1. 李金明-个体化医学检测实验室规范化管理(简)

全国法华林用药基因多态性室间质量评价 调查：2014年5月 正式室间质评：2015年
全国Her2扩增检测室间质量评价 调查：2014年7月-8月 全国BRAF突变室间质量评价 正式质评项目2015年


KRAS testi ng perform ance
Wide-type samples KRAS-04 and KRAS-10 were most often correctly identified (95.2% and 98.4%, respectively) (Table 1). More than 90% of laboratories correctly
心血管系统疾病 胃肠道疾病 生殖系统疾病 抗真菌 镇痛
FDA推荐的常见疾病的检测基因与其相对应的治疗药物（二）
检测基因
IL28B CD30 DPD HLA-B*1502 HLA-B*5701
相关疾病
抗病毒 霍奇金淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤 肿瘤 神经系统疾病 超敏反应（HIV病人） 乳腺癌 骨肠间质瘤 慢性粒细胞白血病 泌尿生殖系统疾病 肺癌、淋巴瘤 肿瘤 胃肠道疾病 肿瘤 慢性支气管阻塞病
再看看。另外，再请教两个问
题：（1）上述措施要在三个区 都进行吗？（2）楼房第三层污 染，在第一层操作怎么也会受 到影响？ 谢谢您拨冗指教！ 刘X
2013.7.18
20130508
质量状况
室间质量评价

全国EGFR突变室间质量评价 调查：2012年7月-8月 正式室间质评：2014年 全国KRAS突变室间质量评价 调查：2013年7月-8月 正式室间质评：2014年
2008年，美国总统科学与技术顾问委员会（the President’s Council of Advisors on Science and Technology, PCAST）提出了一个全面的定义
个体化医学的支柱 全 基 因 组 分 析
蛋 白 质 组 学
代 谢 组 学
BMC Med Inform Decis Mak, 2009, 9: 17.
诊断医学
70%以上信息 来自实验室 分子诊断对 检验医学的 划时代意义！
个体化医疗 （personalized medicine) 精准医疗 （precision medicine） 移动医疗 数字医疗
预测
诊断
监测
预后
目前国内的临床分子诊断现状

绝大部分用于病原体核酸检测


较少部分用于遗传病的产前诊断
精神类疾病 肿瘤
丙戊酸
妥昔单抗
目前个体化医学检测的常用方法及特点
方法

实时荧光PCR方法(扩增阻碍突变系统法（Amplification
Refractory Mutation System，ARMS）、PCR-高分辨溶点曲线分析（ HRM）)

PCR-杂交法（膜上、芯片[基因芯片] 、乳胶颗粒
[Luminex]）
刘大夫：PCR实验室一旦出
现严重污染，消除将会比较 困难，通常可采用下述方法： （1）开窗通风;（2）采用次 氯酸钠溶液擦地面及实验台 面，甚至墙面;（3）增长紫外 照射时间；（4）用75%乙醇 空中喷雾，然后用于次氯酸 钠溶液擦地面及实验台面。 上述措施每天都要进行，直 至污染消除。不知你是否按 上述方法进行？如没有，你 可以这样试，并请将效果告 诉我。 此外，在实验室出现严重污 染后，如还要进行工作，则 可临时更换一个厂家试剂， 应就可以。 20130508
精神类疾病
卓、阿米替林、哌咪清、西酞普兰、氯丙咪嗪、地昔帕明、利培酮、氯氮平、普罗替林、伊潘立酮、丙 咪嗪、莫达非尼、多虑平、氟西汀、奥氮平、奈法唑酮、氟伏沙明、去甲替林
CYP2D6
镇痛 神经系统疾病 心血管系统疾病 抗真菌 生殖泌尿系统疾病
可待因、曲马多、对乙酰氨基酚 右美沙芬、奎尼丁、加兰他敏、四苯喹嗪 普罗帕酮、普萘洛尔 特比萘芬 托特罗定 阿巴卡韦 三氧化二砷 氯喹 氨苯砜 拉布立酶 顺铂、巯基嘌呤、硫鸟嘌呤 硫唑嘌呤
管理专家咨询会》（北京医院第一 会议室） 1998年4月16日卫生部下发《关于 暂停临床基因扩增（PCR）检验的 通知》（卫医发[1998]第9号）
国内回顾

