ELISA法甲胎蛋白(AFP)的检测

ELISA法甲胎蛋白（AFP)的检测

发表时间：2017-08-17T15:58:40.867Z 来源：《心理医生》2017年18期作者：刘晶

[导读] 甲胎蛋白(AFP)是一种在电场中泳动于α-球蛋白区的单一多聚体肽链的糖蛋白，与血清白蛋白、维生素D结合蛋白同属一大家族。（富裕县中医院<富裕县第二医院>检验科黑龙江齐齐哈尔 161200）

【摘要】目的：探讨ELISA法甲胎蛋白（AFP)的检测方法及意义。方法：对原发性肝癌患者30例，对ELISA法甲胎蛋白（AFP)方法及临床意义进行分析。结果：ELISA测得的AFP含量取不同浓度的混合血清，AFP浓度为10.7lng/mL、18.08ng/mL、46.83ng/mL，分别加入不同浓度定值血清，用ELISA法分别检测其回收率。用ELSIA测得的回收率分别在93.90％～98.16％，平均回收率分别为96.42％，ICA的检测精度高，稳定性强。结论：AFP是原发性肝癌最灵敏、最特异的肿瘤标志，血清AFP测定结果大于500μg/L以上，或含量有不断增高者，更应高度警惕。

【关键词】ELISA法；甲胎蛋白（AFP)；检测

【中图分类号】R735.7 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）18-0058-02

甲胎蛋白(AFP)是一种在电场中泳动于α-球蛋白区的单一多聚体肽链的糖蛋白，与血清白蛋白、维生素D结合蛋白同属一大家族。AFP是胚胎发育早期的重要血清成分，由卵黄囊和肝细胞合成。出生后一年内降至正常水平[1]。AFP有很强的免疫抑制功能。当肝细胞发生病变时，AFP基因表达重新开放，于血清中可检测到AFP浓度显著升高。

1.资料与方法

1.1 实验对象

选取2015年1月-2016年6月收治的门诊或住院原发性肝癌患者30例，年龄20～79岁，平均年龄54.5±3.5岁。所有患者增根据临床表现，经B超、CT及各项实验室指标检查确诊。

1.2 实验试剂

微孔反应板用抗AFP单抗体包被。2～8℃干燥保存，有效期内保持稳定。酶结合物溶于缓冲液中，含蛋白稳定剂。2～8℃保存，有效期内保持稳定。显色液A：0.05M乙酸缓冲液，含0.02%过氧化氢，存于滴瓶中。2～8℃保存，有效期内保持稳定。显色液B：含色素基质和稳定剂，存于滴瓶中。2～8℃避光保存，有效期内保持稳定。标准品：AFP浓度分别为5ng/ml，10ng/ml。30ng/ml，60ng/ml，

120ng/ml，240ng/ml。含蛋白稳定剂和防腐剂，存放于玻璃瓶中，2～8℃保存。质控血清含AFP浓度分别为，L-I，L-Ⅱ，含防腐剂及蛋白稳定剂。2～8℃保存，有效期内保持稳定。终止液：含lN H2SO4。洗液(10倍浓缩)：50ml，磷酸盐缓冲液，用前稀释[2]。2～8℃保存，有效期内保持稳定。

1.3 方法

实验前将试剂和标本置于室温（18～28℃）平衡20分钟。标本浓度超过200μg/L时，测定前用“0”标准品适当稀释并混匀。建议稀释倍数为l:10，1:20，1:100。计算数值应乘以相应稀释倍数。将试剂盒浓缩洗液用蒸馏水稀释10倍后，充分混匀后使用。

温浴，取出所需数量的微孔，做上标记，留出一孔做空白对照（指定A1）。在分别注明标号的反应微孔中依次加入50μl标准品0μg/L，10μg/L，30μg/L，60μg/L，120μg/L，240μg/L，质控血清，待测标本。在每孔中加入50μl（1滴）酶结合物（除去A1）。轻轻振荡微孔条，充分混匀。37℃保温60分钟（注：测定高值标本时，则37℃保温30分钟）。保温过程中保持微孔条水平。充分倾去微孔中的液体，用洗液冲洗微孔5次。将微孔条倒置在吸水纸上，拍尽残余水分。显色反应，每孔加1滴（50μl）显色液A，再加1滴（50μl）显色液B。在室温下反应5分钟。每孔中加1滴终止液终止反应。在终止反应的30分钟内测各孔的OD450nm。

2.结果

ELISA测得的AFP含量取不同浓度的混合血清，AFP浓度为10.7lng/mL、18.08ng/mL、46.83ng/mL，分别加入不同浓度定值血清，用ELISA法分别检测其回收率。用ELSIA测得的回收率分别在93.90%～98.16%，平均回收率分别为96.42%。

3.讨论

所有患者的血清标本和各测试组分均按可传染情况处理，实验中的溢出物需用消毒剂彻底清除。标本及所有可能被传染的物质均按含有传染物的情况进行净化和处理。避免显色液B或终止液与皮肤或黏膜接触。一旦接触，立即用水彻底清洗。不要混淆试剂瓶盖，不要混用不同批号的试剂及微孔反应板，不要使用过期的试剂盒。实验加样完毕后，应注意轻摇微孔反应条，一定要充分混匀[3]。在冲洗过程中，要冲洗干净，并拍干微孔中的残余液体，否则将降低精确度，造成吸光度升高的假象。实验完毕后，应及时将试剂盒放回，2～8℃冰箱。使用微孔反应板应注意干燥保存，避免受潮。贮存和使用显色液B时应避免光线直接照射。实验过程中，实验室的温度应保持在18～28℃。

AFP是原发性肝癌最灵敏、最特异的肿瘤标志，血清AFP测定结果大于500μg/L以上，或含量有不断增高者，更应高度警惕。肝癌患者血清AFP含量变化的速率和程度与肿瘤组织分化程度高低有一定相关性，分化程度较高的肿瘤AFP含量常大于200μg/L。AFP的动态变化与病情有一定的关系。AFP含量上升提示病情恶化，其动态变化是显示治疗效果的一项敏感指标。原发性肝癌患者在检测AFP时出现阴性或假阴性可能与测定方法、癌肿类型、原发部位等因素有关[4]。肝细胞肝癌血清甲胎蛋白的水平高低与肝细胞分化程度有关，I级肝癌细胞分化接近正常细胞，故甲胎蛋白量尚不足以测出，Ⅳ级者由于分化极差，已失去类似胚胎细胞的功能，也不能从血清中检出甲胎蛋白，Ⅱ、Ⅲ级癌细胞认为是和胚胎肝细胞相似的幼稚细胞能产生甲胎蛋白，阳性率较高，由于肝细胞癌的分化程度不同，甲胎蛋白含量也有差异，是阳性率不高的原因之一。在非肝细胞癌的胆管细胞癌等也不产生甲胎蛋白。

【参考文献】

[1]郑定容,刘仿.ELISA与ICA法对甲胎蛋白检测的比较[J]. 中国医药科学,2011,01(9):153-154.

[2]殷正丰.甲胎蛋白异质体作为肝癌标志物的临床应用[J]. 实用肿瘤杂志,2004,19(1):1-4.

[3]贾志凌,王莉,刘畅,等.甲胎蛋白异质体对肝癌诊断的临床意义[J].中国肿瘤,2010,19(10):686-688.

[4]胡敏华,陈燕,李筱莉,等.甲胎蛋白异质体的临床意义[J]. 诊断学理论与实践,2006,5(3):258-259.