荧光显微镜的使用及观察汇总
荧光显微镜的使用与显微摄影要点
b、聚光镜 两个电磁透镜
聚光镜的作用是将电子束会聚在样品上,控制照明束
斑的大小及孔径角。
2、成像与放大系统 a、样品室 插入支持铜网的样品臂。 b、物镜 短焦距的强磁透镜,安装了光阑和消像散器, 决定分辨率。首次成像,放大100Х
c、中间镜及投影镜
中间镜:弱透镜,放大20X,用
梯形或方形的上下两边平行。
7、切片 切片刀有钻石刀和玻璃刀。
注意事项:切片刀要锋利,否则切片上会出现划痕。
切片厚度500—1000Å,面积1mm² 以下。 切片连成带浮在水面上。
8、装网 载网的类型:
Formvar 膜的制备: 配制0.3% Formvar(聚乙烯醇缩甲醛)的二氯乙烷(或 氯仿)溶液。
生物电子显微镜技术
第一节 透射电子显微镜技术
一、显微镜的分辨率与放大倍数 分辨率: d = 0.61λ / η· sinα
电子的波长:
λ = h / mv
h —普朗常数 , 6.62×10-27 尔格 / 秒 m —电子质量 , 9.1×10-28 克 v —电子运动速度
根据能量守恒定理:
1/2mv2 = eU
固定
脱水(或干燥)
3、冰冻法 冰冻的样品可直接观察或冰冻干燥后观察。 样品制作的关键步骤:干燥。一般用临界点干 燥法。
比近轴电子要厉害的多,以致两者不交在一点上,结果
在象平面成了一个满散圆斑 2、衍射差 电子通过光阑发生衍射。增大孔径角可以减小衍 射差。 最佳孔径角为10-2—10-3弧度。
透镜
象
物
α
P P’’
P’
光轴
球差
3、色差
入射电子的速度不同,未能会聚于一点。电子的 能量不同,从而波长不一造成的,电子透镜的焦距随着 电子能量而改变,因此,能量不同的电子束将沿不同的 轨迹运动。
荧光显微镜的使用流程
荧光显微镜的使用流程一、介绍在生物科学领域中,荧光显微镜是一种常用的工具。
它利用荧光现象来观察和研究细胞、组织和生物分子。
本文将介绍荧光显微镜的使用流程,包括前期准备、显微镜的操作步骤、关键技巧和常见问题解答。
二、前期准备在使用荧光显微镜之前,需要进行一些前期准备工作,以确保顺利进行观察和实验。
2.1 样本准备首先,需要准备好要观察的样本。
样本可以是细胞、组织切片或荧光标记的蛋白质等。
对于细胞样本,可以在培养皿中直接观察或使用刀片将其固定在载玻片上。
对于组织切片,需要进行固定、切片和染色等处理。
2.2 荧光染色荧光显微镜通过荧光标记物来观察样本。
因此,在观察前需要对样本进行荧光染色。
常用的荧光染料有荧光素、荧光素二异硫氰酸酯(FITC)等。
根据需要选择适当的染料,并根据染料的使用说明进行染色操作。
2.3 防护措施在进行荧光显微镜观察时,应注意个人防护。
戴上实验手套和口罩,避免接触染料和其他有害物质。
同时,确保显微镜和工作台的清洁,以避免样本污染和数据误差。
三、荧光显微镜的操作步骤荧光显微镜的操作步骤通常包括调节显微镜参数、调节荧光镜片和观察样本等。
3.1 调节显微镜参数在使用荧光显微镜前,需要调节显微镜的参数。
首先,打开显微镜,并调节光源亮度合适。
然后,调节物镜,使样本图像清晰可见。
最后,根据需要选择合适的荧光滤光片,并将其插入显微镜中。
3.2 调节荧光镜片荧光镜片是荧光显微镜中一个重要的部件。
在观察时,需要根据染料的特性来选择合适的荧光镜片。
常用的荧光镜片有单色荧光镜片、双色荧光镜片和三色荧光镜片等。
调节荧光镜片可以增强荧光信号和减少背景噪音。
3.3 观察样本当显微镜参数和荧光镜片设置好后,可以开始观察样本。
将染色好的样本放置在载玻片上,并用夹片封闭。
然后,将载玻片放置在显微镜的样本台上,并通过调节焦距和聚焦仪调整样本的焦平面。
最后,通过目镜观察样本,并使用涂片或液晶板记录图像。
四、关键技巧使用荧光显微镜的过程中,有一些关键技巧可以帮助提高观察效果和数据质量。
倒置荧光显微镜使用方法(一)
倒置荧光显微镜使用方法(一)倒置荧光显微镜使用方法简介倒置荧光显微镜是一种常用于细胞、组织等生物样品观察的显微镜。
其特点是将物镜和光源的位置倒置,使得观察样品更加方便。
下面将介绍几种常见的倒置荧光显微镜使用方法。
方法一:样品准备1.在无菌条件下,将生物样品移植到培养皿或载玻片中。
2.样品可以是活细胞,也可以是固定的组织切片等。
3.如果需要染色,可以根据实验需求选择适当的荧光染料。
方法二:显微镜设置1.将倒置显微镜放在实验台上,并确保显微镜的稳定性。
2.打开显微镜电源,待显微镜系统启动后进行下一步操作。
3.调整光源,使得荧光光源均匀而明亮。
4.根据实验需求选择适当的滤光片,用于选择荧光发射波长。
方法三:样品装载1.将培养皿或载玻片放置在显微镜的样品台上。
2.使用目镜观察样品并调整焦距,确保样品清晰可见。
3.根据样品大小和形状进行显微镜调焦,以获得最佳的观察效果。
4.确保样品和显微镜的镜头之间没有空气或污染物,以避免影响观察结果。
方法四:荧光观察1.使用目镜观察样品后,可以使用显微镜的荧光通道进行观察。
2.打开荧光激发光源,调整光强度适当,避免过度曝光或低信号。
3.使用适当的荧光滤光片,选择要观察的荧光波长范围。
4.使用气体扩散器或其他方法降低样品温度,以减少荧光褪色和光损伤。
