重组表达抗菌肽Hadrurin抗菌活性分析
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．
８ ４微 克／ ． ５ 毫升 ， 而且 ～ ０ １０ ２￣ Ｐ ￣ Ｈ１ ７ ￣ ０ Ｘ ． 在 Ｈ３ Ｐ ０条件 下仍 具有 高效 抗 菌活性 ｇ
今 日畜牧兽医ｏ １ ￣３ ２ ０－ １６期 ０ ｇ
础上 ， 纯化 的 ｒ ｄｕｉ 将 Ｈａｒｒ ｎ蛋 白进行 肠激酶 酶切 ， 恢复 其 天然 活性 结构 。 用最 小抑 茵浓 度（ Ｃ 和 最 小 杀 菌 ＭＩ ） 浓度 （ Ｃ） ＭＢ 方法检 测抗 菌肽 Ｈａｒｒ ｄｕｉ 不 同剂量 、 同 ｐ 值 、 同保 存温 度 下对 鸡致 病性 大肠 杆 菌和金 ｎ在 不 Ｈ 不
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Ｅ ｍａｌｒｍｓ＠ １６ｃ ｒ — ｉｘ ｙ ２．ｎ ： ｊ ｏ
一
科 技 前 沿
：
株 基 因 ｌ型新 城疫 病毒 的分 离及基 因组分析 Ｉ
本研 究从 ２ ０ ０ ８山 东表 现神 经 症状 的 某新城 疫 疫苗免 疫 鸡群 中分 离到一 株 病毒 。通 过 鸡红 细胞 凝 集试
依据 。
主三
重组 表达抗 茵肽 Ｈ ｄ ｕｉ ａ ｒｒ ｎ抗茵 活性分 析 为 了给表 达 高活性 的 抗 茵肽 Ｈａｒｒ ｄｕｉ 供 开发 应 用 的依据 ，进 一 步 为 用基 因工程 方 法 生产具 有 多种 ｎ提
生物 活性 的抗 菌肽 Ｈａ ｒｒ ｄｕｉ 白提 供研 究基 础 ， ｎ蛋 本研 究表 达获得 重组 抗 茵肽 Ｈａ ｒｒ ｒ ｄｕｉ） 白的基 ｄｕｉ Ｈａｒｒ 蛋 ｎ（ ｎ
黄 色葡萄球 菌的抑 菌 活性及 杀 菌活性 。并 以 小鼠为 动物模 型 ， 进行抗 茵肽 ｒ ｄｕｉｄ对小 鼠的体 内保 护 实 Ｈａｒｒ ｎ 验 。结 果表 明抗 菌肽 ｒ ｄｕｉ 上述 细菌 的最 小抑 菌 范围为 １３～ ３ Ｈａｒｒ ｎ对 ． ４ ２微 克／ ２ 毫升 ． 小杀 菌 范 围为 １ ７ 最 ． ～ ７
Ｑ— Ｒ— ， Ｋ— Ｆ 符合 强毒株 氨基 酸序 列特 点 。 通过 Ｆ基 因裂解位 点 附近 高 变 区 ３ ９个核苷 酸序 列 构建 遗传进 ８
化 树 ， 明该毒 株在 分 类地 位上属 于基 因 Ｉ 型 。 证 Ｉ 此外 ， 病毒 感 染 Ｓ Ｆ鸡 试验 证 明 ｃ／ Ｐ ｋ ＣＨ／ Ｓ ０ ～ ９毒株属 Ｌ Ｄ／ ８ ２
Ｃ主
牛源 Ａ型 多杀性 巴 氏杆 菌培 养特 性和 免疫 原性 的研 究
为 了确定 牛源 荚膜血 清 Ａ 型 多杀性 巴氏杆 菌（ｍ） Ｐ 的培 养特性 ， 研 究采 用 脑心 浸液 （ＨＳ 养基 分 别 于 本 Ｂ ￣ 静 止 、５转／ ７ 分钟 、５ ２ ０转／ 分钟 ３种 培 养转 速对 Ｐ 进 行 培 养 ， 与加 血 Ｂ 进 行 比较 ． 过 绘 制 生长 曲线 ｍ 并 ＨＩ 通
