紫外线对枯草芽孢杆菌诱变共21页文档
紫外线对枯草芽孢杆菌诱变剖析
[5]娄权，陈广平.浸矿微生物紫外诱变选育及浸矿机理研究[J].现代 矿业，2004（2）. 通过微生物的铜离子耐受性培养，选取可以浸出铜离子的酸性浸矿 微生物，并利用紫外线照射对微生物进行诱变培养，培育出一种可 以高效浸出铜离子的酸性浸矿微生物。同时探讨了微生物对铜离子 的耐受性培育和紫外线诱变在高效浸矿微生物选育中的应用，以及 浸矿微生物在矿山中的应用前景。 [6]丁学知，夏立秋.苏云金杆菌高毒力菌株4.0718的快速选育[J].中 国生物防治，2001,17（4）63-166. 不同生态区域的早作地、果园和稻田采集的858份土样中，分离筛 选出苏云垒杆菌30株 选取一株具典型苏云垒杆菌菌落特征和较高杀 虫毒力的菌株70为出发菌株，经紫外线和两次亚硝基胍的交替复合 诱变，显微涂片染色镜检，发现菌体的伴孢晶体的形状、大小、数 量及芽孢与伴孢晶体的比倒与杀虫效力密切相关 以这些特征为参考 进行一佚速韧筛和毒力生测复筛，筛选出一株高毒力突变杀虫菌株 4．0718。该突变袜杀虫毒力与原始菌株相比提高了7．5倍，在6、 12和24h内供试小菜蛾三龄幼虫死亡率分别高达20％ 、97％ 和 100· 此菌株的高效速效杀虫毒力经连续l0代培养能稳定遗传。
实验结论： 实验失败
失败原因分析：细节决定成败
1：制作牛肉膏蛋白胨培养基时，没有调到合适的 PH。 2：培养基灭菌处理没有处理好，导致杂菌没有 灭干净。 3：接种过程中由于在酒精灯上灼烧时间长且 没有完全冷却就进行接种导致菌种被烫死。 培养基培养时没有长出实验中所需菌落。
失败原因
4：紫外线诱变过程及诱变后的稀释操作没有在无菌下进行 在黑暗中培养时间过短。 5：涂平板时离酒精灯远进，导致杂菌进入，最后 菌落没有长出，且其他杂菌生长旺盛。 6：由于以上所有操作都应无菌操作进行，但实际操作没有 做到无菌操作，最后导致平板上菌落较杂，分不清枯草芽 孢杆菌菌落无法计数。
2022年黑龙江职业学院生物制药技术专业《微生物学》期末试卷B(有答案)
2022年黑龙江职业学院生物制药技术专业《微生物学》期末试卷B(有答案）一、填空题1、微生物与人类关系的重要性，你怎么强调都不过分，微生物是一把十分锋利的双刃剑，它们在给人类带来______的同时也带来______。
2、______、______和______等细菌在细胞质内储存有大量的聚-β-羟丁酸（PHB），具有______、______和______等作用。
3、丝状真菌遗传学研究主要是借助有性过程和______过程，并通过遗传分析进行的，而______是丝状真菌，特别是不产生有性孢子的丝状真菌特有的遗传现象。
4、物理灭菌因素的种类很多，例如______、______、______、______、______和______等。
5、叶绿体的构造由______、______和______三部分组成。
6、亚病毒包括______、______、______和______。
7、在菌种资源开发中，筛选菌种的四个步骤为：______、______、______和______。
8、按照对培养基成分的了解，培养基可分为______、______和______。
9、一个葡萄糖分子经EMP途径后，可获得2分子______、2分子______ 和2分子中间代谢物______（其分子式是______）。
10、有两个系统和五种成分参与补体结合反应中，包括______系统的______和______成分，______系统的______和______成分；此外还有一个______成分。
若反应后出现溶血现象，则可说明补体结合反应为______。
二、判断题11、微生物与其他生物之间的关系只有互利或互害的关系。
（）12、用混菌法测微生物活菌数时，每个平皿中的菌液加入量是1ml。
（）13、微生物的次生代谢物是微生物主代谢不畅通时，由支代谢途径产生的。
（）14、至今利用全细胞水解液的糖型来作菌种鉴定的主要微生物，是放线菌。
（）15、螺菌是螺旋状细菌的一类，又称螺旋体。
2022年山西大学生物科学专业《微生物学》期末试卷B(有答案)
2022年山西大学生物科学专业《微生物学》期末试卷B(有答案）一、填空题1、细菌细胞的内含物有______、______、______和______四类。
2、大多数DNA动物病毒的核酸在______复制，蛋白质在______合成，病毒粒子的组装在______完成。
3、巴斯德效应是发生在很多微生物中的现象，当微生物从______转换到______下，糖代谢速率______，这是因为______比发酵作用更加有效地获得能量。
4、微生物的营养类型可分为______、______、______和______。
5、Ainsworth（1973）真菌分类系统将真菌门分成______亚门、______亚门、______亚门、______亚门和______亚门。
6、在微生物学历史上，固体培养基的发明人是______，用于固体培养基的优良凝固剂琼脂的发明人是______。
7、用于微生物大规模液体培养的发酵罐，其主要作用是要为微生物提供______、______、______、______和______等最适培养条件。
8、清水中营养物浓度很低，所以清水中的微生物具有许多共同特征来适应环境，比如______、______和______等。
9、筛选营养缺陷型的四个环节是______、______、______和______。