方法五:图像处理与分析1.使用相机或图像采集系统,记录荧光显微镜观察的图像。
2.可以使用图像处理软件进行曝光、对比度、亮度等调整,以优化图像质量。
3.利用图像分析软件进行细胞大小、数量、定量荧光信号等参数的测量和分析。
方法六:清洁与维护1.每次使用完成后,及时关闭荧光光源和显微镜电源。
2.用干净的纸巾或棉签轻轻擦拭显微镜的镜头和其他表面。
3.定期检查显微镜的各个部件,如镜头、滤光片、光源等,若有问题及时修理或更换。
以上是倒置荧光显微镜的使用方法,希望对您的实验有所帮助。
请根据实际需求进行调整和适配,并注意实验的安全性和准确性。
2.荧光显微镜的使用方法与注意事项
荧光显微镜的使用方法与注意事项1、打开显微镜电源。
2、需要使用荧光才开启荧光光源,开启汞灯需要记录打开和关闭的时间。
提示:两次开启汞灯的时间必须间隔半小时以上,打开汞灯后,必须半小时后方可关闭。
3、擦拭镜头:擦拭目镜和物镜。
在长纤维脱脂棉签顶端蘸上无水乙醇,从中央部分开始,采用螺旋渐进的方式轻轻逐步擦到边缘。
提示:①无需经常将物镜/目镜拆下来清理擦拭,日常使用时仅需用脱脂棉签及擦镜纸配合无水乙醇擦去油污即可,只有遇到顽固污渍时才应将物镜拆卸清理。
擦拭镜头时,动作应轻柔,不能过于用力,以避免损坏镀膜层。
②留意擦镜纸的两个面,纹路是不同的:其中一面是粗糙的,另一面更光滑些,要使用更光滑的那一面来清洁。
一般不建议用干的擦镜纸直接擦拭,同样可能划伤镜头。
4、放置样本,正置显微镜将样本放至物镜下方,倒置显微镜将样本放至物镜上方。
提示:显微镜样本一定要保持干净,如有盖片样本,一定要干净干燥,以免样本上的试剂污染物镜。
免疫荧光染色用抗荧光淬灭剂封片。
HE染色、免疫组织化学染色、高尔基染色等用中性树脂封片。
5、选择适合于自己实验的物镜放大倍数,由低到高进行观察。
6、选取实验相应方案,如光强,shutter,明场/DIC等。
切换滤光片,将荧光染色标本所需的激发滤光片组转入光路。
提示:选择与荧光染色标本相应滤色块。
如UV——DAPI,hochest等(镜下观察为蓝色);蓝光——FITC,Alex488等(镜下观察为绿色);绿光——Alex555,Cy3等(镜下观察为红色)。
7、实验结束,关闭电源。
提示:①显微镜使用过程中,镜体、灯箱及电源等位置应无遮挡或覆盖,以免影响散热从而损耗显微镜寿命。
显微镜使用完后,等灯箱部分冷却后,再盖上防尘罩。
②显微镜包含很多光学部件,避免显微镜碰撞,以保护光学系统。
显微镜属精密仪器,如需搬动,拆修,请联系专业人员。
荧光显微镜的使用流程
荧光显微镜的使用流程一、前言荧光显微镜是一种高端的显微镜,广泛应用于生物学、医学等领域。
本文将详细介绍荧光显微镜的使用流程,包括准备工作、样品制备、仪器操作等方面。
二、准备工作1.检查仪器:首先要检查荧光显微镜是否正常工作。
确认灯泡是否亮着,光源是否正常,调整好滤镜等。
2.清洁仪器:使用前要清洁荧光显微镜,以确保样品不会受到污染。
可以用纯净水和酒精擦拭仪器表面和物镜。
3.调节目视系统:荧光显微镜的目视系统需要进行调节。
首先要调节目视系统的放大倍数和对焦,以便更好地观察样品。
三、样品制备1.选择适当的标记物:根据实验需求选择适当的标记物。
比如选择与待测蛋白质结合能力较强的荧光染料。
2.固定样品:将待测样品固定在载玻片上,并进行脱水处理。
可以在载玻片上加一滴PBS缓冲液,然后用吸水纸吸干,再滴上荧光染料。
3.封片:将载玻片和盖玻片封起来,以防止样品受到外界污染。
四、仪器操作1.调节荧光显微镜:首先要调节荧光显微镜的亮度和对比度。
可以通过调节荧光显微镜的滤镜来选择合适的波长。
2.选择放大倍数:根据需要选择合适的放大倍数。
一般情况下,使用40-100倍的物镜进行观察。
3.观察样品:将载玻片放在样品台上,并用目视系统进行对焦。
观察样品时要注意避免强光照射,以免影响荧光信号。
4.拍照记录:可以使用相机或者电脑软件对观察到的图像进行拍照记录。
五、数据分析1.图像处理:使用图像处理软件对拍摄到的图像进行处理,以增强对比度和清晰度。
可以使用Photoshop等软件进行处理。
2.数据统计:根据实验需求对数据进行统计分析,并得出结论。
六、注意事项1.避免强光照射:荧光显微镜对强光非常敏感,避免强光照射可以减少样品的损伤。
2.注意样品制备:样品制备过程中要注意防止样品受到污染,以保证实验结果的准确性。
3.仪器维护:荧光显微镜是一种高端仪器,需要定期进行维护和保养,以确保其正常工作。
七、结论本文详细介绍了荧光显微镜的使用流程,包括准备工作、样品制备、仪器操作等方面。
荧光显微镜应用实践报告(2篇)
第1篇一、引言荧光显微镜是一种利用荧光物质在特定波长下发出荧光的现象,通过观察荧光标记的样品来研究生物分子、细胞和组织的结构、功能和动态变化的高分辨率显微镜。
随着生物科学和医学的发展,荧光显微镜在生物学、医学、化学、材料科学等领域得到了广泛应用。
本报告旨在通过对荧光显微镜的应用实践,总结其操作方法、应用领域和实验结果。
二、实验目的1. 掌握荧光显微镜的操作方法。
2. 熟悉荧光标记技术在生物学研究中的应用。
