白血病细胞免疫表型流式细胞分型技术及意义(FlowCytometer)
基于白血病分类的流式细胞术数据分析
基于白血病分类的流式细胞术数据分析白血病是一种相对较为常见的恶性血液病，其患者人数逐年增加。
其中，淋巴细胞白血病与骨髓增生性疾病的鉴别诊断，尤其是B-淋巴细胞白血病与慢性淋巴细胞白血病的鉴别诊断是白血病分类中最为困难的问题之一。
液体肿瘤的流式细胞术可以快速、准确地定量观察肿瘤细胞的表型及其分布状态，从而为诊断、分型、危险分层、疗效评估和指导个性化治疗提供了重要的参考依据。
一、流式细胞仪及其原理流式细胞仪（flow cytometer）是一种分析生物颗粒的现代化仪器，通过微细水在单细胞水平上分离、激发、检测、采集和分析细胞，使得我们可以从样品中快速、可靠地获得多参数荧光信息。
其主要原理是实现细胞的有效分离、定量、激发和检测，并将其表型指纹信息记录下来，以便科研人员和医生进一步分析和诊断相关问题。
二、流式细胞仪的前处理前处理是流式细胞术的关键环节之一，目的是获得高纯度的单细胞悬液，以方便后续的分离、激发和检测。
其主要包括样本采集、样品制备和细胞洗涤三个方面。
1. 样本采集样本采集是前处理的第一步，样本的质量和数量对后续的分离、检测和数据分析具有重要的影响。
在样本采集过程中，需要注意避免样本污染、细胞凋亡、氧化等对样本品质的影响。
2. 样品制备样品制备是前处理的重要环节之一，主要包括细胞裂解、滤过、质量检测、细胞染色和标记等步骤，在操作过程中，需要严格按照流程要求，精细化操作。
3. 细胞洗涤细胞洗涤是前处理的最后一步，其主要目的是从制备好的样品中，去除多余的细胞碎片、溶质和垃圾等杂质，得到纯净的单细胞悬液。
三、数据分析和诊断数据分析和诊断是液体肿瘤流式细胞术的重要环节之一，通过细胞表型相关分析等手段，展开进一步的诊断、分型以及疾病危险评估。
1. 后续生物信息学分析后续生物信息学分析可以对流式细胞术得到的多参数荧光信息进行进一步的解析和比对，方便分析人员和医生从中挖掘更多的疾病相关指标。
2. 诊断和分型诊断和分型是流式细胞术的重要应用之一，其主要基于患者血液中病理细胞的表型学特征，进一步进行疾病的分类和诊断。
白血病免疫分型初筛方案
白血病免疫分型初筛方案白血病免疫分型初筛方案白血病是一种由于造血干细胞异常增殖引起的恶性血液病，其临床表现及预后差异较大。
对于白血病患者的治疗和预后判断，准确的分型至关重要。
近年来，随着免疫学研究的进展，白血病的免疫分型成为了一个重要且具有指导意义的方面。
本文将介绍白血病免疫分型的初筛方案，以及其对临床的意义和应用。
一、什么是白血病免疫分型？白血病免疫分型是通过检测白血病患者的免疫表型，即细胞上表达的抗原和细胞表面标记物，来确定白血病的类型和亚型。
目前，常见的白血病免疫分型方法主要包括流式细胞术、免疫组化、免疫电镜等。
二、为什么需要白血病免疫分型？白血病患者的治疗和预后与其分型紧密相关。
不同类型的白血病具有不同的临床表现、生物学特点和预后，准确的分型对于指导个体化治疗非常重要。
免疫分型不仅可以帮助医生确定病情严重程度、制定个体化治疗方案，还可以对患者的预后做出评估。
对于一些疑难病例，免疫分型还有助于确定病理诊断和鉴别诊断，减少误诊和漏诊的发生。
三、白血病免疫分型的初筛方案目前，国际上广泛应用的白血病免疫分型初筛方案主要是基于流式细胞术。
这一方法具有快速、准确、多参数检测的特点，使得它成为了白血病免疫分型的首选工具。
白血病免疫分型的初筛方案通常包括以下几个方面的内容：1. 纵向免疫分型纵向免疫分型主要是通过检测白血病细胞表面的免疫表型，确定白血病的类型和亚型。
对于怀疑白血病的患者，医生通常会进行一系列免疫标记物的检测，如CD45、CD34、CD13、CD33、CD14、CD15等。
这些标记物可以帮助医生确定白血病患者的分型，指导后续的治疗和预后评估。
2. 横向免疫分型横向免疫分型则是通过比较不同类型的白血病细胞表面的免疫表型，辅助鉴别白血病的类型和亚型。
在横向免疫分型中，医生通常会检测同一类别不同亚型的白血病患者的共同抗原和独特抗原，以确定其具体的亚型。
3. 免疫细胞化学分析免疫细胞化学分析是一种通过检测白血病细胞内特定抗原的染色反应，来确定白血病的类型和亚型的方法。
流式细胞术讲义
髓系细胞和单核细胞
7
CD20 FITC/CD22 PE/ CD45 PerCP
B淋巴系细胞及其分化程度
8
CD8 FITC/CD4 PE/ CD45 PerCP
T淋巴系细胞及其分化程度
9
CD3 FITC/CD16+56 PE/ CD45 PerCP
T淋巴系细胞、NK细胞
10
CD36 FITC/GP-A PE/ CD45 PerCP
❖ T细胞相关标志：
CD2、CD3、CD5、CD7、CD4、CD8
常用白血病免疫分型荧光素标记单克隆抗体组合及其意义
