流式细胞术免疫分型基础

流式细胞术免疫分型基础免疫分型组成系别相关标志干/祖细胞：CD34，CD38，HLA-DR，TdT髓系：CD33，CD13，CD15，CD11b，CD14，CD64，cMPO，CD117, CD11c, CD36红系：CD71，glyA巨核系：CD41，CD61B 细胞：CD10，CD19，CD20，CD22，CD23，k，λ, cCD79a,cIgM, (CD5, CD11c, CD103, CD25, FMC7)T细胞：CD2，CD3，CD5，CD7，CD4/8，cCD3, TCR NK细胞：CD16，CD56，（CD3 -/CD56+）浆细胞：CD138，CD38,c k，cλ原始细胞（Blast）早幼粒细胞（有颗粒原粒？）髓系幼稚细胞•幼稚细胞包括原粒、原单、原始巨核、幼单。

•异常单核不能算幼稚单核，在鉴别急性粒单细胞白血病、急性单核细胞白血病、慢性粒单细胞白血病中有重要作用。

•小的异常增生巨核和微巨核不能算幼稚细胞。

•在APL中，异常早幼粒也算幼稚细胞。

•原红一般不计在内，除非罕见的急性纯红细胞白血病。

髓系幼稚细胞免疫标志•原粒、原单：CD34、CD117、HLA-DR、CD13、CD33、MPO+/-•原始巨核:CD61、CD41a、CD9、CD36（不特异）•幼单：CD15dim、HLA-DRstr、CD64、CD11c、CD4dim、CD11b、CD33str、CD13、CD14-•APL：HLA-DR-、CD34-、CD117+、CD9+、CD15-/+、CD33str、CD64+、CD13dim淋系幼稚细胞•幼稚细胞包括原始淋巴、幼稚淋巴。

表型：•幼稚标志+泛B/T标志•幼稚标志：CD34、TdT、B系（CD10）T系（CD1a、CD99str)•泛B：CD19、cCD79a、CD22•泛T：胞浆CD3、CD7、CD2、CD5•不表达成熟标志：B系胞膜轻链；T系CD4、CD8、CD32008 WHO分类•偏成熟髓系疾病–髓系增殖性肿瘤(MPN)（包括肥大细胞增多症）–伴有嗜酸细胞增多和PDGFRA、PDGFRB、FGFR1异常的髓系和淋系肿瘤–MDS/MPN–MDS•急性髓系白血病和急性未定系列白血病•前体淋巴肿瘤•成熟淋巴增殖性疾病–B细胞淋巴瘤–T或者NK细胞淋巴瘤–何杰金氏淋巴瘤–免疫缺陷病•组织细胞和树突细胞肿瘤MPN（髓系增殖性肿瘤）•BCR-ABL1阳性慢性髓系白血病（chronic myelogenous leukemia,CML)•慢性中性粒细胞白血病(CNL)•真性红细胞增多症(PV)•原发性骨髓纤维化(PMF)•特发性血小板增多症(ET)•慢性嗜酸性粒细胞白血病，NOS(CEL)•肥大细胞增多症(mastocytosis)•髓系增殖性肿瘤，不能分类的(MPN.U)CML加速期(Accelerated Phase,AP)•出现下述之一考虑CML AP：PB中嗜碱性粒细胞超过20%；（嗜碱性粒细胞识别：位置：CD45/SSC图，原粒的左上，表达CD9、CD123、CD203c、CD22dim）PB或者BM中髓系幼稚细胞为10-19%幼稚细胞克隆为非髓系。

CML急变期（Blast Phase, BP）•表现为下述之一：①PB中原始细胞占白细胞20%以上，BM中原始细胞占有核细胞20%以上，②原始细胞髓外增生。

70%的病例BP是急髓变，包括中性粒、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核系、巨核系或者红系急变，或者上述组合，20-30%为淋系急变。

MDS/MPN•CMML•aCML, BCR-ABL1-•JMML•MDS/MPN,UCMML诊断标准1、持续性PB单核细胞增多>1X109/L（>20%)2、无Ph染色体或者BCR/ABL1基因3、无PDGFRA或者PDGFRB重排（尤其是伴嗜酸性粒细胞增多的病例）4、PB和BM中幼稚细胞<20%5、至少1个髓系增生不良，如果没有或者只有轻微髓系增生不良，需要其它条件：①造血细胞中存在获得性、克隆性细胞或者分子遗传学异常，或者②单核细胞增多至少持续3个月和③排除其它所有导致单核细胞增多的原因。

急性白血病(acute leukemia)诊断标准•BM：建议用瑞氏染色，计数500个分化细胞，PB计数200个•如果有明显的细胞减少，可以使用棕色层（buffycoat）涂片。

•如存在骨髓纤维化，不能涂片，如果blast表达CD34,活检片子CD34+≥20%也可以诊断。

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)诊断标准•BM或者PB中：髓系原始细胞≥20%，或者有髓外侵润。

•特例：1、重现性遗传学异常，髓系幼稚细胞<20%也可以诊断。

2、骨髓有核红细胞50%以上，见鉴别诊断。

•主要标准根据BM涂片、PB涂片、BM活检。

•分类标准仅适用于化疗前。

红系前体细胞>=骨髓有核细胞的50%时的可能诊断MDS幼稚细胞<骨髓中非红系的20%BM 中和/或PB 中幼稚细胞<20%≥50%M6幼稚细胞≥骨髓中非红系的20%BM 中和/或PB 中幼稚细胞<20%≥50%纯红白血病粒系成分少幼稚细胞少见红系前体≥80%MDS 相关AML 符合MDS 相关AML 标准BM 中和/或PB 中幼稚细胞>20%≥50%诊断其它表现PB/BM 发现BM 中红系前体%注意：非红系的计算，红系前体、淋巴细胞、浆细胞都不计在内。