3. 分析荧光显微镜在细胞器观察、蛋白质定位、基因表达等方面的实验结果。
三、实验材料1. 荧光显微镜:Olympus BX532. 荧光染料:Cy3、Cy5、FITC、DAPI3. 样品:大肠杆菌、细胞株4. 试剂:PBS缓冲液、双蒸水、甲醇、甘油、DNA/RNA分离试剂盒等四、实验方法1. 荧光显微镜操作方法(1)样品制备:将细胞或组织样本进行固定、染色和封片。
(2)荧光显微镜观察:将样品置于载物台上,调整物镜、光圈和滤光片,观察荧光信号。
(3)图像采集:使用显微镜自带或外接的图像采集系统,对荧光图像进行采集。
2. 荧光标记技术在生物学研究中的应用(1)细胞器观察:利用不同荧光染料标记线粒体、内质网、高尔基体等细胞器,观察其在细胞内的分布和动态变化。
(2)蛋白质定位:利用荧光标记抗体或荧光蛋白,观察蛋白质在细胞内的定位和动态变化。
(3)基因表达:利用荧光标记的DNA/RNA探针,检测基因表达水平。
五、实验结果与分析1. 细胞器观察(1)线粒体:Cy3标记的线粒体在细胞内呈现红色荧光,观察到线粒体在细胞内的分布和动态变化。
(2)内质网:Cy5标记的内质网在细胞内呈现绿色荧光,观察到内质网在细胞内的分布和动态变化。
(3)高尔基体:FITC标记的高尔基体在细胞内呈现黄色荧光,观察到高尔基体在细胞内的分布和动态变化。
2. 蛋白质定位(1)细胞骨架:利用GFP标记的肌动蛋白,观察到细胞骨架在细胞内的分布和动态变化。
实验七荧光显微镜的使用及观察
花粉小孢子四分体
水溶性苯胺蓝染色液
拟 南 芥 花 粉 在 柱 头 上 的 萌 发
授粉后10-30分钟的拟南芥柱 头、水溶性苯胺蓝染色液
荧光显微镜的配套滤片
激发滤片 型号 UV
V BV B G
允许通过的波长 配用的阻断滤片
应用
365W
410~420W 404~435W
490W 520~550W
410W
460W 515W、530W
515W 580W
硫代黄素荧光 染色和FITC
单胺荧光
吖啶橙 FITC和金胺
TRITC和佛根 反应荧光染色
二、实验材料和仪器:
荧光显微镜、镊子、解剖针、盖玻片、载玻片、 脱色苯胺蓝染色液、蒸馏水、拟南芥开花植株。
三、实验内容与方法:
1. 观察荧光显微镜的结构、练习使用荧光显 微镜。
2. 花粉四分体胼胝质壁的观察。 3. 花粉粒在柱头上的萌发和花粉管的生长。
四、作业:
1、描述在荧光显微镜下所观察到的实验现象。 2、绘拟南芥花粉四分体的形态图。
荧光显微镜使用方法
1.打开灯源,超高压汞灯要预热几分钟才能达 到最亮点。
2.用低倍镜白光观察,调整光源中心,使其位 于整个照明光斑的中央。
3.选择合适的激发光和滤光片。 4.观察。
使用中应注意:末装滤光片不要用眼直接观 察,以免引起眼的损伤;用油镜观察标本时,必 须用无荧光的特殊镜头油;
汞灯使用注意事项
轻则烧断保险丝或烧毁汞灯电源中的扼流圈重则汞灯爆炸汞灯的使用寿命一般只有300小时使用得当可达600小时使用寿命与开关的次数成反比样品应集中观察
实验七 荧光显微镜的使用及观察
一、实验目的与要求:
了解荧光显微镜的构造及其维护方法。掌握荧光 显微镜的使用方法和使用中的注意事项。学习胼脂质 荧光的观察方法。
(优选)实验荧光显微镜的使用
二、滤色镜系统
一个滤光镜系统(即一个滤光块)由激发滤色 镜、二向色镜、阻挡滤色镜(三部分组成。
通过以上激发滤光片、二向色镜、阻挡滤光片 的相应组合,可以形成多种不同的激发方法,如紫 外(UV)、紫(V) 、兰(B)和绿(G)等(这些 名称是以激发光主波长的颜色而定的)。
尼康所提供的滤光块种类很多,按客户要求选 择配套。
汞灯能以最小的表面发出最大数量的紫外光和蓝光 ,且光亮度大,光度稳定。它是用石英玻璃制作,中间呈 球形,有两个钨电极,内充一定数量的汞和少量氩氖混合 气体。
一、光源
工作时由两个电极间放电,引起水银蒸发,球内气 压迅速升高,当水银完全蒸发时,可达50~70个标准大气 压力,这一过程一般约需5~15min。
次生荧光:有些生物组织经紫外线照射后,并不能发 出荧光,但是当它吸收荧光染料后也可以产生荧光,称为次 生荧光(或间接荧光)。如吖啶橙,DAPI均可检测细胞内的 核酸。
荧光显微镜的基本结构组成
一、光源
由于标本发出的荧光和激发光相比,是非常微弱的, 因此荧光显微镜的光源强度必须很高,所以对于荧光显微 镜的光源我们通常采用高压汞灯。
透射荧光显微镜的构造
吸收滤色镜 暗场聚光镜
汞灯箱 激发滤色镜
透射荧光显微镜原理
目镜
透射荧光显微镜原理
物镜
吸收滤色镜 暗场聚光镜
激发滤色镜
汞灯
反射荧光显微镜原理
吸收滤色镜
分色镜 物镜 标本
汞灯 激发滤色镜
实验原理
某些物质经波长较短的光照射后,分子被激 活,吸收能量后呈激发态。
其能量部分转化为热能或用于光化学反应外 ,相当一部分则以波长较长的光能形式辐射出来, 这种波长长于激发光的可见光称为荧光。
荧光显微镜使用方法
荧光显微镜使用方法荧光显微镜是一种用于观察荧光物质的显微镜,它利用物质受激发后发出的荧光来进行观察和分析。
荧光显微镜在生物学、医学、材料科学等领域有着广泛的应用,下面我们来详细了解一下荧光显微镜的使用方法。
