微生物常用生化反应及意义

手工法ＩＮＤ试验原理 手工法ＩＮＤ试验原理 ＩＮＤ
● 原理： ● 有些细菌具有色氨酸酶，能分解培养基中的色氨酸，产生吲哚， ● 吲哚与试剂柯凡克（ＫＯＶＡＣ）对二甲氨基苯甲醛作用，形成 ● 玫瑰吲哚而呈红色
手工ＩＮＤ试验结果判断 手工ＩＮＤ试验结果判断 ＩＮＤ
Microscan Panel 上原理和结果判断 ● 原理： ● 色氨酸代谢形成吲哚，加入ＫＯＶＡＣ’Ｓ试剂，阳性反应会呈红 ● 色． ● 结果判断： ● 阳性为粉红至红色，阴性为澄清或橙色．
● ● ● ● 某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，并进一步将丙酮酸脱羧成为 乙酰甲基甲醇，后者在碱性环境中被空气中的氧氧化成为二乙酰， 进而与培养基中的精氨酸等所含的胍基结合，形成红色的化合物， 即Ｖ－Ｐ试验阳性
手工Ｖ－Ｐ试验结果判别 手工Ｖ－Ｐ试验结果判别 Ｖ－Ｐ
Microscan Panel 上原理和结果判断 ● 原理： ● 细菌使丙酮酸钠反应产生乙偶姻，在加入40%KOH,5%α萘酚后产生红色 ● 结果判断： ● 红色为阳性，澄清为阴性． ● 经过１８小时培养，某些非发酵菌可能产生粉红色，应判为阴性
微生物常用生化反应及 意义
德灵诊断
周玮刚

革兰氏染色法（Ｇ 革兰氏染色法（Ｇram stain） （Ｇ ）
● 染色步骤： ● １．初染：第一染色剂（结晶紫）染色１分钟，水洗 ● ２．固定：第二染色剂（碘液）染色１分钟，水洗 ● ３．脱色：第三液脱色剂（９５％乙醇）脱色到无紫色脱落为止， 水洗 ● ４．复染：第四液复染液（石碳酸复红）染色３０Ｓ，水洗．干 后镜检
手工法NIT试验原理 试验原理 手工法
● 原理：
● 硝酸盐培养基中的硝酸盐可被某些细菌还原为亚硝酸盐，后者与 ● 乙酸作用生成亚硝酸．亚硝酸与对氨基苯磺酸作用，形成偶氮苯 ● 磺酸，再与α萘氨结合成红色的Ｎ－α苯氨偶氮苯磺酸．
手工ＮＩＴ试验结果判别 手工ＮＩＴ试验结果判别 ＮＩＴ
Microscan Panel 上原理和结果判断 ● 原理： ● 细菌把硝酸盐转变成亚硝酸盐，当加入甲基苯磺酸，然后加入α ● 萘胺时就会产生红色． ● 结果判断： ● 红色为阳性，澄清为阴性．
触酶试验图谱
溶血现象
１．α 溶血：菌落周围出现狭窄的草绿色溶血环．
溶血现象
● ２．β 溶血：菌落周围出现明显宽广的完全透明环
溶血现象
● ３．γ 溶血：菌落周围无溶血环
葡萄糖Ｏ／Ｆ反应原理 葡萄糖Ｏ／Ｆ反应原理 Ｏ／Ｆ
● 原理：
● 又称氧化／发酵（Ｏ／Ｆ）试验，观察细菌对葡萄糖分解 ● 过程中是利用分子氧（氧化型），还是无氧降解（发酵型），或 ● 不分解葡萄糖（产碱型）．
氧化酶试验图谱
触酶试验
● 原理： ● 具有触酶（过氧化氢酶）的细菌，能催化过氧化氢，放出新生态氧，继 而形成分子氧，出现气泡． ● 方法： ● 取１－３ml ３％过氧化氢溶液滴加入盐水菌悬液中． ● 结果判断： ● 出现气泡者为阳性 ● 注意事项： ● 细菌要求新鲜．因红细胞内含有触酶，可能出现假阳性，故不宜用血琼 脂平板上的菌落做触酶试验．需用已知阳性菌和阴性菌作对照．
燥
染色后镜检结果
● 将细菌分为革兰氏阴性细菌和革兰氏阳 ● 性细菌两大类
革兰氏阴性细菌镜下图谱
革兰氏阳性细菌图谱
氧化酶试验
● 原理： ● 氧化酶是细胞色素呼吸酶系统的酶．具有氧化酶的细菌首先使细胞色素 Ｃ氧化，再由氧化型细胞色素Ｃ使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合 物． ● 方法 ● 取洁净的滤纸一小块，涂抹菌苔少许，加一滴１０g/L对苯二胺溶液于 菌落上，观察颜色变化． ● 结果判断 ● 立即呈粉红色并迅速转为紫红色者为阳性 ● 注意事项：试剂需每星期新鲜配置（试剂在空气中易发生氧 化）．避 免接触含铁物质．不宜采用含葡萄糖的培养基上的菌落（葡萄糖发酵可 抑制氧化酶活性）．
Microscan 上做这些试验的目的
● 什么方法是微生物鉴定的金标准？ ● 为什么要做这些生化反应实验？ ● 不做会怎样？
ＴＨＡＮＫＳ ＨＡＰＰＹ Ｗ ＹＥＡＲ
ＡＮＤ ＮＥ
葡萄糖Ｏ／Ｆ反应结果判断 葡萄糖Ｏ／Ｆ反应结果判断 Ｏ／Ｆ
● 手工方法：
Microscan Panel 上结果判断
● 为ＯＦ／Ｇ孔 ● 判断方法：和ＯＦ／Ｂ孔相比较 ● 若ＯＦ／Ｂ是绿色 ● 转为黄色即为阳性 ● 若ＯＦ／Ｂ是兰／兰绿 ● 转为黄至黄绿为阳性
手工法Ｖ－Ｐ试验原理 手工法Ｖ－Ｐ试验原理 Ｖ－Ｐ ● 原理：