管号 1
三色标记McAb
MouseIgG1/ MouseIgG1/CD45 PerCP
染色细胞及目的
阴性对照及设门
2
CD5 FITC/CD7 PE/ CD45 PerCP
T淋巴系细胞、部分早期髓系细胞
样本要求：
➢ 肝素抗凝骨髓3ml(或外周血) ➢ 每天上午送检 ➢ 收费：
➢ 70元/每个单抗(临床常规检测12个单抗)
❖ 干/祖细胞标志：
CD34、CA133
❖ 髓系标志：
CD33、CD13、CD11b、CD15、MPO
❖ B细胞相关标志：
CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD79a、 CyIg、SmIg
3
CD10 FITC/CD19 PE/ CD45 PerCP
B淋巴系细胞
4
Anti-HLA-DA FITC / CD13 PE/ CD45 PerCP 髓系细胞、 B淋巴系细胞、部分T淋
巴系细胞
5
CD34 FITC/CD38 PE/ CD45 PerCP
反映细胞分化程度
白血病流式报告解读
白血病流式报告解读白血病是一种由于造血系统恶性克隆增生导致的恶性疾病，其发病率逐年上升。
流式细胞术是一项常用的检测手段，能够对白血病患者的血液样本进行细胞分析，并提供重要的诊断和治疗指导信息。
根据白血病流式报告，我们可以看到以下几个关键指标。
1. 免疫表型分析免疫表型分析是流式细胞术最重要的应用之一。
通过检测细胞膜上的特定免疫标记物，可以确定细胞的类型和分布。
在白血病患者中，免疫表型分析可以帮助鉴别不同的细胞系，如淋巴细胞白血病和骨髓细胞白血病。
2. 异常细胞群分析通过流式细胞术，我们可以分析样本中的异常细胞群。
在白血病患者中，异常细胞群的存在可以提供重要的诊断线索。
例如，在急性淋巴细胞白血病中，常见的异常细胞群为早幼B细胞和早幼T细胞。
而在急性髓细胞白血病中，异常细胞群则包括早幼髓细胞和原始髓细胞。
3. 异常免疫表型分析流式细胞术还可以通过检测细胞的免疫表型异常来帮助白血病的诊断和分类。
例如，在B淋巴细胞慢性淋巴细胞白血病中，CD5和CD23的共表达异常是其诊断的关键特征之一。
而在骨髓异常增生综合征中，CD34和CD117的共表达异常则是其诊断的重要标志。
4. 异常细胞比例分析流式细胞术可以通过测定样本中异常细胞的比例来评估疾病的严重程度。
在白血病患者中，异常细胞比例的增加通常与疾病进展和预后不良相关。
因此，通过流式细胞术的异常细胞比例分析，可以提供白血病患者的预后评估和治疗指导。
5. 微小残留病灶检测流式细胞术还可以用于微小残留病灶的检测。
在白血病患者接受治疗后，流式细胞术可以检测微小残留病灶的存在，从而评估治疗的疗效和预后。
通过流式细胞术的微小残留病灶检测，可以及早发现复发风险，采取相应的治疗措施。
白血病流式报告的解读可以通过免疫表型分析、异常细胞群分析、异常免疫表型分析、异常细胞比例分析和微小残留病灶检测等指标来进行。
这些指标不仅可以帮助白血病的诊断和分类，还可以评估疾病的严重程度、预后和治疗效果。
流式技术在血液科的应用
流式技术在血液科的应用
流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）在血液科的应用主要体现在对血液
疾病的诊断、治疗和预后评估上。
1. 诊断：流式细胞术可以对外周血细胞或骨髓细胞进行抗原表达的检测分析，有助于对各种血液病进行诊断、分型和分类。
例如，对于白血病，可以通过流式细胞术进行免疫分型，有助于确定治疗方案和预后评估。
对于淋巴瘤，流式细胞术也可以用于诊断和分类。
2. 微小残留病监测：对于一些血液肿瘤，尽管在治疗后临床症状可能消失，但可能仍存在微小残留病灶，流式细胞术可以用于监测这些微小残留病灶，以评估治疗效果和预测复发风险。
3. 预后评估：流式细胞术检测的抗原表达等指标可以用于评估疾病预后。
例如，一些研究表明，急性白血病患者中CD34+细胞的比例与疾病预后相关。
4. 免疫治疗靶点寻找：流式细胞术可以用于寻找免疫治疗的靶点，例如寻找肿瘤特异性抗原等。
以上信息仅供参考，如有疑问或想了解更多相关信息，建议咨询专业医师或查阅医学专业书籍。
白血病免疫学积分系统意义
白血病免疫学积分系统意义白血病是一种恶性肿瘤，由于白血球数量过多，常导致免疫系统功能受损、贫血和感染等问题。
白血病免疫学积分系统（Leukemia Immunophenotyping Scoring System，LISS）是一种流式细胞术用于白血病分类和治疗评估的指南。
本文将重点讨论该系统的意义。
一、白血病分类LISS是根据不同免疫分型信号分子的表达情况诊断血液病的一种方法，通过分析血液细胞表面分子的表达情况，判断其类型和亚型。
白血病在免疫系统内的分化和发展是复杂的，因此需要结合多种免疫学参数来做出准确的分型判断。