AML ，NOS 亚型：参照FAB界限不清，出现分化标志原粒以外，有分化阶段粒细胞，POX,SBB,CE+原粒<90%，单核系<20%M2单核标志单核系为主，NAE+NAF 抑制单核系≥80%M5R6明显红系和粒系原幼+分化细胞，红系PAS 阳性20%以上，有核红占有核细胞50%以上或者红系80%以上M6巨核标志原始巨核，PAS 粗颗粒阳性原始巨核20%以上M73群细胞粒单两系原始加分化细胞，POX,CE, NAE+NAF 抑制原幼粒+成熟粒≥20%原幼单+成熟单≥20%M4干祖+全髓标志原粒为主，分化阶段少，POX,SBB ≥3%原粒≥90%M1干祖+全髓标志像原始淋巴，POX,SBB<3%不定M0表型形态学髓系幼稚占非红系比例亚型LBL/ALL定义•定义：以局部团块为主，没有或者很少PB、BM侵润，为淋巴瘤。

根据细胞成熟阶段分为成熟淋巴瘤或者淋巴母细胞淋巴瘤(LBL)•如果局部和PB/BM都有，分类比较武断，有的以25%为界，一般骨髓幼稚细胞<20%不考虑ALL，而为LBL。

淋巴肿瘤的定义成熟度累及范围NHL成熟淋巴白血病/淋巴瘤成熟淋巴白血病/淋巴瘤NHL成熟LBL ALL ALL LBL 幼稚都有BM 、PB<20%都有BM 、PB>25%BM 、PB 髓外为主前体B细胞白血病/淋巴瘤，NOS•B-ALL：以胞膜免疫球蛋白为界，不包括Burkitt。

•表型：CD19+/cCD22+/cCD79a+，但是都不特异，需要组合+高强度表达。

表1 B-ALL/LBL免疫表型分类++++++++++cCD79a++++++++++CD22#++++++++++CD19++++---sIg ++++++--cIgM ++++++-CD20++++++++-CD10-++++CD34-++++++TdT Mature B-ALL 现Burkitt 样白血病/淋巴瘤Transitional pre-B-ALL*(无EGIL 编码)Pre B-ALL (EGIL B-III)Common B-ALL(EGIL B-II)Pro B-ALL (EGIL B-I)标志-：<10%的病例阳性；+：25-75%的病例阳性；++：>75%病例阳性。

*：约5%的Pre B-ALL 为过渡型pre B-ALL ，定义为胞浆和胞膜IgM ，但是不表达成熟κ、λ轻链。

#：PE标记或者胞浆CD22。

表2 T-ALL/LBL免疫表型分类+单阳单阳--+++髓质-双阳双阳-++++皮质---+/--+++Pre---+/---++Pro CD3CD8CD4CD34CD1a CD2CD7cCD3亚型每种临床表现应该评价的细胞系（来自2006 Bethesda）T、M嗜酸性粒细胞增多B、T 淋巴细胞增多、肝脾大M 单核细胞增多M 中性粒细胞增多B、T、M、P 全血细胞减少B、T、M、P 血小板减少B、T、M、P 白细胞减少B、T、M、P 贫血评价的细胞系临床表现注：B:B细胞系;M:髓系;P:浆细胞系;T:T细胞系最低检测抗体11、成熟髓系肿瘤/疾病：•原始细胞标志：CD34、CD117•髓系标志：CD11b、CD13、CD14、CD15、CD16、CD642、成熟B系肿瘤：CD5、CD10、CD19、CD20、CD23、kappa、lambda3、成熟T/NK系肿瘤：CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD56（如果CD4/CD8双阳，要求做CD1a）4、浆细胞肿瘤/疾病：CD19、CD38、CD56、CD138、胞浆kappa、胞浆lambda最低检测抗体25、AML：•原始细胞标志：CD34、CD117、HLA-DR•髓系标志：CD11b、CD13、CD14、CD33、CD64、胞浆MPO•伴系表达标志：CD7、CD56、CD196、B-ALL：•原始细胞标志：CD34•B系标志：CD10、CD20、CD19、胞浆CD79a（或者CD22-PE/胞浆CD22）7、T-ALL：•原始细胞标志：CD34、胞浆TdT•T系标志：CD1a 、CD2、胞浆/胞膜CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD56一个完整的免疫分型做多少抗体？普通免疫分型：•1步法建议做20个抗体•2步法做15个抗体。

复杂的免疫分型，如罕见疾病、混合白血病、T细胞淋巴瘤、异常细胞群比例较低的疾病等，可能需要增加抗体种类，有些抗体需要重复使用。

最简单的急性白血病抗体组合CD34干细胞HLA-DR、CD10其他CD14、CD64单核CD2、CD4、CD5、CD7、CD8、CD56、cCD3T 系CD19、c/m kappa、c/m lambda、CD20、cCD79a或者CD22、CD138B/浆系CD13或者CD33、CD117、MPO髓系最低panel不按照疾病类别，所有疾病采取一致panel的：•MPO/cCD79a(CD22)/CD45/cCD3•CD34/CD10/CD45/CD19•ckappa/clambda/CD19/CD138•CD4/CD8/CD45/CD2•CD7/CD117/CD45/CD56•CD14/CD64/CD45/CD13(33）•CD20/HLA-DR/CD45/CD5。