纯化水微生物限度检查分析方法确认方案

纯化水微生物限度检查分析方法确认方案目录1. 介绍 (4)2. 目的 (4)3. 适用范围 (4)4. 职责 (4)4.1验证小组职责 (4)4.2工程部职责 (4)4.3质量中心职责 (4)4.4验证办公室职责 (4)4.5质量管理负责人职责 (5)5. 缩略语 (5)6. 法规指南 (6)6.1法规 (6)6.2指南 (6)7. 参考文件 (6)8. 方法描述 (7)8.1测定方法描述 (7)8.2规程 (7)8.3可接受标准 (7)9. 验证设计 (8)9.1验证不确定性控制措施 (8)9.2潜在风险清单 (8)9.3试验设计 (10)10. 文件管理规范 (10)11. 测试项目列表 (12)12. 测试描述和可接受标准 (13)12.1人员确认 (13)12.2仪器/设备确认和校准确认 (13)12.3文件确认 (14)12.4培养基/试剂确认 (14)12.5样品确认 (15)12.6薄膜过滤法计数方法验证 (15)13. 偏差处理 (16)14. 变更控制 (16)15. 验证报告 (17)16. 附件清单 (17)17. 支持性附件清单 (17)18. 测试报告 (17)1.介绍微生物限度检查方法用于纯化水微生物限度测定，方法来源中国药典2010版，二部，附录Ⅺ J “微生物限度检查法”。

本方案的目的是建立文件记录证明纯化水微生物限度测定方法在本公司质量控制实验室的适用性和可重现性，方法能够提供一致、可信和准确的微生物限度检测数据。

2.目的/038）进行方法确认。

对《纯化水微生物限度测定标准操作规程》（SOP/A0/QC03证明该方法适用于纯化水微生物限度检查，具有准确性和可靠性，可达到控制产品质量的目的。

3.适用范围本验证方案适用于纯化水的微生物限度检查放行测定。

4.职责4.1验证小组职责✓对照品/试剂/物料/样品确认✓方案的实施，数据的收集✓最终报告的编写✓偏差报告的编写4.2工程部职责✓提供在方案执行中所需仪器的校准证书✓执行前审核本方案✓报告审核4.3质量中心职责✓执行前审核本方案✓报告审核4.4验证办公室职责✓执行前审核本方案✓报告审核4.5质量管理负责人职责✓批准本方案5.缩略语在下面的表格中规定了本方案中使用的缩略语。

6.法规指南为了编写本方案，参考了以下文件：6.1法规✓中国GMP（2010年修订）中国食品药品监督管理局（CFDA）✓中国药典（ChP）二部 2010版6.2指南✓GMP指南中国食品药品监督管理总局（CFDA）20107.参考文件为编写本方案，参考了以下文件：8.方法描述8.1测定方法描述8.1.1实验准备8.1.1.1核对待检供试品信息是否正确。

8.1.1.2核对试验用培养基、试剂、耗材是否在有效期内。

8.1.1.3核对试验用培养基适用性检查是否合格。

8.2规程8.2.1检验量：纯化水的检验量为1ml。

8.2.2供试液的制备：以原液为供试液。

8.2.3细菌、霉菌及酵母菌检查法量取100ml无菌0.9%氯化钠溶液加到培养器中，然后取1ml纯化水加入培养器中，并减压抽滤直至抽干。

然后将培养器倒臵于洁净工作台上，使滤膜裸露，浇注温度不超过45℃的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基培养。

