β-半乳糖苷酶染色试剂盒使用说明
LacZ染色试剂盒使用说明书
华越洋⽣生物提供 QQ: 1733351176LacZ染⾊色试剂盒使⽤用说明书β-‐Galactosidase S taining K it M annual编号 名称 产品规格北京华越洋生物RS3601-‐23 LacZ染色试剂盒 250次分析基本信息：大肠杆菌中的LacZ基因是应用极广的报告基因之一，被用来检测表达载体介导的基因转移效率，也用于基因启动子研究。
LacZ编码β-‐半乳糖苷酶，该物质非常稳定，能抵抗蛋白酶的水解，并且可以利用许多底物，包括X-‐gal。
X-‐Gal是β-‐半乳糖苷酶（β-‐galactosidase）的显色底物，在β-‐半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物，所以可以轻易的检测出LacZ基因的表达。
The LacZ gene from E. coli is one of the most commonly used reporter genes f or t esting t he e fficiency o f e xpression v ector m ediated g ene t ransfer and for studying the regulation of promoters of genes. The LacZ gene encodes the enzyme β-‐galactosidase, which is very stable, resistant to proteolytic d egradation, c an u tilize a v ariety o f s ubstrates a nd c an b e e asily assayed in situ. The β-‐Galactosidase staining kit utilizes X-‐gal as the substrate.产品说明：华越洋的β-‐半乳糖苷酶染色试剂盒利用X-‐gal作为底物，配合试剂盒内提供的其他试剂，可以完成250次染色反应。
小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA试剂盒使用说明书本
小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA试剂盒使用说明书本本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中β半乳糖苷酶(βGAL)的含量。
试验原理：βGAL试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知βGAL浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将βGAL和生物素标记的抗体同时温育。
小鼠β半乳糖苷酶ELISA试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中βGAL的浓度呈比例关系。
试剂盒组成：自备材料蒸馏水。
加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振荡器及磁力搅拌器等。
安全性避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
衰老相关β-半乳糖苷酶染色
衰老相关β-半乳糖苷酶染色细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒产品编号产品名称规格BL133A细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒100 T产品简介：细胞衰老时，SA-β-Gal (senescence-associated β-galactosidase)活性水平会上调，此时本试剂盒可以对衰老的细胞或组织进行染色检测。
正常细胞经过有限次数的分裂后停止分裂，出现不可逆的生长停滞，此时细胞仍然是存活的，但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化，通常表现为细胞体积变大，与衰老相关的β-半乳糖苷酶为活化状态。
β-半乳糖苷酶是细胞溶酶体内的水解酶，通常在pH 4.0时表现活性，但在衰老细胞内该酶在pH 6.0条件下表现活性。
本试剂盒即是基于此现象及原理，以X-Gal为底物，衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶催化该底物生成蓝色产物，表现为细胞胞质有蓝色沉积物，在光学显微镜下即可很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。
本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。
本试剂盒仅染色衰老细胞，对衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞等不会染色。
产品组成:组分名称规格BL133A-1β-半乳糖苷酶染色固定液100 mLBL133A-2β-半乳糖苷酶染色液A100 mLBL133A-3β-半乳糖苷酶染色液B 1.2 mLBL133A-4DMF（二甲基甲酰胺） 5 mlBL133A-5X-Gal（粉末）100 mg使用方法：见说明书注意事项：1、X-Gal粉末配制成溶液后，分装成小份-20℃保存，3个月内有效，X-Gal溶液需室温完全解冻混匀后再使用。
2、β-半乳糖苷酶染色液A和B需提前恢复至室温后再使用，配制好的染色工作液需充分混匀无沉淀方可使用。
3、衰老细胞β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH条件，不能在CO2培养箱中进行孵育显色，否则会影响染色工作液的pH，导致染色失败。
β-半乳糖苷酶活性测定方法
