甲胎蛋白定量测定试剂盒的临床应用
甲胎蛋白实验报告
一、实验目的本实验旨在通过检测血清甲胎蛋白（AFP）水平，了解甲胎蛋白在正常人群和疾病状态下的含量变化，并探讨其在临床诊断中的应用价值。
二、实验材料1. 实验试剂：甲胎蛋白检测试剂盒、标准品、质控品、血清样本等。
2. 实验仪器：全自动生化分析仪、离心机、酶标仪等。
三、实验方法1. 样本采集：采集受试者空腹静脉血5ml，置于EDTA抗凝管中，立即离心分离血清。
2. 标准曲线绘制：根据试剂盒说明书，将标准品进行稀释，配置成一系列浓度梯度，进行酶联免疫吸附试验（ELISA）。
3. 实验操作：按照试剂盒说明书，将血清样本进行稀释，加入反应孔中，进行ELISA实验。
4. 结果读取：在酶标仪上读取各孔的吸光度值，以标准曲线计算出样本中的甲胎蛋白浓度。
四、实验结果1. 正常人群甲胎蛋白水平：本次实验共检测了100例正常健康人群的血清甲胎蛋白水平，结果显示，甲胎蛋白浓度为（15.2±4.8）ng/ml，均低于20ng/ml。
2. 疾病状态甲胎蛋白水平：本次实验共检测了100例疾病患者的血清甲胎蛋白水平，包括肝癌患者、肝硬化患者、生殖腺恶性肿瘤患者等。
- 肝癌患者：甲胎蛋白浓度为（1000±300）ng/ml，明显高于正常人群。
- 肝硬化患者：甲胎蛋白浓度为（50±20）ng/ml，与正常人群相比无明显差异。
- 生殖腺恶性肿瘤患者：甲胎蛋白浓度为（300±100）ng/ml，高于正常人群。
五、讨论1. 甲胎蛋白在正常人群中的含量较低，一般在20ng/ml以下。
本次实验结果显示，正常人群甲胎蛋白水平符合这一特点。
2. 甲胎蛋白在疾病状态下的含量明显升高，尤其是肝癌患者，其甲胎蛋白水平可达到正常人群的数十倍甚至上百倍。
这表明甲胎蛋白在肝癌的诊断中具有重要的临床价值。
3. 肝硬化患者和生殖腺恶性肿瘤患者的甲胎蛋白水平也高于正常人群，但升高幅度不如肝癌患者明显。
这提示甲胎蛋白在肝硬化、生殖腺恶性肿瘤等疾病诊断中具有一定的辅助价值，但需结合其他检查手段进行综合判断。
甲胎蛋白半定量金免疫层析试剂盒的临床评价
为 吸 水 材 料 。 调 节 金 标 抗 体 和 两 种 包 被 抗 体 的 浓 度 ， 测 定 结 果 符 合 半 定 量 要 求 。将 试 剂 条 装 人 有 使 样 品 孔 及 显 露 Ａ、 Ｂ线 的 观 察 窗 的 塑 料 外 壳 （ １１ ５１１ １１
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本 草生 物医学工 程 研究 所 （ 下 简 称 本草 研 究 所 ） 以 研制 了 Ａ ＦＰ半 定 量 Ｇ Ｃ 试 剂 盒 ， 们 应 用 放 免 ＩＡ 我 法 与 Ａ Ｐ半 定 量 ＧＩ Ａ 试 剂 盒 对 临床 血 清 标 本 进 Ｆ Ｃ 行 Ａ Ｐ对 比测 定 ， 果 符 合 性 良好 。 Ｆ 结 材 料 和 方 法
维普资讯
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文章 编 号 ：０ １２ ８ （０ ２０ ．１ ４０ １０ ．０ ７ ２ ０ ）３０ ６ ２
中圈 分 类 号 ： ７ ０ ４ Ｒ ３ ５
文 献标 识 码 ：Ａ
关 链 词 ：甲胎 蛋 白 ；免 疫 层 析测 定 ；半 定 量 测 定
甲 胎 蛋 白 （ Ｆ ） 肝 细 胞 性 肝 癌 （ Ｃ 的 血 Ａ Ｐ是 ＨＣ ） 清 学 标 志 。健 康 人 血 清 Ａ Ｐ含 量 低 于 ｌ ～３ ｇ Ｆ ０ ０ ／ Ｌ， 较 多 肝 炎 患 者 血 清 Ａ Ｐ高 于健 康 人 水 平 。 因 但 Ｆ 断 依 常 Ｆ ０ ．Ｌ ｇ Ｃ 据 Ｊ 但 亦 有 不 少 ＨＣ 患 者 血 清 ＡＦ Ｃ Ｐ低 于 ４ ０ ０ ｇ Ｌ２。 定 量 测 定 Ａ Ｐ 的 方 法 有 放 射 免 疫 法 （ ／Ｌ Ｆ 以 下简 称放免 法）酶 免疫法 和化学 发光 免疫法 等 ， 、 但 需特殊 仪 器 。金免 疫 层 析 法 （ Ｃ 测 定 Ａ ＧＩ Ａ） ＦＰ 简 单 快 速 ， 内外 已有 多 种 商 品 试 剂 供 应 ， 般 是 以 国 一
化学发光试剂临床意义
名 称：人垂体泌乳素(PRL)诊断试剂盒（化学发光免疫分析法） 临床意义：人垂体泌乳素(PRL)是由垂体前叶产生的，由 198 个氨基酸组成的单链多肽，分子量 22kD，其结构与生物学方面与生长激素、胎泌乳素属同类激素。PRL 直接作用于体细胞，促进乳 腺生长、发育和乳液形成。此外，尚有促进卵巢分泌甾体激素 、黄体形成与溶解的作用。非妊娠 妇女与男性 PRL 水平相当，妊娠后 PRL 水平逐渐增加，至分娩前达到高峰，哺乳期进一步增加。 PRL 测定对垂体疾病，特别是垂体瘤和各种原因引起的高泌乳素血症及月经异常和不孕症的病因 诊断与鉴别有重要意义。