LISS包括采用不同的物质特征进行临床分型，如T细胞、B细胞、浆细胞、中性粒细胞等。
由于不同的蛋白质在不同的白血病细胞中表达的量和类型不同，LISS使得这些白血病类型的分析更为准确。
二、白血病治疗LISS对白血病的治疗有着重要的指导意义。
在识别白血病类型后，LISS可以帮助医生鉴别白血病类型和是否有遗传异常，在治疗方案制定和完善中发挥重要作用。
针对广泛应用的治疗方案，如化疗和干细胞移植，LISS也可以提高其疗效，预测疗效和潜在的不良反应。
LISS不仅可以用于血液恶性肿瘤的分型，也可以用于其他类似的疾病分类和治疗评估。
三、临床应用随着科技的创新和发展，LISS已经逐渐应用到诊断实践中。
流式细胞术是目前白血病诊断和分类中最为常用的方法之一，它主要依靠光学原理和荧光染色来测量细胞的物理和生化特性，从而实现白血病的分类和监测。
LISS最初是在1998年被引入到临床中，经过多年的探索和改进，现在已经成为现代医学中的一个基本流程，有望广泛应用于临床诊断和研究领域。
综上所述，LISS是一种基于流式细胞术的免疫学指南，可以辅助诊断、治疗和预测白血病的疗效，对于提高白血病治疗的可行性和可靠性有重要的作用。
随着人类对细胞学和遗传学的认识不断深入，LISS未来还有望在更多的领域和方法中得到应用，成为医学发展前沿的重要一环。
流式白血病检测指标
流式白血病检测是一种常用的实验室检测方法，可用于诊断和监测白血病。
以下是一些常见的流式白血病检测指标：
1. 免疫表型：通过检测细胞表面的特定抗原或标记物，确定白血病细胞类型。
例如，在急性淋巴细胞白血病（ALL）中，常见的免疫表型指标包括CD10、CD19和CD20等。
2. DNA细胞倍体性：通过测量细胞中DNA含量的变化，判断细胞是否存在异常的染色体数量或结构。
这对于诊断和分型白血病具有重要意义。
3. 克隆性分析：利用多参数流式细胞术，检测白血病细胞中的克隆性异常。
这可以帮助确定异常细胞的来源和进展情况。
4. 红细胞内吞作用：通过检测红细胞内部存在的白血病细胞或细胞碎片，了解疾病的程度和进展。
5. 骨髓细胞形态学分析：通过观察和评估骨髓细胞的形态学特征，包括细胞形状、大小、核与胞浆比例等，判断是否存在白血病细胞。
这些指标通常结合使用，以获得更准确的白血病诊断和监测结果。
具体的指标选择和解读还需要根据医生的建议和实际情况进行。
1。
流式细胞术的临床应用
一、诊断性指标如图1所示，图（左）白血病细胞成为一个单一的群体，很难区分原始或病态的白血病细胞和成熟的细胞。
但是通过CD45和（SSC）设门法之后（图右），看到图（左）无法区分细胞被分成了五群。
在这五群中，成熟细胞CD45表达的荧光比较强。
A门里是淋巴细胞，B门里是单核细胞，C门里就是粒细胞群，D门里是原始细胞，一般CD45表达较弱。
一些细胞碎片、红细胞和转移来的瘤细胞，由于不表达CD45，可能位于D门、D门偏下或者E门的位置。
CD45结合侧向散射光之后能把白血病细胞找出来，减少了其它细胞的干扰。
对D门里的白血病细胞做进一步的分型，就能准确看到白血病细胞群免疫分型的表达情况。
图13.白血病的特异性标志免疫表型分析主要是根据细胞的特异表面标志，把白细胞分成T细胞、B细胞和原始细胞。
T淋巴细胞白血病一般表达的分化抗原有胞浆内的cCD3、抗TCRαβ、抗TCRγδ、CD2、CD5、CD8、CD10和CD7；B淋巴细胞白血病一般表达的分化抗原有胞浆内的cCD79a、CD22、CD19 、CD10和CD20；髓系白血病一般表达的分化抗原有胞浆内的cMPO、CD117、CD13、CD33、CD14、CD15和CD64；NK淋巴细胞白血病一般表达的分化抗原有CD16、CD56和CD57；红白血病一般表达的分化抗原有GlyA和CD36；巨核细胞白血病一般表达的分化抗原有CD41、CD42和CD61；一系列非特异标志在不同的白血病中可能都有表达，尤其是表达在早期的造血干组细胞上，一般表达的分化抗原有CD34和HLA-DR。
其中，对T淋巴细胞白血病来讲比较特异的是胞浆内的CD3，当胞浆内CD3出现阳性的时候，高度怀疑是T淋巴细胞白血病。
对于B淋巴细胞白血病来讲，胞浆内的CD79a和CD19是比较特异的，cCD79a最具特异性。
cCD3和cCD79a分别表达于早期T细胞和B细胞。
cMPO是髓系特异标志。
如图2所示为B-ALL的表达图。
血液流式细胞免疫分型
血液流式细胞免疫分型血液流式细胞免疫分型（Flow Cytometry Immunophenotyping）是一种常用于研究血液细胞群体特征的实验技术。
它通过流式细胞仪对单个细胞进行高速连续检测和分析，可以准确地鉴定和定量不同细胞类型及其亚群。
血液流式细胞免疫分型广泛应用于临床诊断、疾病监测和研究领域。
