血红蛋白电泳的意义和判断 PPT
血红蛋白检测的临床意义PPT课件
血红蛋白疾病的区域分布图
Thalassemias
➢ 全世界范围内经结构分析证实的异常血红蛋白 日益增多，至90年代初期已达600多种，但仅 不到1／3的异常血红蛋白伴有临床症状。
➢ 世界卫生组织估计，全球约有1.5亿人携带血
红蛋白病基因，并已将血红蛋白病列为严重危 害人类健康的6种常见病之一。
Z 12 : Hb Bart’s, Hb Providence, Hb J-Mexico, Hb J-Baltimore….
Z 11 : Hb Kaoshiung(New York),denaturated Hb A Z 10 : Hb Hope, Hb M-Iwate
Z 9 : Hb A, Hb Camperdown, Hb Phnom Penh……
Z 8 : Acetylated Hb F, Hb Altanta, Hb Athens-GA
Z 7 : Hb F, denaturated Hb S, Hb Porto-Allegre…….. Z 6 : Hb D-Punjab, Hb Philadelphia, Hb Korle-Bu, Hb Lepore,
(小红细胞症, 血红蛋白过少, Heinz corps,...) 出现无法解释的异常溶血现象.... 对全部家族成员进行血红蛋白的检测.
血红蛋白疾病的检测方法
➢ Electrophoresis : 醋酸纤维素薄膜电泳／ 琼脂糖凝胶电泳)
➢ HPLC : 高效液相色谱法 ➢ Capillarys : 高效毛细管电泳法
Hb A2 variants
Z 3 : Hb A2, Hb O-Arab Z 2 : Hb C, Hb Constant Spring, Setif HbA2 variant
血红蛋白电泳的临床意义
血红蛋白电泳的临床意义
血红蛋白电泳是一种检测人体血红蛋白组成的方法，通过分离不同类型的血红蛋白，可以对一些血液病和遗传疾病进行诊断和评估。
其临床意义包括以下几个方面：
1. 诊断血红蛋白病：血红蛋白电泳可以检测出不同类型的血红蛋白变异，从而诊断和区分各种血红蛋白病。
比如，可以分辨出镰状细胞贫血、地中海贫血、遗传性球形红细胞增多症等。
2. 确定携带者和患者：血红蛋白电泳可以帮助鉴定携带血红蛋白基因变异的人群，比如地中海贫血的携带者。
3. 预测疾病进展：通过观察血红蛋白电泳的结果，可以评估一些血红蛋白病的预后和疾病进展情况。
比如，镰状细胞贫血患者的血红蛋白电泳结果可以提示疾病的严重程度和可能的并发症。
4. 确定输血治疗方案：血红蛋白电泳可以帮助确定输血治疗方案，特别是对于一些血红蛋白病患者来说，血红蛋白电泳结果可以指导是否需要输血以及血型选择。
总的来说，血红蛋白电泳在临床上有着重要的意义，可以帮助诊断和区分各种血红蛋白病，评估预后和疾病进展情况，并指导治疗方案的制定。
血清蛋白电泳ppt课件
肝硬化型
主要特征： Alb均有不同程度的降低，α 1、α 2和β 球蛋 白正常或降低，γ -G明显增高且宽度增加，可见β -γ 桥。
病理生理： 肝细胞受损导致Alb明显降低，β -γ 桥的出现 与血清免疫球蛋白，特别是IgA、IgM、IgG同时增加有关， 其中以IgA影响较大，当IgA和IgM泳动在β 和γ 之间，使β 区带与γ 区带融合而形成β -γ 桥。
区带电泳（按支持介质）：淀粉凝胶电泳 滤纸电泳 醋酸纤维素薄膜电泳 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳
按支持介质形式：水平式电泳、垂直电泳
按缓冲液pH值：连续pH和不连续pH电泳
生物化学与分子生物学实验教3学中心
临床电泳项目
临床上以琼脂糖电泳法开展的电泳项目：
血清蛋白电泳 免疫固定电泳 尿蛋白电泳 同工酶电泳 脑脊液寡克隆电泳 本周氏蛋白电泳 脂蛋白电泳
血清免疫固定电泳（IFE）
是一种包括琼脂糖凝胶蛋白电泳和免疫沉淀两个 过程的操作，是免疫沉淀反应的一种混合技术。 优势：将血清蛋白电泳、高分辩率、抗原-抗体特 异性免疫反应等有机结合，对蛋白进行分离和定 型，形象地观察Ig的各类重链和轻链分型。
生物化学与分子生物学实验教6学中心
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳结果