1. 样品准备。
在使用荧光显微镜之前,首先需要准备好待观察的样品。
样品的准备包括固定、染色等步骤,确保样品的完整性和清晰度。
在进行染色时,需要选择适合的荧光染料,以便观察到清晰的荧光信号。
2. 调节荧光显微镜。
接下来是调节荧光显微镜的步骤。
首先要打开显微镜的电源,然后调节照明系统,确保样品能够受到足够的激发光。
接着调节物镜和目镜,使其对焦并调整放大倍数,以获得清晰的观察效果。
3. 观察样品。
当荧光显微镜调节好后,就可以开始观察样品了。
在观察过程中,要注意调节荧光滤光片,以选择合适的激发光和荧光信号的观察。
观察时要避免光线干扰,保持观察环境的暗度,以获得清晰的荧光图像。
4. 图像记录与分析。
观察到感兴趣的荧光信号后,可以进行图像记录与分析。
使用相机或者荧光成像系统,记录下清晰的荧光图像。
接着可以利用图像分析软件进行图像处理和分析,以获取更多的信息和数据。
5. 仪器保养。
在使用完荧光显微镜后,要进行仪器的保养工作。
包括清洁镜头、调整光路、关闭电源等步骤,确保仪器的正常运行和延长使用寿命。
总结。
荧光显微镜的使用方法并不复杂,但需要注意细节和步骤的顺序。
正确的使用方法可以帮助我们获得清晰的荧光图像,从而更好地进行观察和分析。
希望本文对您在使用荧光显微镜时有所帮助,谢谢阅读!。
简述荧光显微镜的使用流程
简述荧光显微镜的使用流程1. 荧光显微镜的基本原理荧光显微镜是一种利用荧光现象观察样品的显微镜。
其基本原理是通过激发样品中的荧光染料,使其发出荧光,然后通过显微镜观察到荧光的图像。
2. 荧光显微镜的准备工作在进行荧光显微镜观察之前,需要进行以下准备工作:•打开荧光显微镜电源,待其预热一段时间。
•确保荧光显微镜镜头、镜片等表面干净,无尘。
•准备好显微镜玻片和荧光染料。
3. 荧光显微镜的使用流程接下来,将详细介绍荧光显微镜的使用流程:3.1 样品制备1.准备样品,可以是细胞、组织等。
2.将样品制作成适当的厚度和尺寸的玻片。
3.使用适当的荧光染料对样品进行标记。
3.2 荧光显微镜调节1.将样品装在玻片夹上,并将其安装在显微镜上。
2.通过荧光显微镜的调节钮,调节聚焦,使得样品清晰可见。
3.调节荧光增强器,以增强荧光显微镜观察的亮度。
3.3 荧光显微镜的观察1.通过荧光滤光片选择适当的波长,以激发荧光染料。
2.调节荧光显微镜的曝光时间、增益等参数,以获取清晰的荧光图像。
3.使用眼镜或摄像机观察和记录荧光图像。
3.4 数据分析与图像处理1.对荧光图像进行分析和处理,例如测量荧光强度、分析荧光定位等。
2.可以使用图像处理软件,对荧光图像进行进一步处理和优化。
3.根据需要,对荧光图像进行统计和图形展示。
4. 注意事项在使用荧光显微镜时需要注意以下事项:•尽量避免直接暴露在荧光光源下,以免对眼睛造成伤害。
•调节荧光显微镜参数时要小心操作,避免损坏设备。
•使用荧光染料时要遵循安全操作规范,防止对人体和环境造成伤害。
5. 结论荧光显微镜是一种用于观察荧光样品的重要工具。
使用荧光显微镜需要进行样品制备、荧光显微镜调节、观察荧光图像以及数据分析和图像处理等步骤。
在进行观察时,需要注意安全操作和设备的保护。
通过荧光显微镜的使用,可以获得对样品荧光特性的深入理解和研究。
荧光显微镜使用方法
荧光显微镜使用方法
荧光显微镜是一种先进的显微镜,它可以使被观察的样本能够发出荧光,从而看到更细胞更宏观的结构。
下面我们一起来了解一下荧光显微镜的使用方法。
1、准备工作
首先,在使用荧光显微镜之前,需要先将镜头清洗干净,以免影响成像效果。
同时,还需要将待观察的样品取出,进行样品的准备工作,例如培养细胞、切片等等。
2、调节镜头
将样品放入显微镜之后,要调节镜头,以获得最佳的成像效果。
首先要将物镜与样品对焦,然后调节荧光滤光片、激发滤光片和物镜的焦距,直到获得最佳的观察效果。
3、拍摄图像
在调节好镜头后,可以使用荧光显微镜来观察和拍摄图像。
观察荧光发射时要避免光线过强,否则会造成图像发虚。
此时需要适当地调节荧光滤光片的重叠程度来获得最佳的成像效果。
4、对图像进行处理
荧光显微镜所拍摄的图像可以根据需要进行处理。
可以使用图像软件来调整图像的对比度、亮度等参数,以产生更清晰、更鲜艳的图
像效果。
同时,可以通过颜色调整功能根据需要来调整图像颜色,如将荧光标记变成不同颜色的。
荧光显微镜在生命科学研究中有着广泛的应用,通过使用荧光标记技术,可以观察细胞内某些分子的转运、相互作用行为等生物学现象。
但荧光显微镜的使用需要非常谨慎,因为光线过强会对样品造成伤害,影响样品的生长和繁殖。
因此,在使用荧光显微镜之前,必须详细阅读说明书,了解荧光显微镜的使用要点,严格遵守操作规程,以确保实验的成功。
实验4荧光显微镜的使用
实验4 荧光显微镜的使用荧光显微镜(fluorescence microscope)是利用一定波长的光激发标本产生不同颜色的荧光,再通过物镜和目镜的放大作用来显示标本中的某些化学成分和细胞组分的显微装置。
荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具,通常用于检测与荧光染料共价结合的特殊蛋白质或其他分子。