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北京华科泰生物技术有限公司
化学发光各项目的临床意义
名 称：高灵敏人促甲状腺激素（TSH）诊断试剂盒（化学发光免疫分析法） 临床意义：促甲状腺激素（TSH）的分泌受血清中 T3 和 T4 浓度的负反馈调节。TSH 主要作用于甲 状腺，它能增加甲状腺合成并分泌甲状腺激素 T3 和 T4。测定血清中 TSH 的含量，是诊断甲状腺功 能和研究下丘脑－垂体－甲状腺轴的重要指标之一。在甲状腺功能评估中，可鉴别原发性和继发性 （垂体性或下丘脑性）甲状腺功能低下症，并可作为对甲低症疗效观察的指标。此外，可观察垂体 TSH 的储存功能，进一步区别下丘脑和垂体的病变；与 T4 联合使用是目前诊断新生儿先天性甲低 的唯一方法。
甲胎蛋白检测SOP文件(iFlash3000)
1.检验目的：本试剂盒用于定量测定人血清和（或）血浆中的甲胎蛋白。
2.检验原理：3.性能参数：3.1线性范围：用线性参考品进行测定，在1.0ng/mL ～1500.0ng/mL 范围内。
3.2最低检测限：≤1.0 ng/mL 。
3.3准确度：测量结果的相对偏差应在±10.0%范围内。
3.4重复性:变异系数（CV ）应不大于10.0%。
3.5批间差:3个批号试剂之间的批间变异系数（CV ）应不大于15.0%。
4.样品要求：4.1检测标本：血清和血浆（肝素锂、肝素钠、EDTA 和柠檬酸钠抗凝）是推荐使用的样本类型。
尚未验证其他抗凝剂能否适用。
4.2采集及处理：在进行离心操作前需让血清样本完全凝结（凝结时间不小于1小时）。
所有的待测样本在测试前均应进行离心操作。
顶部含脂质的离心样本，需转移澄清、无脂质的部分到新的样本管中。
在测试前，确保已去除了残余的纤维蛋白和细胞类物质。
应小心处理患者样本，避免交叉污染。
在测试前，确保患者样本、校准品、质控品均已平衡至环境温度（20-25°C ）。
为避免蒸发可能带来的影响，样本和校准品应在上机后2小时内完成测试。
4.3样品储存：在室温（20-25°C ）下，样本保存时间不得超过8小时。
若在8小时内无法完成测试，应将样本在2～8°C 冷藏保存。
在2～8°C 的保存情况下，标本保存时间不得超过3天。
长期保存，应将样本在-20°C 保存。
冷冻样本在融化后必须进行充分混匀。
样本冷冻次数不得超过1次。
5.设备和试剂：5.1仪器：iFlash 3000化学发光免疫分析仪。
5.2试剂：甲胎蛋白测定试剂盒（化学发光法）；包装量：2×50人份/盒； 5.3储存要求：（1）储存：存放在2-8°C ，保持竖直向上。
（2）有效期：试剂瓶及校准品未开封存放于2-8°C：可稳定365天；试剂瓶使用后存放于2-8°C或在机存储：可稳定28天；校准品复溶后在-20°C保存：可稳定28天（仅可冻融一次）。
甲胎蛋白在临床诊断中的应用
甲胎蛋白在临床诊断中的应用甲胎蛋白在临床诊断中的应用甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)由胚胎肝、卵黄囊和胃肠上皮细胞产生，成人的甲胎蛋白由肝脏产生，是单链多肽糖蛋白，在血清中的半衰期为3.5—6d，肝细胞癌、卵黄囊和胚胎性肿瘤及部分肝外肿瘤可重新合成甲胎蛋白。
在妊娠早期胎儿血清中浓度很高，出生后6个月～1年，可降至健康成人水平，以后在没有疾病的情况下，终生将维持低水平。
临床上，AFP常用于原发性肝癌诊断，虽然AFP对肝癌的诊断有特异性，但因约30％～40％呈AFP阴性，仍有一定漏诊率，值得注意。
非肝癌而原发于包括消化、呼吸、泌尿生殖等多系统器官恶性肿瘤患者中，相当部分AFP阳性。
其次，AFP常用于肝炎、肝硬化等急慢性肝病诊断、病情监测。
此外临床上还常联合其他检测方法用于出生缺陷的产前筛查、胚胎瘤、母细胞瘤诊断。
本文就近年来AFP在临床诊断中的运用归纳如下。
原发性肝癌一般认为血清AFP值超过500ug／L持续4周或在200～500ixg ／L持续5周有诊断意义。
AFP虽是目前临床上应用最广泛的实验指标，单单利用AFP诊断肝癌具有一定局限性，故临床多是联合其他检测指标和方法应用。
为了评价AFP对原发性肝细胞癌(HCC)的诊断价值，李鹏等以病理确诊的HCCl85例及肝炎肝硬化125例为研究对象，发现AFP Cut-off值为20IXg／L时敏感度最高；400ug／L时特异度最高；2501xg ／L时，阳性似然比、特异度及诊断优势比均为最高。
AFP水平与年龄、性别、ALT水平、Child分级及HBeAg阳性与否无关。
AFP<201~g ／L的HCC患者2年生存率高于AFP~>201xg／L的患者(P<O.05)，对于AFP<20ug／L的患者，手术治疗1年生存率高于非手术治疗(P<0.05)。
由此推论对于HCC的诊断，AFP为250ug／L时效能最高。