10、目前对抗体形成机制具有影响力的学说称为______，它是由______（国）的学者______提出的。
二、判断题11、在芽孢萌发前，可用加热等物理或化学处理使其活化，这种活化过程是可逆的。
（）12、从元素水平来看，微生物与动物和植物的要求都很接近，从营养要素的角度来看，它们之间也很相似，故存在“营养上的统一性”。
（）13、在固氮酶的两个组分中，组分Ⅱ（铁蛋白）要比组分Ⅰ（钼铁蛋白）对氧更为敏感。
（）14、在病毒分离时，经盲传3代仍无感染症状出现，便可认定没有病毒存在。
（）15、酵母菌进行有性生殖时产生的有性孢子是孢囊孢子。
2022年浙江工业大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年浙江工业大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、肽聚糖单体是由______和______以______糖苷键结合的______，以及______和______3种成分组成的，其中的糖苷键可被______水解。
2、烟草花叶病毒简称______，外形______状，外层衣壳粒以______时，针方向螺旋状排列成______，具有______功能；核心为______链______。
3、有些乳酸菌因缺乏EMP途径中的______和______等若干重要酶，故其葡萄糖降解需完全依赖______途径。
4、生长因子异养微生物很多，如______、______、______和______ 等。
5、霉菌的气生菌丝可分化出各种类型的子实体，如无性的______、______、______等；有性的______、______和______等。
6、1347年的一场由______引起的瘟疫几乎摧毁了整个欧洲，有1/3的人（约2500万人）死于这场灾难。
7、在现代实验室中研究厌氧菌最有效的“三大件”技术是______、______和______。
8、生物固氮所必需的四个条件是______、______、______和______。
9、普通性转导的基本要求是______，它可能出现的三种后果是______、______和______。
10、决定传染结局的三大因素是______、______和______。
二、判断题11、菌毛是一部分G－细菌特有的、具有运动功能的蛋白质附属物。
（）12、所有碳源物质既可以为微生物生长提供碳素来源，也可以提供能源。
（）13、细菌产生酒精，只有通过ED途径才能达到。
（）14、噬菌体侵染宿主细胞时，蛋白质和核酸同时进入宿主细胞。
（）15、酵母菌细胞壁上所含有的丰富的麦角甾醇，是生产维生素D2的良好原料。
（）16、学名表达的方法有双名法和三名法两种，前者是由一个属名和一个种名加词构成，后者则是由一个属名和由两个种名加词组成的复合词构成。
实验8紫外线对枯草杆菌的诱变效应共18页文档
（4）计算存活率及致死率：
存活率=处理后每毫升活菌数/对照每毫升活菌 数X100%
致死率（%）=1-存活率
结果与讨论 1.紫外线诱变作用的机理是什么？
2.为保证诱变效果，在照射中和照射后的操作应注 意那些问题？
（二）硫酸二乙酯对枯草杆菌的诱变作用
实验目的 1.通过实验观察硫酸二酯对枯草杆菌的诱变效应， 了解化学诱变的机理。 2.掌握化学诱变育种的方法。
本实验以硫酸二乙酯为诱变剂，对能产生淀粉酶的 枯草杆菌进行诱变实验，根据诱变后枯草杆菌在淀粉培养基 上形成透明圈直径的大小来指示诱变效应。
实验原理
化学诱变剂可引起微生物DNA链碱基排列的改变 或是结构的改变，导致了编码氨基酸的变化， 而影响某些蛋白质的合成或酶的活性，使生物 的某一性状发生改变。此改变可稳定地遗传给 后代，形成具有新的遗传性状的菌株。
（2）紫外线处理：10 –5和10–6照射45S，10–3和10-4 照射90S，10–1 和10–2照射180S 。以10–7和10 -8 平板作对照。处理后的平皿用黑纸包好，置37℃ 培养，48h后观察并记录结果。
紫外灯功率为30W，照射距离为30cm
（3）观察诱变效应：取出平皿，分别向菌落分散开 的平板内加卢戈氏碘液数滴，在菌落周围将出现 透明圈，分别测量透明圈与菌落直径并计算其比 值（HC值）。与对照平板进行比较，把明显大于 对照的菌落接到斜面培养保存。
实验8紫外线对枯草杆菌的诱变效应
1、战鼓一响，法律无声。——英国 2、任何法律的根本；不，不成文法本 身就是 讲道理 ……法 律，也 ----即 明示道 理。— —爱·科 克
3、法律是最保险的头盔。——爱·科 克 4、一个国家如果纲纪不正，其国风一 定颓败 。—— 塞内加 5、法律不能使人人平等，但是在法律 面前人 人是平 等的。 ——波 洛克
紫外线对枯草芽孢杆菌生产菌株的诱变与筛选
紫外线对枯草芽孢杆菌生产菌株的诱变与筛选马加强，吴明，马礼鹏，刘博*【摘要】摘要：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种革兰氏阳性菌，具有种类多、分泌蛋白能力强、安全性好等优点，是一种重要工业酶和工业制剂的菌种，被广泛应用于医药、食品、农业、饲料、造纸和纺织等多种领域。
为了进一步提高枯草芽孢杆菌的发酵能力，采用紫外线照射的方法诱导筛选高产菌株。
对通过紫外线诱导提高枯草芽孢杆菌产淀粉酶、蛋白酶、α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase，简称α-ALDC)、3-羟基丁酮(Acetoin)和葡萄糖-1-磷酸(Glucose-1-phosphate，简称G-1-P)能力的条件进行了比较。