血液流式细胞免疫分型的原理是利用细胞表面分子的特异性抗原与相应荧光标记的抗体结合，通过流式细胞仪检测细胞中荧光标记物的荧光强度和散射信号，进而确定细胞的免疫表型。
不同的抗体标记不同的细胞表面标志物，可以对不同类型的细胞进行鉴定和分类。
血液流式细胞免疫分型可用于鉴定和分类多种血液细胞，如淋巴细胞、单核细胞、粒细胞和红细胞等。
在临床诊断中，血液流式细胞免疫分型常用于血液肿瘤的诊断和分期，如白血病和淋巴瘤等。
通过分析细胞表面标志物的表达情况，可以确定细胞的来源和分化状态，帮助医生制定合理的治疗方案。
血液流式细胞免疫分型还可以用于疾病监测和治疗效果评估。
在治疗过程中，通过连续追踪特定细胞亚群的变化，可以评估治疗效果和预测预后。
例如，在HIV感染者中，可以通过测定CD4+T细胞数量来监测疾病进展和指导抗病毒治疗。
此外，血液流式细胞免疫分型还可以用于检测免疫功能异常和自身免疫性疾病等。
血液流式细胞免疫分型的优势在于其高灵敏度、高特异性和高通量性。
通过流式细胞仪的高速连续检测，可以迅速分析大量样本，提高工作效率。
此外，血液流式细胞免疫分型还可以进行多参数分析，同时检测多个细胞表面标志物，更全面地了解细胞特征。
然而，血液流式细胞免疫分型也存在一些局限性。
首先，对于少数细胞数量较少的样本，如骨髓或淋巴结穿刺液，可能需要进行前处理或增加检测敏感性。
其次，标记物的选择和抗体的质量也会影响结果的准确性。
因此，在进行血液流式细胞免疫分型时，需要选择适当的抗体组合，并进行质量控制。
血液流式细胞免疫分型是一种重要的实验技术，可用于研究血液细胞群体特征、临床诊断和疾病监测。
流式细胞仪在白血病诊断中的意义
流式细胞仪在白血病诊断中的意义一、流式细胞仪在白血病免疫分型诊断的概述近年来白血病的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。
早年曾用过的荧光显微镜或APAAP方法基本被废弃。
国际上公认的通用的方法是流式细胞术（FCM）。
流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（McAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。
1、流式细胞仪诊断白血病的依据（1）FCM能快速，多参数，客观的定性又定量测定细胞膜、浆、核的抗原表达。
（2）至今尚未发现白血病的特异抗原。
（3）能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化阻断学说。
即白血病细胞基因异常，分化受阻于某阶段形成不同亚型的白血病。
这群细胞充盈于骨髓。
正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特异性。
因此，这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。
白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型。
2、流式细胞仪诊断白血病的意义（1）骨髓血细胞是形态学分型的基础，FCM白血病免疫分型是对形态学分型的重要补充和进一步深化，国际白血病MIC分型协作组认为免疫分型对每一例急性白血病都是必不可少的，对下列情况意义更大：①用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。
②形态学为急性淋巴细胞白血病（ALL）或急性未分化白血病（AUL）但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。
③混合性白血病。
④部分髓系白血病。
目前，免疫分型对粒细胞和单核细胞白血病的鉴别尚有一定困难。
⑤慢性淋巴细胞白血病。
⑥微小残留白血病。
（2）临床预测；可根据抗原的表达情况预测病情的预后：如白血病患者有CD7+与CD34+共表达，预后不好。
流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)
抗体的选择
PE最强，适用于弱表达抗原 FITC最便宜，适用于强表达抗原，适
用范围广 biotin-avidin不适合 弱抗原的检测
数据显示方式
单参数直方图 双参数二维点图 等高图 二维密度图 三维图
流式常见图形 (Histogram Plot)
流式细胞的主要信息:Fluorescence FL1 FL2 FL3 FL4
第四节 凋亡检测