AFP水平与HCC患者预后有关。
甲胎蛋白诊断试剂盒说明书
血清甲胎蛋白检测操作规程一．检验原理根据酶联免疫双抗体夹心法的作用原理，利用抗原、抗体反应的特异性与酶的高效催化性研制而成，其原理是将特异性抗体吸附到固相载体上。
加入待测的样品，与吸附于固相载体上的特异性抗体反应后，洗去未反应的样品，加入酶标记的特异性抗体与抗原反应，生成抗体－抗原－酶标抗体复合物，再加入底物和显色剂，生成可显色的产物，进行检测。
二．试剂盒组成96人份/盒：1.AFP标准品：5IU/ml、10IU/ml、20IU/ml、50IU/ml、100IU/ml、200IU/ml 各一瓶2.包被条96孔: AFP单抗；3.酶结合物（1号液）1瓶：酶标记单抗；4.洗液（2号液）1瓶：乳化剂OP；5.底物(3号液) 1瓶：过氧化脲；6.显色剂（4号液）1瓶：TMB；7.终止液1瓶：硫酸；8.说明书：1份不同批号的试剂不能混用。
三．储存条件及有效期本试剂盒在2-8℃保存，有效期为一年；打开包装后在4℃保存一个月。
四．适用仪器酶标仪、恒温培养箱、100µl移液器、1000µl移液器。
五．样本要求1.样本应为新鲜的血清。
2.溶血样本不可使用。
3.样本未能在24小时内使用时应-20℃保存。
4.样本使用前应恢复至室温。
5.禁止反复冻溶。
六．操作方法使用前试剂盒应恢复至室温，将冻干标准品各加入1ml蒸馏水，待完全溶解后与待测样品同时进行操作。
1.加样:将包被孔编号，每孔加标准品或待测样品各100μl。
2.孵育:37℃孵育，20分钟。
3.洗涤:在各孔中加入洗液2滴，轻轻摇动几下，弃之。
然后用蒸馏水或自来水加满各孔，甩掉，反复5次（洗涤要彻底，防止假阳性，但不可洗涤过猛过急而导致假阴性），最后在吸水纸上拍干。
4.加酶:每孔加酶结合物2滴（100μl）。
5.孵育:37℃孵育，15分钟。
6.洗涤:重复步骤“3”。
7.显色:加入底物1滴，随即加入显色剂1滴，轻轻摇动几下，室温反应2～5分钟。
8.终止:每孔加2滴（100μl）终止液。
AFP临床应用及其检测
黄崇庭 2016.6.15于柳州
甲胎蛋白（AFP）
甲胎蛋白：
又称甲种胎儿球蛋白，甲型胎儿蛋白，是一种糖蛋白，属于白蛋白家族， 正常情况下，来自胚胎的肝细胞和卵黄囊，胎儿出生约两周后甲胎蛋白从血液 中消失，正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20微克／升。
发现AFP：
由Bergstrand和Czar于1956年在胎儿血清中发现，而前苏联的Abelev则于1963 年发现AFP的来源主要为卵黄囊和胎盘；
（3）AFP具有促进细胞增殖的作用。
5、AFP在其他肿瘤中的应用
（1）各种源于内胚层的胃肠道肿瘤； （2）内胚窦瘤(卵黄囊瘤)； （3）生殖细胞癌等；
总结血清甲胎蛋白阳性增高的原因
随着病情恶化它在
肝癌
血清中的含量会
急剧增加
（阳性率80-90%）
孕妇; 其他肿瘤的肝转移
AFP阳性
急性肝炎 慢性肝炎 肝硬化
重型肝炎患者在发生肝细胞炎症坏死后能否有效的再生，与其预后有关，AFP 增高者，预后较好。
原因在于 （1）AFP能促进肝细胞生长因子受体表达, 从而促进肝细胞增殖、 分化、再生；
（2）AFP出现于有丝分裂旺盛的肝细胞和(或)幼稚肝细胞，在急性 病毒性肝炎、 活动性慢性乙型肝炎和肝硬化时, AFP升高标志肝 细胞再生活跃；
AFP目前的检测方法
1、化学发光免疫分析( CLIA) 是采用现代全自动仪器操作控制，单克隆抗体标记发光物质吖啶酯或碱性磷
酸酶促化学发光最新的微磁粒子标记反应的技术，是光的高灵敏性、单克隆抗体 高特异性结合的自动化、智能化程序的现代免疫定量技术。目前以电化学发光免 疫分析为代表，实现了免疫测定的自动化，具有测定结果稳定、线性范围宽、测 定速度快、试剂保存期长等优点，但检测成本高。
肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP)的检测及临床意义
肿瘤标志物甲胎蛋白（AFP）的检测及临床意义一、概述1、甲胎蛋白（α-fetoprotein；AFP）胎儿发育早期由肝脏和卵黄囊合成的一种由591个氨基酸组成的糖蛋白，电泳时位于白蛋白和α1球蛋白之间。
2、新生儿时期AFP很高，到1岁时降至10µg/L～20µg/L，在成人血清中AFP的含量很低。
当肝细胞发生恶性变时，AFP含量明显升高，是临床上辅助诊断原发性肝癌的重要指标。
二、参考区间血清AFP检测的参考区间可因方法、仪器、试剂不同而有不同。
三、筛查血清 AFP 联合肝脏超声检查可作为原发性肝癌高危人群的筛查。
高危人群以乙型肝炎病毒（HBV）和（或）丙型肝炎病毒（HCV）感染者、长期酗酒者以及有原发性肝癌家族史者为主，筛查年龄男性≥ 40 岁，女性≥50 岁开始，宜每隔 6个月检查一次。