β-半乳糖苷酶活性测定方法β-半乳糖苷酶活性测定（β-galactosidase assays）1、将过夜培养的菌液按1%接种量到新鲜培养基中培养，待OD600至0.6时取出，放置于冰上；（或可检测不同OD600时，菌的酶活性）2、取50-100μl 菌液至1.5 ml 的离心管中，加370-420μl Z buffer；3、加20 μl 氯仿和10 μl 0.1% SDS，振荡混匀，裂解细胞，放置于冰上30分钟；4、向离心管中加入100 μl 浓度4 mg/ml 的ONPG，混匀后立即置于30℃反应30-60分钟；5、待颜色变黄后，加入250 μl 1 M Na2CO3中止反应，准确记录变色反应的时间；6、取200μl上清，测定420 nm 和550 nm 处的吸光度；7、计算β-半乳糖苷酶酶活力：Miller Units = 1,000×[(OD420－ 1.75×OD550)] / (t×V×OD600)，其中，OD420和OD550----显色后的反应液读数；OD600----用于显色分析的培养液的细菌密度；t ----显色反应时间(单位min)；V ----用于显色分析的培养液体积(单位ml)。
Z buffer (总体积100 ml)：Na2HPO4·12H2O 100mM 3.5814 gNaH2PO4·H2O 40mM 0.624gKCl 10mM 0.07455gMgSO4·7H2O1mM 0.0246gβ-mercaptoethanol 5.4μl / ml 540μl加水到总体积90 ml，待试剂溶解后调pH 至7.0，最后定容到100 ml，4℃储存。
Substrate solution(总体积10ml)----现用现配Na2HPO4·12H2O 60mM 0.215 g NaH2PO4·H2O 40mM 0.0624g ONPG 4mg/ml 0.04g终止液（100ml）：Na2CO3 1M 10.6g。
β-半乳糖苷酶染色(组织染色)
β-半乳糖苷酶染色（组织）检测原理：一般认为绝大多数正常细胞仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老(senescence)状态。
此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。
衰老的细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。
衰老细胞通常体积变大，并表达在pH6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)。
细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。
由此以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物。
从而在光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞。
操作步骤：（1）将石蜡组织切片置于65°C恒温箱，烤片1h左右。
（2）脱蜡：二甲苯I 10min→二甲苯II 10min →梯度酒精（由高到低）各5min。
（3）1×PBS 洗涤3次，每次 5min。
注：对于冷冻切片直接按照以下步骤进行。
（4）加入适当体积的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分盖住组织为宜，室温固定不少于 15min。
（5）1×PBS 洗涤3次，每次 5min。
（6）加入适当量的染色工作液。
（7）37℃孵育过夜，最好把整个切片浸泡在染色工作液中。
注：37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。
（8）1×PBS 洗涤3次，每次 5min。
（9）脱水：梯度酒精（由低到高）各5min → 二甲苯I 10min→ 二甲苯 II 10min。
（10）加上封片液封片后4℃可以保存较长时间。
（11）普通光学显微镜下观察。
光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞。
注：所用试剂按照β-半乳糖苷酶染色试剂盒说明配制。
β-半乳糖苷酶染色试剂盒市面上有很多种，但检测方法几近相同，具体还是要参照相应的试剂说明书来操作。
GENMED真菌酵母细胞半乳糖苷酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书
GENMED SCIENTIFICS INC.GENMED真菌/酵母细胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）要紧用途GENMED真菌/细胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量检测试剂是一种旨在利用化学和物理方式，快速有效地裂解真菌细胞，通太高速离心，取得澄清细胞裂解悬液，在β-半乳糖苷酶反映体系里，以邻硝基苯基-β-D- 半乳糖苷为无色底物，水解所产生的亮黄色的邻硝基酚，即采纳比色法定量测定细胞裂解悬液制备样品中的β-半乳糖苷酶活性，藉此成立一种简单的定量评判报告基因的权威而经典的技术方式。
该技术通过精心研制、成功实验证明的。
普遍应用于基因组学、蛋白质组学和其它分子生物学研究。
其适用于转基因后的真菌/酵母活体细胞分析。
产品即到即用，性能稳固，参数优化，操作简便、比色灵敏，可谓国际上同类产品最正确。
技术背景大肠杆菌的标志基因Lac Z编码β-半乳糖苷酶（β-galactosidase ；β-gal），在其催化作用下，半乳糖可从乳糖的水解作用中取得。
β-半乳糖苷酶超级稳固，对蛋白水解降解作用抗性强，且容易测试。
因此β-半乳糖苷酶成为目前最经常使用的报告基因，以评判载体转染的成效。
邻硝基苯基-β-D-半乳糖苷（o-nitrophenyl-β-D-galactopyraniside；ONPG），是一种无色底物，以替代乳糖，在β-半乳糖苷酶的催化下，水解成无色的半乳糖和亮黄色的邻硝基酚（o-nitrophenol；ONP），通过420nm波长的吸光值分析，来测定β-半乳糖苷酶的活性单位。
