《中国药典》2015年版微生物基本知识
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沙氏葡萄糖琼脂SDA：20~25℃培养
培养时间 可接受标 准
细菌：48h 真菌：72h
细菌不超过72h，真菌不超过5天
固体培养基（与对照培养基）： 50%~200%（0.5~2） 液体培养基（与对照培养基管比较）： 生长良好
建议：培养基呈混浊的液体，或划线于相应的 分离平板上，培养后呈现典型菌落
70%
试验菌
2010版
大肠埃希菌
2015版
铜绿假单胞菌
金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、 白色念珠菌、黑曲霉 白色念珠菌、黑曲霉
(1)胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞 菌、白色念珠菌、黑曲霉。 (2)胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆 菌。 (3)沙氏葡萄糖琼脂：白色念珠菌、黑曲霉。
2010版
(1)PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 (2)PH7.2无菌磷酸盐缓冲液 (3)PH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠 溶制剂）或PH7.6无菌磷酸盐缓冲液 （用于结肠溶制剂）
2015版
(1)PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 (2)PH7.2无菌磷酸盐缓冲液 (3)PH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠 溶制剂）或PH7.6无菌磷酸盐缓 冲液（用于结肠溶制剂） (4)增加胰酪胨大豆肉汤培养基 ●不局限上述稀释液
供试品检查部分-结果判断
2010版
供试品的细菌数、霉菌数和酵母 菌数其中任何一个不符合该品种 项下的规定，应从同一批样品中 随机抽样，独立复试两次，以三 次结果的平均值报告菌数。
2015版
无相关内容描述。在实际操作过 程应依据附录9203药品微生物实 验室质量管理指导原则：结果的 判断和检测报告----异常结果出现 时，应进行偏差调查。
2010版
若营养琼脂培养基上长有霉 菌和酵母菌、玫瑰红钠琼脂 培养基上长有细菌，则应分 别点计霉菌和酵母菌、细菌 菌落数。然后将营养琼脂培 养基上的霉菌和酵母菌数或 玫瑰红钠琼脂培养基上的细 菌数，与玫瑰红钠琼脂培养 基中的霉菌和酵母菌数或营 养琼脂培养基中的细菌数进 行比较，以菌落数高的培养 基中的菌数为计数结果。
控制菌项目变化
培养基体系 2010版
大肠菌群
大肠埃希菌
2015版
耐胆盐革兰阴性菌
大肠埃希菌 沙门菌
明显变化
沙门菌
铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
梭菌
铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
梭菌 白色念珠菌
无明显变化
白色念珠菌
《非无菌产品微生物限度检查： 微生物计数法》
通用要求要点： (1) 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。 本 检查法可采用替代检查方法，包括自动检测法，但必须证明其替代方法 等效于药典规定的检查方法。（9201）药品微生物检验替代方法验证指 导原则 (2) 环境洁净度应符合要求。定期检测：不低于B级的单向流空气区域、工作 台面、环境。参考USP〈1117〉实验室分区原则。 (3) 前处理：供试品的抗菌活性，中和剂和灭活剂的有效性及无毒性。表面 活性剂的无毒性及与相容性。 (4) 方法选择：根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择。（平皿 法、薄膜过滤法和MPN法） (5) 菌种管理：（9203）药品微生物实验室质量管理指导原则关于菌株管理 的要求。 (6) 阴性对照：微生物检查需进行阴性对照试验。如果对照有菌生长，应进 行偏差调查。
需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的总菌落数（包括真 菌菌落数）；霉菌及酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长 的总菌落数（包括细菌菌落数）。若因沙氏葡萄糖琼脂上生长的细 菌使霉菌及酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可使用含抗 生素（如氯霉素、庆大霉素）的沙氏葡萄糖琼脂或选择性培养基 （如玫瑰红钠琼脂培养基）