阴性对照试验：取试验用的稀释液100ml，照上述薄膜过滤法操作，作为阴性对照。

阴性对照不得有菌生长。

培养和计数：细菌培养3天，霉菌、酵母菌培养5天，逐日观察菌落生长情况，点计菌落数，必要时，可适当延长培养时间至7天进行菌落计数并报告。

8.3可接受标准纯化水每1ml中细菌、霉菌及酵母菌数总数不得过50CFU。

9.验证设计9.1验证不确定性控制措施如果没有其它要求，下列操作和条件应被控制在要求的限度内，以控制验证不确定性。

9.2潜在风险清单在给定分析方法生命周期中，不可避免“方法环境”的变化从而影响方法性能，方法的所有关键参数应被明确并经验证。

风险评估表达使用定性描述，如“高”“中”“低”。

一个风险的判定依靠风险优先性来定义。

A.严重性(S)对失效可能造成的影响进行描述（即使没有失效发生的大的可能性）？o低（L）：预计会对产品质量无影响或很微小的影响（质量在标准之内）。

o中（M）：预期对产品质量具有较小的影响。

（质量不符合标准要求）。

o高（H）：预期对产品质量具有显著的影响（质量不符合标准要求）。

B.可能性(P)描述失效发生的可能性（依据失效来源的描述）。

o低（L）：产品生命周期内不可能发生。

o中（M）：产品生命周期内可能会发生。

o高（H）：产品生命周期内将会发生多次。

C.可检测性(D)描述故障的可检测性。

o低（L）：不太可能由操作人员或设备控制系统查到。

o中（M）：可由操作人员很容易地查到或具有报警。

o高（H）：通过设备控制系统自动检测并报警，可能自动采取恢复措施。

将把严重性和可能性合在一起来评价风险级别。

将采用如下方法来确定风险级别：在此步将对风险级别进行评价。

在进行评价之后，将风险级别和可检测性合并到一起来确定整体的风险优先性。

风险优先性的“高”以“H”表示，“中”以“M”表示，“低”以“L”表示。

通过如下方式对风险优先性进行评价：潜在风险和控制如下：方法的关键参数经确定并将在实验过程中进行控制，H 级因素将进行独立验证以保证方法的稳定；L 级因素将通过实验室控制措施降低风险，不再进行验证。

9.3试验设计《纯化水微生物限度测定标准操作规程》（SOP/A0/QC 03/038）用于纯化水微生物限度测定，方法为中国药典2部附录Ⅺ J “微生物限度检查法”。

本公司拟将此方法用于纯化水的微生物限度测定的放行检验。

经过方法评估，方法应进行确认以保证方法在本公司微生物实验室的适用性。

根据评估结果和方法使用目的，验证性能参数设臵薄膜过滤法计数方法验证。

10. 文件管理规范记录用笔：✓ 使用黑色签字笔记录。

签名：✓ 被授权的人员才能签署文件。

✓ 应签全名，除非文件另有规定。

✓ 签名应始终一致。

填写栏目：✓ 所有栏目必须填写。

✓ 填写内容与上面栏目相同也应重新填写。

✓ 填写栏目内容，应按照实际测试情况，对测试结果使用对勾“√”填写，只能选择一种测试结果填写。

如下：✓ 若有单个栏目不需要填入内容，则在空白处填写英文字母“不适用”的简写“N/A”，表示无此项内容。

✓若有多个栏目不需要填入内容，应用斜线划掉，斜线上方填写“N/A”，下方签名并注明日期。

如下：更改错误：✓在错误处划线，填入正确的内容，签名并注明更改日期，确保原先信息仍清晰可识别。

如：2012年01月02日修改人签名和修改日期2012年01月01日记录日期：✓年用4位数表示，日和月用2位数表示如：2012年09月01日书面语及名称：✓使用规范的书面语及名称。