产品内容GENMED裂解液（Reagent A）10毫升GENMED强化液（Reagent B）2毫升GENMED活性液（Reagent C）250微升GENMED稀释液（Reagent D）20毫升GENMED反映液（Reagent E）4毫升GENMED终止液（Reagent F）10毫升产品说明书1份保留方式保留GENMED裂解液（Reagent A）、GENMED活性液（Reagent C）和GENMED反映液（Reagent E）在－20℃冰箱里，幸免反复冻融；其余的保留在4℃冰箱里；GENMED反映液（Reagent E）幸免光照；有效保证6月用户自备15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器毫升离心管：用于样品操作的容器（微型）台式离心机：用于样品操作比色皿或酶标板：用于比色分析的容器恒温水槽或培育箱：用于反映物孵育计时器：用于反映计时分光光度仪或酶标仪：用于比色分析实验步骤实验开始前，开启分光光度仪预热，设置波长420nm；开启恒温水槽，设置温度为28℃。
β-半乳糖苷酶染色试剂盒使用说明
β-半乳糖苷酶染色试剂盒使用说明产品简介：β-半乳糖苷酶染色试剂盒(β-Galactosidase Staining Kit)是一种基于衰老时SA-β-Gal(senescence-associatedβ-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。
在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。
绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老状态。
此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。
衰老细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。
衰老细胞通常体积变会大，表达pH 6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。
细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。
本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。
β-半乳糖苷酶染色试剂盒以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物，光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。
本试剂盒仅染色衰老细胞，对衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞等不会染色。
对于组织切片或组织块，可以检测的样品数量视样品的大小而定，对于普通的切片也至少足够检测100个样品，使用6孔板测定，足够测定100个样品。
产品组成：试剂(C):β-半乳糖苷酶染色液A1ml4℃避光试剂(D):β-半乳糖苷酶染色液B1ml4℃避光试剂(E):β-半乳糖苷酶染色液C100ml4℃避光使用说明书1份自备材料：1、PBS或HBSS2、细胞培养器皿3、显微镜操作步骤(仅供参考)：(一)贴壁细胞染色：1、对于6孔板中培养的细胞，吸除细胞培养液，用PBS或HBSS洗涤1次，加入1ml β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定15min。
β-半乳糖苷酶活性测定方法
β-半乳糖苷酶活性测定（β-galactosidase assays）1、将过夜培养的菌液按1%接种量到新鲜培养基中培养，待OD600至0.6时取出，放置于冰上；（或可检测不同OD600时，菌的酶活性）2、取50-100μl 菌液至1.5 ml 的离心管中，加370-420μl Z buffer；3、加20 μl 氯仿和10 μl 0.1% SDS，振荡混匀，裂解细胞，放置于冰上30分钟；4、向离心管中加入100 μl 浓度4 mg/ml 的ONPG，混匀后立即置于30℃反应30-60分钟；5、待颜色变黄后，加入250 μl 1 M Na2CO3中止反应，准确记录变色反应的时间；6、取200μl上清，测定420 nm 和550 nm 处的吸光度；7、计算β-半乳糖苷酶酶活力：Miller Units = 1,000×[(OD420－1.75×OD550)] / (t×V×OD600)，其中，OD420和OD550----显色后的反应液读数；OD600----用于显色分析的培养液的细菌密度；t ----显色反应时间(单位min)；V ----用于显色分析的培养液体积(单位ml)。
Z buffer (总体积100 ml)：Na2HPO4·12H2O 100mM 3.5814 gNaH2PO4·H2O 40mM 0.624gKCl 10mM 0.07455gMgSO4·7H2O1mM 0.0246gβ-mercaptoethanol 5.4μl / ml 540μl加水到总体积90 ml，待试剂溶解后调pH 至7.0，最后定容到100 ml，4℃储存。
Substrate solution(总体积10ml)----现用现配Na2HPO4·12H2O 60mM 0.215 gNaH2PO4·H2O 40mM 0.0624gONPG 4mg/ml 0.04g终止液（100ml）：Na2CO3 1M 10.6g。
大鼠超氧化物歧化酶SODELISA试剂盒使用说明书
小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用预期应用ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中SOD含量。
实验原理小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA试剂盒使用说明书超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内一种重要的超氧阴离子自由基清除剂，分为 Cu,Zn-SOD、Fe-SOD和Mn-SOD 3类，在生物界分布较广，其主要作用是能专一地清除生物氧化中产生的超氧阴离子自由基(O2-.)，有助于减少和阻止脂质的过氧化反应、延缓机体衰老。