2015版
（1）描述方式：按计数方法 适用性试验确认计数方法进行 供试品中需氧菌总数、霉菌及 酵母菌总数的测定。 （2）培养条件：胰酪大豆胨 琼脂平板在30~35℃培养3~5天， 沙氏葡萄糖琼脂平板在 20~25℃培养5~7天；MPN法 和供试品接种，所有试验管在 30~35℃培养3天。
供试品检查部分-结果判断
检验结果判断的前提下，应采用能使微生物生长的更高稀释级的 供试液进行方法适用性试验。若方法适用性试验符合要求，应以 该稀释级供试液作为最低稀释级的供试液进行供试品检测。
培养条件
2010版
细菌数：营养琼脂 30℃~35℃ 3天
2015版
需氧菌总数（TAMC）： 胰酪大豆胨琼脂 30℃~35℃ 3~5天
简便、严谨
评价
微生物检测环境变化
2010版
检测环境 应在洁净度10000级背景 下的局部100级单向流空 气区域内进行
2015版
应在受控洁净环境（不低于 D级洁净环境）下的局部洁 净度不低于B级单向流空气 区域内进行
·其他要求：
▷ 检验过程及环境既要最大可能防止样品受污染，又要防止检验过程 对环境和人员造成的危害。 ▷ 活动区域的合理规划及区分，提高微生物实验操作的安全性和可靠 性。
2010版
试 验 菌 株 1、营养琼脂：大肠埃希菌、 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢 杆菌 2、玫瑰红钠琼脂：白色念 珠菌 黑曲霉
2015版
1、胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠 菌、黑曲霉 2、胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌 3、沙氏葡萄糖琼脂：白色念珠菌、黑曲 霉
供试品检查部分-计数标准
2010版
无规定
2015版
增加： 各品种项下要求执行的微生物限度标准解释如下： 101cfu为可接受的最大限度为20； 102cfu为可接受的最大限度为200； 103cfu为可接受的最大限度为2000；以此类推。 若供试品的需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数的检查结果均符 合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不 符合该品种项下的规定，判供试品不符合规定。
白色念珠菌、黑曲霉于20~25℃培养不大于5天。与对照培养基 适用性检查 比较，恢复率在50%~200%之间。 枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌应不得生长。
计数方法适用性试验
1、常用的供试液制备方法 (1)水溶性供试品 (2)水不溶性非油脂类供试品 (3)油脂类供试品 (4)需要特殊方法制备供试液的供试品：①膜剂、②肠溶及结肠溶制剂、③ 气雾剂喷雾剂、④贴剂。
USP36〈1227〉推荐 细菌及酵母菌计数范围:25250cfu/皿 霉菌计数范围：8-80cfu/皿
供源自文库品检查部分 2、培养
2010版
（1）描述方式：计数方 法包括平皿法和薄膜过滤 法，检查时，按已验证计 数方法进行供试品细菌、 霉菌和酵母菌数测定。 （2）培养条件：细菌 30~35℃培养3天，霉菌和 酵母菌23~28℃培养5天， 必要时可适当延长7天。
若采用上述方法还存在一株或多株试验菌的回收达不到要求， 那么选择回收最接近要求的方法和试验条件进行供试品检查。
MPN法的精密度和准确度不及薄膜过滤法和平皿计数法，仅在 供试品需氧菌总数没有适宜计数方法的情况下使用，本法不适 用于霉菌计数。
供试品检查部分 1、操作
2010版 2015版
按计数方法的验证试验确认 按照计数方法适用性试验确 的程序进行供试液的制备， 认的计数方法进行供试品中 用稀释液稀释成1:10、1:102、需氧菌总数、霉菌和酵母菌 1:103等稀释级的供试液 总数的测定。
基于数据 分析和风 险评估制 定标准尽管未超 过标准规 定，但是 有风险。 -累积数 据，建立 风险评估 体系
《非无菌产品微生物限度检查： 控制菌检查法》
