铁皮石斛试管开花研究

各组开花统计结果
花朵 大小 小 较大 无 花朵 数量 5 20 无 花芽 长势 较慢 较快 无 花期 长短 较长 较短 无
在全部 A 组 20 瓶共 400 苗中， 只有 20 苗开花， 故 花开放率（ % ） = 开放花朵数 / 总花芽数 × 100% = 20 / 400 × 100% = 5% 。 BA 加 植 物 生 长 抑 制 剂 在 B 组 中 单 独 使 用 6（ PP 333 ） ， 所开花朵较大， 数量较多， 长势相对较快。 但花期较短， 至 150 d 时基本凋谢。 茎无明显变化， 无 明显加粗现象， 叶片未出现卷曲现象， 如图 E 和 F。 这 可能是由于植物生长调节剂刺激植物生长 ， 而植物生 长抑制剂抑制其发育而促使铁皮石斛开花 。 在 B 组 20 瓶共 400 苗中， 共有 80 苗开花， 故花开 （ % ） = 80 /400 × 100% = 20% 。 放率 而对照 C 组没有添加任何植物生长调节剂， 故没 有出现开花现象。
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结果与分析
6BA ） 和植物生长抑 应用植物生长调节剂 （ NAA、 制剂（ PP 333 ） 结合来刺激铁皮石斛， 可使铁皮石斛提 120 d 左右。 前开花， 但相对开花时间较长， 2 组石斛种苗均能够开花， 如表 1 所示， 且开花时 间大约为 120 d。但在 A 组中用植物生长调节剂 NAA BA 协同作用， 和 6加上植物生长抑制剂 （ PP 333 ） ， 铁 皮石斛所开花朵较小， 数量较少， 而且长势较慢。但相 对花期较长， 茎明显缩短， 部分未开花植株主茎出现加 粗现象， 多数叶片出现卷须现象如图 A ～ D。
［4 ］ 而且在铁皮石斛成花诱导率上获得显著提高 ， 这与 ［5 ］ 王再花等的研究结果一致 。 Duan J X 等在离体条
件下诱导了 Doriella Tiny （ 五唇兰属 Doritis pulcherrima × Kingiella philippinensia ） 花芽的形成［6］。 随后， 陆续 有兰科植物试管开花的研究报道。 目前为止， 已成功 诱导试管开花的兰科植物有： 建兰、 寒兰、 春兰 × 大花
Study of Tube Flowering of Dendrobium candidum
ZHAO Yinhe （ Key Laboratory of Crop Germplasm Innovation and Sustainable Utilization y， Yunnan Agricultural University， Kunming Yunnan 650201 ， China） Abstract： In this study， the plant growth regulators were used to induce flowering in Dendrobium candidum and the results showed that it can induced flowering without dealing with low temperature and other methods． The plant growth inhibitors PP 333 can promoted floral meristem inception and bloom． However， flowering rate was only 20． 0% ． Key words： Dendrobium candidum； plant growth regulators； floral induction； flowering 进一步建立试管开花授粉受精体系， 可以缩短育种周 期； 第二， 通过研究铁皮石斛试管开花， 建立完善的试 管开花技术体系， 可以用于研究其的开花机理； 第三， 研究铁皮石斛试管开花， 可以用于生产铁皮石斛试管 花卉， 具有广阔的市场前景。 最早进行兰科植物试管开花研究的是法国的 Julien Costantin， 他发现兰花在离体培养条件下缺少菌
第 32 卷
第 2 期 2013 年 2 月
种
子