本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中SOD水平。
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入SOD抗原、生物素化的抗大鼠SOD抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的SOD呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
试剂盒组成1. 酶联板：一块（96孔）2. 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，其浓度为500U/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成500 U/ml，250 U/mL ，125 U/mL，62 U/mL，31 U/mL，15.2 U/mL，7.6 U/mL其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0 U/mL，临用前15分钟内配制。
3. 样品稀释液：1×20ml/瓶。
4. 检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5. 检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6. 检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1：100稀释。
7. 检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1：100稀释。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶。
9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
β-半乳糖苷酶β-galELISA试剂盒使用方法
β-半乳糖苷酶（β-gal）ELISA试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T0.8 pg/ml -35pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定微生物样本中β-半乳糖苷酶（β-gal）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中β-半乳糖苷酶（β-gal）水平。
用纯化的β-半乳糖苷酶（β-gal）体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入β-半乳糖苷酶（β-gal），再与HRP标记的β-半乳糖苷酶（β-gal）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的β-半乳糖苷酶（β-gal）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中β-半乳糖苷酶（β-gal）浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
β-半乳糖苷酶（β-GAL）活性检测试剂盒说明书
β-半乳糖苷酶（β-GAL）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC2585规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体100 mL×1瓶2-8℃保存试剂一粉剂×2支-20℃保存试剂二液体4 mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体15 mL×1瓶2-8℃保存标准品液体1 mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用取1支加入1.25mL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融（1瓶粉剂溶解后可做100T，为了延长使用时间，此产品多给1瓶粉剂）。
2、标准品：5μmol/mL的对硝基苯酚溶液。
产品说明：β-GAL(EC 3.2.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能够催化β-半乳糖苷化合物中β-半乳糖苷键水解，此外还具有转半乳糖苷的作用。
β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量，还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解，释放自由的半乳糖。
β-GAL分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。
p-Nitrophenol(400nm)p-Nitrophenyl β-D-Galactopyranoside需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、超声破碎仪、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），15000g，4℃，离心10min，取上清，置冰上待测。
β-半乳糖苷酶（LACZ）酶活测定
β-半乳糖苷酶（LACZ）酶活测定警示：在我们的手册中介绍的实验可能具有潜在的危险性，要求操作人员具有相当的安全训练、特殊装备、以及相关安全部门的监督。
作为实验操作员的你承担全部的责任、义务和由于实施安全步骤和措施带来的危险。
麻省理工大学没有责任、义务或承担由于实施本材料中内容所引起的危险。
法律声明β-半乳糖苷酶（LAC Z）酶活测定1. 在冰上解冻样品，同时准备裂解液（见下面关于裂解液样品的收集和准备的注意事项）。
2. 准备若干(至少每个样品3个和空白一支)透明的塑料比色皿，每支装有500μl的碳酸钠终止液。
你可以在比色皿上标明测试样品的名称和使用的时间。