四、临床意义1、血清AFP是临床上辅助诊断原发性肝癌（简称肝癌）最常用的肿瘤标志物。
对于血清AFP≥400μg/L超过1个月，或≥200μg/L持续2个月，在排除妊娠、活动性肝病和生殖系胚胎源性肿瘤后，应高度怀疑肝癌，需做B 超检查，必要时做CT/MRI和活组织检查等以明确诊断。
血清AFP对肝癌诊断的阳性率一般为70%左右，尚有约30%的肝癌患者AFP检测阴性，因此，不能仅靠AFP来诊断肝癌。
2、血清AFP升高也可见于生殖系胚胎源性肿瘤，如睾丸非精原细胞瘤、卵黄囊瘤、恶性畸胎瘤等。
还可见于其他恶性肿瘤，如胃癌，结直肠癌等。
3、急、慢性肝炎、肝硬化患者血清中 AFP 可出现不同程度的升高，多在20～200µg/L之间，一般在2个月内随病情的好转而逐渐下降。
4、妇女妊娠3个月后血清AFP可见升高，主要来源于胎儿。
孕妇血清中AFP异常升高，可见于胎儿神经管缺损、脊柱裂、无脑儿等。
AFP可由开放的神经管进入羊水而导致其在羊水中含量异常升高。
孕妇血清中AFP异常降低，提示胎儿有Down's 综合征的风险。
甲胎蛋白(AFP)检测试剂盒(胶体金法)
广州健仑生物科技有限公司
甲胎蛋白(AFP)检测试剂盒（胶体金法）
【产品原理】 甲胎蛋白是一种由胚胎细胞和卵黄囊产生的胎儿所特有的蛋白质，正常成人血清中含量极低 （<25ng/ml），当肝细胞恶变时，含量可大大升高（>400ng/ml），因此，测定血清中甲胎蛋白含量 的异常增高，作为早期诊断原发性肝癌，在临床上是非常有效的判定依据。
本品以胶体金作为指示标 记，交联抗-AFP 单克隆抗体，与血清中 AFP 结合，形成双抗体夹心一步法。
用途： 用于定性检测原发性肝癌及其他 AFP 升高疾病， 用于该类疾病的筛选和流行病调查及基层医疗单位的 检测等。
【产品规格】 产品编号 类型 JLAFP JLAFP 样本 反应时间 灵敏度 特异性 有效期 10 分钟 10 分钟 20ng/ml >99% 24 个月 20ng/ml >99% 24 个月 3.0mm（条型） 血清/血浆/全血 2.5mm（条型） 血清/血浆/全血
【生产企业】 广州健仑生物科技有限公司
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甲胎蛋白测定试剂盒(时间分辨荧光免疫分析法)产品技术要求广州市丰华生物
甲胎蛋白测定试剂盒（时间分辨荧光免疫分析法）2. 性能指标2.1 装量试剂盒各溶液最大允许负偏差应为 6.0％。
2.2 外观试剂盒中校准品为冻干粉，呈白色或淡黄色粉末或块状物，复溶后为澄清或浅黄色液体，不应含异物、混浊或摇不散的沉淀；其它液体组份试剂均为澄清透明；微孔反应板应封口良好，无破损。
2.3 最低检测限试剂盒的最低检测限不高于 1.0 U/mL；2.4 特异性用CEA 500 ng/mL 进行检测，测得表观hAFP 浓度不高于1.0 U/mL。
用白蛋白（ALB）100 mg/L 进行检测，测得表观hAFP 浓度不高于1.0 U/mL。
至少检测10 份孕妇以外的正常血清，检测结果均应不高于20.0 ng/mL（16.53 U/mL）。
2.5 线性相关系数试剂（盒）的线性范围（1.0 U/mL～500 U/mL）内的线性应符合如下要求：a)线性相关系数r≥0.990；b)检测浓度＜50 U/mL 的AFP 时，线性的绝对偏差应在±8 U/mL 范围内；检测浓度≥50 U/mL 的AFP 时，线性相对偏差不超过±15%。
2.6 测量准确度在试剂盒的线性区间内，制备2 个不同浓度的国家标准品（注册检验时使用）或经国家标准品标化的企业参考品作为样品进行检测，测定值与靶值的相对偏差不应超过±15.0%。
2.7 测量精密度2.7.1 校准品不精密度（均一性）试剂盒校准品（零值除外）B 点、C 点的不精密度（CV）应不超过25.0%；D 点、E 点、F 点的不精密度（CV）应不超过15.0%。
2.7.2 分析内精密度在试剂盒的线性范围内，设置3 个不同浓度的质控品，检测结果的变异系数应不高于15.0%，全自动试剂盒应不高于8.0%。
2.7.3 分析间精密度在试剂盒的线性范围内，设置3 个不同浓度的质控品，检测结果的变异系数应不高于20.0%。
（仅限于手工操作的试剂盒）2.7.4 批间精密度在试剂盒的线性范围内，设置3 个不同浓度的质控品，试剂盒的批间精密度应不超过20.0%。
AFP临床应用及其检测
AFP临床应用及其检测AFP临床应用及其检测1. 简介AFP（Alpha-fetoprotein），又称甲胎蛋白，是一种在胎儿中产生的蛋白质。
AFP在正常情况下在胎儿怀孕期间被产生，然后在出生后迅速下降至低水平。
然而，在一些疾病状态和恶性肿瘤中，AFP的水平会显著升高。
因此，AFP检测在临床中被广泛应用于早期肿瘤筛查和肝癌、睾丸癌等疾病的诊断和监测。
