支原体检测

使用试剂盒

protocol

从培养箱中取出培养的细胞，吸取1ml 的培养液与1.5的EP 管，做好名称，代数，日期，培养人标记。

1.将TAKARA 中用于支原体检测的试剂-30℃取出，化冻轻悬，稍离，放冰上

2.以50ul 体系，加阳性对照，共7个样，准备8*reaction

3.MQ 32.75ul 262

10*PCR buffer(绿色，已有loading dye)5ul 40

dNTP Mixture （白色）5ul

40支原体检测

2015年11月26日9:55

酶放到冰上，最后加酶，不能触到底部，吹打几次；

1.涡旋混匀，稍离心，分别加入透明的PCR 管中，45 ul/管;

2.分别加入不同的做好标记的细胞培养上清5ul/管，其中第1管为阳性对照，即positive control；

3.盖紧瓶盖，涡旋震荡；

4.离心后放冰上，拧紧瓶盖；

5.选定程序，对样品进行PCR(盖温为98℃）不同的酶激活温度不同；

6.MCGP F1

0.5ul 4MCGP R1

0.5ul 4Dmem Taq (酶，最后加）

1.25ul 10total 45ul 360ul

step

T ℃t goto cycle

1

95℃1min 2

95℃30s 3

55℃2min 4

72℃1min 23251000:00取出PCR 之后的产物，配制1%-2%的琼脂糖凝胶，

对跑胶结果进行分析。