1）FCM-DNA检测（DNA亚G1峰的检测）：利用PI染 色，检测具有亚G1期DNA含量的细胞比例，代表凋亡 细胞数。其原理为在凋亡过程中，细胞内核酸酶的释 放，将DNA降解，分解成小的片段，在标本制备中的 固定处理时，细胞膜的完整性被破坏，使细胞内降解 的DNA片段从细胞内流出，造成总体DNA含量减少， 成为亚2倍体。注：检测的凋亡细胞数代表晚期的凋亡 细胞比例，且易受标本中的死细胞和碎片的干扰，影 响结果的准确性。 可参看文章： /content/cell/20040914791.htm /content/cell/20040914792.htm
2）CD34+造血干/祖细胞的检测。主要用于干 细胞移植及基因治疗方面的检测。 3）活化血小板及网织血小板的检测，在栓塞 性疾病，如脑血管和心肌梗塞的患者，可出现 活化的血小板增多。而血小板减少的患者，如 果出现网织血小板增多，则说明血小板减少的 原因为血小板破坏过多所致。
4）阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH） 的发病机制为X染色体上的PIG-A基因发 生突变，引起糖化肌醇脂（GPI）锚合成 障碍，使GPI锚连蛋白缺乏，已证实的 GPI锚连蛋白有10余种，用于PNH诊断的 主要为CD55和CD59两种，如果在红细胞 或WBC上出现CD55或/和CD59的减少， 可诊断为PNH。
急性白血病系别判断的流式细胞免疫分型
三、急性白血病系别诊断标准
• EGIL诊断标准缺点： • （1）关于阳性定义，因为影响因素众多，有时存在歧义； • （2）对于某些覆盖率低、特异性高的标志，给予分值低或者未纳入，如CD64、CD14； • （3）对某些常见伴系表达标志予以极低分值，如CD7，未考虑荧光强度的差异； • （4）对于相对特异、在某系别易于伴发的标志，未考虑差异对待，如cCD79a、CD10
三、急性白血病系别诊断标准
• 鉴于几乎没有任何标志是绝对敏感和特异的，做全标志有助于降低误诊风险，因此 在系别筛查时如果出现系别标志表达过多或者过少，或者伴系表达标志的强度超过 标本中残留的正常细胞时，首先应该做全两个诊断标准涉及的相关系别标志，必要 时甚至需要增加CD371等新的髓系标志。
• 在此过程中可以选择一步法或者两步法。选择一步法的实验室，以目前常用3激光8 色机型为例，可供参考的5管法见表3；选择两步法的实验室，第一步进行系别筛查， 包括髓系MPO（或者CD33）和CD117，T系CD7和cCD3、B系CD19和CD22，根据 采用仪器型号不同可能有差异，4色方案可以参考2015年4色流式细胞术中国专家共 识，3激光8色推荐方案见表3。
三、急性白血病系别诊断标准
三、急性白血病系别诊断标准
• 注意几个标志的FCM检测： • （1）MPO：使用克隆号8E6、MPO-7的抗体需要小心，因为均有在B-ALL表达的
报道；阳性阈值虽然大多数沿用10%，但是建议结合荧光强度，并且不典型病例应 该做全其他髓系标志，并结合细胞化学和免疫组化MPO检测结果；FCM破膜处理 可能会使粒细胞的侧向角光散射（side scatter，SSC）降低，从而影响CD45/SSC设 原始细胞门的精确度，导致假阳性结果，正确的方法应结合原始细胞标志修订设门。
流式细胞术免疫分型在急性髓细胞白血病诊断中的应用何文英
·综述·流式细胞术免疫分型在急性髓细胞白血病诊断中的应用江西省抚州市医学科学研究所（344000）何文英南昌大学第一附属医院彭宽流在医学研究领域中，流式细胞仪（flow cytometer，FCM）能够快速分析单个细胞的多种特性，它既可以定性也可以定量，适用于大量标本的检测。
流式细胞仪可以为全血、骨髓、渗出液、脑脊液、尿液和固体组织等很多的样本进行免疫分型，并可检测细胞大小、胞质内容物、DNA、RNA及大量的膜蛋白和胞内蛋白。
临床上采用的急性白血病法，美、英协作组分类标准（FAB）分类方法是基于形态与细胞学检查基础，但这种方法对于来源于同一系列的急性白血病间的鉴别不甚理想，甚至有时对于不同系列的白血病鉴别也较困难[1]。
对伴有髓系抗原表达的急性淋巴细胞白血病（ALL）、伴有淋系抗原表达的急性髓细胞白血病（AML）、区分T-ALL和B-ALL、急性混合型以及细胞形态特征不典型的白血病等的诊断也较困难。
自从Foon与Todd在1986年提出白血病免疫分型以来，FCM已成为诊断血液系统恶性肿瘤不可缺少的重要工具，广泛应用于白血病的临床检测[2]。
其突出的优势是能在分子水平对细胞的理化性质和免疫学特征进行简单、快捷、定性、定量分析，且能够检测残存白血病或标本中幼稚细胞低于50%的白血病[3]。
精确的流式细胞仪技术免疫分型通过分析白血病细胞群中特异抗原（CD）的表达特点，不仅能够给诊断提供客观的指标，而且能够根据某些抗原表达的情况来研究疾病的发展和判断预后[4]。
以下阐述流式细胞仪技术免疫分型在急性髓细胞白血病诊断中的应用。
1流式细胞仪的工作原理流式细胞仪的结构一般可分为5个部分：①流动室及液流驱动系统；②激光光源及光束成形系统；③光学系统；④信号检测与存储、显示、分析系统；⑤细胞分选系统。
