分子实验室细胞实验室常用配方

分子实验室细胞实验室

常用配方

CKBOOD was revised in the early morning of December 17, 2020.

（一）WB相关试剂及常用缓冲液

●RIPA（100mI）（最后要调pH为）

●10%过硫酸铵溶液AP（分装保存于-20度）

AP粉末 1g

ddH

2

0 10ml

●10％SDS（十二烷基硫酸钠）：

SDS粉末 10g

ddH

2

0定容到 100ml

注意：用磁力搅拌器搅拌不会容易起泡泡

●6X蛋白质sample buffer

Tris-HCl(1M, 30mL

SDS 10g

甘油 30mL

DTT（）

溴酚蓝

dd H

2

0 定容至100mL

●10XPBS缓冲液的配制：

NaCl 80g

KCl 2g

Na

2HPO

4

（十二水合36g）

KH

2PO

4

加800 mLddH2O,根据开始的pH用NaOH或HCL调pH到，调好pH再定容到1升。配好后用高压蒸气灭菌后常温保存最好是在4度

●PBST(1X)

PBS(1X) 500ml

Tween 20 500μl

●50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液配制1L溶液各成分的用量

● Tris粉末 242g

冰醋酸

Na

2EDTA·2H

2

O 37.2g

ddH

2

0定容到 1L

●封闭液

脱脂奶粉 5g

叠氮钠 (现配现用时可不加)

PBS 定容到100mL

●染色液(室温)

●脱色液：(室温)

甲醇 165mL

乙酸 50 mL

H

2

0 785 mL

●:（调pH至,4度保存）

● Buffer: （调pH至,4度保存）

●10Х)TBS: （常温保存）

NaCl

Tris粉末

0 定容至1L

ddH

2

●TBST(1X)

TBS(1X) 500ml

Tween 20 500μl

●Stripping buffer(可反复利用)温老师组配方

10%SDS 10ml

Β-巯基乙醇 350 l

Tris-HCI（）（加到50mL水）

加入ddH2O 至50mL

Stripping buffer(可反复利用)郭老师给配方

甘氨酸 15g

SDS 1g

Tween20 1ml

O 1L

dd ddH

2

作这个buffer洗20min，然后用PBST洗3次，再重新封闭孵抗体。

（二）细胞和细菌培养基、抗生素

●LB培养基(当天灭菌后放4度存放)

●LB平板：（当天灭菌后倒平板，放4度存放）

●SOB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨 20g

酵母提取物 5g

氯化钠 0.5g

1mol/L氯化钾

用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁

●1M IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为））溶液

IPTG粉末

0 定容到10ml

ddH

2

用μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。

●Amp+(50mg/ml)

Amp+粉末 50mg

ddH

0 1ml

2

注意：分装保存于-20度，使用时按1000：1的比例用

●Kana+(50mg/ml)

Kana +粉末 50mg

ddH20 1ml

注意：分装保存于-20度，使用时按1000：1的比例用

●胰酶：抽滤，长期保存可放负20度

粉末 0.25g

EDTA -0.03g

1XPBS 100ml

●高糖DMEM培养基：抽滤保存在4度

粉末全部

碳酸氢钠 3.7g

ddH

0 定容到1L（用盐酸调pH值到：）

2

●G418母液（100mg/ml）用μM滤菌，分装存于-20度

粉末 1g

PBS 10ml

●zeocin母液（100mg/ml）用μM滤菌，分装存于-20度

粉末 1g

ddH2O 10ml

●Blasticidin（100mg/ml）用μM滤菌，分装存于-20度

粉末

PBS 10ml

●超声裂解液(lysis buffer)：2011年做蛋白纯化时用

Na

3PO

4

（164）（50mM）

NaCl 17.55g（300mM）

加800 mL ddH2O溶解，用2M NaOH或者2M HCL 调pH到，再定容到1升。配好后用高压蒸气灭菌后常温保存。

●洗涤液(wash buffer)：2011年做蛋白纯化时用