技术 ， 扩增得 到该 病毒 全部 基 因组序 列 。结 果表 明 ， 该毒 株 基 因组 由 １ ８ ５１６个核 苷 酸序 列组成 ， 编码 ６种 结 构蛋 白 ， ＲＮＡ 上的顺 序依 次 为 ３－ — — Ｆ ＨＮ— － Ｆ基 因裂解位 点 处的氨 基酸 序 列为 “ Ｒ— 在 ＂ Ｎｐ ｐ Ｍ— — Ｌ ５。 。 Ｒ—
合诱 导后 ， 可培 养 茵数在 ５ ５天后 降 至零 ， 菌数 在 整个观 察期 内基本 不 变 ， 活 菌数 在 １０天 后 开始 下 降 ． 总 而 ５
１０天后 下 降显 著 ， 明 实验 菌株 可在 ５ ８ 表 ５天进 入 Ｖ ＢＮＣ， 而且 维持 时 间至 １０天。 当进入 该状 态后 ， ８ 茵体 形
和 小鼠毒 力试验 对 Ｐ 的培 养基和 培养 转速 条件进 行 优化 ， 定最佳 培养 条件 为 ， ３ ￣ ０１ 血脑 心 浸 ｍ 确 以 ７Ｃ，． ％全 汤（ ＭＢ— ） ＨＩ 培养基 ，５转／ ７ 分钟 培 养 １ ６小 时。将培 养 的 Ａ型 Ｐ 灭活后 ， 疫 Ｓ Ｆ小 鼠 ， ｍ 免 Ｐ 同时设 立 Ｂ型 Ｐ ｍ
于强毒 嗜神 经型毒株 ， 引起 Ｓ Ｆ鸡 高致 死 率。 能 Ｐ
薹
鸡 白痢沙 门氏茵 ＣＶ Ｃ５ ８标 准株 Ｖ Ｎ Ｃ ７ Ｂ Ｃ研 究模 型 的建 立及鉴 定
为 建 立 活的 非 可培 养状 态（ ＮＣ 研 究模 型 ， ＶＢ ） 本研 究利 用液 体 Ｌ 和 ４Ｃ 合 条 件 对鸡 白痢 沙 门氏 茵 Ｂ ｑ联
验和 血凝抑 制试 验 ， 明为新城 疫病 毒 ， 表 将其命 名 为 ｃ ／ ｋ ｃ肌 ｓ ０— ９ Ｄ／ ８ ２ 。根 据 ＧｅＢａｋ上 登 录的新 城 疫病 ｎ ｎ
wk.baidu.com
毒基 因组序 列 ．设计 １ 引物 经过 ＲＴ— ｃ 扩 增病 毒 感 染的尿 囊液 ． 同时应 用 ３一 ＡＣ ４对 ＰＲ Ｒ Ｅ和 ５一 Ｃ ＲＡ Ｅ
态可 由杆 状 变为球 杆 或球 形 ， 并且 茵体 排 列可 由单 在 变为 聚集 。 经复 苏和 １ Ｓｒ ６ ＲＮＡ鉴 定后 ．“ 变态” 细 的
菌被证 实为沙 门氏 茵， 杂污 染菌。该 实验 为规 范 Ｖ ＮＣ 沙 门氏茵 的鉴 定程 序 以及 制订相 应 的 国家检 测 标 而 Ｂ
准 提 供 了 实验 依 据 。
灭 活苗免 疫组 ， Ａ 型 ｍ 后 的结果 显示 ， 攻 Ｐ Ａ型 灭 活茵 的保护 率 为 １ ０ 而 Ｂ型灭 活 苗免疫 组全部 死 亡 。 ０ ％， 本
研 究通过 对牛 源 Ａ 型 Ｐ 培 养特性 和 免疫原 性 的研 究 ， 新型 牛 出血性败 血 症灭 活疫 苗 的研 制提 供 了实验 ｍ 为