流式细胞仪可以检测单个细胞的可见光和荧光特性。
通过检测细胞大小和内容物等物理特性可以对细胞进行分群。
白血病流式免疫分型
白血病流式免疫分型白血病是一种造血系统恶性肿瘤，由于白细胞数量和质量的异常增加，导致机体免疫功能下降，造成多种系统和器官功能异常。
白血病的治疗首先需要确定其类型和分型，以便制定有效的治疗方案。
流式免疫分型作为一种先进的白血病诊断技术，已被广泛应用于临床实践中。
白血病流式免疫分型是将细胞标记物与荧光标记结合，通过流式细胞术对细胞进行定量、定性的分析，进而确定白血病的类型、分型。
它可以快速、灵敏地检测单个细胞，检测出极低浓度的异常白细胞，并对相关疾病进行准确的诊断和分类，特别是对淋巴瘤和白血病的鉴别诊断。
流式免疫分型在白血病治疗诊断中的应用既可以确定疾病的类型，也可以指导治疗方案的制定。
对于急性白血病的治疗而言，流式免疫分型可以评估化疗药物敏感性、预测预后，以及指导骨髓移植的实施，从而提高治疗的效果和疗效。
对化疗失败的慢性淋巴细胞白血病患者进行流式免疫分型，可以确定其恶性程度、预测预后及制定诊断治疗方案，如靶向药物治疗等新的治疗手段。
不过，需要指出的是，流式免疫分型虽然是一种有效的白血病诊断技术，但其存在一定的局限性。
例如，对于某些罕见的白血病类型，目前流式免疫分型无法完成准确的分类，需要结合其他诊断手段进行综合判断。
同时，由于流式免疫分型涉及大量的细胞学和生化实验，其实验成本也比较高，还需要一定的技术开销和专业操作的知识。
综上所述，白血病流式免疫分型作为一种先进的白血病诊断技术，已经逐步成为临床实践中的标准操作。
它可以对白血病患者进行准确的分类和疾病诊断，指导治疗方案的制定，同时也为临床科研提供了有力的手段和工具。
但需要注意的是，流式免疫分型还需要不断探索和深入，结合其他先进技术和诊疗方法，共同提高白血病治疗的水平和效果。
流式细胞术系列之-白血病免疫分型
门位置处出现
白血病流式免疫分型举例
T-ALL
在CD45/SSC点图中，幼稚细胞群体低SSC信号，与成熟 淋巴细胞比较CD45弱表达
Ta ng ca i xi a.00 1
R3
R4
R5 100
R1 R2
101
102
103
CD4 5 PerCP-Cy5.5
104
CD5、CD7、 cCD3、 CD34阳性
• 幼稚细胞群体的FSC和SSC信号与M0相似，Blasts >90%。
流式细胞术应用概述分析解析
34.5± 4.23
CD8
27.9± 5.73 45.7± 9.58**
32.7± 9.01
CD4/CD8 1.27± 0.14 0.43± 0.12**
1.05± 0.26*
NK
17.8± 5. 48 4.37± 3.31** 7.59± 5.01**
2、胞内分子流式细胞术检测 （以Th1/Th2细胞因子检测为例）
抑制免疫反应/杀伤异源细胞
CD3+CD8+CD28CD3+CD4+CD29-
CD3+CD4+CD8+
抑制性T细胞(Ts) 杀伤性T细胞(Tc)
活化的T细胞
抑制细胞和体液免疫 细胞毒性T细胞 在T细胞恶性增生时升高
CD3+CD4-CD8CD4+/CD8+比值 CD45RA+CD45RO-
表达 / T细胞受体(TCR / )
使用调节Th2/Th2细胞因子平衡的药物: 萨力多胺(Thaliodomide) 治疗巨细胞动脉炎
疾病治疗监测
二、流式细胞术在肿瘤学中的应用
肿瘤发生发展
1、DNA倍体和细胞周期分析
细胞周期和DNA倍体分析的原理
G2/M期细
胞,DNA含量开 始增加至4C
1、正常细胞DNA含量稳定在2C水平 2、性细胞DNA含量为1C
Th1细胞及其细胞因子 －常为炎性增强的标志 Th2细胞及其细胞因子 －免疫耐受/抑制有关 －肿瘤免疫 Th2细胞及其细胞因子⇑ －肿瘤发病，
Th1/Th2细胞检测意义
发病机制研究
疾病治疗
使用Th1和Th2相关的细胞因子 IFN-治疗麻疯病
用抗Th1和Th2相关细胞因子或其受体的抗体 抗IL-4抗体治疗真菌和寄生虫感染
白血病淋巴瘤免疫分型 (2)
Burkitt 淋巴瘤和滤泡淋巴瘤
2019年3月20日星期三6时4分52秒
44
评估慢性淋巴增殖性疾病(CLD)的抗体
First: CD5、CD19、kappa、lamda
CD3、CD20、CD23、CD10、CD45
B-cell：CD22、FMC7、CD11c、CD103、CD138 CD38、CD25、CD79b (约12-15Ab)
CD13/CD33；
结合临床情况，符合原始巨核细胞 的免疫表型。
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急性巨核细胞白血病