正常血清蛋白质电泳图谱
生物化学与分子生物学实验教9学中心
血清蛋白电泳区带
白蛋白区带：主要由白蛋白构成。 α 1-球蛋白区带： α 1-抗胰蛋白酶、 α 1-脂蛋白、 α 1-酸性糖蛋白 、甲状腺结合球蛋白、凝血酶原等。 α 2-球蛋白区带： α 2-巨球蛋白、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、 α 2-脂 蛋白、红细胞生成素等。 β -球蛋白区带：主要含铁蛋白、β -脂蛋白、补体C3、C4、β 2-微球 蛋白等。 γ -球蛋白区带含IgG、M、A、D、E免疫球蛋白。
生化检验辅导：血红蛋白电泳
血红蛋白电泳
珠蛋白生成障碍性贫血是世界上最常见和发病率最高的一种单基因遗传病，常见有两类，即α和β海洋性贫血(以往称地中海贫血)，是由于基因突变引起存在于红细胞内的几种血红蛋白(Hb)合成异常。
此项化验可用于检验异常Hb，进一步诊断一些相关疾病。
参考值
HbA：96％-98％
HbA2：1％--3％
HbF：1％～2％
临床意义
(1)HbA2增高是轻型β—海洋性贫血最重要的诊断依据；
(2)HbS病、β链异常的不稳定Hb病及某些巨幼细胞性贫血患者HbA2也可增高；
(3)缺铁性贫血时，HbA2常降低，可与轻型β—海洋性贫血鉴别；
(4)正常人Hb电泳后，一般只见两条区带(HbA和HbA2)，若出现新的区带，则可能为异常Hb，应进一步检查。
要求
用肝素或EDTA抗凝血。
血红蛋白电泳的意义和判断高级
血红蛋白电泳的意义和判断高级血红蛋白电泳是一种常见的实验方法，用来检测和鉴定人体中的不同类型的血红蛋白变异。
血红蛋白是人体红细胞内的一种重要蛋白质，它在氧气的输送和氧气释放中起着至关重要的作用。
在人类中，有许多不同类型的血红蛋白变异，这些变异与一些遗传疾病，特别是与溶血性贫血有关。
血红蛋白电泳的主要意义在于帮助鉴定和诊断血红蛋白病。
血红蛋白病是一类由血红蛋白合成异常或结构异常引起的遗传性疾病。
这些异常导致红细胞形态和功能的改变，进而影响氧气的运输和释放。
血红蛋白电泳可以通过分离和鉴定不同类型的血红蛋白，帮助医生确定血红蛋白病的类型和严重程度，以便实施合理的治疗措施。
1.鉴定不同类型的血红蛋白变异：血红蛋白电泳可以通过分离和识别血红蛋白的不同亚单位组成，比如α链和β链的不同组合，从而识别不同类型的血红蛋白变异。
这些变异可以是由单个氨基酸替换导致的点突变，也可以是由于基因重组或缺失引起的。
2.评估血红蛋白的功能和稳定性：血红蛋白电泳不仅可以帮助确定血红蛋白的结构变异，还可以评估血红蛋白的功能和稳定性。
根据血红蛋白电泳的结果，可以判断血红蛋白分子的氧气结合能力和释放能力是否受到影响，进而预测其在红细胞中的寿命和稳定性。
3.诊断血红蛋白病和遗传性溶血性贫血：血红蛋白电泳是诊断血红蛋白病和遗传性溶血性贫血的关键方法之一、通过将患者的血红蛋白与正常血红蛋白进行比较，可以鉴别出血红蛋白突变和异构体的存在，并确定患者是否患有特定类型的血红蛋白病或溶血性贫血。
这有助于医生确定治疗方案和预测疾病的预后。
总的来说，血红蛋白电泳是一种重要的实验方法，它在血红蛋白病的诊断和鉴定中具有重要的意义。
通过鉴定不同类型的血红蛋白变异，评估血红蛋白的功能和稳定性，诊断血红蛋白病和遗传性溶血性贫血，确定血红蛋白基因型和携带者状态等方面，血红蛋白电泳为医学研究和临床诊断提供了有力的工具。
血红蛋白电泳标准判断
血红蛋白电泳标准判断首先，血红蛋白电泳是通过电泳技术将血液中的血红蛋白分离出来，并根据其在电泳胶中的迁移速度和位置来进行鉴定和定量。
正常人的血红蛋白谱主要包括HbA、HbA2、HbF和HbS等成分，它们在电泳胶中有着特定的迁移位置和峰形。
因此，通过观察患者的血红蛋白电泳谱，可以判断出是否存在异常的血红蛋白类型或数量。
在血红蛋白电泳标准判断中，首先需要对正常人群的血红蛋白电泳谱有所了解。
正常人的血红蛋白电泳谱中，HbA占主导地位，约占总血红蛋白的97%以上，其次是HbA2和HbF，它们的含量相对较低。
而对于一些特定的血液病，如地中海贫血、镰状细胞贫血等，其血红蛋白电泳谱会出现明显的异常，如HbS的出现等。
其次，血红蛋白电泳标准判断需要结合临床资料进行综合分析。
在进行血红蛋白电泳标准判断时，不能仅仅依靠电泳谱图的观察，还需要结合患者的临床资料进行综合分析。