由于它灵敏度高,用极低浓度(PPM级)荧光染料就可清楚地显示细胞内特定成分,故可进行活体观察。
因此,可以用来观察活细胞内物质的吸收与运输,化学物质的分布与定位等;近年来发展起来免疫荧光显微技术,可将荧光素标记抗体,利用抗体与细胞表面或内部大分子(抗原)的特异性结合,在荧光显微镜下对细胞内的特异成分进行精确定位研究;与分光光度计结合构成的显微分光光度计,可对细胞内物质进行定量分析,精确度高,可测得10-15g的DNA 含量。
目前许多新兴生物研究领域如基因原位杂交(FISH)都等应用到荧光显微镜。
由于荧光显微镜技术具有染色简便、标本色彩鲜艳,敏感度高、特异性强的特点,在细胞生物学研究领域已被广泛应用。
荧光显微镜的原理:某些物质受紫外线照射时可发出荧光,这种物质称荧光物质。
细胞内含有少数天然荧光物质,如叶绿素、血红素、维生素、脂褐素、核黄素等经紫外线照射后可产生自发荧光;还有些细胞成分虽然受照射后不发荧光,但可以用荧光物质或荧光染料(如酸性品红、甲基绿、吖啶橙等)处理标本使其有选择性地带上荧光染料,经紫外线照射后可诱发荧光,称为继发荧光。
荧光染料对光的吸收由高度的选择性,其荧光发射也有一定的范围。
如吖啶橙的吸收峰在405nm,发射波长为530~630nm,最高峰在565nm,如要获得比较强的荧光,需要选用与匹配的滤片系统。
荧光染料的种类很多,不同的染料有不同的使用范围。
最常用的荧光染料有以下几种:表荧光染料的应用范围荧光微镜的装置:荧光显微镜与普通光学显微镜结构基本相同,主要区别在于光源和滤光片不同,由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。
荧光显微镜使用方法
荧光显微镜使用方法
荧光显微镜是一种常用的显微镜,用于观察样品中的荧光发射。
下面是荧光显微镜的使用方法:
1. 准备样品:将待观察的样品制备好,例如细胞、组织切片等。
2. 准备溶液:根据样品的要求,准备好适当的荧光染料或荧光探针溶液。
3. 调整显微镜:将荧光显微镜调整到合适的工作状态。
首先打开显微镜的光源,调节亮度和对比度,确保适当的照明条件。
然后根据荧光染料的激发波长,选择合适的滤光片安装在光源和物镜之间。
4. 定位样品:将样品放置在显微镜的样品台上,并使用样品台上的移动装置将样品调整到适当的位置。
5. 调节对焦:使用显微镜的焦距调节旋钮或移动装置,将样品调焦到清晰的图像。
可以使用目镜调焦,然后再使用物镜调焦,以获得更高的放大倍数。
6. 切换到荧光模式:调整显微镜的光源切换到荧光模式。
根据需要,在荧光探针激发波长的范围内选择合适的激发滤光片和荧光滤光片,并将它们安装在光源和物镜之间。
7. 观察和记录图像:通过目镜观察到样品中的荧光发射,并使用显微镜配备的相机或摄像设备拍摄或记录图像。
8. 清洁和存储:使用完毕后,关闭显微镜的光源,将样品从样品台上取下,并清洁显微镜的镜头和样品台。
然后,将显微镜保存在干燥、清洁的地方,以防止灰尘和污染。
以上是荧光显微镜的基本使用方法,根据不同的实验要求和样品特性,可能还需要进行其他调整和操作。
荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程
荧光显微镜使用方法和荧光显微镜把持规程之马矢奏发布时间:2011-06-15荧光显微镜使用方法和荧光显微镜把持规程荧光显微镜是光学显微镜中的一种.关键字:荧光显微镜使用方法荧光显微镜把持规程荧光显微镜使用荧光显微镜使用方法和荧光显微镜把持规程1. 用窗帘遮蔽光线,关闭房间内的灯光,除去显微镜的防尘罩,确保显微镜灯室通风良好、无遮盖.装上汞灯灯箱,并转动灯箱卡圈上的拨杆,将灯箱与镜臂连接.2. 将汞灯灯箱的电源插头拔出荧光电源箱后的插座,再将荧光电源箱的插头拔出220V外接电源.3. 翻开电源开关,电压表显示出电源电压,如电源电压摆荡不年夜于额定电压值的±5%,即可按下启动开关扑灭汞灯,如因天气太冷或电压不稳定等原因,一次启动未扑灭汞灯,可以多揿动几次.待超高压汞灯弧光到达稳定状态并到达最年夜发光效率,即可开始工作.4. 灯胆的调中:(1)任选一块标本放在载物台上.(2)转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移出光路,转动滤色片组转换手轮,将紫光(V)或蓝光(B)或绿光(G)激发滤色片组转入光路,并将10×荧光物镜转入光路.(3)调节粗微调手轮,将标本像调焦清晰.(4)前后推动垂直照明器右边的聚光镜调焦推杆,使视场光栏成像清晰,转动视场光栏拨杆将视场光栏收小,调节视场光栏调中螺钉使视场光栏居中,然后再将视场光栏开至最年夜.(5)转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移入光路,前后调节灯箱上的聚光镜拨杆,使汞灯的弧光在视场内成像清晰.(6)调整灯箱上的灯胆水平调节螺钉和垂直调节螺钉,使汞灯的弧光居中.(7)调整反光镜水平调节螺钉和垂直调节螺钉,使光源的反射像与汞灯的弧光分开.(8)转动聚光镜旋钮把聚光镜移出光路,此时视场照明均匀.5. 荧光观察:(1)将荧光染色标本放到载物台上.