1999年4月29-30日：《基因扩增技术临床应用 专家研讨会》，针对临床开展PCR检验的问题， 达成8点意见：（1）PCR技术本身没有问题， 技术先进。（2）卫生部暂停临床应用有助于 规范管理，应在严格管理的基础上适度开放。 （3）限定临床开展PCR检验项目上。（4）加 强对PCR实验室管理。（5）人员上岗培训。 （6）应有室内质控和参加部中心室间质评。 （7）SFDA尽管批准试剂文号。（8）成立专家 咨询委员会。
CYP2D6 CYP3A4/5
CYP2D6
CYP3A4/5
个体化诊疗：靶向治疗

对“信号传导通路”（Signal Transduction Pathway）的 研究，出现了“靶向治疗”的概念和药物，而药物疗效又 与通路中相应基因突变与否有关。
FDA推荐的常见疾病的检测基因与其相对应的治疗药物（一）
分子诊断的概念

采用分子生物学方法（基因扩增、测序、杂交
、蛋白质组分析、代谢组学分析等）检测患者
体内特定遗传物质的结构或表达水平的变化而 做出的诊断。分子诊断的靶标包括DNA、 RNA、蛋白质和小分子代谢物。
分子诊断是整个 检验医学领域内 发展最快、最有 活力的，在疾病 的诊断和治疗中 往往有决定性作 用！
结果报告解 释及临床应 用（分析后）
质量 保证
室间质评 （分析中）
室内质控 （分析中）
涉及实验 室人员和 临床医生
质量控制
产物分析区
扩增区
标wk.baidu.com制备区
试剂准备区
“各区独立
注意风向 因地制宜 方便工作”
空气流向
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
空气流向
缓冲间
专用走廊
工作流向
“无基因”或“无核酸” 概念的重要性！！！
个体化用药的分子诊断正在兴起
个体化诊疗：基因多态性的意义

对人类基因单核苷酸多态性（SNP）的研究揭示了不同个体对同一药 物的可能有不同的药物疗效和用量。

如果编码药物代谢酶（如细胞色素P450）的基因（如CYP2D6等）发 生非同义突变，造成酶活性的差异，则机体对相应药物的代谢能力就 会出现不同，进而决定了特定个体的能否使用特定药物及其用量。
个体化医学检测

主要是指利用个体基因型或基因表达谱信息在
分子水平上做出临床诊断，从而增加诊断的准
确性并根据患者的遗传特征选择合适的治疗方 法。
Spang R. Biosilico, 2003, 1, 64-68.
个体化医学检测

个体化医学检测，是指通过检测基因及其结构 改变、表达和代谢变化等，对疾病进行预测、 诊断、治疗决策和监测的临床检测技术。
1999年8月17-24日：《第一期全国临床基因扩 增实验室技术人员培训班》在北京卫生部临床 检验中心举办
2002年1月14 日卫生部下 发《临床基 因扩增检验 实验室管理 暂行办法》 （卫医发 [2002]10号）
国内回顾
《医疗机构临床基因扩增检验实验
室管理办法》 （卫办医政发 〔2010〕194号） 《医疗机构临床基因扩增检验实验 室工作导则》 （卫办医政发 〔2010〕194号）
检测基因
EGFR
BRAF BCR-ABL KRAS
相关疾病
肺癌、恶性胶质瘤 黑色素瘤、结直肠癌 慢性粒细胞性白血病 肺癌、结直肠癌
相关药物
西妥昔单抗、吉非替尼、埃罗替尼、帕尼单抗、拉帕替尼
韦罗非尼 伊马替尼 西妥昔单抗、帕尼单抗 阿立哌唑、托莫西汀、卡马西平、硫醚嗪、三甲丙咪嗪、苯妥英、奋乃静、帕罗西汀、万拉法辛、氯氮
相关药物
波西普韦、聚乙二醇化干扰素α-2b、特拉匹韦 Brentuximab vedotin(SGN-35) 卡培他滨 卡马西平、苯妥英 阿巴卡韦 依维莫司、拉帕替尼、帕尼珠单抗、曲妥珠单抗 伊马替尼、舒尼替尼 白消安、达沙替尼、伊马替尼、尼罗替尼 克罗米芬 可唑替尼 地尼白介素 右兰索拉唑 伊马替尼 茚达特罗 伊立替康 异山梨醇、肼屈嗪 利福平、异烟肼、吡嗪酰胺 秦铭泽 来那度胺 马拉韦罗 霉酚酸 普伐他汀 苯乙酸钠、苯甲酸钠、苯丁酸钠
个体化医学检测实验室 规范化管理
李金明 国家卫生计生委临床检验中心
“个体化医学”全面定义