比如，患者的年龄、性别、家族史、临床表现等都会对血红蛋白电泳谱的判断产生影响，需要进行全面的考虑。
最后，血红蛋白电泳标准判断的结果需要进行准确的解读和诊断。
在进行血红蛋白电泳标准判断后，需要对结果进行准确的解读和诊断，从而为临床诊断提供重要的参考依据。
对于异常的血红蛋白电泳谱，需要进一步进行血液学检查和分子生物学检测，以明确诊断。
总之，血红蛋白电泳标准判断是临床血液学检验中的重要内容，对于一些血液病的诊断和鉴别诊断具有重要意义。
通过对正常人群的血红蛋白电泳谱的了解，结合患者的临床资料进行综合分析，最终进行准确的解读和诊断，可以为临床诊断提供重要的参考依据。
希望本文的介绍能够对血红蛋白电泳标准判断有所帮助。
血红蛋白电泳解读
血红蛋白电泳解读？
答：血红蛋白电泳是一种常用的检测方法，主要用于诊断血红蛋白病，尤其是地中海贫血。
这种方法能够定量检测血红蛋白A（HbA）、血红蛋白F（HbF）、血红蛋白A₂（HbA ₂）的含量，有助于对地中海贫血进行初步分类，并筛查出各种异常血红蛋白。
血红蛋白电泳结果的解读主要依赖于各种血红蛋白的含量。
正常情况下，血红蛋白A是主要的血红蛋白，一般占95%以上；血红蛋白A2占血红蛋白的2%左右；而血红蛋白F主要用于胎儿，其含量在出生后逐渐降低。
如果血红蛋白A2或血红蛋白F的含量出现异常，可能提示患有某种血红蛋白病。
例如，如果血红蛋白A2的含量增高，可能是地中海贫血的重要标志，特别是β地中海贫血。
此外，如果血红蛋白F 的含量异常增高，可能提示患有α地中海贫血或其他血红蛋白病。
然而，血红蛋白电泳只能提供初步的诊断信息，对于确诊还需要进行进一步的基因诊断和遗传咨询。
同时，血红蛋白电泳的结果也可能受到一些因素的影响，如年龄、性别、生理状态等，因此在解读结果时需要综合考虑。
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相关症状： 舌苔薄白、贫血、脾萎缩、指(趾)骨梗死。
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相关疾病：
叶酸缺乏所致贫血、维生素B12缺乏所致 贫血、地中海贫血、巨球蛋白血症、异常 血红蛋白病、巨幼细胞性贫血、血红蛋白 M病、血红蛋白C病、硫化血红蛋白血症。
一、HbA2升高，可见于维生素B12或 叶酸缺乏所致的巨细胞贫血、部分轻型珠 蛋白生成障碍性贫血; 二、HbA2降低：见 于缺铁性贫血; 三、HbF升高：可见于纯 合子β珠蛋白生成障碍性贫血、杂合子β 珠蛋白生成障碍性贫血和正常新生儿。 四、其他： 1.主要成分为HbS，而无HbB， 可
医学检验·各论：血红蛋白电泳 >>>
谢谢！Βιβλιοθήκη 临床意义：A占65%-75%，并含有正常的HbF和HbA2， 可诊断为HbS-α-海洋性贫血; 5.HbA消失， HbC占总血红蛋白的28%-44%，可诊断为血 红蛋白病，多见于黑人，血片中可见较多 的靶形细胞; 6.有HbS，还出现HbD，血片 中有靶形细胞，可诊断为血红蛋白D病， 我国北方较多见;
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别名： 血红蛋白电泳。
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简介： 各种血红蛋白的等电点不同的特点，
在一定pH缓冲液中所带的正、负电荷不同， 经电泳后各血红蛋白的移动方向不同。
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临床意义：
血红蛋白与电泳技术 ppt课件
• HbH病患者脐血中HbBart,s含量约为25%， 成年期HbH约0.8-40%，可有少量HbBart,s，
HbA2减少。HbH-CS病人可有少量HbCS，
约2-3%。HbQ-H病的电泳为约HbQ80%， HbH15-20%，少量的HbBart,s，HbA、
HbA2不存在。
α-地贫的临床分型特征
α-地贫的临床分型特征
• 2、标准型α-地贫：
• 最常见的是-α3.7缺失型的纯合子(-α3.7/ α3.7)，其次是缺失2个α基因(--/αα),如主要 是东南亚缺失型(SEA型)