3. 在微量离心试管中加入如下试剂：400μl 磷酸钠盐缓冲液（pH 7.5）133μl ONPG溶液6μl 镁离子溶液4. 把反应混合物放置在37°C的水浴中或者加热垫上预温育。
5. 一旦预热后，加入如下物质：60μl 细胞萃取物比较明智的做法是同时做阴性对照，即用抽提物或不表达β-半乳糖苷酶的细胞抽提物代替前述的细胞抽提物。
6. 留心观察每个反应试管里黄色（o-硝基酚）的出现，在适当的时间点，从每种反应混合物中等量移取100μl的溶液，把它加到装有碳酸钠终止液的比色皿中。
7. 当完成所有时间点测定后，在420 nm处测光密度，记录吸光值，并且计算吸光值与时间的斜率。
斜率和β-半乳糖苷酶的活性成正比。
注意：若在420nm处吸光值高于1.0，则不能采信。
8. 在计算其实际活性时，先制作o-硝基酚标准曲线图，然后根据样品的吸光值在曲线上找出对应的浓度。
一个酶活力单位是指酶在37oC每分钟可催化产生1 μmol的o-硝基酚。
收集和裂解细胞的注意事项细胞培养物的收集1. 在适当的培养时间，取出1.6 ml的培养物放入微量离心管中，并把它置于冰上。
2. 迅速将1.6 ml样品在涡旋混匀器上振荡，然后移出100μl放入已装有900 μL新鲜培养基的比色皿中。
β-半乳糖苷酶染色步骤
β-半乳糖苷酶染色步骤
β-半乳糖苷酶染色是一种用于检测细菌中是否存在β-半乳糖苷酶的方法。
以下是β-半乳糖苷酶染色的步骤：
1. 制备培养基，首先，需要制备含有5-溴-4-氯-3-吲哚丙酸（X-gal）和异丙基β-D-半乳糖苷（IPTG）的LB琼脂培养基。
X-gal是一种底物，IPTG是一种诱导剂，它们会在β-半乳糖苷酶存在的情况下产生蓝色产物。
2. 培养菌落，接种待测细菌在含有X-gal和IPTG的琼脂平板上，并在37摄氏度下培养过夜。
3. 观察菌落，观察琼脂平板上细菌菌落的颜色。
如果细菌中存在β-半乳糖苷酶，菌落会呈现蓝色；如果细菌中不存在β-半乳糖苷酶，菌落会呈现白色。
4. 结果分析，根据菌落的颜色，可以初步判断细菌中是否存在β-半乳糖苷酶。
但需要注意的是，有时候菌落颜色会受到其他因素的影响，因此最好结合其他实验方法进行验证。
总的来说，β-半乳糖苷酶染色是一种简单快速的方法，用于初步检测细菌中是否存在β-半乳糖苷酶，但在实际应用中需要综合考虑其他因素，以确保结果的准确性。
细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂盒产品说明书(中文版)
细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂是一种旨在以X-Gal为底物，通过细胞内β-半乳糖苷酶在酸性条件下稳定表达，催化生成深蓝色的沉积产物，从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的细胞作为细胞复制性衰老（replicative senescence）的分子特征来识别和探测衰老细胞的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
广泛应用于细胞生物学研究。
其适用于各种人体和动物细胞或活体内（in vivo）检测。
产品即到即用，性能稳定，参数优化，着色敏感，堪称国际上同类产品最佳。
技术背景细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。
衰老细胞停滞在细胞周期的G1期，表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征，尤其在酸性条件下，细胞内β-半乳糖苷酶活性增加，而成为细胞衰老的生物学标记。
产品内容清理液（Reagent A）毫升固定液（Reagent B）毫升酸性液（Reagent C）毫升稀释液（Reagent D）毫升染色液（Reagent E）毫升产品说明书 1份保存方式保存染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；稀释液（Reagent D）和染色液（Reagent E）用铝箔封裹，避免光照；有效保证6月用户自备2毫升离心管：用于配制染色工作液15毫升锥形离心管：用于配制染色工作液恒温培养箱：用于染色孵育光学显微镜：用于观察染色后的细胞实验步骤操作一、25cm2细胞培养瓶染色实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent E）从－20℃的冰箱里取出，放进冰槽里等待溶化。
然后移取xx毫升稀释液（Reagent D）到2毫升离心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混匀后，放进37℃恒温水槽里预热，标记为染色工作液。
然后进行下列操作：1．小心抽去25cm2细胞培养瓶里的培养液2．小心加入xx毫升清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面3．小心抽去清理液4．小心加入xx毫升固定液（Reagent B），覆盖整个生长表面5．在室温下孵育5分钟6．小心抽去固定液7．小心加入xx毫升酸性液（Reagent C），清洗细胞表面8．小心抽去酸性液9．重复实验步骤7和8一次10．小心加入xx毫升染色工作液，覆盖整个细胞表面11．放进37℃培养箱，孵育3小时至16小时，或细胞呈现蓝色（注意：避免液体蒸发）12．在光学显微镜下观察和计数：表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞，呈现蓝色。
贝塔半乳糖苷酶染色
贝塔半乳糖苷酶染色贝塔半乳糖苷酶染色引言：贝塔半乳糖苷酶是一种重要的酶类，在医学、生物学和食品工业等领域都有广泛应用。
本文将介绍贝塔半乳糖苷酶染色的方法、原理和应用。
一、贝塔半乳糖苷酶染色方法1. 材料准备（1）1% 贝塔半乳糖苷酶溶液（2）1% 尼龙紫染液（3）0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.0）（4）细菌培养物（5）显微镜玻片和盖玻片（6）恒温箱和定时器2. 操作步骤（1）在显微镜玻片上滴加几滴细菌培养物。
