紫外线对枯草芽孢杆菌诱变共19页
2022年湖南农业大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年湖南农业大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、产甲烷细菌的细胞壁不含______，它属于______。
2、病毒的外壳为______，核心为______，两者共同组成______；有些较复杂的病毒还含有包膜，主要由______或______组成。
3、从葡萄糖开始的肽聚糖生物合成过程中，最重要的4种中间代谢物是______、______、______和______。
4、化能自养型和化能异养型微生物，生长所需的能量前者来自于______的氧化放能，而后者则来自于______的氧化放能；生长所需的碳源前者以______为主，后者则以______为主要来源。
5、霉菌的气生菌丝可分化出各种类型的子实体，如无性的______、______、______等；有性的______、______和______等。
6、微生物从发现到现在的短短的300年间，特别是20世纪中期以后，已在人类的生活和生产实践中得到广泛的应用，并形成了继动、植物两大生物产业后的______。
7、微生物的生长温度三基点分别是：______、______和______。
8、植物根际微生物对植物有益的方面有______、______、______和 ______等。
9、筛选营养缺陷型的四个环节是______、______、______和______。
10、抗原与抗体间有八类主要反应，例如______、______、______和______等。
二、判断题11、产芽孢细菌的种类很多，尤其是G－细菌更多。
（）12、稀释测数用的无菌水通常是由自来水灭菌而成。
（）13、与乳酸发酵分成同型、异型相似，微生物的酒精发酵也有同型与异型之分。
（）14、DNA病毒以双链为多，而RNA病毒以单链为多。
（）15、青霉菌根据分生孢子梗的排列可分为两类，即一轮青霉和多轮青霉。
（）16、菌株的概念与克隆的概念相差甚远。
（）17、在各种微生物生长和代谢过程中，都会引起培养基pH发生不利于此过程的变化。
2022年信阳师范学院生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年信阳师范学院生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、放线菌既可以以______繁殖，也可以以______繁殖，______繁殖是放线菌的主要繁殖方式。
2、病毒的非增殖性感染有______、______和______3种类型。
3、在豆血红蛋白分子中，其蛋白质部分由______所触发，再由______ 的基因进行编码和合成；而血红素部分则由______所触发，再由______ 基因进行编码和合成。
4、化能有机营养型微生物的能源是______，氢供体是______，基本碳源是______，其代表性微生物是______和______等。
5、真菌菌丝具有的功能是______和______。
6、人类对微生物的发现和认识，比对动、植物晚得多，其原因是微生物具有______、______、______和______四个特点。
7、巴氏消毒法的具体方法很多，主要可分为两类，即______和______。
8、微生物生态学是生态学的一个分支，它的研究对象是______与其周围的______和______环境条件间的相互作用规律。
9、艾姆斯试验中用的菌种是______的营养缺陷型______，通过回复突变可以测定待测样品中______的存在。
10、病原菌主要通过______、______和______等的作用在宿主体内繁殖与扩散。
二、判断题11、细菌的鞭毛是通过其顶端生长而非基部生长而伸长的。
（）12、被动扩散是微生物细胞吸收营养物质的主要方式。
（）13、反硝化作用是化能自养微生物以硝酸或亚硝酸盐为电子受体进行的无氧呼吸。
（）14、TMV衣壳是由许多衣壳粒所构成，衣壳粒是以逆时针方向螺旋排列在核心外围的。
（）15、伞菌的担子是一个细胞，而木耳的担子由三个横隔分成四个细胞。
（）16、菌物界是指广义的真菌界，包括黏菌门、假菌门和真菌门（狭义的真菌）3部分。
（）17、可采用高压灭菌对抗体进行灭菌。
（）18、微生物与其他生物之间的关系只有互利或互害的关系。
2022年北京林业大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年北京林业大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、原核微生物包括有______、______、______和______等，真核微生物包括有______、______、______和______等，它们的大小以______单位来表示。
2、马铃薯纺锤形块茎病的病原体是______；苜蓿暂时性条斑病的病原体是______；疯牛病的病原体是______；SARS的病原体是______，艾滋病的病原体是______，禽流感的病原体是______。
3、硝化细菌是属于______营养型微生物，它们的碳源是______。
其中亚硝酸细菌能够将______氧化为______，硝酸细菌则能够将______氧化为______，从而获得能量。
它们用于还原CO2的NADH2，是在消耗大量 ______的情况下，通过______的方式而产生，这也是它们生长缓慢和生长得率低的原因之一。
4、一般而言，微生物在含糖基质上生长，会产生______，而使______；微生物分解蛋白质或氨基酸会产生______，而使______。
5、曲霉分生孢子头的构造为：分生孢子梗的基部有一特征性的______，向上则分化出______、______、______和______，这四种总称为______。
6、在微生物促进人类医疗保健事业发展过程中，曾发生过“六大战役”，即______，______，______，______，______，______。
7、有的葡萄酒酿制，其发酵的微生物就是从其原料______而来，葡萄果皮上的微生物来自于葡萄园的______。