• 患者无明显临床症状，脐血HbBart,s含 量可达5-15%，成人Hb正常或轻度下 降，MCV、MCH轻度下降，少数可见 包涵体， Hb电泳偶可见HbH。
α-地贫的临床分型特征
• 3、HbH病：由于4个α-基因缺失3个引起， 其临床症状轻重程度取决于其基因型的不同。
• 单纯缺失型出生时贫血较轻或无贫血，此后 逐渐加重，通常为轻到中度贫血，伴有脾肿 大，偶有黄疸，当妊娠、感染、服用氧化性 药物时可加重，发育正常，骨骼面容改变不 明显，非缺失型多为HbH-CS，其发病年龄 较早，贫血较严重，肝脾大明显，多数需输 血， HbH及HbBart,s较高。
血红蛋白与电泳技术
浦北县人民医院 谢正慧 2012.11
血红蛋白的演化
• 2、妊娠中期---肝脾造血期 • ε-肽链合成停止，ζ-肽链合成逐渐停止，α
和γ合成增多--------胎儿型血红蛋白： • HbF(α2 γ2) • 还有少量的HbPortland(ζ2γ2)
血红蛋白的演化
3、妊娠后期---骨髓造血为主。 这时血红蛋白的主要肽链为α和γ，开始合成
总结
• 6、平时工作中，如果有Hb、MCV、MCH 降低的，或血涂片红细胞形态异常的，可 建议电泳排查是否有血红蛋白病或地贫。
蛋白质电泳分析PPT课件
蛋白质组学研究
蛋白质电泳分析在蛋白质组学研 究中具有重要作用，可用于分离 和鉴定蛋白质，揭示蛋白质的表
达模式和功能。
生物标志物发现
通过蛋白质电泳分析，可以发现 与疾病相关的生物标志物，有助
于疾病的早期诊用于药物靶点 的筛选和验证，以及药物作用机
制的研究，有助于新药研发。
绝对定量
通过灰度扫描电泳图谱中蛋白质条带， 可以计算出各蛋白质条带的相对含量。
通过标准品或已知浓度的蛋白质样品， 可以建立标准曲线，从而对未知浓度 的蛋白质样品进行绝对定量分析。
相对定量
通过比较不同样品中蛋白质条带的灰 度值或亮度，可以计算出各蛋白质的 相对表达量。
04
蛋白质电泳分析的优缺点
优点
03
蛋白质电泳分析结果解读
电泳图谱的解读
01
02
03
蛋白质分子量标准
电泳图谱中通常会有一条 蛋白质分子量标准，用于 参考和标定蛋白质的分子 量。
蛋白质条带位置
通过观察电泳图谱中蛋白 质条带的位置，可以判断 蛋白质的迁移率和分子量 大小。
蛋白质表达量
通过比较不同样品中蛋白 质条带的亮度或密度，可 以判断蛋白质的表达量。
在食品安全和检测领域的应用前景
食品成分分析
蛋白质电泳分析可用于食品中蛋白质的鉴定和含 量测定，确保食品质量和安全。
污染物检测
蛋白质电泳分析可以检测食品中的有害物质和污 染物，如农药残留、重金属等。
转基因食品检测
通过蛋白质电泳分析，可以检测转基因食品中的 外源蛋白质，保障消费者权益。
THANKS
感谢观看
蛋白质电泳分析PPT 课件
目录
• 蛋白质电泳分析概述 • 蛋白质电泳分析实验操作 • 蛋白质电泳分析结果解读 • 蛋白质电泳分析的优缺点 • 蛋白质电泳分析展望
应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析ppt课件
HPLC在医院临床中的应用
治疗药物监测和药代动力学 临床诊断：血红蛋白分析
32
整理版课件
高效液相色谱法血红蛋白分析操作
静脉血2ml，EDTA-K2抗凝
经定标、质控，标本直接上机，通过电 脑操作，便能实现Hb析出、检测、定量 的过程。
33
整理版课件
8
整理版课件
α地贫
轻型：静止型
标准型
γ 可见Hb Bart’s（ 4）
中间型：
β 血红蛋白H病（ 4 ）
重型：
血红蛋白Bart’s病 9
整理版课件
α链结构异常产生的血红蛋白
血红蛋白Constant Spring （HbCS) α链的羧基端后多出31个氨基酸
血红蛋白QS 碱基突变非缺失型HbH病
25
整理版课件
地贫的基因诊断
α地贫基因诊断试剂盒可同时检测中国 人中常见的三种缺失型α地贫，即东南 亚缺失型（－－SEA ），左侧缺失型 （－α4.2 ），右侧缺失型（－α3.7 ）。 并且还可检出临床上无症状的静止型
α地贫。
26
整理版课件
地贫的基因诊断
β地贫基因诊断试剂盒可对17个常见β 珠蛋白基因突变位点行检测，结果易于 判定。
应用高效液相色谱法进行 血红蛋白分析
血液室 颜慕霞
1
整理版课件
地中海贫血及异常血红蛋白病知识简介
一、地中海贫血综合征（地贫 ）是指因遗 传的缺陷，血红蛋白中的一种或几种 珠蛋白肽链的合成受到抑制，但珠蛋 白肽链的分子结构并无异常的一种单 基因遗传病 。