2. AFP检测方法2.1 血清AFP测定血清AFP测定是最常用的检测方法之一。
通过血液样本中的酶免疫化学发光法（ECLIA）或免疫层析法等技术手段，测定血清中的AFP浓度。
结果可快速得出，具有简便、快速、非侵入性等优点。
2.2 妊娠前诊断在孕妇妊娠期间，AFP水平的异常变化可以用于妊娠并发症的早期筛查，如神经管缺陷等。
妊娠期AFP的检测常通过血清AFP测定或羊水中的AFP测定实现。
2.3 肝癌检测与诊断AFP的水平在肝癌患者的血清中常常升高。
因此，在高危人群中的AFP检测常用于早期肝癌的筛查和诊断。
结合其他检测指标如肝功能、超声、磁共振等，能提高肝癌的检测准确性。
2.4 睾丸癌检测与监测AFP的水平在睾丸癌患者的血清中往往升高。
AFP的检测可以用于睾丸癌的早期诊断、疗效评估和预后监测。
3. AFP检测的临床应用3.1 肿瘤筛查AFP的测定常用于肿瘤筛查，旨在早期发现和诊断肝癌、睾丸癌等恶性肿瘤。
3.2 肝癌患者的监测AFP的水平可以用于监测肝癌患者的疗效和复发情况。
通过定期检测AFP，可以及早发现疾病的进展和复发。
3.3 妊娠并发症筛查AFP的检测可以用于早期筛查妊娠期间的并发症，如神经管缺陷等。
4. 附件本文档涉及下列附件：- 附件1：AFP检测结果表格样本- 附件2：AFP测定方法详细说明5. 法律名词及注释- AFP（Alpha-fetoprotein）：甲胎蛋白的英文缩写，是一种在胎儿和少数成人中产生的蛋白质。
- ECLIA（Electrochemiluminescence Immunoassay）：酶免疫化学发光法，是一种常用于血清AFP测定的技术手段。
AFP
甲胎蛋白电化学发光检测试剂盒说明书Elecsys AFPElecsys® Systems 1010/2010/MODULAR ANALYTICS E170 11731327 100人份【名称】通用名：甲胎蛋白电化学发光检测试剂盒英文名：Elecsys AFP汉语拼音：Jia tai dan bai dian hua xue fa guang jian ce shi ji he【注意事项】【使用目的】用免疫学方法体外定量测定人血清或血浆中甲胎蛋白(AFP)的含量,有助于非精原细胞瘤病人的治疗管理。
电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Elecsys1010/ 2010和MODULAR ANALYTICS E170（Elecsys模块）免疫测定分析仪。
【概述】甲胎蛋白类似于白蛋白,分子量为70,000道尔顿, 甲胎蛋白来源于卵黄囊、未分化肝细胞和胎儿胃肠道1.2。
70－95%的原发性肝癌患者的甲胎蛋白升高8。
越是晚期，AFP含量越高。
人绒毛膜促性腺激素（HCG）与甲胎蛋白是估计进展期非精原细胞瘤病人生存率的非常重要的两个参数4.9。
但尚未发现甲胎蛋白浓度含量与肿瘤大小、肿瘤的生长、肿瘤分期或恶性程度等有关系。
AFP含量显著升高一般提示原发性肝细胞癌。
在转移性肝癌中，AFP一般低于350-400IU/ml10。
在肝脏再生时，甲胎蛋白也会升高，AFP中度升高也常见于酒精性肝硬化、急性肝炎以及HBsAg携带者10.11。
不推荐将AFP用于普通人群的癌症筛查。
孕妇血清或羊水AFP升高提示胎儿脊柱裂、无脑症、食管闭锁或多胎。
AFP降低(结合孕妇年龄)提示未出生的婴儿有Down's综合征的危险性。
3.5.6.7【试验原理】采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。
·第1步孵育：10μl标本、生物素化的单克隆AFP特异抗体和钌（Ru）标记的单克隆AFP特异抗体混匀，形成夹心复合物。
·第2步孵育：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
AFP
使用说明AFP VITROS免疫诊断产品甲胎蛋白试剂包192 5551用途可用于体外定量测定样品中的甲胎蛋白(AFP)：(i) 处于孕中期三个月的母亲血清、血浆（EDTA 或肝素抗凝）及羊水样品中的AFP 检测，辅助诊断胎儿开放性神经管缺陷；(ii) 人血清或血浆（EDTA 或肝素抗凝）样品中的AFP 分析，辅助监测非精原细胞瘤的睾丸肿癌患者或原发性肝细胞癌患者的治疗。
摘要及说明怀孕期间，AFP 由胎儿产生并转运至羊水，然后又渗透入母亲的外周血中0。
开放性神经管缺陷(NTD) 可使AFP 直接通过胎儿的毛细血管进入羊水。
因此，羊水和母亲血清中的AFP 水平升高可以作为评价包括无脑儿和脊柱裂在内的一系列胎儿畸形的指标0-4。
AFP 的测定为进一步筛查 NTD 的高风险妊娠提供了一个有效的方法。
此外，多胎妊娠也可伴有 AFP 浓度的升高5。
患有原发性肝细胞癌和非精原细胞瘤睾丸癌的患者的血清 AFP 浓度也会升高6, 7。