8、硝化作用需要在严格的______条件下进行，而反硝化作用则需要在______条件下进行。
9、典型质粒的核酸分子是______，存在于质粒上的特定基因，使微生物获得了若干特殊功能，如______、______、______、______、______ 或______等。
紫外线对枯草芽孢杆菌诱变剖析
[5]娄权，陈广平.浸矿微生物紫外诱变选育及浸矿机理研究[J].现代 矿业，2004（2）. 通过微生物的铜离子耐受性培养，选取可以浸出铜离子的酸性浸矿 微生物，并利用紫外线照射对微生物进行诱变培养，培育出一种可 以高效浸出铜离子的酸性浸矿微生物。同时探讨了微生物对铜离子 的耐受性培育和紫外线诱变在高效浸矿微生物选育中的应用，以及 浸矿微生物在矿山中的应用前景。 [6]丁学知，夏立秋.苏云金杆菌高毒力菌株4.0718的快速选育[J].中 国生物防治，2001,17（4）63-166. 不同生态区域的早作地、果园和稻田采集的858份土样中，分离筛 选出苏云垒杆菌30株 选取一株具典型苏云垒杆菌菌落特征和较高杀 虫毒力的菌株70为出发菌株，经紫外线和两次亚硝基胍的交替复合 诱变，显微涂片染色镜检，发现菌体的伴孢晶体的形状、大小、数 量及芽孢与伴孢晶体的比倒与杀虫效力密切相关 以这些特征为参考 进行一佚速韧筛和毒力生测复筛，筛选出一株高毒力突变杀虫菌株 4．0718。该突变袜杀虫毒力与原始菌株相比提高了7．5倍，在6、 12和24h内供试小菜蛾三龄幼虫死亡率分别高达20％ 、97％ 和 100· 此菌株的高效速效杀虫毒力经连续l0代培养能稳定遗传。
实验结论： 实验失败
失败原因分析：细节决定成败
1：制作牛肉膏蛋白胨培养基时，没有调到合适的 PH。 2：培养基灭菌处理没有处理好，导致杂菌没有 灭干净。 3：接种过程中由于在酒精灯上灼烧时间长且 没有完全冷却就进行接种导致菌种被烫死。 培养基培养时没有长出实验中所需菌落。
失败原因
4：紫外线诱变过程及诱变后的稀释操作没有在无菌下进行 在黑暗中培养时间过短。 5：涂平板时离酒精灯远进，导致杂菌进入，最后 菌落没有长出，且其他杂菌生长旺盛。 6：由于以上所有操作都应无菌操作进行，但实际操作没有 做到无菌操作，最后导致平板上菌落较杂，分不清枯草芽 孢杆菌菌落无法计数。
2022年山西大学生物科学专业《微生物学》期末试卷B(有答案)
2022年山西大学生物科学专业《微生物学》期末试卷B(有答案）一、填空题1、细菌细胞的内含物有______、______、______和______四类。
2、大多数DNA动物病毒的核酸在______复制，蛋白质在______合成，病毒粒子的组装在______完成。
3、巴斯德效应是发生在很多微生物中的现象，当微生物从______转换到______下，糖代谢速率______，这是因为______比发酵作用更加有效地获得能量。
4、微生物的营养类型可分为______、______、______和______。
5、Ainsworth（1973）真菌分类系统将真菌门分成______亚门、______亚门、______亚门、______亚门和______亚门。
6、在微生物学历史上，固体培养基的发明人是______，用于固体培养基的优良凝固剂琼脂的发明人是______。
7、用于微生物大规模液体培养的发酵罐，其主要作用是要为微生物提供______、______、______、______和______等最适培养条件。
8、清水中营养物浓度很低，所以清水中的微生物具有许多共同特征来适应环境，比如______、______和______等。
9、筛选营养缺陷型的四个环节是______、______、______和______。
10、目前对抗体形成机制具有影响力的学说称为______，它是由______（国）的学者______提出的。
二、判断题11、在芽孢萌发前，可用加热等物理或化学处理使其活化，这种活化过程是可逆的。
（）12、从元素水平来看，微生物与动物和植物的要求都很接近，从营养要素的角度来看，它们之间也很相似，故存在“营养上的统一性”。
（）13、在固氮酶的两个组分中，组分Ⅱ（铁蛋白）要比组分Ⅰ（钼铁蛋白）对氧更为敏感。
（）14、在病毒分离时，经盲传3代仍无感染症状出现，便可认定没有病毒存在。
（）15、酵母菌进行有性生殖时产生的有性孢子是孢囊孢子。
实验8紫外线对枯草杆菌的诱变效应共18页文档
（4）计算存活率及致死率：
存活率=处理后每毫升活菌数/对照每毫升活菌 数X100%
致死率（%）=1-存活率
结果与讨论 1.紫外线诱变作用的机理是什么？
2.为保证诱变效果，在照射中和照射后的操作应注 意那些问题？
（二）硫酸二乙酯对枯草杆菌的诱变作用
实验目的 1.通过实验观察硫酸二酯对枯草杆菌的诱变效应， 了解化学诱变的机理。 2.掌握化学诱变育种的方法。
本实验以硫酸二乙酯为诱变剂，对能产生淀粉酶的 枯草杆菌进行诱变实验，根据诱变后枯草杆菌在淀粉培养基 上形成透明圈直径的大小来指示诱变效应。
实验原理
化学诱变剂可引起微生物DNA链碱基排列的改变 或是结构的改变，导致了编码氨基酸的变化， 而影响某些蛋白质的合成或酶的活性，使生物 的某一性状发生改变。此改变可稳定地遗传给 后代，形成具有新的遗传性状的菌株。
（2）紫外线处理：10 –5和10–6照射45S，10–3和10-4 照射90S，10–1 和10–2照射180S 。以10–7和10 -8 平板作对照。处理后的平皿用黑纸包好，置37℃ 培养，48h后观察并记录结果。
紫外灯功率为30W，照射距离为30cm
（3）观察诱变效应：取出平皿，分别向菌落分散开 的平板内加卢戈氏碘液数滴，在菌落周围将出现 透明圈，分别测量透明圈与菌落直径并计算其比 值（HC值）。与对照平板进行比较，把明显大于 对照的菌落接到斜面培养保存。
实验8紫外线对枯草杆菌的诱变效应
1、战鼓一响，法律无声。——英国 2、任何法律的根本；不，不成文法本 身就是 讲道理 ……法 律，也 ----即 明示道 理。— —爱·科 克
3、法律是最保险的头盔。——爱·科 克 4、一个国家如果纲纪不正，其国风一 定颓败 。—— 塞内加 5、法律不能使人人平等，但是在法律 面前人 人是平 等的。 ——波 洛克
2021年吉林大学微生物学专业《微生物学》期末试卷B(有答案)