2
整理版课件
二、异常血红蛋白病
异常血红蛋白则是指那些由于遗传上的 缺陷，导致珠蛋白分子结构异常的血红 蛋白。由于异常血红蛋白导致溶血性贫 血等临床表现，叫做异常血红蛋白病。 异常血红蛋白病与地贫常并存于同一个 患者称为异常血红蛋白病合并地贫。
血红蛋白电泳名词解释
血红蛋白电泳名词解释
嘿，咱今天就来说说血红蛋白电泳！你知道吗，这血红蛋白电泳就像是一场特殊的比赛！（就好比运动会上不同项目的竞赛）血红蛋白们都在这个电泳的“赛道”上奔跑。
血红蛋白啊，那可是人体内超级重要的家伙呢！它就像个勤劳的小天使，负责帮我们运输氧气到身体的各个角落。
（想象一下快递员给家家户户送包裹）而血红蛋白电泳呢，就是一种用来分析血红蛋白的方法。
咱就说啊，医生们为啥要用这个电泳呢？哎呀，这可太关键啦！通过它，医生们可以发现血红蛋白有没有出啥问题呀。
（这就好像我们通过检查车子的仪表盘来发现车子有没有故障一样）比如说，有没有一些不正常的血红蛋白出现。
在这个过程中，血红蛋白们会根据它们的性质，乖乖地在“赛道”上排列好。
（是不是很像小朋友们排队做游戏呀）正常的和不正常的一下子就能分辨出来啦。
你想想看，如果血红蛋白出了问题，那我们的身体不就糟糕啦！（这就如同房子的根基不牢固一样危险）可能会导致各种疾病呢。
所以说啊，血红蛋白电泳真的超级重要呢！它就像是我们身体的一个小侦探，帮我们找出那些隐藏的问题。
（就像福尔摩斯在寻找案件的线索）大家可千万别小瞧了它哟！我觉得啊，血红蛋白电泳真的是
医学领域里非常了不起的一项技术，它能让我们更好地了解自己的身体状况，及时发现问题并解决问题，保障我们的健康呢！。
血红蛋白电泳(hemoglobin electrophoresis)(HbA2定量)
血红蛋白电泳（hemoglobin electrophoresis）（HbA2定量）实验原理血红蛋白电泳（hemoglobin electrophoresis）目的是检出和确认各种正常和异常的血红蛋白。
根据不同的血红蛋白带有不同的电荷，等电点不同，在一定的pH缓冲液中，血红蛋白的等电点小于缓冲液的pH时带负电荷，电泳时在电场中向阳极泳动，反之，Hb带正电荷向阴极泳动。
在一定电压下，经过一定时间的电泳，不同的血红蛋白所带电荷不同，分子量不同，其泳动方向和速度不同，可分离出各自的区带，同时对电泳出的各区带进行比色或电泳扫描，可进行各种血红蛋白的定量分析。
一般最常用的是pH8.6醋酸纤维薄膜电泳。
胞浆内存在糖原或多糖类物质（如粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等）中的乙二醇基（CHOH-CHOH）经过碘酸（periodic acid）氧化，转变为二醛基（CHO-CHO），与雪夫(Schiff )试剂中的无色品红结合，形成紫红色染料而沉积于细胞内多糖所在处。
该反应称为过碘酸-雪夫(P AS)阳性反应，以前也称为糖原染色。
实验方法材料：1. 缓冲液（1）pH8.6 TEB缓冲液：称取Tris10.29 g，EDTA 0.6 g，硼酸3.2 g，加蒸馏水至1000 ml。
（2）硼酸盐缓冲液：称取硼砂6.87 g，硼酸5.56 g，加蒸馏水至1000 ml。
2. 醋酸纤维薄膜、电泳仪、加样器、分光光度计、比色杯。
方法：1. 血红蛋白溶液的制备取肝素或者枸橼酸钠抗凝血3 ml，2000 rpm离心10分钟后弃去血浆；用生理盐水洗涤红细胞三次（750 rpm，离心5分钟），再2200 rpm，离心10分钟，弃去上清液；加入等量的蒸馏水；再加入0.5倍体积四氯化碳，用力振摇5分钟，2200 rpm，离心10分钟后将上层Hb液吸出备用。
2. 浸膜将醋酸纤维薄膜剪成3 cm×8 cm的纸条，浸入pH8.6 TEB缓冲液，浸透后取出，用滤纸吸干。
血红蛋白检测意义(Sebia血红蛋白毛细管电泳)
血红蛋白疾病的区域分布图
Thalassemias
➢ 全世界范围内经结构分析证实的异常血红蛋白 日益增多，至90年代初期已达600多种，但仅 不到1／3的异常血红蛋白伴有临床症状。
➢ 世界卫生组织估计，全球约有1.5亿人携带血
红蛋白病基因，并已将血红蛋白病列为严重危 害人类健康的6种常见病之一。
Hb Köln,denaturated Hb E….