（2）将细菌培养物预处理：先在60℃下加热5分钟，然后在4℃下冷却5分钟。
（3）将滴加后的细菌培养物在恒温箱中置于37℃下孵育4小时。
（4）将孵育后的细菌培养物倒入1% 贝塔半乳糖苷酶溶液中。
（5）在37℃下孵育2小时，使细菌中含有的酶分解成糖和半乳糖。
（6）将细菌培养物洗净，即用蒸馏水或缓冲液洗去贝塔半乳糖苷酶和糖分子。
（7）在洗净后的细菌培养物上滴加1% 尼龙紫染液，静置5分钟。
（8）用缓冲液清洗玻璃片上的细菌培养物，除去多余的染色剂。
（9）将盖玻片盖在玻璃片上，用显微镜观察。
二、贝塔半乳糖苷酶染色原理贝塔半乳糖苷酶染色原理是将含有半乳糖苷键的多糖或蛋白质在酶的作用下分解成糖和半乳糖。
将分解产物的半乳糖与紫色染料反应形成紫色物质。
三、贝塔半乳糖苷酶染色应用1. 菌群分析：贝塔半乳糖苷酶染色方法用于菌群分析，能够较为准确地分析不同菌群中的贝塔半乳糖苷酶的表达情况。
2. 疾病诊断：贝塔半乳糖苷酶染色方法用于某些疾病的辅助诊断，如肝硬化、白内障等。
3. 食品检测：贝塔半乳糖苷酶染色方法用于食品检测中，能够快速检测出含有蔗糖的食品是否掺假。
结论：贝塔半乳糖苷酶染色方法操作简单，结果可靠。
在医学、生物学和食品工业等领域中都有广泛应用。
β半乳糖苷酶染色统计方法
β半乳糖苷酶染色统计方法β半乳糖苷酶染色统计方法引言β半乳糖苷酶是一种重要的酶，广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域。
为了准确测定β半乳糖苷酶的活性，我们需要针对其染色来进行统计分析。
本文将详细介绍几种常用的β半乳糖苷酶染色统计方法。
方法一：比色法1.准备样本：收集待测试的样本，如细胞培养液或组织切片。
2.制备底物：制备含有4-甲基-β-半乳糖苷（MUG）的底物溶液。
3.加入样本与底物：将样本与底物溶液混合，以触发酶底物反应。
4.加入停止液：加入含碱性溶液，停止反应，生成可测量的产物。
5.比色测定：使用比色法测量产物的吸光度，根据标准曲线计算β半乳糖苷酶的活性。
方法二：荧光法1.准备样本：与比色法相同，收集待测试的样本。
2.加入底物：使用荧光底物（如4-甲基-7-氨基香豆素）进行反应。
3.反应停止：加入相应的化学物质停止反应，生成可测量的荧光产物。
4.荧光测定：使用荧光光谱仪或流式细胞仪来测量荧光产物的荧光强度，并计算β半乳糖苷酶的活性。
方法三：显微镜法1.准备样本：制备待测试的组织切片或细胞样本。
2.染色：使用具有底物性质的染色剂（如X-β-D-GlcA）来染色。
3.显微镜观察：使用显微镜观察到染色后的样本，测量正、负染色细胞的数量。
4.统计分析：根据正、负染色细胞的数量计算出β半乳糖苷酶的活性。
方法四：酶组学技术1.准备样本：收集待测试的细胞或组织样本。
2.酶组学分析：使用高通量酶组学技术（如蛋白质微芯片）来评估多个酶的活性。
3.数据分析：将得到的酶组学数据进行统计分析，计算β半乳糖苷酶的活性。
4.结果验证：使用其他方法对结果进行验证，如比色法、荧光法或显微镜法。
结论根据上述介绍的方法，研究人员可以选择适合自己研究需求的β半乳糖苷酶染色统计方法。
无论是比色法、荧光法、显微镜法还是酶组学技术，都可以提供准确的β半乳糖苷酶活性数据，助力相关研究的开展。
在选择方法时，需根据实验条件、设备设施和预算等因素进行综合考虑，以确保研究结果的可靠性和准确性。
β-半乳糖苷酶(LACZ)酶活测定
警示：在我们的手册中介绍的实验可能具有潜在的危险性，要求操作人员具有相当的安全训练、特殊装备、以及相关安全部门的监督。
作为实验操作员的你承担全部的责任、义务和由于实施安全步骤和措施带来的危险。
麻省理工大学没有责任、义务或承担由于实施本材料中内容所引起的危险。
法律声明β-半乳糖苷酶（LAC Z）酶活测定1. 在冰上解冻样品，同时准备裂解液（见下面关于裂解液样品的收集和准备的注意事项）。
2. 准备若干(至少每个样品3个和空白一支)透明的塑料比色皿，每支装有500μl的碳酸钠终止液。
你可以在比色皿上标明测试样品的名称和使用的时间。
3. 在微量离心试管中加入如下试剂：400μl 磷酸钠盐缓冲液（pH 7.5）133μl ONPG溶液6μl 镁离子溶液4. 把反应混合物放置在37°C的水浴中或者加热垫上预温育。
5. 一旦预热后，加入如下物质：60μl 细胞萃取物比较明智的做法是同时做阴性对照，即用抽提物或不表达β-半乳糖苷酶的细胞抽提物代替前述的细胞抽提物。
6. 留心观察每个反应试管里黄色（o-硝基酚）的出现，在适当的时间点，从每种反应混合物中等量移取100μl的溶液，把它加到装有碳酸钠终止液的比色皿中。
7. 当完成所有时间点测定后，在420 nm处测光密度，记录吸光值，并且计算吸光值与时间的斜率。
斜率和β-半乳糖苷酶的活性成正比。
注意：若在420nm处吸光值高于1.0，则不能采信。
8. 在计算其实际活性时，先制作o-硝基酚标准曲线图，然后根据样品的吸光值在曲线上找出对应的浓度。
一个酶活力单位是指酶在37ºC每分钟可催化产生1 μmol的o-硝基酚。
收集和裂解细胞的注意事项细胞培养物的收集1. 在适当的培养时间，取出1.6 ml的培养物放入微量离心管中，并把它置于冰上。
2. 迅速将1.6 ml样品在涡旋混匀器上振荡，然后移出100μl放入已装有900 μL新鲜培养基的比色皿中。
离心剩下的1.5ml样品，去掉上层清液，把沉淀迅速放在-80°C冷藏。
β-半乳糖苷酶染色试剂盒说明书
细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒产品简介：细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒(Senescence β-Galactosidase Staining Kit)是一种基于衰老时SA-β-Gal (senescence-associated β-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。
在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。
本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。
绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老(senescence)状态。
此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。
衰老(senescence)的细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。
衰老细胞细胞通常体积变大，表达pH 6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。
细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。
碧云天生产的细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒，以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物。
从而在光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。
本试剂盒仅染色衰老细胞，不会染色衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞。
如果使用6孔板检测，足够测定100个样品；使用24孔板测定，足够测定400个样品；使用96孔板测定，足够测定1000个样品。
对于组织切片或组织块，可以检测的样品数量视样品的大小而定。
对于普通的切片也至少足够检测100个样品。
保存条件：-20℃保存，一年有效。
其中X-Gal溶液需避光保存。
注意事项：β-半乳糖苷酶染色固定液有一定的腐蚀性和毒性，操作时请注意防护。
钠测定试剂盒(半乳糖苷酶法)产品技术要求
钠测定试剂盒(半乳糖苷酶法)适用范围：用于体外定量测定人血清或血浆中的钠含量。
1.1 包装规格表1 包装规格1.2 主要组成成分表2 主要组成成分2.1 外观试剂1为无色透明液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂2为淡黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；2.2试剂的净含量应不少于表1中的标称量。
2.3 测定项目2.3.1 试剂空白a) 试剂空白吸光度试剂空白吸光度≤0.5000（波长405nm，光径1.0cm）。
b) 试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率≤0.500/min（波长405nm，光径1.0cm）。
2.3.2 准确度用国家标准物质GBW09152，对试剂盒进行测试，实测值与标识值的偏差在±15%内。
2.3.3 分析灵敏度样本浓度为150 mmol/L时，其吸光度变化在0.1000～0.3000之间。
2.3.4 线性区间在[90,160]mmol/L区间内，线性相关系数r应不小于0.9900，测定的线性偏差应不超过±10%。
2.3.5 精密度a) 批内精密度批内精密度应不大于5.0%。
b) 批间精密度批间差应不大于10.0%。
2.4 稳定性试剂盒在2℃～8℃密封避光保存，有效期为18个月。
到效期后的试剂盒性能应能符合2.1、2.3.1、2.3.2、2.3.3、2.3.4、2.3.5a)的要求。
2.5 溯源性按《GB/T 21415-2008体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，试剂盒校准品溯源至企业工作校准品，与朗道公司校准品比对赋值。
LacZ染色试剂盒使用说明书
华越洋⽣生物提供 QQ: 1733351176LacZ染⾊色试剂盒使⽤用说明书β-‐Galactosidase S taining K it M annual编号 名称 产品规格北京华越洋生物RS3601-‐23 LacZ染色试剂盒 250次分析基本信息：大肠杆菌中的LacZ基因是应用极广的报告基因之一，被用来检测表达载体介导的基因转移效率，也用于基因启动子研究。
LacZ编码β-‐半乳糖苷酶，该物质非常稳定，能抵抗蛋白酶的水解，并且可以利用许多底物，包括X-‐gal。
X-‐Gal是β-‐半乳糖苷酶（β-‐galactosidase）的显色底物，在β-‐半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物，所以可以轻易的检测出LacZ基因的表达。
The LacZ gene from E. coli is one of the most commonly used reporter genes f or t esting t he e fficiency o f e xpression v ector m ediated g ene t ransfer and for studying the regulation of promoters of genes. The LacZ gene encodes the enzyme β-‐galactosidase, which is very stable, resistant to proteolytic d egradation, c an u tilize a v ariety o f s ubstrates a nd c an b e e asily assayed in situ. The β-‐Galactosidase staining kit utilizes X-‐gal as the substrate.产品说明：华越洋的β-‐半乳糖苷酶染色试剂盒利用X-‐gal作为底物，配合试剂盒内提供的其他试剂，可以完成250次染色反应。
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β-半乳糖苷酶染色试剂盒使用说明
产品简介：
β-半乳糖苷酶染色试剂盒(β-Galactosidase Staining Kit)是一种基于衰老时SA-β-Gal(senescence-associatedβ-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。