2021年吉林大学微生物学专业《微生物学》期末试卷B(有答案）一、填空题1、在细胞质内贮藏有大量聚-β-羟基丁酸（PHB）的细菌有______、______、______和______等。
2、纯化的病毒制备物应保持其______和______。
3、次级代谢是微生物生长至______或______，以______为前体，合成一些对微生物自身生命活动无明确生理功能的物质的过程。
次级代谢产物大多是分子结构比较复杂的化合物，如______、______、______、______、______及______等多种类别。
4、不能在人工培养基上生长的微生物称为______，例如______、______和______等。
5、真菌是不含有______素、______营养，以______进行繁殖的真核微生物。
6、著名的微生物学家Roger Stanier提出，确定微生物学领域不应只是根据微生物的大小，而且也应该根据有别于动、植物的______。
7、酵母菌经______作活体染色后，活细胞在光学显微镜下呈______ 色，死细胞呈______色；细菌经______染色后，活细胞在紫外光显微镜下会发出______色荧光，死细胞则发出______色荧光。
8、一般来说，在土壤中，各种微生物含量按递减顺序排列如下：______、______、______、______、______和______。
9、线粒体的核糖体在大小上类似于原核生物的核糖体，线粒体与细菌之间的近缘关系，支持真核的细胞器（线粒体、叶绿体）是由______演化出来的假设。
10、T细胞在识别抗原的同时也识别自身______。
二、判断题11、细菌的芽孢和孢囊都是休眠细胞，都具有相同的抗热性、抗辐射、抗干燥能力。
（）12、Na＋，K＋-ATP酶利用ATP的能量将胞内K＋“泵”出胞外，而将胞外Na＋“泵”入胞内。
（）13、环丝氨酸和青霉素抑制肽聚糖生物合成的机制，都属于代谢类似物对酶的活性中心发生竞争性抑制作用这一类。
紫外线对枯草芽孢杆菌生产菌株的诱变与筛选
紫外线对枯草芽孢杆菌生产菌株的诱变与筛选马加强，吴明，马礼鹏，刘博*【摘要】摘要：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种革兰氏阳性菌，具有种类多、分泌蛋白能力强、安全性好等优点，是一种重要工业酶和工业制剂的菌种，被广泛应用于医药、食品、农业、饲料、造纸和纺织等多种领域。
为了进一步提高枯草芽孢杆菌的发酵能力，采用紫外线照射的方法诱导筛选高产菌株。
对通过紫外线诱导提高枯草芽孢杆菌产淀粉酶、蛋白酶、α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase，简称α-ALDC)、3-羟基丁酮(Acetoin)和葡萄糖-1-磷酸(Glucose-1-phosphate，简称G-1-P)能力的条件进行了比较。
【期刊名称】安徽农业科学【年(卷),期】2016(044)017【总页数】4【关键词】枯草芽孢杆菌；紫外线诱导；酶制剂；3-羟基丁酮；葡萄糖-1-磷酸枯草芽孢杆菌是一种革兰氏阳性菌，呈直杆状，内生芽孢，好氧，其菌落不透明，呈白色或微黄色，表面粗糙，可将体内生产的蛋白分泌到胞外。
枯草芽孢杆菌广泛分布于土壤、动植物表面和湖波海洋中，正是因为其生活环境的多样化，可以利用多种环境中丰富的物质，所以细菌体内有丰富的产酶系统，具有产生多种酶的潜力，可以生产蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、果胶酶、β-葡聚糖酶、植酸酶、果胶酶木、聚糖酶、纳豆激酶、维生素、寡糖、小肽、氨基酸、增味剂、葡萄糖-1-磷酸和3-羟基丁酮等，应用于食品、纺织、医药、科研、造纸、皮革、环保与饲料养殖中[1-4]。
枯草芽孢杆菌是经我国农业部认定的2种饲料添加菌种之一，也是美国食品药物管理局(FDA)认定的安全菌种[5]。
枯草芽孢杆菌是工业酶生产的主要菌种之一，仅有由其生产的蛋白酶、淀粉酶。
其中，脂肪酶就占据整个酶市场的50%以上[1,3]。
在食品领域，枯草芽孢杆菌生产的酶占世界食品工业酶总量的60%以上，在我国食品工业酶中由枯草芽孢杆菌生产的酶占85%以上。
2022年中国海洋大学微生物学专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年中国海洋大学微生物学专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、第一个用自制显微镜观察到微生物的学者是______，被称为微生物学研究的先驱者，而法国学者______和德国学者______则是微生物生理学和病原菌学研究的开创者。
2、芽孢有许多结构层次，自外至内为______、______、______、______、______、______和______。
3、Avery和他的合作者分别用降解DNA、RNA和蛋白质的酶作用于有毒的S型细胞抽提物，然后分别与______混合，结果发现，只有DNA被酶解而遭到破坏的抽提物无转化活性，说明DNA是转化所必须的转化因子。
4、利用干燥对微生物影响的原理，在日常生活中常用______、______ 和______等方法保存食物。
5、酵母菌中，有性生殖可以产生的孢子有______孢子或______孢子。
6、血凝抑制试验是根据特异性的病毒抗体与病毒表面蛋白作用可能抑制______性质设计的。
7、海洋细菌有______、______、______和______等共同特征。
8、化能异养菌以______获得能量，以______作为碳源，并将其还原为新的有机物。
9、一个葡萄糖分子在有氧条件下，经过不同的代谢途径最终会产生不同数量的ATP，例如经EMP途径可净产______个ATP，经HMP途径产______个ATP，经ED途径产______个ATP，而经EMP＋TCA途径则可产______个ATP。
10、人体的白细胞种类很多，它们在免疫防御中具有重要作用，例如，具有吞噬功能的如______、______、______和______；无吞噬功能但在特异性免疫中作用极其重要的有两种，即______与______。
二、判断题11、黄曲霉毒素是著名的致癌剂，人或动物摄入足够剂量后，不必经过体内代谢活化即可诱导肝癌的发生。
（）12、促进扩散可实现营养物从外界环境中逆浓度梯度输入到细胞内。