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初治急淋分型
Acute Leukemia – Blasts Present >20%
CD7+ and/or CD2+
T-Lineage
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FACS在血液病诊断中的应用
FACS在白血病MRD检测中的应用
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血病。
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急性单核细胞白血病
从左图 CD45 和 SSC 二维散点图中，可 以看出 R1 为成熟淋巴细胞， R3 为粒系， R4 为红系（ CD36+ 、 GLyA+ ） R5 为原始细胞 区域比例较低。而 R2 所占比例较大，通过 分析得出： 1、 CD45表达较强， SSC较大，为单核系的 特点。 2、 R2表达HLA-DR、CD4和CD14（部分表 达）、CD36、CD38、CD13/CD33； 3、不表达CD8，GLyA。 结合临床情况，符合急性单核细胞白血 病。 2019年3月20日星期三6时4分52秒
白血病免疫分型
白血病免疫分型白血病的免疫分型主要是根据造血干细胞再分化发育过程中，不同的阶段，细胞表面的分子标记也不同这一规律，反推出细胞是处于哪个阶段以及细胞属于哪个系别来源。
一般使用流式细胞仪去检测细胞上面表达的抗原，通过检测，我们可以判断出白血病细胞属于哪个系列来源以及处于分化的哪个阶段，最终来确诊白血病的类型。
此种白血病的分型即为免疫分型。
白血病免疫分型是诊断白血病的重要标准，对于白血病选择化疗药物以及估计预后是非常重要的。
白血病的免疫分型最早由欧洲提出来，它主要是根据造血干细胞再分化发育过程中，不同的阶段，细胞表面的分子标记也不同这一规律，反推出细胞是处于哪个阶段以及细胞属于哪个系别来源。
一般使用流式细胞仪去检测细胞上面表达的抗原，通过检测从而判断出，白血病细胞属于哪个系列来源以及处于分化的哪个阶段，最终来确诊白血病的类型。
此种白血病的分型即为免疫分型。
白血病免疫分型一般是对白血病细胞表面表达的分子进行相关检测。
1、白血病的诊断需要骨髓穿刺、骨髓液免疫分型、染色体和基因检查以进一步诊断，骨髓细胞学诊断白血病的准确性仅为70%左右。
如果同时增加白血病的免疫分型，白血病的明确诊断准确率可以接近100%。
2、白血病免疫分型是指对白血病细胞表面表达的分子进行相关检测，可以进一步区分急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病和慢性髓系白血病等类型。
同时还需要检查融合基因的染色体，以便对白血病诊断后的预后进行分层，并制定个性化的化疗方案。
建议平时多进行体育锻炼，增强自身免疫力。
急性白血病是造血干细胞的克隆性恶性疾病，发病时骨髓中异常的原始细胞大量增殖并浸润各种器官组织，正常造血受到抑制。
急性白血病分为急性淋巴细胞白血病和急性非淋巴细胞白血病，这两类还可分成多种亚型。
白血病的分型采用MIC分型，即形态学、免疫学和细胞遗传学结合的分型。
根据白血病细胞免疫学标志，不仅可将急性淋巴细胞白血病和急性非淋巴细胞白血病进行区别，而且还可将T细胞和B细胞急性淋巴细胞白血病加以区别。
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FCM History
1934 Moldavanl first try（从固定式细胞分析-流动式） 1953 Crosland-Taylor:laminar flow（解决难题） 1956 Coulter（初次应用 ） 1965 Kamentsky: spectrometer principle(Ortho（开 1967 Vandilla and LosAlamos group: Feulgen,
90 Degree Light Scatter (SSC)
Laser
FALS Sensor
90LS Sensor
细胞对光的散色现象与细胞样品制备无关.
FSC
FSC信号的强弱与细胞的大小和活力相关
SSC
SSC信号的强弱与细胞内颗粒多少相关
细胞散色光信号
细胞荧光测量
细胞的自发荧光 未经染色的样品细胞
FACSVantage Fluid System
激发光源与光束 成形系统
激光（Laser,
Light amplification by stimulated emission of radiation)是一种相干光 源。单谱线，高强度. 细 胞在1-2us内就可以收集 到足够强的荧光信号.一 般采用Ar+激光器,有多 条可调谱线,与多种荧光 染料激发谱匹配.