【期刊名称】安徽农业科学【年(卷),期】2016(044)017【总页数】4【关键词】枯草芽孢杆菌；紫外线诱导；酶制剂；3-羟基丁酮；葡萄糖-1-磷酸枯草芽孢杆菌是一种革兰氏阳性菌，呈直杆状，内生芽孢，好氧，其菌落不透明，呈白色或微黄色，表面粗糙，可将体内生产的蛋白分泌到胞外。
枯草芽孢杆菌广泛分布于土壤、动植物表面和湖波海洋中，正是因为其生活环境的多样化，可以利用多种环境中丰富的物质，所以细菌体内有丰富的产酶系统，具有产生多种酶的潜力，可以生产蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、果胶酶、β-葡聚糖酶、植酸酶、果胶酶木、聚糖酶、纳豆激酶、维生素、寡糖、小肽、氨基酸、增味剂、葡萄糖-1-磷酸和3-羟基丁酮等，应用于食品、纺织、医药、科研、造纸、皮革、环保与饲料养殖中[1-4]。
枯草芽孢杆菌是经我国农业部认定的2种饲料添加菌种之一，也是美国食品药物管理局(FDA)认定的安全菌种[5]。
枯草芽孢杆菌是工业酶生产的主要菌种之一，仅有由其生产的蛋白酶、淀粉酶。
其中，脂肪酶就占据整个酶市场的50%以上[1,3]。
在食品领域，枯草芽孢杆菌生产的酶占世界食品工业酶总量的60%以上，在我国食品工业酶中由枯草芽孢杆菌生产的酶占85%以上。
紫外线诱变育1
准紫外线诱变育种1.准紫外线诱变育种备孢子悬浮液取新采收的无菌孢子,放入装有生理盐水的三角瓶中(瓶中可放少量玻璃球),摇荡,使孢子分散.孢子液浓度以每毫升含孢子..诱变处理处理要放在能折光的箱中,箱内顶部装15瓦紫外灯管.把孢子液放在培养皿底部.盖好盖,培养皿距灯管30厘米,处理前先开灯30分钟左右,使波长稳定,然后打开皿盖,照射时间为0.5—4分钟(由于各种菌类的孢子不同,照射时间也应有所不同),选定对孢子杀伤在90﹪--99﹪的适当处理时间.照射结束盖上皿盖,稀释,然后取稀释液0.1毫升涂平板,适温黑暗培养,待长出是芒状菌落后立即挑出,供进一步试验用.(二)硫酸二乙脂诱变处理硫酸二乙酯属烷化剂,对人体有毒,使用时要注意安全.1.准备孢子悬浮液同前2.诱变处理取硫酸二乙酯原液2毫升,加乙醇2毫升溶解,吸取0.4毫升硫酸二乙酯溶液放入20毫升孢子悬浮液中,让其作用.作用时间,至数小时不等,选出孢子杀伤在90﹪以上的适当处理时间,采用大量稀适法中止反复.最后取0.1毫升涂平板或斜面,适温培养,挑出星芒状菌落作进一步试验.(三)单孢杂交方法1.分离单孢采集孢子,采用连续稀释法稀释孢子,以达到镜检每视野1---2个孢子为好;涂布平板,,适温培养;挑起单个菌落,继续培养.2.单核菌丝鉴定(1)海登海因氏铁矾苏木精染色法①苏木精处理:取苏木精0.5克,溶于10毫升95%乙醇内,再加90毫升蒸馏水,用纱布扎住瓶口,置光亮处,3—4个月成熟后方能使用.氧化完成的苏木精呈酒红色.为防止苏木精过度氧化,可将苏木精溶于95%乙醇内配成原液,使用前加水稀释.如在乙醇中加少量甘油效果会更好.②媒染液准备:这种染色法要用铁矾作媒染液.配方为铁矾2.5克,溶于100毫升蒸馏水中即可.③褪色剂制备:将上述媒染液加水稀释一倍即可.④铁矾苏木精染色步骤:将石蜡切片从二甲苯经各级乙醇到水,冲洗,媒染1—4小时,蒸馏水洗2—3次,用退色剂处理至镜检细胞核清晰为止.(2)锁状联合鉴定取菌丝镜检,观察3—5个视野,以找不到锁状联合为准,确认为单核菌丝.(3)出菇试验鉴定利用单核菌丝不结实的特征,相同条件下以双核菌丝作对照鉴定单核菌丝.3.杂交采用两点接种法进行杂交,杂交可在平板上也可在试管内进行.方法是将两个不同亲本的单核菌丝分别接种在平板或试管斜面上,两点相距1厘米左右,适温培养,待两亲本菌丝生长入空白试管斜面,培养.镜检有无锁状联合,如有锁状联合说明已杂交上,留下作出菇筛选.4.初筛,复筛,中试推广取有锁状联合的试管,扩制原种,栽培种,进行小面积出菇筛选,为初筛.把初筛中综合性状表现较好的菌株扩大面积进行复筛,选出优良菌株作中试推广.(四)多孢杂交方法1.亲本孢子萌发时间测试分别制备两亲本孢子悬浮液,同时分别接入培养基上,适温培养,定时观察孢子萌动情况,纪录萌动时间.2.孢子杂交根据亲本孢子萌动时间,同时(孢子萌动时间基本一致)或先后接入孢子液同一试管斜面上,培养,当两亲本菌丝接触,发生自然杂交.培养过程中经常检查,见有单菌落出现就挑出,接入马铃薯葡萄糖培养基上培养.3.拮抗试验取杂交菌株与两亲本作3点拮抗试验,选取有2条拮抗线的菌株扩大培养,作初筛,复筛,中试推广.(五)原生质体融合所谓原生质体是细胞去除细胞壁后的细胞核和细胞质的部分.原生质体融合则是把具有一定遗传标记的两种不同遗传类型的原生质体,通过细胞核和细胞质的融合,进行遗传重组成为新的类型的一种方法.它是生物技术领域的重大突破,它为远缘杂交育种开辟了新的途径.1.原生质体制备(1)培养适龄的菌丝体可以用液体培养,也可用试管斜面培养,一般要求生长旺盛的幼嫩菌丝体.如香菇原生质体制备采用25℃液体培养,也可用试管斜面培养4天的菌丝体最佳.培养基以马铃薯葡萄糖酵母粉培养基为最好,不但菌丝生长不好,同时原生质体释放量有也大.(2)酶系统与酶浓度选择真菌细胞壁的主要成分是纤维素、半纤维素和几丁质等多糖物质,合适的脱壁酶系统是这些多糖物质降解的关键,常用的有溶壁酶、脱壁酶、蜗牛酶等.