在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。
绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老状态。
此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。
衰老细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。
衰老细胞通常体积变会大，表达pH 6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。
细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。
本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。
β-半乳糖苷酶染色试剂盒以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物，光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。
本试剂盒仅染色衰老细胞，对衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞等不会染色。
对于组织切片或组织块，可以检测的样品数量视样品的大小而定，对于普通的切片也至少足够检测100个样品，使用6孔板测定，足够测定100个样品。
产品组成：
试剂(C):β-半乳糖苷酶染色液A1ml4℃避光
试剂(D):β-半乳糖苷酶染色液B1ml4℃避光
试剂(E):β-半乳糖苷酶染色液C100ml4℃避光使用说明书1份
自备材料：
1、PBS或HBSS
2、细胞培养器皿
3、显微镜
操作步骤(仅供参考)：
(一)贴壁细胞染色：
1、对于6孔板中培养的细胞，吸除细胞培养液，用PBS或HBSS洗涤1次，加入1ml β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定15min。
对于其它类型的培养板，固定液及后续溶液的用量参照此比例进行操作。
2、吸除细胞固定液，用PBS或HBSS洗涤细胞3次，每次3min。
3、吸除PBS或HBSS，每孔加入1ml染色工作液。
使用聚丙烯(polypropylene)容器，不能使用聚苯乙烯(polystyrene)容器配制染色工作液。
染色工作液的配制方法参考表1。
β-半乳糖苷酶染色液A10μl
β-半乳糖苷酶染色液A10μl
β-半乳糖苷酶染色液C930μl
X-Gal溶液50μl
表1：染色工作液的配制方法:
说明：对于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的简单的判定方法是：聚丙烯容器可以高温高压灭菌；而聚苯乙烯容器不适合高温高压灭菌，一旦高温高压处理就会严重变形。
4、37℃孵育过夜，可以用parafilm或保鲜膜封住6孔板防止蒸发。
注意：37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。
5、普通光学显微镜下观察。
如不能及时观察计数，可以去除染色工作液，加入2ml PBS，
4℃可以保存数天；或者加上封片液封片后，4℃可以保存较长时间。
(二)悬浮细胞染色：
1、离心收集细胞至 1.5ml离心管内，用PBS或HBSS洗涤1次，加入1mlβ-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定15min。
固定时可以在摇床上缓慢摇动，以避免细胞结成团块。
2、离心，吸除细胞固定液，用PBS或HBSS洗涤细胞3次，每次3min。
3、离心，吸除PBS或HBSS，每管加入0.5-1ml染色工作液。
染色工作液的配制方法参考表1。
4、37℃孵育过夜。
注意：37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。
5、取部分染色后的细胞，滴加到载玻片上或6孔板内，普通光学显微镜下观察。
如不能及时观察计数，可以离心，去除染色工作液，然后加入1ml PBS，4℃可以保存数天。
如果离心，取细胞用于涂片，加上封片液封片后，4℃可以保存较长时间。
(三)组织切片染色：
1、对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡和水化处理。
对于冷冻切片直接按照以下步
骤进行。
2、加入适当体积的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分盖住组织为宜，室温固定不少于15min。
3、用PBS浸泡洗涤组织3次，每次不少于5min。
4、吸除PBS，加入适当量的染色工作液。
染色工作液的配制方法参考表1。
5、37℃孵育过夜，可以用parafilm或保鲜膜封住防止蒸发。
最好把整个切片浸泡在染色工作液中。
注意：37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。
6、普通光学显微镜下观察。
如不能及时观察，加上封片液封片后4℃可以保存较长时间。
注意事项：
1、β-半乳糖苷酶染色固定液有一定的腐蚀性和毒性，操作时请注意防护。
2、β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH条件，不能在二氧化碳培养箱中进行染色反应。
用于细胞培养的二氧化碳培养箱中较高浓度的二氧化碳会影响染色工作液的pH值，而导致染色失败。
3、β-半乳糖苷酶染色液B在刚刚溶解后会观察到有沉淀，属正常现象，充分混匀或Vortex后，沉淀会全部溶解。
作为常规，试剂使用前必须确保沉淀全部溶解，并且混匀。
4、配制染色工作液时需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯(polystyrene)容器。
但染色时可以在聚苯乙烯(polystyrene)容器中进行，例如普通的
6孔板就可以用作染色的容器。
5、需自备PBS或HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。