文件前后名称要一致。

11.测试项目列表在下面的表格列出了本方案将要执行的测试。

12.测试描述和可接受标准12.1人员确认✓目的确认所有执行本方案的人员符合要求。

✓程序●列出所有执行本方案的人员（姓名、部门、职位）。

●在验证程序开始前，对所有参与测试的人员进行方案和相关技能培训，培训应该有记录。

●执行方案人员本人在签名处使用黑色签字笔书写本人签名以及日期。

✓可接受标准●所有执行本方案人员本人使用黑色签字笔正确书写本人签名及日期。

●所有执行本方案的人员已经过方案和相关技能培训并已记录。

✓测试报告测试结果填写在测试报告1《人员确认》表内。

12.2仪器/设备确认和校准确认✓目的保证使用的仪器/设备都已经过验证和校准，并有文件记录。

✓程序●列出所有实验使用的仪器/设备。

●在测试报告2《仪器/设备确认和校准确认》中对每一台测试所用的仪器应标识出仪器名称、编号、型号、用途、校准证明、校准日期、下次校准日期；每台设备应标识出设备名称、编号、型号、用途、验证文件编号、验证日期、下次验证日期。

✓可接受标准●测试使用仪器仪表均经过确认和校准，且在有效期内。

●用于校准的计量标准应该能够追溯到中国国家计量基准或相当的国际标准。

●所有确认和校准有文件记录。

✓测试报告测试结果填写在测试报告2《仪器/设备确认和校准确认》表内，如有偏差记录在偏差报告中。

12.3文件确认✓目的确认验证相关的SOP和验证方案已经完成审批。

✓程序●在测试报告3《文件确认》中记录验证所需要文件名称、文件编号、版本，存放位臵和文件状态。

●检查本验证方案的批准状态。

✓可接受标准●文件放臵在相应操作现场适当的区域；●文件已经过批准，并且是现行版本，以保证准确性。

●本验证方案已经批准。

✓测试报告测试结果填写在测试报告3《文件确认》表内，如有偏差记录在偏差报告中。

12.4培养基/试剂确认✓目的确认使用的培养基和试剂的适用性。

✓程序●列出实验使用的培养基和试剂。

●检查培养基的来源/批号/有效期/保存条件，非官方对照品提供检验报告单。

●检查试剂来源/批号/有效期/保存条件。

✓可接受标准所有培养基/试剂均来自批准的供应商，存放在需要的条件下，均在有效期内。

✓测试报告测试结果填写在测试报告4《培养基/试剂确认》表内，如有偏差记录在偏差报告中。

12.5样品确认✓目的确认验证所用样品的来源和适用性。

✓程序●检验使用样品生产信息或来源信息。

●检查样品的包装完整程度及状态。

✓可接受标准最终产品应为生产规模产品；验证前样品包装完整，样品外观符合规范。

✓测试报告测试结果填写在测试报告 5《样品确认》表内，如有偏差记录在偏差报告中。

12.6薄膜过滤法计数方法验证✓目的检查验证用纯化水对薄膜过滤法计数方法检测无干扰。

✓程序●供试液的制备：取原液作为供试液。

●●试验组：取稀释液100ml加入培养器中，然后取纯化水1ml加入培养器中，并减压抽滤直至抽干，加入制备的50～100CFU的试验菌，过滤，将培养器倒臵于洁净工作台上，使滤膜裸露，浇注温度不超过45℃的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基培养。

●菌液组：取制备的50～100CFU的试验菌，倾注培养基，冷却后至合适的温度培养。

●供试品对照组：取稀释液100ml加入培养器中，然后取纯化水1ml加入培养器中，并减压抽滤直至抽干，浇注温度不超过45℃的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基培养。

●稀释液对照组：取稀释液100ml，过滤，加入制备的50～100CFU的试验菌，过滤，将培养器倒臵于洁净工作台上，使滤膜裸露，浇注温度不超过45℃的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基培养。

●上述三组试验平行做三次。

●试验组菌回收率=（试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数）/菌液组平均菌落数。

●稀释液对照组的菌回收率=稀释液对照组平均菌落数/菌液组平均菌落数。

✓可接受标准●稀释液对照组的菌回收率均应不低于70%。

●若试验组的菌回收率均不低于70%，则可按该供试液制备方法和菌落计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数；若任一次试验中试验组的菌回收率低于70%，应建立新的方法，消除供试品的抑菌活性，并重新验证。