中国科学院广东微生物研究所研制的脱壁酶具有较好的酶解效果,香菇菌丝脱壁采用1%脱壁酶,其原生质释放量可达到10/7%毫升以上 . (3)渗透压稳定剂选择脱去细胞壁的原生质体必须在相应的渗透压条件下才不至于破裂,因此,合适的渗透压稳定剂是影响菌丝释放原生质体的重要因素.常用的有0.6摩/升氯化钾、0.6摩/升硫酸镁及0.6摩/升甘露醇.香菇菌丝脱壁的渗透压稳定剂以0.6摩/升氯化钾或0.6摩/升硫酸镁为宜,原生质释放量均在10/7/毫升以上.(4)酸碱度一般担子菌的脱壁在中性条件下效果最好,香菇则要在较酸[氢离子浓度100微摩/升(PH4)]的酶解反应系统中才能达到高的脱壁率.2.原生质体再生脱壁的原生质体虽然失去原有的形态而变成球形,但细胞质膜和整个基因团仍然存在,它具有原来的生理功能,在适宜的条件下,细胞壁能在形成,恢复为一个细胞,在培养基上形成菌落,这就是再生.再生培养基有麦芽糖10%,葡萄糖4%,酵母粉4%(MDY)；麦芽糖10%,葡萄糖4%,酵母粉4%,菌丝提取液15%(MDYM);纤维二糖1.5%,蛋白胨0.2%,菌丝提取液20%.香菇原生质体再生方法:将制备好的原生质体经过滤和洗涤后,置于再生培养基MDYM中浅层培养(25℃),2天后把开始萌动的原生质体涂布在固体再生培养基表面,经10至15天后即开始出现微小的再生菌落,把这些菌落转移到马铃薯葡萄糖琼脂培养基上培养,10至14天可长满斜面.再生滤可达10%左右,若采用再生培养基MDY,则再生率只有1%左右,说明不同营养成分对原生殖体再生的影响.再在生培养中,渗透压稳定剂以蔗糖为好.3原生质体融合(以香菇为例) 将两个单核亲本的原生质体以1：1混合(每个原生质体数目在5×10/6毫升以上),混匀后缓慢加入等体积的聚乙二醇溶液[ 聚乙二醇溶液4000,30%,10毫摩/升氯化钙 ,氢离子浓度3136纳摩/升(PH5.5)],与24℃静止30分钟,用0.05摩/升甘氨酸,50毫摩/ 升氯化钙,氢离子浓度 0.316纳摩/升(PH9.5)的缓冲液冲洗2至3次,稀释后取0.1毫升放入0.5%软琼脂融合子再生培养基中,混匀后把它薄薄地铺在 1.5%琼脂的融合子再生培养平板上,25℃培养.4. 融合子的检出于鉴定待培养基上出现肉眼可见的微小再生菌落时,将其分别转移到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上,镜检菌丝有无锁状联合.融合子的鉴定可做以下试验:镜检有无锁状联合;融合子与亲本菌株的拮抗试验;酯酶同工酶谱;多酚氧化酶谱;DNA扩增仪分析;出菇试验.㈥单核和同核原生质体杂方法由于单核和同和原生质体是直接来源于营养菌丝 ,没有经过减数分裂的无性后代,所以这一材料为食用菌的遗传和育种研究提供了一个十分重要的基础材料.单核和同核原生质体与孢子单核体相比,有它自己的特点:它是自己从菌丝体得到的;只存在两种交配型(亲本型AXBX,AYBY);在菌落形态、菌丝生长速度﹑羧甲基纤维素酶相对活性和酯酶同工酶这4种性状上,都具有相对的稳定性,变异范围小,亲本性状不易在单核原生质体中分散和稀释,这就可以使人们在一个比较小的变异范围内去选择具有亲本性状的单核体.单核原生质体的这一特点在食用菌菌种改良中具有重要意义,同时也为遗传育种中充分利用野生种质资源提供了一个十分光明的前景.杂交的具体方法:同前法制备原生质体.分别取不同亲本的单核原生质体进行杂交(杂交方法同单孢杂交),得到杂交株后进行初筛﹑复筛,中试推广.(七)单双核杂交方法选用两个亲本,其中一个用其双核菌丝,另一个分离单核原生质体,在平板上先接种单核原生质体,待菌落长到1厘米左右时,相距0.5∽1厘米处接种双核菌丝,适温培养.数天后,挑取单核菌丝一边.少许菌丝镜检,如有锁状联合,说明已杂交成功,可行扩管培养,进行筛选.四﹑基因工程育种基因工程就是基因水平上的遗传工程.它是用人工方法把人们所需要的某一供体生物的遗传物质---- 脱氧核糖核酸(DNA)大分子提取出来,在离体条件下切割后,把它和作为载体的脱氧核糖核酸分子连接起来,然后导入某一受体细胞中,以让外来的遗传物质在其中“安家落户”,进行正常的复制和表达,从而获得符合人们预先设计要求的新物种.基因工程主要包括以下步骤︰准备材料,如“目的”基因﹑载体及工具酶等;体外重组;载体传递﹑复制表达.基因工程育种在医﹑工﹑农方面有较多的研究,食用菌育种上研究甚少.。
2022年中国海洋大学微生物学专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年中国海洋大学微生物学专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、第一个用自制显微镜观察到微生物的学者是______，被称为微生物学研究的先驱者，而法国学者______和德国学者______则是微生物生理学和病原菌学研究的开创者。
2、芽孢有许多结构层次，自外至内为______、______、______、______、______、______和______。
3、Avery和他的合作者分别用降解DNA、RNA和蛋白质的酶作用于有毒的S型细胞抽提物，然后分别与______混合，结果发现，只有DNA被酶解而遭到破坏的抽提物无转化活性，说明DNA是转化所必须的转化因子。
4、利用干燥对微生物影响的原理，在日常生活中常用______、______ 和______等方法保存食物。
5、酵母菌中，有性生殖可以产生的孢子有______孢子或______孢子。
6、血凝抑制试验是根据特异性的病毒抗体与病毒表面蛋白作用可能抑制______性质设计的。