BD公司不同型号流式细胞仪
FACSCalibur
FACSCanto
FACSCount
LSRII
FACSAria
FACSVantage&DiVa
Coulter公司不同型号流式细胞仪
EPICS XL/XLMCL
台式机
CytomicsTM FC 500 系列
最新型
EPICS Altra细胞分选仪 大型科研型
白血病细胞免疫表型流 式细胞分型技术及意义
（FlowCytometer）
SSMU
Shi Gui Ying
分析细胞学
细胞的形态学参数 定量 细胞化学成分及含量
生物学特征
细胞的功能
Laser
FALS Sensor
分析细胞学 年青的交叉学科
激光技术 数字计算机技术 电子物理技术 电子摄像技术 光电测量技术 荧光细胞化学技术 单克隆抗体技术等
Longpass
460 500 540
Shortpass
460 500 540
Bandpass
460 500 540
LP 500
SP 500
BP500/50
信号转换系统:光 电 数字信号.
FCM细胞分选装置
超声振荡器:20-40KC
液流断离点:离喷口5-8mm
f=v/4.5d
488 nm laser
1979年 国家科委重点项目： 研制国内第一台激光流式细胞仪
1982年 国内第一台三参数激光流式细胞仪诞生 1984年国家科委组织科研成果的鉴定验收
1985年 获国家卫生部科技成果乙等奖 1985年--1990年 灵敏度、信噪比、更多参数
流式分选仪研制开发 计算机四参数软件 样品制备、医学生物学应用
液滴冲电:脉冲幅度,荷电多少,宽 度大小同时带电液滴数多少.
- Charged Plates
静电高压偏转板: 几千伏电压 分选细胞的收集装置: 96孔板,载玻片或试管
FSC Sensor Fluorescence detector
+
Single cells sorted into test tubes
DNA Histogram（完善） 1969 Hulett:Sorter(Icp-22) 1973 B-D:First commercial FCM--FACS I（发展） 1979 SSMU: FCM Developing（推广） 1980 BJNU: First FCM (FACS III) in China About 450 FCMs in China
荧光信号
激光束
Injector Tip
Sheath fluid
通过流动室后细 胞一个一个排列 成单行,依次通过 检测区.把流动室
称为单细胞流 发生器.
流动室
Flow Cell
孔径50-200m 检测区离喷口200m 有分选功能
Laser
液流驱动系统（示意图）
流速与压力的关系服从Bernoulli方程，即 P=(1/2)V2 (忽略高度的变化)。改变气压,就可获得不同的流速。
什么是流式细胞术(FCM)？
FCM是以流式细胞仪为检测手段的一项 能快速、精确的对单个细胞理化特性进行
多参数定量分析和分选的技术。
Laser
FALS Sensor
特点:
流动的 可以是活细胞的 定量的 多参数的 高统计学精度的 分选细胞
FCM的一般结构和原理
速度 轨迹 检测
散射光 荧光
流动室
2-3mm方形石英 内径直200-300m 流速慢,细胞信号大, 小型化。
在激发光的照射下可测到有微弱的荧 光信号.
细胞荧光 经过各种特异染色的细胞在激
发光的照射下可测到较强的荧光信号.
自发荧光信号与特异染色的荧光信号分析图 自 发 荧 光 信 号
特 异 染 色 的 荧 光 信 号
细胞荧光信号
荧光信号的测量：
经过PMT将光学信号转变为电脉冲信号，并增加PMT 的电压及增益，可将脉冲信号进行放大。放大方式有两种 ：
球透镜和柱面透镜 ：
光 束
20×200m 椭圆形光，短轴和细胞流平行，长 轴与细胞流垂直。
成
形
与
细
胞
受
照
方
式
光
束
这种椭圆形光斑的
成
检测区保证每个细
形
胞分别受到光照
与
且受检时受到一致
细 胞 受
激发光焦斑
的光照 FCM的 单细胞照明技术.
照
方
式
低速
高速
不同样本速率形成的样本流
光收集系统：滤光片
PMT
1
PMT
2
Bandpass Filters
PM4 T
PMT
3
光电管
Laser
PMT可将散色光及荧光信号转换成电脉冲信号,电 脉冲信号通过模数转换器(ADC)量化为数字信号.
细胞散色光信号
Forward Angle Light Scatter (FSC)
Laser
FALS Sensor
细胞对光的散色现象与细胞样品制备无关.
利用单克隆抗体分离细胞亚群
MACS-Magnetic Cell Sorting
磁
阳
阴
珠 分 离
性 选 择
性 选 择
细胞分选系统
通道式分选
电荷式分选
细胞信号检测与分析处理系统
细胞散色光的波长是与激发光波长一致的.前向散色光信号:光电二极管
侧向及荧光信号用光电倍增管
Flow cell
Dichroic Filters