磁珠分选
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混合淋巴细胞反应（MLR）
分别于0h , 24h和48h收集BMDCs，与未接触过的受试菌的native小鼠脾脏内的CD4+和CD8+T细胞进行反应，用3H-TdR掺入法检测其活化T细胞的能力。小鼠脾脏CD4+和CD8+细胞的制备
（1）脾脏单细胞悬液的制备：颈椎脱臼处死小鼠，自来水冲洗后浸泡在75%酒精中5min。无菌取脾脏放人平皿，加入5ml四型胶原酶溶液，用1ml针筒给每个脾脏注射500ul四型胶原酶溶液，剪碎脾脏后37℃孵育30min。将上述脾脏细胞悬液转移至200目不锈钢筛网，用注射器针芯研磨，过滤剩余组织。加入6ml PBS混匀，4℃，1500 rpm/min ,离心5min ，弃上清后重复一次，加入6ml PBS 重悬备用。
（2）密度梯度离心法分离脾脏单个核细胞（mononuclear cells,MNCs）:吸取3ml已预热的小鼠淋巴细胞分离液至华氏管，缓慢加入6ml脾脏细胞悬液，20℃，1800 rpm/min ,离心25min。吸出云雾状MNCs层液体，加入6ml PBS混匀，4℃，1500 rpm/min ,离心5min 。弃上清后重复一次，再加入5ml PBS重悬。取少量细胞适当稀释后混匀，显微镜下计数。
（3）抗体标记细胞：每106 MNCs加入1ug anti-CD4或anti-CD8单抗混匀，4℃孵育10min后加入1~2 ml buffer , 4℃，1500 rpm/min ,离心洗涤10min ，弃上清后重复一次。加入90ul buffer和10ul streptavidin microbeads混匀，6~12℃孵育30min，每隔10min晃动均匀一次。用1~2ml buffer洗涤，4℃，1500 rpm/min ,离心10min，弃上清后加入500ul buffer。
（4）磁珠法分离CD4+和CD8+T细胞：将LS column 固定于磁珠细胞分选磁场中，加入3ml buffer润洗柱子。细胞悬液上株，收集阴性细胞再次上柱，3ml buffer洗柱3次。将分离柱从磁场中取出，放置在合适的收集管上，加入5ml buffer，用柱塞轻柔的冲洗出细胞，再加入5ml buffer ，快速冲洗出细胞，取少量细胞适当稀释后，显微镜下计数。调整细胞浓度为2.5 * 106个/ml 备用。以上操作步骤均在冰上进行。