7、海洋细菌有______、______、______和______等共同特征。
8、化能异养菌以______获得能量，以______作为碳源，并将其还原为新的有机物。
9、一个葡萄糖分子在有氧条件下，经过不同的代谢途径最终会产生不同数量的ATP，例如经EMP途径可净产______个ATP，经HMP途径产______个ATP，经ED途径产______个ATP，而经EMP＋TCA途径则可产______个ATP。
10、人体的白细胞种类很多，它们在免疫防御中具有重要作用，例如，具有吞噬功能的如______、______、______和______；无吞噬功能但在特异性免疫中作用极其重要的有两种，即______与______。
二、判断题11、黄曲霉毒素是著名的致癌剂，人或动物摄入足够剂量后，不必经过体内代谢活化即可诱导肝癌的发生。
（）12、促进扩散可实现营养物从外界环境中逆浓度梯度输入到细胞内。
7微生物诱发突变(紫外线法)2019
观察诱变效率
选取CFU数在5-6个的处理后涂布的 平板观察诱变效应：
分别向平板内加碘液数滴，在菌落周 围将出现透明圈。分别测量透明圈直径 与菌落直径并计算其比值（HC比值）。
与对照平板相比较，说明诱变效应， 并选取HC比值大的菌落移接到试管斜 面上培养。
微生物诱发突变 （紫外线法）
生物制药系 2019年11月
一、实验目的
通过实验观察紫外线对枯草芽孢杆菌的诱变效应，并 掌握基本方法。
二、实验原理
生物的遗传信息的改变是通过基因突变、 基因重组和基因转移来进行的。基因突变， 又称点突变，包括自发突变和诱发突变。许 多物理因素、化学因素和生物因素对微生物 都有诱变作用，这些能使突变率提高到自发 突变水平以上的因素称为诱变剂。
此斜面可作复筛用。
观察，根据实验结果填写下表。
平均CFU数/皿稀释倍数 处理时间/min
0（对照）
紫外线诱变结果
10-4
10-5
10-6
存活率/%
致死率 /%
1 3
诱变效应记录表
HC比值 菌落
1
2
3
4
诱变剂
56
UV
对照
六、思考题
1.用紫外线进行诱变时，为什么要打开皿盖？为什么要在 红光下操作，暗环境下培养？ 2.分析你的实验结果： 你是否获得了比对照株产淀粉酶更高的突变株？试分析 其可能的原因。 从你的实验结果中，说明致死率与诱变效应的相关性。
五、实验结果
1.观察及计数
将培养好的平板取出进行细菌计数。根据对照平板上CFU数， 计算出每毫升菌液中的CFU数。 同样计算出紫外线处理1min和3min后的CFU数及致死率。 ★每毫升样品中菌落形成单位数（CFU） =同一稀释度2次重复的平均菌落数×稀释倍数×10
【2019年整理】紫外线诱变育种
紫外线诱变选育α-淀粉高产菌株一、实验目的1.学习菌种的物理因素诱变育种基本技术。
2.通过诱变技术筛选出高产ɑ-淀粉酶的菌株。
二、实验原理紫外线是一种最常用有效的物理诱变因素，其诱变效应主要是由于它引起DNA结构的改变而形成突变型。
紫外线诱变，一般采用15W或30W紫外线灯，照射距离为20-30cm，照射时间依菌种而异，一般为1-3min，死亡率控制在50％-80％为宜。
被照射处理的细胞，必须呈均匀分散的单细胞悬浮液状态，以利于均匀接触诱变剂，并可减少不纯种的出现。
同时，对于细菌细胞的生理状态则要求培养至对数期为最好。
本实验以紫外线处理产淀粉酶的枯草杆菌，通过透明圈法初筛，选择淀粉酶活力高的生产菌株。
三、实验材料1.菌种产淀粉酶枯草芽孢杆菌2.器材装有15W或30W紫外灯的超净工作台、电磁力搅拌器（含转子）、低速离心机、培养皿、涂布器、10m L离心管、（1、5、10m L）吸管、250m L三角瓶、恒温摇床、培养箱、直尺、棉签、橡皮手套、洗耳球3.培养基和试剂①无菌水、75%酒精②0.5％碘液碘片1g、碘化钾2g、蒸馏水200m L，先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘片全部溶解后，加足水即可。
③选择培养基可溶性淀粉2g，牛肉膏1g，N a C l0.5g，琼脂2g，蒸馏水100m L，p H6.8～7.0，121℃灭菌20m i n。
④肉汤培养基牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，N a C l0.5g，蒸馏水100m L，p H7.2～7.4，121℃灭菌20m i n。
四、实验步骤1.菌体培养取枯草芽孢杆菌一环接种于盛有20m L肉汤培养基的250m L三角瓶中，于37℃振荡培养12h，即为对数期的菌种。
2.菌悬液的制备取5m L发酵液于10m L离心管中，以3000r/m i n离心10m i n，弃去上清液。
加入无菌水9m L，振荡洗涤，离心10m i n，弃去上清液。
2022年中国海洋大学生物技术专业《微生物学》期末试卷B(有答案)
2022年中国海洋大学生物技术专业《微生物学》期末试卷B(有答案）一、填空题1、细菌的鞭毛是由______构成的，它从______长出，穿过______伸出体外。
2、烈性噬菌体生活史可分五个阶段，即______、______、______、______和______。
3、一切生物，在新陈代谢的本质上既存在着高度的______，又存在着明显的______。
4、对培养基pH进行内源调节的主要方式是借______调节和以______作备用碱调节两种；外源调节是根据实际需要从外界流加______或______液调节培养液的pH值。