2021年扬州大学微生物学专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2021年扬州大学微生物学专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、常见的球菌类细菌的代表属有______，______，______等。
2、大多数DNA动物病毒的核酸在______复制，蛋白质在______合成，病毒粒子的组装在______完成。
3、在豆血红蛋白分子中，其蛋白质部分由______所触发，再由______ 的基因进行编码和合成；而血红素部分则由______所触发，再由______ 基因进行编码和合成。
4、按照对培养基成分的了解，培养基可分为______、______和______。
5、蕈菌从其______、______、______、______和______等方面来考察，证明它是典型的微生物，其大型子实体相当于其他真菌的______。
6、微生物与人类关系的重要性，你怎么强调都不过分，微生物是一把十分锋利的双刃剑，它们在给人类带来______的同时也带来______。
7、E.coli的代时约为______min，一个细胞经2h繁殖后，可变为______ 个；Saccharomyces cerevisiae的代时约为______min，一个细胞经6h分裂后，可变为______个。
8、沼气发酵的过程可分三个阶段，即______、______和______，其中第三阶段的主要菌种是______。
9、外源DNA导入原核细胞可以采用以下3种方法：______方法，即重组质粒载体导入感受态细胞；______方法，即重组噬菌体DNA或重组噬菌质粒导入感受态细胞；______方法，即外源DNA被包装成λ噬菌体颗粒导入宿主细胞。
10、在免疫学反应中，抗原抗体反应的一般规律是______、______、______、______、______。
二、判断题11、因支原体的细胞大小接近病毒，故具有滤过性。
（）12、在EMB培养基中，伊红美蓝的作用是促进大肠杆菌的生长。
（）13、无氧呼吸是一类在无氧条件下进行的、产能效率较低的特殊呼吸。
7微生物诱发突变(紫外线法)2019
观察诱变效率
选取CFU数在5-6个的处理后涂布的 平板观察诱变效应：
分别向平板内加碘液数滴，在菌落周 围将出现透明圈。分别测量透明圈直径 与菌落直径并计算其比值（HC比值）。
与对照平板相比较，说明诱变效应， 并选取HC比值大的菌落移接到试管斜 面上培养。
微生物诱发突变 （紫外线法）
生物制药系 2019年11月
一、实验目的
通过实验观察紫外线对枯草芽孢杆菌的诱变效应，并 掌握基本方法。
二、实验原理
生物的遗传信息的改变是通过基因突变、 基因重组和基因转移来进行的。基因突变， 又称点突变，包括自发突变和诱发突变。许 多物理因素、化学因素和生物因素对微生物 都有诱变作用，这些能使突变率提高到自发 突变水平以上的因素称为诱变剂。
此斜面可作复筛用。
观察，根据实验结果填写下表。
平均CFU数/皿稀释倍数 处理时间/min
0（对照）
紫外线诱变结果
10-4
10-5
10-6
存活率/%
致死率 /%
1 3
诱变效应记录表
HC比值 菌落
1
2
3
4
诱变剂
56
UV
对照
六、思考题
1.用紫外线进行诱变时，为什么要打开皿盖？为什么要在 红光下操作，暗环境下培养？ 2.分析你的实验结果： 你是否获得了比对照株产淀粉酶更高的突变株？试分析 其可能的原因。 从你的实验结果中，说明致死率与诱变效应的相关性。
五、实验结果
1.观察及计数
将培养好的平板取出进行细菌计数。根据对照平板上CFU数， 计算出每毫升菌液中的CFU数。 同样计算出紫外线处理1min和3min后的CFU数及致死率。 ★每毫升样品中菌落形成单位数（CFU） =同一稀释度2次重复的平均菌落数×稀释倍数×10
2022年哈尔滨师范大学微生物学专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年哈尔滨师范大学微生物学专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、古生菌包括______、______和______等。
2、支原体因缺乏细胞壁，故出现一系列其他特征，包括______、______、______和______等。
3、四种引起细菌基因重组的方式是______、______、______和______。
4、在微生物培养过程中，会发生不利于其继续生长的pH变化，一般可采取两类方法作外源调节：① ______，过酸时可加入______或______ 等调节；过碱时，可加入______或______等调节；② ______，过酸时可通过______或______调节，过碱时可通过______或______调节。
5、Ainsworth（1973）真菌分类系统将真菌门分成______亚门、______亚门、______亚门、______亚门和______亚门。
6、影响噬菌体吸附作用的内外因素有______、______、______和______等。
7、常用的污水处理装置有两种，一是利用______进行处理的______，另一是利用______进行处理的______。
8、通常牛肉膏蛋白胨培养基适合于培养______、应将pH调至______；高氏一号培养基适合于培养______、应将pH调至______；马丁氏培养基合于培养______、pH为______；马铃薯葡萄糖培养基适合于培养______、pH为______。
9、光能自养微生物有产氧与不产氧两大类，前者如______等，后者如______等。
10、免疫应答过程可分三个阶段，即______、______和______。
二、判断题11、江河水体中微生物的种类和数量受所流经两岸土壤的影响很大。
（）12、大多数真菌需要高碳氮比的营养物，而动物致病细菌需要低碳氮比的营养物。
（）13、凡能进行硝酸盐呼吸的细菌，都存在着一条完整的呼吸链。
枯草芽孢杆菌8-32拮抗菌株的紫外诱变选育