Baidu Nhomakorabea
（ Seed）
Vol． 32
No． 2
Feb．
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图
铁皮石斛生长发育与开花图示
6BA 对开花起 可促进花芽的形成。但也有研究指出， BA 浓度为 1． 0 mg / L 时， 抑制作用。当 6花芽的诱导 6BA 必须在 率达最高， 达 20% 。 因此， 在本试验中， 高浓度下才可以促进铁皮石斛顶端花芽发育成熟并开 BA 也导致培养基出现不同程度的 花， 但是高浓度 6褐化， 从而影响植株的各种代谢活动， 间接影响试管苗 开花。 3． 2 其他激素的影响 除上述激素外， 其他激素对兰科植物试管开花也
［2 ］ 根可以促进开花 。 利用激素调控兰花试管开花方 Goh C J 在研究单茎型杂种 面， 一直是研究的突破口，
铁皮石斛 （ Dendrobium officinale Kimura et Migo ） ， 属于兰科（ Orchidaceae） 石斛属（ Dendrobium ） 。 多年生 附生草本植物。生于海拔 1 600 m 左右的山地半阴湿 的岩石上， 喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境， 不耐 一般仅能耐 － 5 ℃ 的低温。 石斛可分为黄草、 金 寒， 钗、 马鞭等数十种， 铁皮石斛为石斛之极品， 它因表皮 呈铁绿色而得名。铁皮石斛具有独特的药用价值， 以 ， 《中国 其茎入药， 中药名： 石斛， 属补益药中的补阴药 ： 益胃生津， 药典》 滋阴清热。 铁皮石斛等少数品种之 嫩茎， 扭成螺旋状或弹簧状， 晒干， 商品称为耳环石斛， 又名枫斗。 铁皮石斛原附生在高山岩石壁或森林树干上 ， 对 生境条件要求苛刻， 故较难开花和结果。 在栽培条件 下， 从种子萌发到开花通常需要 3 ～ 4 年 。研究铁皮 石斛试管开花， 对探讨其开花规律， 阐明开花调控机理 具有重要的意义。第一， 通过研究铁皮石斛试管开花，
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讨
论
植物生长调节剂是一类由人工合成的具有类似植 物激素生理活性的化合物。植物花芽的分化与内源激 素水平关系密切， 因此可通过施用外源激素解除休眠 、 促进花芽分化实现提早开花。 3． 1 细胞分裂素的影响 细胞分裂素具有诱导器官分化的作用 。在研究铁 通过调节细胞分裂素比例， 诱导其 皮石斛试管开花时， 6BA 对花芽的形成有 花芽形成和开放。有研究指出， BA， 重要作用， 在本试验培养基中通过添加适量的 6· 17·
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研究报告
赵银河： 铁皮石斛试管开花研究
Doriella Tiny、 Psyg蕙兰杂种、 大根兰、 蝴蝶兰、 文心兰、 morchis Pusilla、 Epipogium roseum、Cymbidiumniveomarginatum Mak、 Bulbophyllum auricomumLindl、 Doritaenopsis and Phalaenopsig 以及石斛属中的部分品种（ 如春石 斛、 铁皮石斛、 细茎石斛、 金钗石斛、 霍山石斛、 叠鞘石 Dendrobium Madame ThongIn、 Dendrobi报春石斛、 斛、 um Sonia 17 、 Dendrobium Chao Praya Smile、 Friederick ＇s Dendrobium 等） 。 Techato S 等在研究石斛兰（ Friederick’ s Dendrobium） 的试管开花时发现， PP 333 与花芽的诱导有关， 而
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铁皮石斛试管开花研究
赵银河 （ 云南农业大学作物种质创新与可持续利用重点实验室 ， 昆明 650201 ）