5、我国自古以来就利用曲霉做发酵食品，如利用______的蛋白分解能力作酱，利用______的糖化能力制米酒。
6、微生物与人类关系的重要性，你怎么强调都不过分，微生物是一把十分锋利的双刃剑，它们在给人类带来______的同时也带来______。
7、由于升汞（HgCl2）有腐蚀作用，所以不能用于______消毒，特别是______制品。
8、微生物间和微生物与它种生物间的主要关系有五种，即______、______、______、______、______。
9、进行自然转化的必要条件为______和______。
10、当前已开发的新型疫苗有______、______、______、______、______和______等。
二、判断题11、古生菌细胞壁假肽聚糖上的糖链与真细菌肽聚糖的糖链一样，都可以被溶菌酶水解。
（）12、大多数放线菌和真菌都是氨基酸自养型生物。
（）13、EMP途径主要存在于厌氧生活的细菌中。
（）14、当前在人类的传染病中，病毒性病原体已占70%～80%，故它是人类健康的重大敌人。
（）15、卵孢子的数量决定于与藏卵器交配的雄器中细胞核的数量。
（）16、“三域学说”是根据对大量微生物DNA的测定后而提出的。
（）17、在相同作用温度下，湿热灭菌法比干热灭菌法的灭菌效果更好。
2021年西南大学微生物学专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2021年西南大学微生物学专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、根据分裂方式及排列的不同，球菌分有______、______、______、______、______和______等，螺旋菌又有______、______和______，及其他形态的细菌有______、______、______和______。
2、大多数DNA动物病毒的核酸在______复制，蛋白质在______合成，病毒粒子的组装在______完成。
3、在无氧条件下，葡萄糖经EMP途径后形成的终产物______可被进一步还原成______，也可先通过脱羧作用形成______，然后再被还原成______。
4、通常牛肉膏蛋白胨培养基适合于培养______、应将pH调至______；高氏一号培养基适合于培养______、应将pH调至______；马丁氏培养基合于培养______、pH为______；马铃薯葡萄糖培养基适合于培养______、pH为______。
5、霉菌的气生菌丝可分化出各种类型的子实体，如无性的______、______、______等；有性的______、______和______等。
6、我国古代劳动人民在微生物应用方面的主要贡献是发明用______独特工艺加工______原料以生产______。
7、在微生物的生产实践中，为获得优良接种体（“种子”），多取用______期的培养物；为获得大量菌体，多取用______期的培养物；为取得高产量的次生代谢产物，多取用______期的培养物。
8、磷的生物地球化学循环包括3种基本过程：______、______、______。
9、在诱变工作中，常用的物理诱变剂如______、______和______等；化学诱变剂如______、______、______和______等，其中的______ 有“超诱变剂”之称。
10、免疫细胞主要包括______、______、______和______等，它们均来自骨髓多能______。
实验8紫外线对枯草杆菌的诱变效应
（2）紫外线处理：10 –5和10–6照射45S，10–3和10-4
照射90S，10–1 和10–2照射180S 。以10–7和10 培养，48h后观察并记录结果。
紫外灯功率为30W，照射距离为30cm
-8
平板作对照。处理后的平皿用黑纸包好，置37℃
（3）观察诱变效应：取出平皿，分别向菌落分散开
的平板内加卢戈氏碘液数滴，在菌落周围将出现
注意：硫酸二乙酯有毒，不能接触皮肤，操作时可戴上 一次性乳胶手套。
对照：以同样操作取未经硫酸二乙酯处理的菌液稀
释涂平板（10–3，10–4，10–5各涂2块板）
5.计数：将培养24-48 h后的平板取出进行细胞计数，
并计算出诱变处理15min和30 min后的存活率。
6.观察诱变效应：分别向菌落分散开的平板内滴加 碘液数滴，菌落周围将出现透明圈，分别量5组
2.稀释：取摇瓶培养至对数期的菌液（菌液浓度为
10 8 -10 10 ）0.5 ml 入4.5 ml 生理盐水中，进行10 倍稀释，稀释度为10 –1 - 10 –8 。 3.涂布：取10 –1 - 10 –8的菌液各100 ul涂平板，每个 稀释度涂平板2只。
4.紫外线处理： （1）在暗室或红光下进行紫外线处理。预先打开紫 外灯照射15min ,使光波稳定。
紫外线诱变的主要作用是使细菌DNA链中相邻二个 嘧啶核苷酸形成二聚体，并阻碍双链的解开和复
制，从而引起基因突变，最终导致表型的变化。
受紫外线损伤的DNA，能被可见光复活，因此，经诱变处
理过的微生物样品需用黑纸或黑布包裹以避免可见光的
照射。另外，照射处理后的孢子液不要储放太久，以免 突变在黑暗中修复。
实验器材
1.紫外照射箱、37℃恒温培养箱、取液器、 2.无菌平板、试管、无菌涂棒、酒精灯、记号笔、黑纸、 试 管架、无菌吸头等