枯草芽孢杆菌8-32拮抗菌株的紫外诱变选育高同国;贾天瑶;郭晓军;张冬冬;朱宝成【摘要】为了获得更高拮抗活性的菌株,以对大豆根腐病病原菌具有较强拮抗作用的Bacillus subtilis8-32为实验材料,采用紫外线诱变方法选育具有更高拮抗活性菌株.紫外诱变条件为30 W紫外线,15 cm辐射距离,诱变时间4 min.结果表明,经初筛和复筛,从诱变后菌落形态差异显著的100个菌株中,筛选得到3株(YB-1,YB-2和YB-3)拮抗活性明显增强的菌株,其拮抗活性与对照相比分别提高了50％,55％和50％,并且传代培养10次后其活性保持不变,说明诱变菌株YB-1,YB-2和YB-3遗传性状稳定.【期刊名称】《河北大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(035)006【总页数】6页(P610-615)【关键词】大豆根腐病;枯草芽孢杆菌;尖孢镰刀菌;紫外诱变【作者】高同国;贾天瑶;郭晓军;张冬冬;朱宝成【作者单位】河北农业大学生命科学学院,河北保定071001;河北农业大学生命科学学院,河北保定071001;河北农业大学生命科学学院,河北保定071001;河北农业大学生命科学学院,河北保定071001;河北农业大学生命科学学院,河北保定071001【正文语种】中文【中图分类】Q933第一作者：高同国(1984-)，男，河北邢台人，河北农业大学讲师，博士，主要从事植物真菌病害及生物防治研究.E-mail：**************大豆是世界上重要的粮食及经济作物，近些年由于重茬、迎茬比例不断增加，大豆根腐病日趋严重，成为制约大豆生产的主要病害之一.仅黑龙江垦区大豆根腐病发病率就为75%~90%，感病品种产量损失为5%~10%，严重可达90%以上，有的甚至绝产[1]，给我国经济带来严重损失.大豆根腐病(soybean root rot)是大豆根部和茎部疾病的统称[2]，是一种根治困难、危害严重的常发性土传病害.大豆根腐病在整个生长期都有可能发生，病原菌通过浸染植株的根、茎、叶以及部分豆荚，引起根和茎的腐烂、植株矮化、枯萎,最终导致大豆死亡.大豆根腐病的致病菌有多种，其中以尖孢镰刀菌为主要致病菌[3].目前，对大豆根腐病的治疗主要依靠化学农药，但化学农药的使用造成严重的环境污染，所以生物防治土传染疾病逐渐引起大家的关注[4],并且由于细菌自身的优点，在生物防治中展现出良好的发展前景，因此，用生物来防治疾病的研究与开发有着重要的意义[5-7].目前用于生物防治的菌株中研究最多的是芽孢杆菌属(Bacillus sp.)和假单胞菌属(pseudomonas sp.)，芽孢杆菌可以产生内生芽孢，抗逆能力强，繁殖速度快，营养要求简单，易定殖在植物表面，其逐渐成为世界上生防细菌研究的重点.如Zhang等[8]采用拌种和根施2种方法研究了10株枯草芽孢杆菌在防治镰刀菌引起的根腐病上的效果，其中4株细菌对根腐病的防治效果达到43%~63%.芽孢杆菌BH1对尖孢镰刀菌引起的大豆根腐病的田间防效达56.1%，大豆增产7.6%[9-10]；细菌 BRF-1可促进大豆幼苗生长，在豆长连、重1年和正茬土壤上，对大豆根腐病的防治效果分别达 53.9%,34.4%和 15.8%[11].上述研究均表明芽孢杆菌可以有效地防治大豆根腐病的发生，目前可用于大豆根腐病的商业菌剂中的菌种以枯草芽孢杆菌为主，如Bio safe，Companion，HiStick N/T等[12]，但这些产品主要集中在美国等发达国家，国内对大豆根腐病的防治虽然取得了一定的进展，但是有效的商业化菌剂依然很少.在前期工作中，以大豆根腐病病原菌——尖孢镰刀菌为指示菌，从实验室保存的237株细菌中筛选得到1株对尖孢镰刀菌具有明显拮抗作用的菌株Bacillus subtilis 8-32，平板对峙实验表明其抑菌圈直径达21.62 mm，孢子萌发抑制率达42.5%~71.6%，温室生防效果显示该菌株使大豆根腐病病情指数降低了32.08%.为进一步提高其拮抗能力，本实验拟通过对枯草芽孢杆菌(B.subtilis)8-32进行紫外诱变，筛选出具有更强拮抗性能的菌株，为8-32菌剂的开发及大豆根腐病的防治奠定基础.生防细菌：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 8-32(本实验室筛选保藏).大豆根腐病病原真菌：尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)(由中国科学院东北地理与农业生态研究院王光华教授提供).1.2.1 菌种活化尖孢镰刀菌的活化：取保存好的尖孢镰刀菌斜面1支，挑取1块菌落接种在PDA 培养基平板上，倒置放在28 ℃的培养箱中培养，培养3~5 d.枯草芽孢杆菌的活化：取实验室保存好的枯草芽孢杆菌斜面1支，用划线的方法接种在NA培养基平板上，倒置放在37 ℃的培养箱中培养，培养1~2 d.1.2.2 枯草芽孢杆菌8-32生长曲线的测定用竹签挑取活化好的枯草芽孢杆菌，接种到NB培养基中，37 ℃，180 r/min震荡培养12 h.再按1%的接种量接种到新鲜的NB培养基中，37 ℃，180 r/min震荡培养，并每隔2 h取样，测定样品在600 nm波长下的吸光度，并绘制生长曲线[13-14].1.2.3 紫外诱变方法本实验采用分光光度法对枯草芽孢杆菌8-32的生长曲线进行测定，结果见图1.结果显示：0~2 h菌体处于调整期，2~20 h菌体处于对数期，20~90 h菌体处于稳定期；90 h以后菌体死亡速率大于生长速率，菌体处于衰亡期.本实验选取对数期的菌体进行研究，选择生长7 h(对数生长初期)的菌体作为研究对象.根据生长曲线，对培养7 h的菌体进行紫外诱变，在30 W紫外灯，辐射距离15 cm条件下，以NA为培养基，采用梯度稀释涂布平板方法，研究不同辐射时间对8-32菌体存活数量的影响，结果见图2和图3.由图2可知，随着紫外照射时间的延长菌体的存活率越来越低.通过对图2平皿上的菌体计数，计算出不同诱变时间下菌体的存活数量，绘制存活率曲线.由图3可知，当诱变时间为1 min时，其存活率为66.40%，2 min的存活率为26.60%，4 min的存活率为17.5%.对诱变处理4 min，避光培养24 h后形态不同的菌体进行筛选.通过对100个形态不同的菌株进行筛选，得到3株抑菌效果较强的菌株，筛选结果如图4.结果显示：与对照菌相比较，YB-1,YB-2和YB-3的抑菌效果都有所增加，将这3株菌进行保藏并对其复筛，进一步研究其抑菌作用.