厌氧菌操作流程

厌氧菌培养操作规程

第一部分 标本采集和运送

有厌氧菌感染指征时，需进行微生物学诊断。而标本的采集和运送是否合格，对厌氧菌检验结果影响很大。要求标本绝对不能被正常菌群所污染。采集时尽量避免接触空气。临床在进行厌氧菌培养前还应与实验室联系，做好接种培养的准备，进行床边接种或采用输送培养基。

一、标本采集

标本应从正常无菌部位或通过严格无菌技术采集，血液、胸腔液、腹腔液、心包液、关节液、胆汁、脑脊液及通过外科无菌手术抽出的脓液等，与常规方法相同。用特殊技术或方法采取的标本，采集部位与方法如下：

1、肺部 肺部分泌物可经气管在环甲膜平面以下抽取，或用纤维支气管镜。带有保护取样刷不被正常菌群污染的套管。将取样刷剪下。可放入运送培养基或床边直接接种。

2、胸腔 直接胸腔穿刺。

3、尿道 耻骨联合上方经皮肤穿刺膀胱抽尿。

4、脓肿 封闭性脓肿用无菌空针抽取。如已破溃，用无菌棉拭子擦去表面脓液。取深部分泌物。

5、女性生殖道 消毒阴道从后穹隆穿刺，取脓液。若取子宫分泌物则用无菌导管抽取，导管外套以一个保护膜套管，插入子宫后才戳穿保护膜套管，在子宫内取标本。

6、窦道或深部伤口 用空针连着导管，尽可能深入抽取。伤口底部、边缘和窦道壁上刮下来的组织也是很好的标本，更能反映感染的细菌。若标本量太少，可适当加少量无菌盐水，冲洗后再吸出。

7、血液标本 毛囊和皮脂腺深部的丙酸杆菌易造成污染。用碘酊消毒后必须等一定时间，不要立即抽血。

其它注意事项：必须通过用于厌氧菌正常栖居地才能取到的标本，如痰、支气管镜采样（无特殊保护套）、咽拭子、排出的尿及阴道拭子不能做厌氧菌培养，粪便标本厌氧菌培养．只能做难辨梭菌及肉毒杆菌的培养。

在无条件床边采样时，尽快将空针中的气体排尽，用消毒空针抽取厌氧培养标本，将针头插入无菌像皮塞。必须用棉拭子采集的标本．可立即做床旁接种或插入运送培养基中送细菌室培养

二、标本运送

1、标本送入厌氧运送装置后，应尽快送到实验室，最迟不超过6小时。标本不应放在冰箱里，低温对一些厌氧菌有害，且低温下标本吸收氧气较多。

2、厌氧培养基：Anaerobe Basal Agar（OXOID公司商品）+5%脱纤维羊血。

第二部分 厌氧菌检验流程

1、观察标本性状、染色、镜检及初步报告接种前观察标本是否是脓性，带血或腐败物质及气味，紫外灯下观察有无荧光，并做记录。标本（除血液）涂片革兰染色规察细菌的种类及相对比例，可用“少量”、“+”、“++”或“+++”表示。根据厌氧菌的特殊形态，可初步确定有无厌氧菌感染，厌氧菌在镜下特征，如染色不匀而多形态等。并可提示对所用培养基的选择，见表2-10-1。向临床医生发出一级报告，建议试用哪类药物。镜检对整个鉴定程序有质量控制作用。

2、厌氧培养装置 厌氧菌需要在无氧环境下生长，造成培养环境无氧的方法有两种：

（l）厌氧手套箱：价格昂贵．适合大量标本的培养及鉴定操作，临床使用较少。

（2）厌氧盒法：气袋法，接种完标本后将平皿放入厌氧盒，使用气体发生袋（AnaeroGen Oxoid公司或生物梅里埃公司)，撕开后将内袋放入厌氧盒内，无需触酶，立即盖紧盖子，放35℃培养至少48小时。或用含气体发生药片的气袋，加入10ml水，放触酶，亚甲蓝或刃天青指示剂。此法方便，可床边接种。

3、耐氧试验 当厌氧培养平皿上的厌氧菌与兼性菌混合生长时，为了确定是否为厌氧菌，一定要做耐氧试验。厌氧平皿上挑选的每个菌落同时接种厌氧血平皿及普通血平皿，分别做厌氧培养及需氧培养，若厌氧培养有细菌生长，对应

中生长好，而在需需氧培养不生长，则为厌氧菌。有些微需氧菌在5%～10% CO

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培养(厌氧球菌、纳氏放线菌、氧、庆氧培养生长不好的细菌，应置5％～10% CO

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蛛网丙酸杆菌等）。

4、厌氧菌的快速鉴定与诊断方法 已确定是厌氧菌并分离到纯菌后，可采用以下快速、简捷的方法鉴定。

(1) API-ID32（生物梅里埃）：一个32 孔试条，其中29孔作为测定用，含干粉状底物测定厌氧菌酶活性。试条在有氧条件下37℃培养4小时，可肉眼观察结果或用ATB仪自动判读结果。

(2) VITEK-ANI卡：自动微生物鉴定系统VITEK的ANI鉴定卡可用厌氧菌鉴定。