2022年西安交通大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年西安交通大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、芽孢的形成须经过7个阶段，它们是______、______、______、______、______、______和______。
2、烈性噬菌体生活史可分五个阶段，即______、______、______、______和______。
3、微生物有两种同化CO2的方式：______和______。
自养微生物固定CO2的途径主要有3条：卡尔文循环途径，可分为______、______和 ______3个阶段；还原性三羧酸途径，通过逆向的三羧酸循环途径进行，多数酶与正向三羧酸循环途径相同，只有依赖于ATP的______是个例外；乙酰辅酶A途径，存在于甲烷产生菌、硫酸还原菌和在发酵过程中将CO2转变乙酸的细菌中，非循环式CO2固定的产物是______和______。
4、从元素水平来看，微生物的有机氮源有______和______两类，无机氮源则有______、______和______三类。
5、典型蕈菌的子实体是由顶部的______、中部的______和基部的______三部分组成。
6、细菌分类鉴定的主要文献是______。
7、厌氧菌的固体培养方法有：______、______、______、______和______。
8、由霉腐微生物引起的材料劣变有______、______、______和______ 等多种。
9、细菌的质粒种类很多，其中接合性质粒如______，抗药性质粒如______，产细菌素质粒如______，诱癌质粒如______，诱生不定根的质粒如______，执行固氮的质粒如______，降解性质粒如______等。
10、补体的本质是一类______，它能被任何一种______所激活，然后发挥其______、______和______等作用。
二、判断题11、芽孢在细菌细胞体内的不同部位均可随意着生。
（）12、在基团转位运输方式中，除了在运输过程中物质发生化学变化这一特点外，其他特征均与主动运输方式相同。
2022年陕西中医药大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年陕西中医药大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、衣原体的特点是：______、______、______、______、______和______等。
2、影响噬菌体吸附作用的内外因素有______、______、______和______等。
3、Calvin循环可分______、______和______3个阶段。
4、碳源对微生物的功能是______和______，微生物可用的碳源物质主要有______、______、______、______、______和______等。
5、真核生物鞭毛杆的横切面为______型，其基体横切面则为______ 型，这类鞭毛的运动方式是______。
6、被誉为微生物学奠基人的是______世纪、______国的______；而细菌学的奠基人则为______国的______。
7、通常按工业发酵中菌种是否被载体固定，人为地分为______发酵和______发酵。
8、微生物寄生于其他微生物的例子如______、______；微生物寄生于植物的例子如______；微生物寄生于动物的例子如______。
9、微生物转录水平的调控一般都是蛋白质或某些小分子物质对基因转录的阻遏或激活，而在翻译水平上也发现了类似的______作用。
10、．常用的减毒活疫苗有______、______和______等。
二、判断题11、处于萌发阶段的芽孢，具有很强的感受态。
（）12、培养营养缺陷型微生物的培养基必须同时加入维生素、氨基酸、嘌呤及嘧啶。
（）13、支持细胞大量生长的碳源，可能会变成次级代谢的阻遏物。
（）14、嗜肝DNA病毒和逆转录病毒的基因组复制均存在逆转录过程。
（）15、葡枝根霉和有性根霉的区别是：前者靠异宗配合产生接合孢子，后者靠同宗配合产生接合孢子。
（）16、菌株的概念与克隆的概念相差甚远。
（）17、稀释平板测数时，真菌的计数标准是选择每皿中菌落数在10～100 个的稀释度进行计数。
2022年延安大学生物科学专业《微生物学》期末试卷B(有答案)
2022年延安大学生物科学专业《微生物学》期末试卷B(有答案）一、填空题1、细菌的染色方法有______、______和______。
其中鉴别染色法又可分为______、______、______和______。
2、病毒的存在范围是病毒能够感染并在其中复制的______。
3、微生物生物氧化的过程可以分为______、______和______三个阶段。
4、实验室配制固体培养基的操作程序是______、______、______、______、______、______、______。
5、真核生物的细胞核由______、______、______和______等构成。
6、1347年的一场由______引起的瘟疫几乎摧毁了整个欧洲，有1/3的人（约2500万人）死于这场灾难。
7、在微生物培养过程中，会发生不利于其继续生长的pH变化，一般可采取两类方法作外源调节：① ______，过酸时可加入______或______ 等调节；过碱时，可加入______或______等调节；② ______，过酸时可通过______或______调节，过碱时可通过______或______调节。
