[工学]色谱测定法

离子交换色谱是利用被分离物质在离子交 换剂（树脂、凝胶）上交换能力的不同使 组分分离；常用的交换剂有不同强度的阳 离子交换剂、阴离子交换剂，流动相为水 或含有机溶剂的缓冲液。

分子排阻色谱法又称凝胶色谱法，是利 用被分离物质分子大小的不同导致在填 料上渗透程度不同使组分分离；常用的 填料有葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、微孔 聚合物、微孔硅胶或玻璃珠等，根据固 定相和供试品的性质选用水或有机溶剂 作为流动相。

色谱法又可根据分离方法分为：纸色谱法、 薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱法、高 效液相色谱法等。所用溶剂应与供试品不 起化学反应，纯度要求较高。分析时的温 度，除气相色谱法或另有规定外，系指在 室温操作。分离后各成分的检出，应采用 各品种项下所规定的方法。
纸色谱法

纸色谱法系以纸为载体，以纸上所含水 分或其他物质为固定相，用展开剂进行展 开的分配色谱。供试品经展开后，可用比 移值(Rf)表示其各组成成分的位置(比移值 =原点中心至斑点中心的距离／原点中心 至展开剂前沿的距离)。但由于影响比移 值的因素较多，因而一般采用在相同实验 条件下与对照物质对比以确定其异同。
生物药物分析测定方法
色谱测定法
色谱测定法

色谱法根据其分离原理可分为：吸附色谱 法、分配色谱法、离子交换色谱法与排阻 色谱法等。 吸附色谱法是利用被分离物质在吸附剂上 吸附能力的不同，用溶剂或气体洗脱使组 分分离；常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、 聚酰胺等有吸附活性的物质。


分配色谱是利用被分离物质在两相中分配 系数的不同使组分分离，其中一相被涂布 或键合在固体载体上，称为固定相，另一 相为液体或气体，称为流动相；常用的载 体有硅胶、硅藻土、硅镁型吸附剂与纤维 素粉等。


1．对仪器的一般要求 所用的仪器为高 效液相色谱仪。仪器应定期检定并符合有 关规定。 (1) 色谱柱 最常用的色谱柱填充剂为化 学键合硅胶。 反相色谱系统使用非极性 填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常 用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷 镑合硅胶(如氰基硅烷键合相和氨基硅烷 键合相等)也有使用。


正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填 充剂有硅胶等。离子交换填充剂用于离子 交换色谱；凝胶或高分子多孔微球等填充 剂用于分子排阻色谱等；手性键合填充剂 斥于对映异构体的拆分分析。

展开可以单向展开，即向一个方向进行；也 可进行双向展开，即先向一个方向展开，取 出，俟展开剂完全挥发后，将滤纸转动90°， 再用原展开剂或另一种展开剂进行展开；亦 可多次展开、连续展开或径向展开等。
高效液相色谱法 高效液相色谱法系采用高压输液泵将规 定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行 分离测定的色谱方法。注入的供试品，由 流动相带入柱内，各成分在柱内被分离， 并依次进入检测器，由记录仪、积分仪或 数据处理系统记录色谱信号。 高效液相色谱仪由高压输液系统、进样 系统、分离系统、检测系统、记录系统等 五大部分组成。

然后添加展开剂使浸没溶剂槽内的色谱 滤纸，展开剂即经毛细管作用沿色谱滤 纸移动进行展开，展开至规定的距离后， 取出色谱滤纸，标明展开剂前沿位置， 俟展开剂挥散后按规定方法检出色谱斑 点。
(2)上行法点样方法同下行法。展开缸内加入 展开剂适量，放置俟展开剂蒸气饱和后，再 下降悬钩，使色谱滤纸浸入展开剂约0.5cm， 展开剂即经毛细管作用沿色谱滤纸上升，除 另有规定外，一般展开至约15cm后，取出晾 干，按规定方法检视。

分析前，选择适当的色谱柱和流动相，开 泵，冲洗柱子，待柱子达到平衡而且基线 平直后，用微量注射器把样品注入进样口， 流动相把试样带入色谱柱进行分离，分离后 的组分依次流入检测器的流通池，最后和洗 脱液一起排入流出物收集器。当有样品组分 流过流通池时，检测器把组分浓度转变成电 信号，经过放大，用记录器记录下来就得到 色谱图。色谱图是定性、定量和评价柱效高 低的依据。

作为药品的鉴别时，供试品在色谱图中 所显主斑点的位置与颜色(或荧光)，应 与对照品在色谱图中所显主斑点相同。 作为药品的纯度检查时，可取一定量的 供试品，经展开后，按各品种项下的规 定，检视其所显杂质斑点的个数或呈色 深度(或荧光强度)。 作为药品的含量测定时，将主色谱斑点 剪下洗脱后，再用适宜的方法测定。

用于上行法时，在盖上的孔中加塞，塞 中插入玻璃悬钩，以便将点样后的色谱 滤纸挂在钩上；并除去溶剂槽和支架。 (2) 点样器 常用具支架的微量注射器或 定量毛细管，应能使点样位置正确、集 中。
(3) 色谱滤纸应质地均匀平整，具有一定机 械强度，不含影响展开效果的杂质；也不 应与所用显色剂起作用，以致影响分离和 鉴别效果，必要时可进行处理后再用。用 于下行法时，取色谱滤纸按纤维长丝方向 切成适当大小的纸条，离纸条上端适当的 距离用铅笔划一点样基线，必要时，可在 色谱滤纸下端切成锯齿形便于展开剂滴下。 用于上行法时，色谱滤纸长约25cm，宽度 则按需要而定，必要时可将色谱滤纸卷成 筒形；点样基线距底边约2. 5cm。
2．操作方法 (1) 下行法将供试品溶解于适宜的溶剂中 制成一定浓度的溶液。用定量毛细管或 微量注射器吸取溶液，点于点样基线上， 溶液宜分次点加，每次点加后，俟其自 然干燥、低温烘干或经温热气流吹干， 样点直径为2～4mm，点间距离约为 1.5～2.0cm，样点通常应为圆形。

将点样后的色谱滤纸的点样端放在溶 剂槽内并用玻棒压住，使色谱滤纸通过 槽侧玻璃支持棒自然下垂，点样基线在 支持棒下数厘米处。展开前，展开缸内 用各品种项下规定的溶剂的蒸气使之饱 和，一般可在展开缸底部放一装有规定 溶剂的平皿或将浸有规定溶剂的滤纸条 附着在展开缸内壁上，放置一定时间， 俟溶剂挥发使缸内充满饱和蒸气。


1．仪器与材料 (1) 展开容器通常为圆形或长方形玻璃 缸，缸上具有磨口玻璃盖，应能密闭。 用于下行法时，盖上有孔，可插入分液 漏斗，用以加入展开剂。在近顶端有一用 支架架起的玻璃槽作为展开剂的容器，槽 内有一玻棒．用以压佳色谱滤纸；槽的两 侧各支一玻棒，Байду номын сангаас以支持色谱滤纸使其自 然下垂，避免展开剂沿色谱滤纸与溶剂槽 之间发生虹吸现象。