(2)将10×平场物镜或40×荧光物镜转入光路,调节载物台纵横移入手轮,将标本移入光路.(3)转动滤光片转换拨轮,将荧光染色标本所需要的激发滤光片组转入光路.激发滤光片组编号刻在滤片组转换拨轮上.滤光片选择正确与否,是荧光显微镜能否获得正确应用的关键.选用滤光片时,必需遵守斯托克斯定律:激发滤光片的透射波长<双色束分离器的透射波长<阻断滤光片的透射波长.由于激发滤光片、双色束分离器和阻断滤光片,出厂时已按其用途和自己的光学特性进行了严格的组合匹配,在观察和摄影时,只需选择滤光片组即可.(4)调节粗调手轮,当看清荧光图像轮廓后,再用微调手轮调焦,直至看到清晰的荧光图像.(5)当需要获得较强的荧光图像时,可转动聚光镜旋钮把聚光镜移入光路,可获得较明亮的荧光图像.(6)当需要使用40×或100×荧光物镜观察时,应在标本和物镜间加上甘油,油中不能有影响观察的小泡或杂质.使用时可使甘油慢慢浸润一会儿,然后轻轻左右来回转植物镜转换器以排除气泡.6. 荧光显微摄影——显微镜摄像头由于荧光图像一般均较明场观察暗很多,所以进行荧光显微摄影需要较长的曝光时间,在曝光时应注意防止仪器震动.荧光显微镜摄影技术对记录荧光图像十分需要,由于荧光很易褪色减弱,要即时摄影记录结果.方法与普通显微摄影技术基秘闻同.因紫外光对荧光猝灭作用年夜。
荧光显微镜对叶片观察
荧光显微镜的使用方法:(1)打开灯源,超高压汞灯要预热15min才能达到最亮点。
(2)透射式荧光显微镜需在光源与暗视野聚光器之间装上所要求的激发滤片,在物镜的后面装上相应的压制滤片。
落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发滤片、双色束分离器、压制滤片的插块。
(3)用低倍镜观察,根据不同型号荧光显微镜的调节装置,调整光源中心,使其位于整个照明光斑的中央。
(4)放置标本片,调焦后即可观察。
使用中应注意:未装滤光片不要用眼直接观察,以免引起眼的损伤;用油镜观察标本时,必须用无荧光的特殊镜油;高压汞灯关闭后不能立即重新打开,需待汞灯完全冷却后才能再启动,否则会不稳定,影响汞灯寿命。
(5)观察。
例如:在荧光显微镜下用蓝紫光滤光片,观察到经0.01%吖啶橙荧光染料染色的细胞,细胞核和细胞质被激发产生两种不同颜色的荧光(暗绿色和橙红色)。
[2]荧光显微镜的标本制作要求1、载玻片载玻片厚度应在0.8~1.2mm之间,太厚的坡片,一方面光吸收多,另一方面不能使激发光在标本上聚集。
载玻片必须光洁,厚度均匀,无明显自发荧光。
有时需用石英玻璃载玻片。
2、盖玻片盖玻片厚度在0.17mm左右,光洁。
为了加强激发光,也可用于涉盖玻片,这是一种特制的表面镀有若干层对不同波长的光起到不同干涉作用的物质(如氟化镁)的盖玻片,它可以使荧光顺利通过,而反射激发光,这种反射的激发光可激发标本。
3、标本组织切片或其他标本不能太厚,若太厚激发光大部分消耗在标本下部,而物镜直接观察到的上部不充分激发。
另外,细胞重叠或杂质掩盖,影响判断。
4、封裱剂封裱剂常用甘油,必须无自发荧光,无色透明,荧光的亮度在pH8.5~9.5时较亮,不易很快褪去。
所以,常5、镜油一般暗视野荧光显微镜和用油镜观察标本时,必须使用镜油,最好使用特制的无荧光镜油,也可用上述甘油代替,液体石蜡也可用,只是折光率较低,对图像质量略有影响。
注意事项:(1)严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作,不要随意改变程序。
如何使用自然科学实验中的荧光显微镜
如何使用自然科学实验中的荧光显微镜荧光显微镜是一种重要的实验工具,广泛应用于生物学、医学、物理学等领域。
它能够通过荧光标记的物质发出的荧光来观察样品的细胞结构、分子运动等。
本文将介绍如何正确使用荧光显微镜进行实验,并探讨其在科学研究中的应用。
1. 准备工作在使用荧光显微镜之前,首先需要准备好实验所需的样品和试剂。
样品可以是细胞培养物、动植物组织切片等。
试剂则包括荧光染料、缓冲液等。
确保样品和试剂的质量良好,以获得准确可靠的实验结果。
2. 荧光染料的选择荧光显微镜实验中最重要的一步就是选择合适的荧光染料。
不同的荧光染料对于不同的实验目的有着不同的选择标准。
一般来说,荧光染料应具有较高的荧光量子产率、较长的激发和发射波长、以及良好的稳定性。
此外,还需要考虑染色物对样品的影响,以及与其他染料的互补性等因素。
3. 样品的染色将样品与合适的荧光染料进行染色是荧光显微镜实验的关键步骤之一。
染色的目的是使样品中的特定结构或分子能够发出荧光。
染色的方法有直接染色和间接染色两种。
直接染色是将荧光染料直接与样品接触,而间接染色则是通过特定的抗体或标记分子与目标物结合,再加入荧光染料进行染色。
根据实验需求和样品特点选择合适的染色方法。
4. 荧光显微镜的使用在进行荧光显微镜实验之前,需要对荧光显微镜进行适当的调整和设置。
首先,调整显微镜的焦距和对焦,确保样品能够清晰可见。
其次,选择合适的激发光源和滤光片,使荧光染料能够发出最强的荧光信号。
最后,根据实验需要调整显微镜的放大倍数和视场,以获得所需的观察效果。
5. 图像获取与分析荧光显微镜实验得到的图像可以通过相机或图像采集系统进行记录。