Z 5 : Hb S, Hb Hasharon, Hb Handsworth, denaturated Hb O-Arab. Z 4 : Hb E, denaturated Hb C, Hb Köln, Hb A2 variants, M-Iwate
地中海贫血病
: 一组遗传性的珠蛋白链的合成不对称.
: a-地中海贫血病 : b-地中海贫血病
ab
d g
Normal Hb A=a2b2 HbA2=a2d2 Hb F=a2g2
ab
d g
a-Thalassemia
b4=HbH g4=HbBart’s
ab
d g
b-Thalassemia
Increased HbA2 (4-6%)
Hb A2 variants
Z 3 : Hb A2, Hb O-Arab Z 2 : Hb C, Hb Constant Spring, Setif HbA2 variant
Z 1 : Hb dA2 Hb aA2, Hasharon Hb A2 variant, Winnipeg Hb A2 variant……
• Cellulose电泳
研究报告已指出這二种方法
对α、β型地中海型贫血的区 Nhomakorabea别诊断只有95%的能力，尚
血红蛋白电泳及临床意义
血红蛋白电泳及临床意义血红蛋白电泳可以将血红蛋白中各正常成分或异常成分分离，以便进一步鉴定或定量测定。
用等电聚焦毛细管电泳(CIEF)和区带电泳(CZE)可分离出十几种Hb变异链，有作者采用CZE法对正常人和地中海贫血患者血液样品在pH 11.8碱性磷酸盐缓冲液(PBs)中进行分离，分离的速度很快(<8分钟)，两者的电泳图谱明显不同[1]。
对胎儿红细胞处理后，分离其血红蛋白，可分离出α、β和γ几种球蛋白链，如采用低pH 3.2的缓冲液，虽然分析时间延长，但变异体的分辨效果更佳。
显然CE技术对鉴别诊断血红蛋白病起重要作用。
1 材料与方法1.1 检测对象收集2011年1月～2012年12月受检300例均为门诊进行婚前检查或前前检查人员。
其中男60例，女240例，年龄22～35岁，平均为29岁。
1.2 方法电泳槽中的阳极注入 pH9.1的Tris缓冲溶液，阴极注入 pH8.6的巴比妥缓冲溶液，要求两极液面尽量成同一水平。
把醋酸纤维素薄膜裁成4cm×12cm大小，浸入薄膜浸泡液中10min左右，取出，用滤纸吸去多余浸泡液，把薄膜粗面朝上，贴在电泳槽支架上，用两层纱布搭桥，不接通电源，自由平衡5min。
用血红蛋白吸管吸取2～3μ浓度为1 80～100g/L的血红蛋白溶液，放在盖玻片边缘(盖玻片长约1cm)，把血红蛋白液用盖玻片印在醋酸纤维素薄膜靠阴极一端约1.5cm处(薄膜下衬一片干燥滤纸，吸去多余的血红蛋白液)，同时用正常人血红蛋白液作对照。
接通电源，平衡5min，电压调至150V，电流量约为0.2mA/cm簿膜宽，电泳15～20min。
电泳完毕后，取下薄膜条，置于氨基黑10B染色液里染色10min，取出，用漂洗液漂洗，换液数次，直至薄膜条洁白为止。
2 结果在pH 8.6或pH 8.8电泳时，正常人的血红蛋白A及血红蛋白A2都向正极方向泳动，血红蛋白A在前，血红蛋白A2在后。
但血红蛋白F与血红蛋白A的位置很靠近，难以准确地分离和定量，可作1min碱变性试验，来测定血红蛋白F。
血红蛋白电泳检查（电泳法）
血红蛋白电泳检查（电泳法）1. 原理血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。
每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。
所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。
所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。
正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。
血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。
氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同。
本实验在碱性（PH=8.60）条件下，以琼脂糖凝胶电泳的方法进行，对红细胞洗涤后造成溶血，电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。
多余的染色液用酸性液体洗去。
待琼脂糖凝胶板干燥后，肉眼可直接判别有无电泳条带异常。
运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。
血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。
血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。
2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2 标本种类：抗凝血2.3 标本要求：抗凝剂选用ED TA，柠檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。
常规静脉采血1.8ml，加入含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml的干燥。
清洁试管中，充分混匀。
3. 标本储存：储存于2-8℃冰箱中，5天。
4. 标本运输：储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。
6. 试剂6.1 试剂名称：血红蛋白电泳检查试剂6.2 试剂生产厂家：法国Sebia公司6.3 包装规格：150test s6.4 试剂盒组成琼脂糖凝胶 10块溶血素 1瓶缓冲液条带 10包×2条薄滤纸1×10张氨基黑（浓缩液）1瓶×100ml点样模具滤纸 10条×1盒6.5 试剂储存条件及有效期：贮存于室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃），不能冷冻。
血红蛋白电泳检查（电泳法）
血红蛋白电泳检查（电泳法）血红蛋白电泳检查（电泳法）1. 原理血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。
每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。
所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。
所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。
正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。