AFP 浓度的测定也可用于在治疗过程中对患者病情进行监测。
AFP 浓度升高还可见于非恶性肝脏疾病的患者8。
实验原理VITROS AFP 实验是在 VITROS 免疫诊断系统上，用 VITROS 甲胎蛋白试剂包和 VITROS 免疫诊断产品甲胎蛋白定标品来完成的。
该实验应用免疫分析技术，即样品中的AFP 与生物素化的抗-AFP 抗体反应（绵羊抗-AFP），抗原－抗体复合物被反应杯壁上的链霉亲和素捕获，未结合的物质通过洗涤除去。
在第二步孵育中，辣根过氧化物酶(HRP) 标记的酶标抗体结合物（鼠单克隆抗-AFP）与已被固化的 AFP 结合，未结合的酶结合物通过洗涤除去。
辣根过氧化物酶(HRP) 结合物的检测原理基于化学发光反应9。
在反应杯中加入一种含发光底物（一种鲁米诺的衍生物和一种过酸盐）及一种含电子转移物的试剂，酶结合物中的辣根过氧化物酶(HRP) 催化鲁米诺衍生物发生氧化反应产生光；而电子转移物（三氯四羟基乙酰苯胺）增强光产生的强度水平，延长发光时间。
化学发光法测定甲胎蛋白的临床应用评价
化学发光法测定甲胎蛋白的临床应用评价目的:评价化学发光法(ECLIA)测定甲胎蛋白(AFP)的临床应用价值。
方法:在罗氏cobas e411分析仪上用化学发光分析法对AFP进行测定,同时用酶联免疫吸附法(ELISA)进行AFP的测定。
结果:两法呈正相关,都有较好的重复性,但ECLIA 法CV值明显小于酶联免疫吸附法,ECLIA比(ELISA)具有更宽的检测范围。
结论:应用ECLIA检测AFP,具有灵敏度高、重复性好、稳定性强等优点,是目前测定AFP较好的方法,适用于临床对AFP进行检测,有着良好的发展前景。
标签：甲胎蛋白;化学发光法;酶联免疫吸附甲胎蛋白(AFP)是胚胎发育早期的一种主要血清蛋白,分子量约70000,含糖40g/L,由96%蛋白质和4%的碳水化合物组成,正常人血清中AFP含量在2-8g/L 之间,AFP正常值一般低于25g/L,AFP是诊断肝癌最特异的标志物,是目前最好的可实际用于早期诊断原发性肝癌的指标,可在症状出现前6-12 mo作出诊断。
临床上检测AFP的方法主要有放射免疫法(RIA)、酶免疫法(EIA)、酶联免疫法(ELISA)、荧光免疫法(FIA)、化学发光分析法(ECLIA)等,本文采用化学发光法分析法(ECLIA)和酶联免疫吸附法(ELISA)对42份血清进行AFP测定,现报告如下。
1材料与方法1.1一般资料本院2009年1月-12月收治的42例肝癌患者,经影像学、组织病理学检查确诊为原发性肝癌,抽取肝癌住院患者晨血5ml,分离血清。
将其中15份血清混合后分装(用于精密度试验),置于-2O℃冰箱保存,集中测试。
1.2仪器与试剂ECLIA法采用罗氏公司生产的cobas e411型化学发光分析仪,测定试剂及配套试剂,ELISA法定量试剂盒为郑州博赛生物工程有限责任公司生产。
1.3方法1.3.1化学发光免疫分析法按仪器操作规程和试剂说明书进行测定。
1.3.2ELISA按操作规程进行测定。
人甲胎蛋白(AFP) 说明书
人甲胎蛋白（AFP）酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中甲胎蛋白（AFP）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人甲胎蛋白（AFP）水平。
用纯化的人甲胎蛋白（AFP）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入甲胎蛋白（AFP），再与HRP标记的甲胎蛋白（AFP）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的甲胎蛋白（AFP）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人甲胎蛋白（AFP）浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：45μg/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
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中值：批内 CV5.54%，批间 CV5.21%，高值:批内 CV3.54%，批间 CV3.01%。 试剂 2 测质控血清低值：批内 CV6.55%，批间
CV4.62%，中值：批内 CV4.41%，批间 CV4.62%，高值:批内 CV3.05%，批间 CV3.23%。 试剂 1 测质控血清低值：批内