个体化医学是根据每个病人的个体特征制定相应的治疗策 略的医学，但并不意味着对每个病人都准备一套药物或设 立一套医疗设备，而是根据病人对特定疾病的易感性以及 对特定治疗的应答程度进行分类治疗，使得预防或治疗性 的干预措施能集中于确定会受益的人群，从而为那些不会 受益的人群节省医疗开支并减少药物的副反应，该定义强 调了人是个体化医学的立足之本。
HLA-B*5701 PML/RARα
抗病毒 肿瘤 抗感染
G6PD
皮肤病及牙科疾病 肿瘤 肿瘤
TPMT
风湿病
肌肉骨骼疾病 精神类疾病 神经系统疾病
卡利普多
西酞普兰、安定 氯巴占 克拉匹多、普拉格雷、替格瑞洛 右兰索拉唑、艾美拉唑、奥美拉唑、泮托拉唑、雷贝拉唑 曲螺酮、乙炔雌二醇 伏立康唑 塞来昔布
CYP2C19
尊敬的李教授：
您好！ 来信请教一个问题，具体情况 是这样的：我这儿使用的PCR仪是 ABI 7300，用的是达安公司的HBVDNA试剂，去年12月中旬的一次试 验中发生了爆管事件，事件发生后， 已经按照SOP规程进行了消毒处理， 到现在已经有半年了，可还是不能 消除污染。PCR实验室在三楼，现 在即使加样操作放在同一幢楼房的 一楼进行，其余如混匀、温育、离 心等还放在原来的实验室，扩增也 在原来的实验室，阴性对照孔所加 对照都未如标本一样处理（因此暴 露在空气中的时间很短），可是阴 性对照孔仍有扩增，大约在21个循 环的时候开始，阴性对照显示的Ct 约为26左右。请问这是什么原因， 怎么处理才能消除污染。盼指点！ 刘X

PCR-Sanger测序 PCR-焦磷酸测序 新一代高通量测序



PCR-SSCP、RFLP、dHPLC等
荧光原位杂交 免疫组化
质量管理的发展


经验管理 质量检验管理 统计质量管理 全面质量管理（ISO9000、17025、15189） 标准化+全面质量管理
实验室质量管理体系的建立
20130508
尊敬的李教授： 您好！您所说的措施我都 实行过，只不过除通风外，其 余措施仅实施过很少几次，我 将按您所说措施处理一段时间
李教授：您好！我是上次 向您请教PCR实验室污染 如何清除的小刘，我们按 照您的指点进行处理，现 在实验室污染已经完全清 除，非常感谢！以后我们 会更加注意操作的规范及 相关知识的学习！
--“个体化医学检测实验室管理办法”（定稿）
个体化医学检测结果的意义

通俗地讲，就是决定特定的治疗药物或方法是 否能用或用多用少
临床分子诊断技术发展历程：几个里程碑


1953年:DNA双股螺旋的发现 1963年:放射免疫测定技术 1972~1977年:重组DNA技术、核酸测序方法 1983年:PCR测定技术 1991-1993年:实时荧光PCR技术和芯片技术 2003年：人类基因组计划基本完成。后基因组的 功能基因组研究，药物基因组学 2007年-- 新一代高通量测序技术

质量手册
质量体系程序文件 标准操作程序 (相关记录表格)


质量管理的内涵
写你所做的 做你所写的 记录你已做的 分析你已做的
看得见的
看不见的
国内回顾
1990年：PCR技术在国内开始用于
临床检测
1990年代中期：假阳性？（假阴
性？）
国内回顾
1996年：卫生部科研课题 1998年3月20日：<临床PCR实验室
HER2/NEU
C-Kit Ph染色体 Rh基因型 ALK CD25 CYP1A2 PDGFR UGT1A1
结肠癌
心血管系统疾病 抗感染 肺部疾病 脊髓增生异常综合征 AIDS 移植 代谢及内分泌系统疾病 胃肠道疾病
NAT1 and NAT2 CFTR(G551D) 5号染色体长臂 CCR5 HGPRT APOE2 UCD(NAGS; CPS;ASS;OTC;ASL;ARG) CD20
实验室分区和检测质量保证体系


分析前：标本采集、运送和保存及质检 分析中：实验室设计、仪器设备正确使用与 维护和校准、可操作性检测SOP制订、室内 质控、室间质评或实验室间比对、人员培训 分析后：结果的分析、报告与解释
涉及临床医生 标本采集环节 和实验室
检验申请单， 标本采集、 运送和保存 （分析前）