通用要求要点： (1)控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存 在特定的微生物。本检查法可采用替代检查方法，包括自动检测 法，但必须证明其替代方法等效于药典规定的检查方法。（9201） 药品微生物检验替代方法验证指导原则。 (2)供试液制备及实验环境要求同《非无菌产品微生物检查：微生物 计数法》参考USP〈1117〉实验室分区原则。 (3)前处理：供试品的抗菌活性，中和剂和灭活剂的有效性及无毒性。 表面活性剂的无毒性及与相容性。 (4)在各控制菌项下：生化实验和“应进行分离、纯化及适宜的鉴定 实验。”改为较少的生化实验或“采用其它适宜方法进一步鉴 定。”
培养基适用性检查
2010版
检查范围
加菌量
2015版
微生物计数用的成品培养基、由脱水培 养基或按处方配制的固体和液体培养基
固体培养基
50~100CFU
不大于100CFU
培养温度 营养琼脂：30~35℃ 胰酪大豆胨琼脂TSA：30~35℃培养 玫瑰红钠：23~28℃ 胰酪大豆胨肉汤TSB： 30~35℃培养
2010版
无规定
2015版
例如：当标准为10cfu，不同于以往10cfu规定的以10的指数规 定标准，考虑了微生物计数结果的可变性，即计数结果的精密 度，而非类似化学检验结果。故要求我们需要在结果判断时或 制定内控标准时，对于结果的判断或历史数据的分析需要用风 险分析的手段进行评估。制定标准时需要依据历史数据，工艺 过程，用药人群等进行相应分析，制定合理的内控标准，即总 原则为在内控标准的控制下产品无任何质量风险。
控制菌结果判断趋向多样化
微生物计数用培养基
2010版
1、营养琼脂用于细菌计数 2、玫瑰红钠用于霉菌和酵母菌计数 3、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂用于酵 母菌计数 4、菌液制备用稀释液：0.9％氯化钠 溶液
2015版
1、胰酪大豆胨琼脂和胰酪大豆胨肉汤用于需氧 菌总数测定 2、沙氏葡萄糖琼脂用于霉菌和酵母菌总数测定 3、沙氏葡萄糖琼脂+抗生素用于细菌超标引起 霉菌和酵母菌总数超标用 4、菌液制备用培养基：PH7.0无菌氯化钠-蛋白 胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液
2015版
若因沙氏葡萄糖琼脂培养基 上生长的细菌使霉菌及酵母 菌的计数结果不符合微生物 限度要求，可使用含抗生素 （如氯霉素、庆大霉素）的 沙氏葡萄糖琼脂培养基或选 择性培养基（如玫瑰红钠琼 脂培养基）进行霉菌和酵母 菌总数测定。使用选择性培 养基时，应进行培养基适用 性检查。如采用MPN法，测 定结果为需氧菌总数。
霉菌及酵母菌数：玫瑰 霉菌及酵母菌总数 红钠琼脂 （TYMC)：沙氏葡萄糖 琼脂 23℃~28℃ 5天 20℃~25℃ 5~7天
结果判断
计数方法 薄膜过滤 法 平皿法 MPN法 结果判断 （试验组菌落数—供试品对照组菌落数）/菌液对 照组菌落数比值应在0.5~2之间 试验组菌数应在菌液对照组菌数的95%置信限内
微生物检查体系的调整
2010版
分类依据 质控分类 检验体系 项目1 按微生物类别分 细菌、真菌 选择培养、或者人为区分 细菌数 营养琼脂
2015版
按营养条件分 需气、厌气菌 直接与培养条件对应 需氧菌总数 胰酪大豆胨琼脂 （TSA）
项目2
霉菌及酵母菌总数 玫瑰红钠琼脂
容易造成漏检
霉菌及酵母菌总数 沙氏葡萄糖琼脂 （SDA)
2、接种和稀释
2010版
试验组 供试液和菌液同时 加入平皿中
2015版
供试液，加入试验菌液，混匀，使 每张滤膜所滤过的供试液中含菌量 不大于100cfu。
供试品 对照组
菌液对 照组 中和剂 对照组
供试液直接加入平 皿中
直接加入菌液到平 皿中 稀释剂对照组
稀释也代替菌液同试验组操作。 （中国药典特殊规定的，协调案无 相关要求）
不含中和剂及灭活剂的相应稀释液 替代供试液，按试验组操作。 中和剂、灭活剂及表面活性剂的稀 释液中加入规定量菌液
接种和稀释
消除供试品的抑菌活性的方法
（1）增加稀释剂和培养基的用量； （2）加入中和剂或灭活剂； （3）采用薄膜过滤法和冲洗； （4）综合上述措施。
●根据供试品须符合的微生物限度标准和菌数报告规则，在不影响
培养基适用性检查
培养基名称 沙氏葡萄糖琼脂+抗生素 （当细菌超标引起霉菌和酵母菌总数超标用） 无菌性检查 取已灭菌的SDA注皿，用于20~25℃培养5~7天，应无菌落生长。 抑菌性检查：枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 试验用菌种 促生长能力：白色念珠菌、黑曲霉 1、庆大霉素：广谱。对G-，G+菌有比较好的抗菌作用 常用抗生素 2、氯霉素：广谱。对G-菌作用强；对G+菌作用不及青霉素与 四环素。 接种方法 抑菌性：接种不小于100cfu试验用菌。 促生长能力：接种不大于100cfu试验用菌。