采用琼脂扩散抑菌圈法对初筛得到的3株抑菌活性较高的菌株(YB-1，YB-2，YB-3)进行复筛，结果见图5.结果表明，诱变后得到的3株细菌YB-1,YB-2和YB-3的抑菌圈直径与对照菌相比较都有明显的增大.与对照菌相比较，YB-1，YB-2和YB-3抑菌圈的平均直径分别增加了50%，55%和50%.对复筛得到的3株抑菌活性较高的菌株进行连续传代培养， YB-1，YB-2和YB-3连续传10代后分别标记为YB-1-C，YB-2-C和YB-3-C.采用琼脂扩散抑菌圈法对传代后的菌株进行稳定检测(图6)，结果显示经过传代培养10代以后，抑菌圈大小未有明显改变，说明本实验筛选得到的3株菌株的高产性状可以稳定遗传.大豆根腐病是引起大豆减产的主要原因之一，生物防治因其高效、安全、无污染等优点越来越引起人们的重视.采用紫外线进行诱变育种是生防菌株常用的育种方法之一，如王静等[16]对枯草芽孢杆菌 B47进行了2次紫外诱变选育，诱变后其菌株对西瓜枯萎病病菌的拮抗能力提高37.5%~68.8%，贾洁等[17]采用紫外诱变后其菌株对大肠杆菌的抗菌活性提高58.49%.本研究通过紫外诱变选育方法也成功筛选出3株拮抗活性明显提高的菌株，其活性与诱变前相比分别提高了50%，55%和50%，并且该3株细菌遗传性状稳定.但研究中未能对突变株的生防效果进行跟踪实验，也未能明确突变株产生的拮抗物质和抗菌谱是否发生了改变，上述问题还需要进一步深入研究.综上所述，本研究通过紫外诱变技术选育出3株具有更高拮抗能力的菌株YB-1，YB-2和YB-3，其拮抗活性分别提高50%，55%和50%，且3株细菌的遗传稳定性良好.[1] 王佳. 大豆根腐病生防菌的鉴定及发酵条件的优化[D]. 哈尔滨:黑龙江大学, 2010： 9-10.WANG Jia. Identification of biocontrol strain against to soybean root rot an d fermentation conditions optimization [D]. Haerbin: Heilongjiang Universi ty, 2010： 9-10.[2] 许艳丽, 战丽莉, 李春杰, 等. 大豆病害发生特点和综合防治技术[J]. 大豆科技, 2009(3):15-17.[3] 刘辉. 黑河地区大豆根腐病防治措施[J]. 种子世界, 2014(4):51-52.[4]JOHN M， WHIPPS. Microbial interactions and biocontrol in the rhizosphere [J]. Journal of Experimental Botany, 2001,52:487-511.[5]ELIZABETH A B, EMMERT, JO HANDELSMAN. Biocontrol of plant disease:a (Gram-) positive perspective[J].FEMS Microbiology Letters,1999,171:1-9. [6]CHEN Yun, YAN Fang, CHAI Yunrong, et al. Biocontrol of tomato wilt diseas e by Bacillus subtilis isolates from natural environments depends on conser ved genes mediating biofilm formation [J]. Environmental Microbiology, 20 13, 15(3): 848-864.[7] 张彦杰, 罗俊彩, 武燕萍, 等. 生防枯草芽孢杆菌研究进展[J].生命科学仪器, 2009,7(4):19-23.ZHANG Yanjie, LUO Juncai, WU Yanping, et al. Research advancement of the biological control bacteria B.subtilies[J]. Life Science Instruments, 2009,7(4):19-23.[8]ZHANG Jinxiu, XUE A G, TAMBONG J T. Evaluation of seed and soil treatme nts with novel Bacillus subtilis strains for control of soybean root rot caused by Fusarium oxysporum and F. graminearum [J]. Plant Disease, 2009, 93(12):1317-1323.[9] 郭荣君,刘杏忠,杨怀文,等.芽孢杆菌BH1防治大豆根腐病的效果及机制[J].中国生物防治,2003,19(4):180-184.GUO Rongjun, LIU Xingzhong, YANG Huaiwen, et al. Mechanism of Rhizob acteria BH1 (Bacillus sp .) to suppress soybean root rot disease caused by F usarium spp [J] . Chinese Journal of Biological Control, 2003, 19(4):180-184.[10] 郭荣君, 刘杏忠, 杨怀文. 大豆根际细菌I拮抗大豆根腐病菌研究[J]. 大豆科学, 1998, 17(l):53-58.GUO Rongjun, LIU Xingzhong, YANG Huaiwen. Soybean Rhizobacteria I studies control of soybean root rot disease [J]. Soybean Science, 1998, 17(l):53 -58.[11] 王光华, 周克琴, 张秋英, 等. 拮抗细菌 BRF-1 对几种植物病原真菌的抗生效果[J]. 中国生物防治, 2003, 19(2):73-77.WANG Guanghua, ZHOU Keqin, ZHANG Qiuying, et al. Antagonism of Bacil lus strain BRF-1 against plant pathogenic fungi [J]. Chinese Journal of Biological Control, 2003, 19(2):73-77.