在图像获取过程中,应注意调整曝光时间和增益等参数,以获得适当的信号强度和图像清晰度。
获取到的图像可以通过图像处理软件进行进一步的分析和处理,如调整对比度、合并多通道图像等。
荧光显微镜在科学研究中有着广泛的应用。
例如,在生物学领域,荧光显微镜可以用于观察细胞的形态和结构,研究细胞的生理功能和病理变化;在医学领域,荧光显微镜可以用于疾病的诊断和治疗监测,如癌症细胞的检测和药物分子的追踪;在物理学领域,荧光显微镜可以用于研究纳米材料的光学性质和量子效应等。
荧光显微镜使用方法
荧光显微镜使用方法荧光显微镜是一种能够观察荧光物质的显微镜,它利用荧光物质在受到激发光照射后发出的荧光来观察样品。
荧光显微镜在生物医学、生物化学、材料科学等领域都有着广泛的应用。
本文将介绍荧光显微镜的使用方法,帮助使用者更好地操作和利用荧光显微镜进行观察和实验。
1. 准备工作。
在使用荧光显微镜之前,首先要进行准备工作。
确保显微镜处于干净整洁的状态,检查镜头和样品台是否有灰尘或污垢,需要用专门的镜头纸进行清洁。
另外,检查荧光显微镜的光源是否正常,灯泡是否需要更换,确保充足的光源。
2. 样品准备。
样品的准备是使用荧光显微镜的关键步骤。
首先,将样品放置在样品台上,并使用载玻片或者盖玻片将其封装好,避免样品干燥或者受到污染。
另外,根据样品的特性选择合适的荧光染料进行标记,确保样品能够发出清晰的荧光信号。
3. 调整显微镜参数。
在观察样品之前,需要根据样品的特性和荧光染料的特性来调整荧光显微镜的参数。
首先是调整激发光源的波长和强度,根据荧光染料的激发波长来选择合适的滤光片。
然后是调整目镜和物镜的倍数,确保观察到清晰的荧光图像。
4. 观察和记录。
调整好显微镜参数后,就可以开始观察样品了。
通过调节焦距和光源强度,找到合适的观察条件,观察样品的荧光信号。
在观察过程中,可以通过调整对比度和亮度来优化荧光图像的质量。
同时,可以使用相机或者摄像机来记录荧光图像,以便后续分析和研究。
5. 数据分析。
观察样品后,需要对荧光图像进行数据分析。
可以使用图像处理软件来处理和分析荧光图像,提取样品的荧光强度、分布和形态等信息。
通过数据分析,可以更好地理解样品的特性和荧光染料的性能,为后续的实验和研究提供参考。
6. 清洁和保养。
在使用荧光显微镜之后,需要对显微镜进行清洁和保养。
首先是清洁镜头和样品台,使用镜头纸和清洁液进行清洁,确保镜头的清晰度和透光性。
另外,需要关闭光源和电源,将显微镜放置在干燥通风的地方,避免灰尘和湿气对显微镜的影响。
荧光显微镜的使用流程讲解
荧光显微镜的使用流程讲解一、准备工作1.确保荧光显微镜的正常运行状态,检查是否已安装好所需荧光滤光片和目标物镜。
2.打开显微镜电源,待灯泡亮起后,调节亮度到合适的水平。
3.确保使用的载玻片或培养皿已清洁干净,无污垢和杂质。
二、样品处理1.取出要观察的样品,并根据实验要求进行处理,如染色、固定等。
注意,使用荧光染料时应避免暴露在光线下和其他自然光源。
2.在滴液架上滴上适量的液体样品,覆盖胶片或盖玻片。
三、调节显微镜1.将样品载玻片放在显微镜的载物台上,将载物台垫片固定好。
2.调节照明光源,将光线调至适合观察的强度,并使用亮度调节旋钮获得清晰的视野。
3.转动物镜转盘,选择合适的目标物镜。
一般来说,低倍(如4倍或10倍)用于整体观察,高倍(如40倍或100倍)用于观察细胞结构等。
四、对焦和观察1.初步对焦:通过调节焦距手轮,将物镜移到与载玻片非常接近的位置,并微调焦距观察样品的大致轮廓。
2.高倍对焦:使用粗调焦距手轮将物镜缓慢下移,直到目标物体的轮廓清晰可见。
然后使用细调焦距手轮进行最后的微调,以获得清晰的焦点。
3.观察:使用目镜观察并调整试镜筒高度,使样品的细节清晰可见。
如果需要,可以调节对比度、色彩和亮度来优化观察效果。
五、荧光成像1.切换到荧光模式:根据所用荧光染料选择合适的荧光滤光片,并将其插入滤光片插槽中。
2.调整曝光时间:通过设置合适的曝光时间,确保获得适当的荧光强度,并避免过曝或欠曝。
3.观察和记录:通过目镜观察荧光信号,并使用相机或图像捕捉软件记录所得图像。
六、保存和分析1.将观察到的荧光图像保存到电脑或存储介质中,便于后续处理和分析。
2.如果需要,可以使用图像处理软件对图像进行调整、增强和分析,以获得更详细的信息。
七、结束操作1.关闭显微镜电源,待灯泡冷却后再关闭仪器。
2.清洁和保养:将使用过的载玻片和盖玻片进行清洁,并检查显微镜是否有任何损坏或污垢,及时进行维护和保养。
以上就是荧光显微镜的使用流程讲解。
荧光显微镜的基本使用方法(专业知识)
3、 作为荧光显微镜使用;A、先关闭荧光通道,再
打开荧光激发器电源,等待15分钟。B、等待期间,
打开显微镜光源,找到需要观察的样品,选用合适
的物镜,调整焦距。C、关闭显微镜光源,打开荧
光通道。D、需要图片,要把镜体上的相应拉杆拉
到绿线位子。按下相应附稻谷件课件上的照相按扭。
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细胞核与细胞质DNA的直接荧光染色