培养时间 可接受标 准
细菌：48h 真菌：72h
细菌不超过72h，真菌不超过5天
固体培养基（与对照培养基）： 50%~200%（0.5~2） 液体培养基（与对照培养基管比较）： 生长良好
建议：培养基呈混浊的液体，或划线于相应的 分离平板上，培养后呈现典型菌落
70%
试验菌
2010版
大肠埃希菌
2015版
铜绿假单胞菌
金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、 白色念珠菌、黑曲霉 白色念珠菌、黑曲霉
(1)胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞 菌、白色念珠菌、黑曲霉。 (2)胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆 菌。 (3)沙氏葡萄糖琼脂：白色念珠菌、黑曲霉。
2010版
(1)PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 (2)PH7.2无菌磷酸盐缓冲液 (3)PH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠 溶制剂）或PH7.6无菌磷酸盐缓冲液 （用于结肠溶制剂）
2015版
(1)PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 (2)PH7.2无菌磷酸盐缓冲液 (3)PH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠 溶制剂）或PH7.6无菌磷酸盐缓 冲液（用于结肠溶制剂） (4)增加胰酪胨大豆肉汤培养基 ●不局限上述稀释液
供试品检查部分-结果判断
2010版
供试品的细菌数、霉菌数和酵母 菌数其中任何一个不符合该品种 项下的规定，应从同一批样品中 随机抽样，独立复试两次，以三 次结果的平均值报告菌数。
2015版
无相关内容描述。在实际操作过 程应依据附录9203药品微生物实 验室质量管理指导原则：结果的 判断和检测报告----异常结果出现 时，应进行偏差调查。
2010版
若营养琼脂培养基上长有霉 菌和酵母菌、玫瑰红钠琼脂 培养基上长有细菌，则应分 别点计霉菌和酵母菌、细菌 菌落数。然后将营养琼脂培 养基上的霉菌和酵母菌数或 玫瑰红钠琼脂培养基上的细 菌数，与玫瑰红钠琼脂培养 基中的霉菌和酵母菌数或营 养琼脂培养基中的细菌数进 行比较，以菌落数高的培养 基中的菌数为计数结果。
控制菌项目变化
培养基体系 2010版
大肠菌群
大肠埃希菌
2015版
耐胆盐革兰阴性菌
大肠埃希菌 沙门菌
明显变化
沙门菌
铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
梭菌
铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
梭菌 白色念珠菌
无明显变化
白色念珠菌
《非无菌产品微生物限度检查： 微生物计数法》
通用要求要点： (1) 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。 本 检查法可采用替代检查方法，包括自动检测法，但必须证明其替代方法 等效于药典规定的检查方法。（9201）药品微生物检验替代方法验证指 导原则 (2) 环境洁净度应符合要求。定期检测：不低于B级的单向流空气区域、工作 台面、环境。参考USP〈1117〉实验室分区原则。 (3) 前处理：供试品的抗菌活性，中和剂和灭活剂的有效性及无毒性。表面 活性剂的无毒性及与相容性。 (4) 方法选择：根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择。（平皿 法、薄膜过滤法和MPN法） (5) 菌种管理：（9203）药品微生物实验室质量管理指导原则关于菌株管理 的要求。 (6) 阴性对照：微生物检查需进行阴性对照试验。如果对照有菌生长，应进 行偏差调查。
需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的总菌落数（包括真 菌菌落数）；霉菌及酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长 的总菌落数（包括细菌菌落数）。若因沙氏葡萄糖琼脂上生长的细 菌使霉菌及酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可使用含抗 生素（如氯霉素、庆大霉素）的沙氏葡萄糖琼脂或选择性培养基 （如玫瑰红钠琼脂培养基）