[12] CAWOY H, BETTIOL W, FICKERS P, et al. Bacillus-based biological control of plant diseases//STOYTCHEVA M. Pesticides in t he modern world-pesticides use and management [J]. InTech, Rijeka, 2011, 273-302. [13] 牛春华, 高岩, 李玉秋, 等. 紫外诱变选育高产蛋白酶枯草芽孢杆菌[J].中国酿造, 2011(12):67-69.NIU Chunhua, GAO Yan, LI Yuqiu, et al. Selection of high protease-producing strain of Bacillus subtilis by UV mutation [J]. China Brewing, 201 1(12):67-69.[14] 牛春华,丁东红,徐文静,等.用玉米浆发酵生产类胡萝卜素红酵母的紫外诱变选育[J].中国酿造, 2010(1):61-63.NIU Chunhua, DING Donghong, XU Wenjing, et al. Mutation and selection of carotenoid-producing Rhodotorula [J]. China Brewing, 2010(1):61-63.[15] 施巧琴, 吴松刚. 工业微生物育种学[M]. 北京:科学出版社,2003.[16] 王静, 朱建华, 林纬, 等. 枯草芽孢杆菌 B47 高产拮抗物质菌株的紫外诱变选育[J]. 安徽农业科学, 2008, 36(33): 14642-14644.WANG Jing, ZHU Jianhua, LIN Wei, et al. Screening for the strain highly pro ducing antagonistic substance from Bacillus subtilis B47 by UV Mutageneis is [J]. Journal of Anhui Agricultural Sciences, 2008, 36(33):14642-14644. [17] 贾洁, 郭小华, 惠明, 等. 枯草芽孢杆菌 R21-4 的诱变育种及其抗菌蛋白性质的研究[J]. 食品工业科技, 2006, 26(11): 53-56.【相关文献】1.2.4 检测平板的制备将约20 mL灭菌PDA培养基倒入培养皿中，作为底层培养基.取5 mL无菌水倒入病原菌活化平板并用接种针刮取孢子制成菌悬液，将菌悬液倒入45 ℃左右的灭菌PDA培养基，混匀铺板，作为上层培养基,待平板冷却后制成含有病原菌的PDA检测平板.1.2.5 枯草芽孢杆菌的诱变及筛选根据致死率曲线选择致死率为80%~90%的诱变时间对枯草芽孢杆菌进行诱变，步骤同1.2.3.挑取紫外诱变后形态特征不同的枯草芽孢杆菌单菌落，用十字划线的方法接种在尖孢镰刀菌鉴定平板上，进行初筛.将平板倒置放在28 ℃的培养箱中培养48~72 h，观察并挑选出抑菌圈比较大的单菌落进行复筛.采用琼脂扩散抑菌圈法对初筛后抑菌圈比较大的菌体进行复筛.首先对初筛后的菌体进行液体发酵培养24 h，然后将发酵液4 000 r/min离心20 min，取上清液加入所打的孔中，放在28 ℃的培养箱中培养48~72 h，观察并测量抑菌圈的直径，计算抑菌圈增长率.1.2.6 遗传稳定性测定将复筛后抑菌圈比较大的菌株(YB-1，YB-2，YB-3)进行传代培养，用竹签挑取经过复筛后抑菌圈比较明显的单菌落，用划线的方法接种在NA培养基平板上，培养24 h，重复10次，即完成传代培养10代.对传代培养10代以后的菌株发酵培养24 h，采用琼脂扩散抑菌法观察抑菌圈的变化情况，同时与出发菌株的抑菌圈进行比较，分析此菌株的稳定性.。
2022年东北林业大学微生物学专业《微生物学》期末试卷B(有答案)
2022年东北林业大学微生物学专业《微生物学》期末试卷B(有答案）一、填空题1、革兰氏阳性细菌细胞壁的主要成分为______和______，而革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分则是______、______、______和______。
2、大多数DNA动物病毒的核酸在______复制，蛋白质在______合成，病毒粒子的组装在______完成。
3、从生态类型来分，固氮菌可以分为三类，即______、______和______。
4、微生物在培养基中生长时，由于其______而使培养基______发生改变；所以在配制培养基时，为维持该条件的相对恒定，常在培养基中加入缓冲物质如______或______。
5、真菌生长在基质内的菌丝称为______，其功能主要是______，伸出基质外的菌丝称为______，其功能主要是______。
6、我国古代劳动人民在微生物应用方面的主要贡献是发明用______独特工艺加工______原料以生产______。
7、影响微生物生长的主要因素有______、______、______、______和______等。
8、一般来说，在土壤中，各种微生物含量按递减顺序排列如下：______、______、______、______、______和______。
9、基因突变的自发性和不对应性曾有三个著名实验予以证明，它们是______等人的______，______的______，以及______等的______。
10、生理上的屏障结构有______和______。
二、判断题11、在G＋细菌细胞膜上，是找不到磷脂酰胆碱的。
（）12、琼脂的熔化温度是80℃以上，凝固温度是45℃以下。
（）13、硫细菌、铁细菌和硝化细菌等化能自养菌不能通过Calvin循环进行CO2的固定。
（）14、大肠杆菌的λ噬菌体是一种典型的温和噬菌体。
（）15、真菌在液体培养时常会形成对发酵生产不利的菌丝球。
（）16、学名表达的方法有双名法和三名法两种，前者是由一个属名和一个种名加词构成，后者则是由一个属名和由两个种名加词组成的复合词构成。