8、有机污染物生物降解过程中经历的主要反应包括______，______， ______和______。
9、当细菌处于一种氨基酸全面匮乏的“氨基酸饥饿”状态时，细菌会采取一种应急反应以求生存，实施这一应急反应的信号，大量合成两种物质，它们是：______和______。
10、T细胞在识别抗原的同时也识别自身______。
二、判断题11、细菌的鞭毛是通过“挥鞭”方式而推动细胞运动的。
（）12、病毒、类病毒和朊病毒因其是活细胞内寄生物，不能在人工培养基上培养，故属于难养菌。
（）13、环丝氨酸和青霉素抑制肽聚糖生物合成的机制，都属于代谢类似物对酶的活性中心发生竞争性抑制作用这一类。
（）14、在病毒分离时，经盲传3代仍无感染症状出现，便可认定没有病毒存在。
紫外线对枯草芽孢杆菌诱变共21页文档
16、自己选择的路、跪着也要把它走 完。 17、一般情况下)不想三年以后的事， 只想现 在的事 。现在 有成就 ，以后 才能更 辉煌。
18、敢于向黑暗宣战的人，心里必须 充满光 明。 19、学习的关键--重复。
20、懦弱的人只会裹足不前，莽撞的 人只能 引为烧 身，只 有真正 勇敢的 人才能 所向披 靡。
46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫扎特
2022年江西农业大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年江西农业大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、蓝细菌和黏细菌不能在液体中自由活动，但可以在固体表面上______，这是由于______而进行的。
2、病毒的外壳为______，核心为______，两者共同组成______；有些较复杂的病毒还含有包膜，主要由______或______组成。
3、厌氧乙酰-CoA途径又称______途径，这种非循环式的CO2固定机制主要存在于一些______、______和______等化能自养细菌中。
4、在营养物质运输中既消耗能量又需要载体的运输方式是______和______。
5、酵母菌一般具有以下五个特点：① ______，② ______，③ ______，④ ______和⑤______。
6、在微生物促进人类医疗保健事业发展过程中，曾发生过“六大战役”，即______，______，______，______，______，______。
7、常用的防腐方法有______、______、______和______等。
8、在自然界中存在许多极端环境，并进化出与这类环境相适应的各种极端微生物，如______、______、______、______、______、______和______等。
9、紫外线对微生物DNA的损伤，主要产生______，通过______和______等可修复DNA的损伤。
10、免疫细胞主要包括______、______、______和______等，它们均来自骨髓多能______。
二、判断题11、菌毛一般着生于G＋致病细菌的细胞表面。
（）12、琼脂的熔化温度是80℃以上，凝固温度是45℃以下。
（）13、大量服用抗生素的患者同时要服用维生素，这是因为肠道微生物受到了抑制，减少了维生素的合成。
（）14、TMV病毒是由约50%ssRNA核心和约50%蛋白质衣壳所组成。
（）15、真核微生物染色质中的组蛋白，都是以八聚体形式存在于核小体中。
紫外线对枯草芽孢杆菌诱变
实验结论： 实验失败
失败原因分析：细节决定成败
1：制作牛肉膏蛋白胨培养基时，没有调到合适的 PH。 2：培养基灭菌处理没有处理好，导致杂菌没有 灭干净。 3：接种过程中由于在酒精灯上灼烧时间长且 没有完全冷却就进行接种导致菌种被烫死。 培养基培养时没有长出实验中所需菌落。
失败原因
4：紫外线诱变过程及诱变后的稀释操作没有在无菌下进行 在黑暗中培养时间过短。 5：涂平板时离酒精灯远进，导致杂菌进入，最后 菌落没有长出，且其他杂菌生长旺盛。 6：由于以上所有操作都应无菌操作进行，但实际操作没有 做到无菌操作，最后导致平板上菌落较杂，分不清枯草芽 孢杆菌菌落无法计数。
[5]娄权，陈广平.浸矿微生物紫外诱变选育及浸矿机理研究[J].现代 矿业，2004（2）. 通过微生物的铜离子耐受性培养，选取可以浸出铜离子的酸性浸矿 微生物，并利用紫外线照射对微生物进行诱变培养，培育出一种可 以高效浸出铜离子的酸性浸矿微生物。同时探讨了微生物对铜离子 的耐受性培育和紫外线诱变在高效浸矿微生物选育中的应用，以及 浸矿微生物在矿山中的应用前景。 [6]丁学知，夏立秋.苏云金杆菌高毒力菌株4.0718的快速选育[J].中 国生物防治，2001,17（4）63-166. 不同生态区域的早作地、果园和稻田采集的858份土样中，分离筛 选出苏云垒杆菌30株 选取一株具典型苏云垒杆菌菌落特征和较高杀 虫毒力的菌株70为出发菌株，经紫外线和两次亚硝基胍的交替复合 诱变，显微涂片染色镜检，发现菌体的伴孢晶体的形状、大小、数 量及芽孢与伴孢晶体的比倒与杀虫效力密切相关 以这些特征为参考 进行一佚速韧筛和毒力生测复筛，筛选出一株高毒力突变杀虫菌株 4．0718。该突变袜杀虫毒力与原始菌株相比提高了7．5倍，在6、 12和24h内供试小菜蛾三龄幼虫死亡率分别高达20％ 、97％ 和 100· 此菌株的高效速效杀虫毒力经连续l0代培养能稳定遗传。