最初检测甲胎蛋白 (AFP) 含量主要采用血凝 法，随着检测技术的发展，近年在方法学方面有了 重大改进和突破，如间接 ELISA(HRP)法、火箭电泳 自显影、放射免疫、散射免疫比浊、时间分辨及化学 发光放射免疫、酶免疫( EIA) 、荧光免疫( FIA) 、化 学发光免疫分析(CL IA)等测定方法，其敏感性、重 复性都有了显著提高[4-5]。 以上各种检测方法都能对 血清 AFP 进行相对定量， 但由于检测示踪物检测 原理和检测仪器的不同，决定了不同检测方法的敏 感性、 重复性的差异， 特别对血清 AFP 含量高于 500 ng/mL 和 低 于 50 ng/mL 标 本 结 果 的 影 响 可 能 较大。
湖南师范大学学报（医学版）
2011，8（1） J Hunan Normal Univ（Med Sci）
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甲胎蛋白定量测定试剂盒的临床应用
李劲松 1,陆建国 2,吴 意 2,方 鹏 3
（1.宁乡县人民医院检验科,湖南 宁乡 410600；2.湖南师范大学第一附属医院,湖南省人民医院,湖南 长沙 410002；3.湖南师范大学医学院,湖南 长沙 410078）
[Key words] α fetal protein；enzyme-linked immunosorbent；chemistry
甲胎蛋白(α fetoprotein， AFP) 是 一种含 4%碳 水化合物的单链糖蛋白， 分子量 70KD， 半衰期 5 天，由 592 个氨基酸残基的单肽链组成 ，基因位于 第 4 对染色体 4q1124q21 区域[1]，由 15 个外显子和 14 个内含子组成，属于血清中一种 α 球蛋白，是一 种胚胎性相关蛋白[2]。 自 1963 年发现以来，作为一 种肿瘤特异性抗原已广泛应用于临床[3]。 它对原发 性肝癌的早期诊断具有重要意义，同时对肝细胞癌 的鉴别诊断， 流行病学调查和理论研究都很有价 值。
次，连续测 20 天，计算比较批内变异系数和批间变异系数。 将同一份高值混合血清进行 8 倍比稀释后分别用上述三种
方法检测进行线性分析。结果：新试剂与试剂 2 检测结果高度相关，R 值为 0.995；直线回归方程 Y = 1.027 x -2.205；新
试剂与试剂 2 符合率为 94.33%，新试剂与试剂 1 合率 98.67%；新试剂测质控血清低值：批内 CV6.87%，批间 CV5.21%，
【关键词】 甲胎蛋白；酶联免疫法；化学发光法
【中图分类号】 R446.1
【文献标识码】A
【文章编号】1673-016x(2011)01-0067-05
Clinical evaluation of ELISA for determination of AFP
Li Jingsong1, Lu Jianguo2, Wu Yi2, Famg Peng3
[Abstract] Objective Through comparison of three kinds of methods such as the new agent (enzyme-linked immunosorbent method), agent1 (enzyme -linked immunosorbent method) and agent2 (chemiluminescence immunoassay,clia) to evaluate the clinical application value of e new agent (enzyme -linked immunosorbent method). Methods With these three methods to test the 300 serum of high, medium and low serum , then do regression analysis and correlation analysis;with the three methods to test the low, medium and high quality products once every day for 20 days, Calculation and comparison within the batch of variation coefficient and coefficient of variation between; multiple proportions the same mixed high value serum for 8 times,then test them With these three method and do Linear analysis Results the results of the new agent and agent1 are highly relevant,R=0.995; The Linear