实验8紫外线对枯草杆菌的诱变效应
（2）紫外线处理：10 –5和10–6照射45S，10–3和10-4
照射90S，10–1 和10–2照射180S 。以10–7和10 培养，48h后观察并记录结果。
紫外灯功率为30W，照射距离为30cm
-8
平板作对照。处理后的平皿用黑纸包好，置37℃
（3）观察诱变效应：取出平皿，分别向菌落分散开
的平板内加卢戈氏碘液数滴，在菌落周围将出现
注意：硫酸二乙酯有毒，不能接触皮肤，操作时可戴上 一次性乳胶手套。
对照：以同样操作取未经硫酸二乙酯处理的菌液稀
释涂平板（10–3，10–4，10–5各涂2块板）
5.计数：将培养24-48 h后的平板取出进行细胞计数，
并计算出诱变处理15min和30 min后的存活率。
6.观察诱变效应：分别向菌落分散开的平板内滴加 碘液数滴，菌落周围将出现透明圈，分别量5组
2.稀释：取摇瓶培养至对数期的菌液（菌液浓度为
10 8 -10 10 ）0.5 ml 入4.5 ml 生理盐水中，进行10 倍稀释，稀释度为10 –1 - 10 –8 。 3.涂布：取10 –1 - 10 –8的菌液各100 ul涂平板，每个 稀释度涂平板2只。
4.紫外线处理： （1）在暗室或红光下进行紫外线处理。预先打开紫 外灯照射15min ,使光波稳定。
紫外线诱变的主要作用是使细菌DNA链中相邻二个 嘧啶核苷酸形成二聚体，并阻碍双链的解开和复
制，从而引起基因突变，最终导致表型的变化。
受紫外线损伤的DNA，能被可见光复活，因此，经诱变处
理过的微生物样品需用黑纸或黑布包裹以避免可见光的
照射。另外，照射处理后的孢子液不要储放太久，以免 突变在黑暗中修复。
实验器材
1.紫外照射箱、37℃恒温培养箱、取液器、 2.无菌平板、试管、无菌涂棒、酒精灯、记号笔、黑纸、 试 管架、无菌吸头等
2022年西安交通大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年西安交通大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、芽孢的形成须经过7个阶段，它们是______、______、______、______、______、______和______。
2、烈性噬菌体生活史可分五个阶段，即______、______、______、______和______。
3、微生物有两种同化CO2的方式：______和______。
自养微生物固定CO2的途径主要有3条：卡尔文循环途径，可分为______、______和 ______3个阶段；还原性三羧酸途径，通过逆向的三羧酸循环途径进行，多数酶与正向三羧酸循环途径相同，只有依赖于ATP的______是个例外；乙酰辅酶A途径，存在于甲烷产生菌、硫酸还原菌和在发酵过程中将CO2转变乙酸的细菌中，非循环式CO2固定的产物是______和______。
4、从元素水平来看，微生物的有机氮源有______和______两类，无机氮源则有______、______和______三类。
5、典型蕈菌的子实体是由顶部的______、中部的______和基部的______三部分组成。
6、细菌分类鉴定的主要文献是______。
7、厌氧菌的固体培养方法有：______、______、______、______和______。
8、由霉腐微生物引起的材料劣变有______、______、______和______ 等多种。
9、细菌的质粒种类很多，其中接合性质粒如______，抗药性质粒如______，产细菌素质粒如______，诱癌质粒如______，诱生不定根的质粒如______，执行固氮的质粒如______，降解性质粒如______等。
10、补体的本质是一类______，它能被任何一种______所激活，然后发挥其______、______和______等作用。
二、判断题11、芽孢在细菌细胞体内的不同部位均可随意着生。
（）12、在基团转位运输方式中，除了在运输过程中物质发生化学变化这一特点外，其他特征均与主动运输方式相同。
2022年陕西中医药大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年陕西中医药大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、衣原体的特点是：______、______、______、______、______和______等。
2、影响噬菌体吸附作用的内外因素有______、______、______和______等。
3、Calvin循环可分______、______和______3个阶段。
4、碳源对微生物的功能是______和______，微生物可用的碳源物质主要有______、______、______、______、______和______等。
5、真核生物鞭毛杆的横切面为______型，其基体横切面则为______ 型，这类鞭毛的运动方式是______。
6、被誉为微生物学奠基人的是______世纪、______国的______；而细菌学的奠基人则为______国的______。
7、通常按工业发酵中菌种是否被载体固定，人为地分为______发酵和______发酵。
8、微生物寄生于其他微生物的例子如______、______；微生物寄生于植物的例子如______；微生物寄生于动物的例子如______。
9、微生物转录水平的调控一般都是蛋白质或某些小分子物质对基因转录的阻遏或激活，而在翻译水平上也发现了类似的______作用。
10、．常用的减毒活疫苗有______、______和______等。
二、判断题11、处于萌发阶段的芽孢，具有很强的感受态。
（）12、培养营养缺陷型微生物的培养基必须同时加入维生素、氨基酸、嘌呤及嘧啶。
（）13、支持细胞大量生长的碳源，可能会变成次级代谢的阻遏物。
（）14、嗜肝DNA病毒和逆转录病毒的基因组复制均存在逆转录过程。
（）15、葡枝根霉和有性根霉的区别是：前者靠异宗配合产生接合孢子，后者靠同宗配合产生接合孢子。
（）16、菌株的概念与克隆的概念相差甚远。
（）17、稀释平板测数时，真菌的计数标准是选择每皿中菌落数在10～100 个的稀释度进行计数。