摘要： 植物生长调节剂对铁皮石斛的花期调控试验结果表明， 不经低温 诱导或者 其 他 方 法处理， 应用 植物 生长 调节剂 能 促进铁皮石斛开花。植物生长抑制剂 PP 333 能够促进花芽的起始和开花， 但最高开花率仅为 20． 0% 。本研究 采 用 2 种 6BA) 结合植物生长抑制剂( PP 333 ) 来剌激铁皮石斛提前开花 ， 植物生长调节剂( NAA、 以 期 为 铁皮石斛花期调控提供 参考。 关键词： 植物生抑制节剂； 铁皮石斛； 花芽诱导； 开花 S 682． 31 文献标志码： A 文章编号： 1001 － 4705 （ 2013 ） 02001604 中图分类号：
收稿日期： 2012 － 10 － 21 基金项目： 本 项 目 得 到 国 家 自 然 科 学 基 金 （ 编 号： NSFC 30860130 和 NSFC 31060166 ） ； 云南省面上项目（ 编号： 2007 C 209 M） 和云 南省中青年学术技术带头人后备人才（ 编号： 2012 HB 018 ） 资助。 作者简介： 赵银河（ 1967 － ） ， 女， 副教授， 主要从事发育遗传学研究； Email： yhzhao808@ 163． com。
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1． 1
材料与方法
试验地点
本试验于云南农业大学农学与生物技术学院组培 实验室进行。 1 ． 2 试验材料 供试材料为广南铁皮石斛组培种苗 。 1 ． 3 试验方法 pH = 5． 8 。 以 MS 培养基为基本培养基， 活性炭， BA 设 2 个 浓 度 0． 2 、 1． 0 mg / L， 植物生长 调 节 剂 6NAA 为 0． 01 mg / L； PP 333 为 0． 5 mg / L。 。 B、 C （ 对照） 。 试验分为 3 组 A、 A： MS + 6BA 0． 2 mg / L + NAA 0． 01 mg / L + PP 333 为 0． 5 mg / L； B ： MS + 6BA 1． 0 mg / L + PP 333 为 0． 5 mg / L； C ： MS。 A， B 2 组每组 20 瓶， C 组 8 瓶， 共 48 瓶。 每瓶接 种 20 株铁皮石斛无根试管苗。
表1
分组 A B ck 开花时间 （ d） 120 120 120
0． 5 mg / L ABA 的培养基上培养 15 d， 再转移到含有 BA 的 MS 培 养 基 上， 花 芽 诱 导 率 明 显 提 高， 可达 82． 8% ， 而且每株植株花的数目都有增加 。 铁皮石斛开花需要一个低温诱导过程， 即在夜温 9 ～ 13 ℃ 、 13 ～ 25 ℃ 、 温差 10 ～ 15 ℃ 下诱导 2 ～ 4 周可 促其花芽形成。目前， 铁皮石斛花期主要通过制冷或 ， 高山低温进行调控 因而需要购买相应的制冷设备或 建立高山基地， 成本投入较大， 此外， 高山催花技术完 会带来一系列不稳定的因素， 如出 全依赖于气候条件， 现黄叶、 落叶、 花蕾败育、 开花节数少等问题。 只用一 BA） 处理铁皮石斛， 容易造成 种植物生长调节剂（ 如 6花芽败育、 畸形发育等不正常现象。 本研 究 试 图 采 用 2 种 植 物 生 长 调 节 剂 （ NAA、 6BA） 结合植物生长抑制剂 （ PP 333 ） 来刺激铁皮石斛 提前开花， 以期为铁皮石斛花期调控提供参考 。
［7 ］ ［1 ］ 且可使其开出的花均为正常花 。 王光远等 在研 究铁皮石斜的试管开花中发现， 如果先将原球茎接于
培养条件为： 温度 （ 26 ± 1 ） ℃ ， 光照强度 1 500 ～ 1 800 lx， 光照时间 12 h / d。 在接种培养 120 d 后开始统计开花情况。 统计公式为： 花开放率 （ % ） = 开放花朵数 / 总花 120 d 以后， 芽数 × 100% ， 取出进行观察统计。
［1 ］
兰花整体植株花芽诱导和发育的调节作用时 ， 发现了 BA 还 而且通过添加 6石斛兰整体植株的花芽发端， 可以促使花芽发育成熟并开花
［3 ］
。 冯莹等在研究适
6BA 可促进花芽 宜春石斛开花的培养基中同样认为 ， 的诱导， 但是不能正常开放。 随后李璐等进一步对春 N、 P、 K 比 例、 NH + N： 石斛 试 管 开 花 研 究 认 为， 3－ NO N、 TDZ、 PP 333 、 椰汁对春石斛开花有显著影响；