手消毒

2.1.2.5 消毒剂对手消毒模拟现场试验

2.1.2.5.1 目的

用于测定消毒剂对人工污染于手表面细菌的杀灭作用，并作为确定该消毒剂对手消毒实用剂量的参考。

2.1.2.5.2 试验器材

（1）大肠杆菌8099或NCTC 10538，对尚需用于杀灭其他特定细菌目的者，可增用该特定细菌进行试验。菌悬液制备按2.1.1.2规定的方法和要求进行。

（2）胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）：见附录A。

（3）胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）：见附录A。

（4）中和剂（以TSB为溶剂，经鉴定合格）。

（5）液体肥皂200g/L。

（6）参考样品：正丙醇60%（V/V）与异丙醇60%（V/V）。

（7）标准硬水：见附录A。

（8）磷酸盐缓冲液(PBS，0.03mol/L，pH7.2)。

（9）无菌纱布巾。

（10）吸管、试管、平皿若干。

（11）振荡混合器。

2.1.2.5.3 试验步骤

(1)菌悬液的制备取2支在TSB中培养18h～24h的大肠杆菌培养物分别接种于1LTSB 大三角烧瓶中，在36℃±1℃培养箱中培养18h～24h，用TSB将其稀释为2×108cfu/ml～

2×109cfu/ml菌悬液。

（2）将12名～15名志愿者随机分为两组，第一组使用参考样品，第二组使用试验样品

（3）使用液体肥皂洗手1min 去除手表面污染的自然菌，然后用无菌纱布将手擦干。

（4）将2×108cfu/ml-2×109cfu/ml大肠杆菌的菌悬液放入一无菌容器中，

（5）将手掌中间到指尖部位浸入菌悬液中，手指分开，停留５s，将手离开菌悬液，在空气中干燥３min。

（6）干燥后立即将拇指与其他手指尖在含10ml TSB的平皿中搓洗１min，取适当稀释度接种平皿。计数菌落数，作为试验前菌数。

（7）不再重复污染手，立即进行消毒处理。

（8）试验样品组：按说明书介绍的用量、作用时间和使用频率以标准的洗手方法（如图2-1）搓擦30s～60s（卫生手消毒）或最长5min（外科手消毒）。以流动的自来水冲洗5s，抖掉手上残留的水。立刻将拇指与其它手指尖在含10ml中和剂的平皿中搓洗1min，做适当稀释后，分别取样液1.0ml以倾注法接种两个无菌平皿，放37℃恒温箱培养48h，计数菌落

(9)参考样品组：对于卫生手消毒，取60%异丙醇3 ml到入手心中，按标准的洗手方法用力搓擦30s。以确保手的所有部位均匀接触异丙醇。重复使用异丙醇按上述方法搓擦使总的搓擦时间为60s。对于外科手消毒，使用60%正丙醇3ml，按标准的洗手方法用力搓擦，当接近干燥时，再加3ml正丙醇搓擦。以保持作用3min。用流动的自来水冲洗5s，抖掉手上残留的水。其余步骤与试验样品组相同。

1.掌心对掌心搓擦

2.手指交错掌心对手背搓擦

3.手指交错掌心对掌心搓擦

4.两手互握互搓指背

5.拇指在长中转动搓擦

6.指尖在掌心中摩擦

图2-1 标准的洗手方法

(10) 在试验当日，第一组与第二组样品对换，重复上述试验。

(11) 分别计算参考样品组和试验样品组的菌数减少的对数值。

2.1.2.5.4 评价规定

(1) 试验样品的杀灭对数值大于或等于参考样品的杀灭对数值为合格。

(2) 若试验样品的杀灭对数值小于参考样品的杀灭对数值，应进行统计学处理，以确定差异是否显著。

(3) 若试验样品的杀灭对数值不显著小于参考样品的杀灭对数值，可判为消毒合格。若试验样品的杀灭对数值显著小于参考样品的杀灭对数值，表明该试验样品不符合本规范的要求。

2.1.2.5.5 注意事项

（1）试验必须在同一受试者、同一天、相同环境、同样条件下进行，使试验样品和参考样品的结果具有可比性。

（2）所有受试者应年满18岁，身体健康。手部皮肤应无破损、无皮肤病，手指甲短而

（3）试验用菌悬液应在第1只手浸入后3h内使用。在1次试验中，无论使用试验样品还是参照样品，所有受试者手的染菌都应使用同一批菌悬液。

（4）对受试者，在每次试验结束时，应及时对双手进行彻底的消毒处理。

2.1.2.6 消毒剂对手消毒现场试验

2.1.2.6.1目的

测定消毒剂对手表面自然菌消毒所需使用的剂量，以验证该消毒剂对手消毒实用剂量。

2.1.2.6.2试验器材

（1）中和剂（中和剂经鉴定合格)

（2）无菌棉拭

（3）稀释液0.1%吐温80的0.03mol/L磷酸盐缓冲液pH7.2

（4）磷酸盐缓冲液(PBS，0.03mol/L，pH7.2)。

（5）标准硬水：见附录A。

（6）无菌纱布巾

（7）胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）：见附录A。

（8）胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）：见附录A。

（9）振荡混合器

（10）吸管、试管、平皿若干。

2.1.2.6.3试验步骤

(1) 在使用现场，随机选定受试者。试验不少于30人次。

(2) 消毒前，在受试者双手相互充分搓擦后，让受试者左手指并拢，用无菌棉拭在含10ml 稀释液试管中浸湿，于管壁上挤干后，在五指屈面指尖至指根，往返涂擦2遍，每涂擦一遍，将棉拭转动一次。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入中和剂试管内，作为阳性对照组样本。

(3)根据消毒剂使用说明书的方法对右手进行消毒，对手的卫生消毒一般设定作用时间为1min，对外科洗手后的泡手一般设定作用时间为3min。消毒后用中和剂代替稀释液，与阳性对照组同样的方法对受试者右手上残留的自然菌采样一次，作为试验组样本。

(4)分别将未用过的同批中和剂、稀释液各1.0ml、棉拭1份～2份作为阴性对照组样本。

(5)分别取试验组、阳性对照组和阴性对照组样本各1ml，以琼脂倾注法接种平皿，每个样本接种2个平皿，放37℃恒温箱中培养48h，观察最终结果。

(6) 计算杀灭对数值

2.1.2.6.4 评价规定

阳性对照组应有较多细菌生长，阴性对照组应无菌生长，以对30人次手上自然菌的平均杀灭对数值≥1.00可判为消毒合格。