Ｃ Ｃ５ ８参考株 的进 行 ＶＢ ＶＣ ７ ＮＣ诱 导 ， 构建 Ｖ ＮＣ 研 究模 型 。 同时依 靠胎牛 血 清和程 序性 升温 对 处 于该 状 Ｂ
态的 菌体 进行 复 苏， 并对 复 苏前后 的细 菌进行 了 １ Ｓｒ ６ ＲＮＡ验证 。结 果表 明 ： 实验 菌株 经 液体 Ｌ Ｂ和 ４ ℃联
８ ４微 克／ ． ５ 毫升 ， 而且 ～ ０ １０ ２￣ Ｐ ￣ Ｈ１ ７ ￣ ０ Ｘ ． 在 Ｈ３ Ｐ ０条件 下仍 具有 高效 抗 菌活性 ｇ
今 日畜牧兽医ｏ １ ￣３ ２ ０－ １６期 ０ ｇ
础上 ， 纯化 的 ｒ ｄｕｉ 将 Ｈａｒｒ ｎ蛋 白进行 肠激酶 酶切 ， 恢复 其 天然 活性 结构 。 用最 小抑 茵浓 度（ Ｃ 和 最 小 杀 菌 ＭＩ ） 浓度 （ Ｃ） ＭＢ 方法检 测抗 菌肽 Ｈａｒｒ ｄｕｉ 不 同剂量 、 同 ｐ 值 、 同保 存温 度 下对 鸡致 病性 大肠 杆 菌和金 ｎ在 不 Ｈ 不
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科 技 前 沿
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重组 表达抗 茵肽 Ｈ ｄ ｕｉ ａ ｒｒ ｎ抗茵 活性分 析 为 了给表 达 高活性 的 抗 茵肽 Ｈａｒｒ ｄｕｉ 供 开发 应 用 的依据 ，进 一 步 为 用基 因工程 方 法 生产具 有 多种 ｎ提
生物 活性 的抗 菌肽 Ｈａ ｒｒ ｄｕｉ 白提 供研 究基 础 ， ｎ蛋 本研 究表 达获得 重组 抗 茵肽 Ｈａ ｒｒ ｒ ｄｕｉ） 白的基 ｄｕｉ Ｈａｒｒ 蛋 ｎ（ ｎ
黄 色葡萄球 菌的抑 菌 活性及 杀 菌活性 。并 以 小鼠为 动物模 型 ， 进行抗 茵肽 ｒ ｄｕｉｄ对小 鼠的体 内保 护 实 Ｈａｒｒ ｎ 验 。结 果表 明抗 菌肽 ｒ ｄｕｉ 上述 细菌 的最 小抑 菌 范围为 １３～ ３ Ｈａｒｒ ｎ对 ． ４ ２微 克／ ２ 毫升 ． 小杀 菌 范 围为 １ ７ 最 ． ～ ７
Ｑ— Ｒ— ， Ｋ— Ｆ 符合 强毒株 氨基 酸序 列特 点 。 通过 Ｆ基 因裂解位 点 附近 高 变 区 ３ ９个核苷 酸序 列 构建 遗传进 ８
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牛源 Ａ型 多杀性 巴 氏杆 菌培 养特 性和 免疫 原性 的研 究
为 了确定 牛源 荚膜血 清 Ａ 型 多杀性 巴氏杆 菌（ｍ） Ｐ 的培 养特性 ， 研 究采 用 脑心 浸液 （ＨＳ 养基 分 别 于 本 Ｂ ￣ 静 止 、５转／ ７ 分钟 、５ ２ ０转／ 分钟 ３种 培 养转 速对 Ｐ 进 行 培 养 ， 与加 血 Ｂ 进 行 比较 ． 过 绘 制 生长 曲线 ｍ 并 ＨＩ 通