2015版
（1）描述方式：按计数方法 适用性试验确认计数方法进行 供试品中需氧菌总数、霉菌及 酵母菌总数的测定。 （2）培养条件：胰酪大豆胨 琼脂平板在30~35℃培养3~5天， 沙氏葡萄糖琼脂平板在 20~25℃培养5~7天；MPN法 和供试品接种，所有试验管在 30~35℃培养3天。
供试品检查部分-结果判断
检验结果判断的前提下，应采用能使微生物生长的更高稀释级的 供试液进行方法适用性试验。若方法适用性试验符合要求，应以 该稀释级供试液作为最低稀释级的供试液进行供试品检测。
培养条件
2010版
细菌数：营养琼脂 30℃~35℃ 3天
2015版
需氧菌总数（TAMC）： 胰酪大豆胨琼脂 30℃~35℃ 3~5天
简便、严谨
评价
微生物检测环境变化
2010版
检测环境 应在洁净度10000级背景 下的局部100级单向流空 气区域内进行
2015版
应在受控洁净环境（不低于 D级洁净环境）下的局部洁 净度不低于B级单向流空气 区域内进行
·其他要求：
▷ 检验过程及环境既要最大可能防止样品受污染，又要防止检验过程 对环境和人员造成的危害。 ▷ 活动区域的合理规划及区分，提高微生物实验操作的安全性和可靠 性。
2010版
试 验 菌 株 1、营养琼脂：大肠埃希菌、 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢 杆菌 2、玫瑰红钠琼脂：白色念 珠菌 黑曲霉
2015版
1、胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠 菌、黑曲霉 2、胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌 3、沙氏葡萄糖琼脂：白色念珠菌、黑曲 霉
供试品检查部分-计数标准
2010版
无规定
2015版
增加： 各品种项下要求执行的微生物限度标准解释如下： 101cfu为可接受的最大限度为20； 102cfu为可接受的最大限度为200； 103cfu为可接受的最大限度为2000；以此类推。 若供试品的需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数的检查结果均符 合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不 符合该品种项下的规定，判供试品不符合规定。
白色念珠菌、黑曲霉于20~25℃培养不大于5天。与对照培养基 适用性检查 比较，恢复率在50%~200%之间。 枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌应不得生长。
计数方法适用性试验
1、常用的供试液制备方法 (1)水溶性供试品 (2)水不溶性非油脂类供试品 (3)油脂类供试品 (4)需要特殊方法制备供试液的供试品：①膜剂、②肠溶及结肠溶制剂、③ 气雾剂喷雾剂、④贴剂。
USP36〈1227〉推荐 细菌及酵母菌计数范围:25250cfu/皿 霉菌计数范围：8-80cfu/皿
供源自文库品检查部分 2、培养
2010版
（1）描述方式：计数方 法包括平皿法和薄膜过滤 法，检查时，按已验证计 数方法进行供试品细菌、 霉菌和酵母菌数测定。 （2）培养条件：细菌 30~35℃培养3天，霉菌和 酵母菌23~28℃培养5天， 必要时可适当延长7天。
若采用上述方法还存在一株或多株试验菌的回收达不到要求， 那么选择回收最接近要求的方法和试验条件进行供试品检查。
MPN法的精密度和准确度不及薄膜过滤法和平皿计数法，仅在 供试品需氧菌总数没有适宜计数方法的情况下使用，本法不适 用于霉菌计数。
供试品检查部分 1、操作
2010版 2015版
按计数方法的验证试验确认 按照计数方法适用性试验确 的程序进行供试液的制备， 认的计数方法进行供试品中 用稀释液稀释成1:10、1:102、需氧菌总数、霉菌和酵母菌 1:103等稀释级的供试液 总数的测定。
基于数据 分析和风 险评估制 定标准尽管未超 过标准规 定，但是 有风险。 -累积数 据，建立 风险评估 体系
《非无菌产品微生物限度检查： 控制菌检查法》