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稻谷课件
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1、 该镜可作为明视场显微镜使用,也可作为荧光 显微镜使用,根据需要,做相应的附件连接,开启 相应的电源。禁止乱调设置,以免影响他人正常使 用。
2、 作为明视场显微镜使用;A、接通电源后,打开 显微镜底座前的电源开关,按光亮需要调节底座右 侧的滑竿。B、根据需要,调节底座光栅和聚光器 光栅及其高度,可获得最佳的图象效果。C、需要 图片,要把镜体上的相应拉杆拉到绿线位子。按下 相应附件上的照相按扭。
• 当眼睛离开物镜进行记录或将显微镜交给合作实验 者观察时,要随手阻断激发光光路。实践结果表明, 熟练、规范和合理的观察操作可以将样品淬灭对观 察和记录造成的影响降低到最小限度。
• 荧光信号的淬灭还与激发光的强度成正比。因此,
在可以观察到荧光信号的情况下,应该尽量降低激
发光的强度。这样做还稻谷有课件利于降低背景。
稻谷课件
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根(显示 叶绿体)
叶片
线粒体GFP转基因拟南芥
稻谷课件
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注意事项
激发光挡片的使用----减少淬灭
稻谷课件
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注意事项
• 荧光的淬灭与激发光的照射时间成正比,因此应尽 量减少观察时间外激发光对样品的照射。激发光挡 片可以部分或完全阻断激发光光路。在正式观察样 品之前,激发光光路应该处于完全阻断状态。否则, 在我们将样品放到载物台上,移动样品台将样品调 整到物镜位置,找到要观察的细胞并进行调焦的过 程中,样品上的荧光可能已经发生了相当程度的淬 灭。为了避免观察前不必要的淬灭,上述一系列操 作需要在透射光源下进行。
荧光显微镜的使用方法
荧光显微镜的使用方法
荧光显微镜是一种能够使样品在荧光条件下显示出不同颜色和亮度的显微镜。
以下是荧光显微镜的使用方法:
1. 准备样品:样品需要被标记上荧光染料或具有天然荧光性质。
2. 确定荧光滤镜:根据染料或荧光物质的发射光波长选择相应的荧光滤镜。
3. 安装荧光滤镜:打开显微镜,拧下目镜,在显微镜镜头接口安装荧光滤镜。
4. 调节荧光显微镜光源:调节荧光显微镜光源,使其亮度适宜。
5. 放置样品:放置样品到荧光显微镜的工作台上,并用试样夹固定住。
6. 调节荧光显微镜成像:轻轻旋转或移动样品,调节显微镜成像,以获得清晰的图像。
7. 拍照或记录:用数字相机或视频设备记录图像,或记录图像和数据。
使用荧光显微镜需要注意的是,荧光显微镜是一个高灵敏度的仪器,需要避开明亮的光源和强烈的震动来保持相对稳定的成像。
此外,荧光染料需要被正确的选
用和标记,以保证成像的质量和可靠性。
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四、作业:
1、描述在荧光显微镜下所观察到的实验现象。 2、绘拟南芥花粉四分体的形态图。
荧光显微镜的配套滤片
激发滤片 型号 UV 允许通过的波长 365W 配用的阻断滤片 410W 应用 硫代黄素荧光 染色和FITC
V
BV
410~420W
404~435W
460W
515W、530W
单胺荧光
吖啶橙
B
G
d. 汞灯的使用寿命一般只有300小时,使用得当可达600小 时,使用寿命与开关的次数成反比,样品应集中观察。
花粉小孢子四分体
水溶性苯胺蓝染色液
拟 南 芥 花 粉 在 柱 头 上 的 萌 发
授粉后10-30分钟的拟南芥柱 头、水溶性苯胺蓝染色液
实验七 荧光显微镜的使用及观察
一、实验目的与要求:
了解荧光显微镜的构造及其维护方法。掌握荧光
显微镜的使用方法和使用中的注意事项。学习胼脂质 荧光的观察方法。
二、实验材料和仪器:
荧光显微镜、镊子、解剖针、盖玻片、载玻片、 脱色苯胺蓝染色液、蒸馏水、拟南芥开花植株。
三、实验内容与方法:
1. 观察荧光显微镜的结构、练习使用荧光显 微镜。 2. 花粉四分体胼胝质壁的观察。 3. 花粉粒在柱头上的萌发和花粉管的生长。
汞灯使用注意事项
a. 汞灯接通电源后需要10-15分钟预热,汞才能充分汽化 并形成汞弧,产生高亮度而稳定的激发光。 b. 在汞灯使用过程中,不要随意开关汞灯的电源。 c. 关掉汞灯电源后,必须等待15-20分钟待汞灯自燃冷却后 才可再次接通电源,违反这一操作规定时,将会造成严 重后果!(轻则烧断保险丝或烧毁汞灯电源中的扼流圈, 重则汞灯爆炸)
490W
520~550W
515W
580W
FITC和金胺
TRITC和佛根 反开灯源,超高压汞灯要预热几分钟才能达 到最亮点。 2.用低倍镜白光观察,调整光源中心,使其位 于整个照明光斑的中央。 3.选择合适的激发光和滤光片。 4.观察。 使用中应注意:末装滤光片不要用眼直接观 察,以免引起眼的损伤;用油镜观察标本时,必 须用无荧光的特殊镜头油;