细胞
大吞噬细胞 外周血:单核
不同组织中:吞噬细胞 直径为14～17μm 肾形或弯曲折叠的不规则形 颗粒纤细而疏松，故着色较浅 胞浆较丰富的溶酶体 长 持续1-2天,是天然免疫晚期应答的
三、T淋巴细胞转化实验
• T细胞受到特异性抗原或非特异性丝裂 原刺激时，可发生转化。
–特异性抗原 –非特异性丝裂原：PHA、ConA等。
• 正常人淋巴细胞受到PHA刺激后，其转 化率为60-80%。
转化细胞形态特征
• 细胞体积：增大 • 细胞核
–大小：增大 –染色质：疏松 –核仁：清晰 –有丝分裂：+/-