血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。
氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同。
本实验在碱性（PH=8.60）条件下，以琼脂糖凝胶电泳的方法进行，对红细胞洗涤后造成溶血，电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。
多余的染色液用酸性液体洗去。
待琼脂糖凝胶板干燥后，肉眼可直接判别有无电泳条带异常。
运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。
血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。
血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。
2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2 标本种类：抗凝血2.3 标本要求：抗凝剂选用EDTA，柠檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。
常规静脉采血1.8ml，加入含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml 的干燥。
清洁试管中，充分混匀。
3. 标本储存：储存于2-8℃冰箱中，5天。
4. 标本运输：储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。
6. 试剂6.1 试剂名称：血红蛋白电泳检查试剂6.2 试剂生产厂家：法国Sebia公司6.3 包装规格：150tests6.4 试剂盒组成琼脂糖凝胶 10块溶血素 1瓶缓冲液条带 10包×2条薄滤纸1×10张氨基黑（浓缩液）1瓶×100ml点样模具滤纸 10条×1盒6.5 试剂储存条件及有效期：贮存于室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃），不能冷冻。
有效期两年。
7. 仪器设备7.1 仪器名称：SEBIA电泳仪7.2 仪器厂家：法国Sebia公司7.3 仪器型号：HYDRASYS8. 操作步骤8.1 血红蛋白液制作：抗凝血离心，5000rpm，5分钟，去掉血浆，用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞3次，若红细胞体积小于10ul，需特别小心。
血红蛋白电泳检查(电泳法)
血红蛋白电泳检查（电泳法）1. 原理血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。
每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。
所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。
所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。
正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。
血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。
氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同。
本实验在碱性（PH=8.60）条件下，以琼脂糖凝胶电泳的方法进行，对红细胞洗涤后造成溶血，电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。
多余的染色液用酸性液体洗去。
待琼脂糖凝胶板干燥后，肉眼可直接判别有无电泳条带异常。
运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。
血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。
血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。
2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2 标本种类：抗凝血2.3 标本要求：抗凝剂选用EDTA，柠檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。
常规静脉采血1.8ml，加入含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml的干燥。
清洁试管中，充分混匀。
3. 标本储存：储存于2-8℃冰箱中，5天。
4. 标本运输：储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。
6. 试剂6.1 试剂名称：血红蛋白电泳检查试剂6.2 试剂生产厂家：法国Sebia公司6.3 包装规格：150tests6.4 试剂盒组成琼脂糖凝胶 10块溶血素 1瓶缓冲液条带 10包×2条薄滤纸1×10张氨基黑（浓缩液）1瓶×100ml点样模具滤纸 10条×1盒6.5 试剂储存条件及有效期：贮存于室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃），不能冷冻。
有效期两年。
7. 仪器设备7.1 仪器名称：SEBIA电泳仪7.2 仪器厂家：法国Sebia公司7.3 仪器型号：HYDRASYS8. 操作步骤8.1 血红蛋白液制作：抗凝血离心，5000rpm，5分钟，去掉血浆，用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞3次，若红细胞体积小于10ul，需特别小心。
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Hb F
Age (monF: g
Hb A2:d
-
成人
琼脂糖凝胶
Hydrasys® (Sebia) 碱性缓冲液
新生儿
血红蛋白遗传病类型 (HEMOGLOBINOPATHIES) ?
血红蛋白疾病
血红蛋白性质变化 : 血红蛋白分子病 ○ 结构异常, 一个或数个氨基酸变异或缺失, 都将会导致血红蛋 白分子的电性发生改变 ○ 常见血红蛋白变异体
Gg
Ag
d
b
SCHGgéhtéerteorzHoyAzoggymogotezteycgcodomtmeppoosuintbed
HbC
N
AC
HbA
Heterozygote AC
SC
N HbA
HbS HbC
SC Compound heterozygoty
D型血红蛋白分子病
常见区域:
常见于印度.