通用要求要点： (1)控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存 在特定的微生物。本检查法可采用替代检查方法，包括自动检测 法，但必须证明其替代方法等效于药典规定的检查方法。（9201） 药品微生物检验替代方法验证指导原则。 (2)供试液制备及实验环境要求同《非无菌产品微生物检查：微生物 计数法》参考USP〈1117〉实验室分区原则。 (3)前处理：供试品的抗菌活性，中和剂和灭活剂的有效性及无毒性。 表面活性剂的无毒性及与相容性。 (4)在各控制菌项下：生化实验和“应进行分离、纯化及适宜的鉴定 实验。”改为较少的生化实验或“采用其它适宜方法进一步鉴 定。”
培养基适用性检查
2010版
检查范围
加菌量
2015版
微生物计数用的成品培养基、由脱水培 养基或按处方配制的固体和液体培养基
固体培养基
50~100CFU
不大于100CFU
培养温度 营养琼脂：30~35℃ 胰酪大豆胨琼脂TSA：30~35℃培养 玫瑰红钠：23~28℃ 胰酪大豆胨肉汤TSB： 30~35℃培养
2010版
无规定
2015版
例如：当标准为10cfu，不同于以往10cfu规定的以10的指数规 定标准，考虑了微生物计数结果的可变性，即计数结果的精密 度，而非类似化学检验结果。故要求我们需要在结果判断时或 制定内控标准时，对于结果的判断或历史数据的分析需要用风 险分析的手段进行评估。制定标准时需要依据历史数据，工艺 过程，用药人群等进行相应分析，制定合理的内控标准，即总 原则为在内控标准的控制下产品无任何质量风险。
控制菌结果判断趋向多样化
微生物计数用培养基
2010版
1、营养琼脂用于细菌计数 2、玫瑰红钠用于霉菌和酵母菌计数 3、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂用于酵 母菌计数 4、菌液制备用稀释液：0.9％氯化钠 溶液
2015版
1、胰酪大豆胨琼脂和胰酪大豆胨肉汤用于需氧 菌总数测定 2、沙氏葡萄糖琼脂用于霉菌和酵母菌总数测定 3、沙氏葡萄糖琼脂+抗生素用于细菌超标引起 霉菌和酵母菌总数超标用 4、菌液制备用培养基：PH7.0无菌氯化钠-蛋白 胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液
2015版
若因沙氏葡萄糖琼脂培养基 上生长的细菌使霉菌及酵母 菌的计数结果不符合微生物 限度要求，可使用含抗生素 （如氯霉素、庆大霉素）的 沙氏葡萄糖琼脂培养基或选 择性培养基（如玫瑰红钠琼 脂培养基）进行霉菌和酵母 菌总数测定。使用选择性培 养基时，应进行培养基适用 性检查。如采用MPN法，测 定结果为需氧菌总数。
霉菌及酵母菌数：玫瑰 霉菌及酵母菌总数 红钠琼脂 （TYMC)：沙氏葡萄糖 琼脂 23℃~28℃ 5天 20℃~25℃ 5~7天
结果判断
计数方法 薄膜过滤 法 平皿法 MPN法 结果判断 （试验组菌落数—供试品对照组菌落数）/菌液对 照组菌落数比值应在0.5~2之间 试验组菌数应在菌液对照组菌数的95%置信限内
微生物检查体系的调整
2010版
分类依据 质控分类 检验体系 项目1 按微生物类别分 细菌、真菌 选择培养、或者人为区分 细菌数 营养琼脂
2015版
按营养条件分 需气、厌气菌 直接与培养条件对应 需氧菌总数 胰酪大豆胨琼脂 （TSA）
项目2
霉菌及酵母菌总数 玫瑰红钠琼脂
容易造成漏检
霉菌及酵母菌总数 沙氏葡萄糖琼脂 （SDA)
2、接种和稀释
2010版
试验组 供试液和菌液同时 加入平皿中
2015版
供试液，加入试验菌液，混匀，使 每张滤膜所滤过的供试液中含菌量 不大于100cfu。
供试品 对照组
菌液对 照组 中和剂 对照组
供试液直接加入平 皿中
直接加入菌液到平 皿中 稀释剂对照组
稀释也代替菌液同试验组操作。 （中国药典特殊规定的，协调案无 相关要求）
不含中和剂及灭活剂的相应稀释液 替代供试液，按试验组操作。 中和剂、灭活剂及表面活性剂的稀 释液中加入规定量菌液
接种和稀释
消除供试品的抑菌活性的方法
（1）增加稀释剂和培养基的用量； （2）加入中和剂或灭活剂； （3）采用薄膜过滤法和冲洗； （4）综合上述措施。
●根据供试品须符合的微生物限度标准和菌数报告规则，在不影响
培养基适用性检查
培养基名称 沙氏葡萄糖琼脂+抗生素 （当细菌超标引起霉菌和酵母菌总数超标用） 无菌性检查 取已灭菌的SDA注皿，用于20~25℃培养5~7天，应无菌落生长。 抑菌性检查：枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 试验用菌种 促生长能力：白色念珠菌、黑曲霉 1、庆大霉素：广谱。对G-，G+菌有比较好的抗菌作用 常用抗生素 2、氯霉素：广谱。对G-菌作用强；对G+菌作用不及青霉素与 四环素。 接种方法 抑菌性：接种不小于100cfu试验用菌。 促生长能力：接种不大于100cfu试验用菌。