技术 ， 扩增得 到该 病毒 全部 基 因组序 列 。结 果表 明 ， 该毒 株 基 因组 由 １ ８ ５１６个核 苷 酸序 列组成 ， 编码 ６种 结 构蛋 白 ， ＲＮＡ 上的顺 序依 次 为 ３－ — — Ｆ ＨＮ— － Ｆ基 因裂解位 点 处的氨 基酸 序 列为 “ Ｒ— 在 ＂ Ｎｐ ｐ Ｍ— — Ｌ ５。 。 Ｒ—
合诱 导后 ， 可培 养 茵数在 ５ ５天后 降 至零 ， 菌数 在 整个观 察期 内基本 不 变 ， 活 菌数 在 １０天 后 开始 下 降 ． 总 而 ５
１０天后 下 降显 著 ， 明 实验 菌株 可在 ５ ８ 表 ５天进 入 Ｖ ＢＮＣ， 而且 维持 时 间至 １０天。 当进入 该状 态后 ， ８ 茵体 形
和 小鼠毒 力试验 对 Ｐ 的培 养基和 培养 转速 条件进 行 优化 ， 定最佳 培养 条件 为 ， ３ ￣ ０１ 血脑 心 浸 ｍ 确 以 ７Ｃ，． ％全 汤（ ＭＢ— ） ＨＩ 培养基 ，５转／ ７ 分钟 培 养 １ ６小 时。将培 养 的 Ａ型 Ｐ 灭活后 ， 疫 Ｓ Ｆ小 鼠 ， ｍ 免 Ｐ 同时设 立 Ｂ型 Ｐ ｍ
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鸡 白痢沙 门氏茵 ＣＶ Ｃ５ ８标 准株 Ｖ Ｎ Ｃ ７ Ｂ Ｃ研 究模 型 的建 立及鉴 定
为 建 立 活的 非 可培 养状 态（ ＮＣ 研 究模 型 ， ＶＢ ） 本研 究利 用液 体 Ｌ 和 ４Ｃ 合 条 件 对鸡 白痢 沙 门氏 茵 Ｂ ｑ联
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毒基 因组序 列 ．设计 １ 引物 经过 ＲＴ— ｃ 扩 增病 毒 感 染的尿 囊液 ． 同时应 用 ３一 ＡＣ ４对 ＰＲ Ｒ Ｅ和 ５一 Ｃ ＲＡ Ｅ
态可 由杆 状 变为球 杆 或球 形 ， 并且 茵体 排 列可 由单 在 变为 聚集 。 经复 苏和 １ Ｓｒ ６ ＲＮＡ鉴 定后 ．“ 变态” 细 的
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准 提 供 了 实验 依 据 。
灭 活苗免 疫组 ， Ａ 型 ｍ 后 的结果 显示 ， 攻 Ｐ Ａ型 灭 活茵 的保护 率 为 １ ０ 而 Ｂ型灭 活 苗免疫 组全部 死 亡 。 ０ ％， 本
研 究通过 对牛 源 Ａ 型 Ｐ 培 养特性 和 免疫原 性 的研 究 ， 新型 牛 出血性败 血 症灭 活疫 苗 的研 制提 供 了实验 ｍ 为
Ｃ Ｃ５ ８参考株 的进 行 ＶＢ ＶＣ ７ ＮＣ诱 导 ， 构建 Ｖ ＮＣ 研 究模 型 。 同时依 靠胎牛 血 清和程 序性 升温 对 处 于该 状 Ｂ
态的 菌体 进行 复 苏， 并对 复 苏前后 的细 菌进行 了 １ Ｓｒ ６ ＲＮＡ验证 。结 果表 明 ： 实验 菌株 经 液体 Ｌ Ｂ和 ４ ℃联