特点:
变异体位置 b121 Glu (谷氨酸,负电荷) →Gln (谷氨酰胺, 不带电荷) (D- Los Angeles
基因纯合体:
轻微贫血
杂合体:
无症状
Hb A fraction: absence Hb E fraction: 100 %
Hb A fraction: 65 – 70 % Hb E fraction: 30 – 35 %
下列情况下,需要进行血红蛋白检测
临床和遗传问题 (产前诊断) 贫血,小红细胞症 新生儿筛查 对来自地贫高发区人口,进行筛查 …
血红蛋白遗传病
遗传性疾病基因学图谱
正常基因
异常基因
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问和交流
异常血红蛋白类型
目前, 已经证实的有超过1000 种以上的变异体(, b, g and d)
大部分变异体出现频率较低, 并且没有明显临床症状 4种主要变异体 (Hb S, Hb C, Hb E and Hb DPunjab)出
b-globin : S – C – DPunjab – E…
血红蛋白含量变化 : 地中海贫血 ○ 合成或合成调控异常 :
b globin b Thalassemias globin Thalassemias
合并型 : 血红蛋白分子病Hemoglobinopathies /地贫 Thalassemias
对诊断有帮助的其他信息
患者临床症状,年龄,籍贯和其他相关的背景
(输血记录) 血液全套检测, 网状细胞级别和进行细胞形态镜检 Hb电泳 (EDTA抗凝管) 离子平衡和溶血情况
血红蛋白检测的几种方法
目前, 血红蛋白检测步骤如下: - 电泳法对Hb进行检测 或者使用等电聚焦电泳法
Hb A fraction: 65 – 70 % Hb D fraction: 30 – 35 %
E型血红蛋白分子病
常见区域:
常见与东南亚地区.
特点:
变异位点 b26 Glu (谷氨酸,负电荷) →Lys (赖氨酸,正电荷) 碱性缓冲液: 总体带电荷下降 → 凝胶电泳中,出现在HbC附近
临床症状:
儿童-成人出现 10-15% Hb H * 4 个基因表达沉默: Hb Bart’s胎儿水肿综合征 (死胎)
镰刀型红细胞血症
变异体出现在 6 GAG (谷氨酸) GTG (缬氨酸)
Chromosomes 16
normal gene
abnormal gene
N SS AS
N
Chromosomes 11
= D-Punjab)
(6 different Hb D according to the position of the mutation)
碱性缓冲液中: 电荷下降 → M电泳速度变度变慢,靠近Hb S
临床症状:
基因纯合体:
轻微贫血
基因杂合体:
无症状 (仅在电泳中发现D区带)
Hb A fraction: absence Hb D fraction: 100 %
Gg
Ag
d
b
Gg
Ag
d
b
Héeteérozygote
Gg
Ag
d
b
HbS
AS
N
HbA HbS
Gg
Ag
d
b
Homozygote
SS
C型血红蛋白分子病
变异体位置:AA 6: GAG (谷氨酸) AAG (Lys)
Chromosomes 16
Chromosomes 11
Gg
Ag
d
b
Gg
Ag
d
b
Héetéerozygote
o 临床症状
* Beta 地贫重症型 - 严重贫血 (需要长期输血治疗) * Beta 地贫中间型 * Beta 地贫轻微型 - 无临床症状
Alpha 地中海贫血
o常见区域
常见与远东地区,非洲和地中海区国家
o 临床症状: 根据Alpha基因的表达状态, 有4个不同程度的Alpha地贫症状
* 1 个基因表达沉默: 静止型 (非常难检测到, 在出生会测到Hb Bart’s 1-2% ) * 2 个基因表达沉默: 轻型alpha地贫,在出生会测到Bart’s 2-10% * 3 个基因表达沉默: 血红蛋白Hb H病, 出生时出现2-30% Bart’s,
三维结构
4 亚单位
2 alpha链
○ 2 alpha genes
3 «非 »alpha链 : beta, delta, gamma
○ 1 b gene , 1 d gene , 2 g genes
Chromosomes 16
Chromosomes 11
Gg
Ag
d
b
Gg
Ag
d
b
HbA b HbF g HbA2 d
现频率较高 ( 特定人群) ○ 携带者会出现健康问题 ○ 儿童可能在出生时即伴随有严重症状
血红蛋白疾病的区域分布图
Thalassemias
Beta 地中海贫血
bo 没有Beta链合成 b+ 合成能力下降
o 常见区域
常见与地中海区域: 意大利, 西班牙,希腊, 近东地区, 非洲北部. 同样常见于东南亚 : 泰国,印度, 越南,中国, 印尼.
血红蛋白电泳的意义和判断
目的
血红蛋白结构和功能的回顾
Sebia CAPILLARYS 2 / Minicap血红蛋白检测说明 血红蛋白临床结果说明
血红蛋白的结构
血红蛋白分子是由4条多肽链(2对)和4个可以结合铁和氧气的血红素.
Normal hemoglobins, contain alpha, beta, delta, and gamma globin chains.