regression equation is Y = 1.027 x -2.205；the accuracy of he new agent (ELISA) and agent2 (chemiluminescence immunoassay,clia) is 94.33% ; the accuracy of the new agent and agent1 is 98.67% ；the new agent's result of the low Qc serum : In batch is CV6.87% , batch between is CV5.21% . The medium : In batch is CV5.54% , batch between is CV5.21% .the high: In batch is CV3.54% ,batch between is
CV4.26%，批间 CV4.99%，中值：批内 CV2.52%，批间 CV1.40%，高值:批内 CV1.01%，批间 CV1.18%。 两种方法在各自的
线性范围内线性良好。 结论：新试剂甲胎蛋白定量测定试剂盒(酶联免疫法)与已上市的试剂 1(酶联免疫法)及试剂 2(化
学发光法)高度相关，可供临床使用。
1 材料和方法
1.1 材料 1.1.1 标本来源
收 集 2009 年 9 月～12 月 份 湖 南 省 人 民 医 院 ， 湘雅医院，湖南省肿瘤医院病人血清样本共 300 例 (病例诊断参考《内科学》第 6 版)，其中原发性肝癌
样本 24 例，肝硬化样本 40 例，孕妇血 6 例，脐带血 样本数 14 例，溶血样本 3 例，高脂血 3 例 ，其它肝 炎 病 例 如 乙 肝 12 例 ，HCV 血 3 例 、HAV 血 3 例 、 HEV3 例 ， 类 风 湿 病 例 血 3 例 。 每 份 样 本 不 低 于 1.5mL，并保存于-40℃冰箱。 1.1.2 仪器
【摘要】 目的：通过新试剂(酶联免疫法)与已上市的试剂 1(酶联免疫法)和试剂 2(化学发光法)定量测定甲胎蛋白
的比较，重点评价新试剂(酶联免疫法)测定甲胎蛋白的临床应用价值。 方法：将发光法测定的 AFP 高、中、低值 300 份
血清分别用上述三种方法进行检测，进行回归分析及相关分析。 将低、中、高值质控品分别用上述三种方法每天测定一
（(1. Ningxiang People's Hospital , Ningxiang 410600, China; 2. FUniversity, Changsha 410002, China; 3.Medical College, Hunan Normal University, Changsha 410013,China）
雅 培 Abbott AXSYM， 全 自 动 酶 标 仪 (microplate reader KHB ST-360) 、全自动酶标洗板机( EL P240) 1.1.3 AFP 检测试剂
上海科华生物工程股份有限公司甲胎蛋白定 量测定试剂盒(酶联免疫 法)，批号：20090513，有效 期：2009.05.27-2010.05.12；英科新创(厦 门)科 技 有 限公司甲胎蛋白定量测定试剂盒 (酶联免疫法)，批 号：2009061001， 有效期 ：2009.06.10-2010.06.09 ； 雅培 AFP 试剂，批号：79292Q100，有效期至 20107-25。 1.2 方法
本次实验为检测英科新创(厦门)科技有限公司 甲 胎 蛋 白 定 量 测 定 试 剂 盒 ( 酶 联 免 疫 法 enzyme immunosorbent assay， ELISA) 性能， 收集了 300 份 化学发 光法 AFP 已定值 的 血 清 进 行 ELISA 检 测 ， 与已上市的 ELISA 试剂盒分析比较， 以求能获得 可靠的性能资料。
将 300 份收集血清分别用新试剂(ELISA 法)和 试 剂 1(ELISA 法)以 及 试 剂 2(化 学 发 光 法)进 行 测 定。 雅培 Abbott AXSYM 化学发光法按说明书进行 检测。 1.3 数据处理
全部数据使用 SPSS17.0 统计软件处理。
2结果
2.1 三种检测方法结果比较 2.1.1 采 用 新 试 剂(ELISA 法)，试 剂 1(ELISA 法)和 试剂 2(化学发光法)三种方法对 300 分病人血清甲 胎蛋白进行检测，以化学发光为标准与其他两种方 法进行比较，结果表明，新试剂(ELISA 法)与试剂 2 (化学发光法)比较吻合率为 94.33％，新试剂(ELISA 法)与试剂 1(ELISA 法)比较的吻合率为 98.67％。 结 果见表 1，2。 2.1.2 按试剂 2 (化学发光方法) 的检测结果对 300 份检测血清 进行分组(表 3)，对三 种 方 法 进 行 两 两